阿魏酸在烟曲霉菌诱导人角膜上皮细胞中的抗炎作用.pdf

第5 9卷 第4期2 0 2 3年0 8月青 岛 大 学 学 报(医 学 版)J OUR NA LO FQ I N G D AOUN I V E R S I T Y(ME D I C A LS C I E N C E S)V o l.5 9,N o.4A u g u s t 2 0 2 3 收稿日期2 0 2 3-0 1-2 3;修订日期2 0 2 3-0 2-1 7 基金项目山东省自然科学基金(Z R 2 0 1 9 B H 0 0 4)第一作者张飒飒(1 9 9 6-),女,硕士。通信作者彭旭东(1 9 8 8-),男,博士,副主任医师,硕士生导师。E-m a i l:d o c t o r p x d 1 2 6.c o m。阿魏酸在烟曲霉菌诱导人角膜上皮细胞中的抗炎作用张飒飒1,鲁叶慧1,熊翌宏2,杨珊珊1,吴媛1,彭旭东1(1 青岛大学附属医院眼科,山东 青岛 2 6 6 0 0 3;2 湖北医药学院药护学院)摘要 目的 探讨阿魏酸(F A)在烟曲霉菌诱导的人角膜上皮细胞中的抗炎作用。方法 采用C C K-8方法检测不同浓度F A(0、5 0、1 0 0、1 5 0、2 0 0、2 5 0、3 0 0m o l/L)溶液对人角膜上皮细胞(HC E C)活力的影响;采用R T-P C R方法检测灭活的烟曲霉菌菌丝感染HC E C后,F A对炎症因子白细胞介素1(I L-1)、白细胞介素6(I L-6)、肿瘤坏死因子(TNF-)及核因子E 2相关因子2(N r f 2)mR NA表达的影响;采用E L I S A方法检测F A对炎症因子I L-6及单核细胞趋化蛋白(MC P-1)蛋白表达的影响。结果 3 0 0m o l/L的F A溶液处理组HC E C存活率低于其他各组(F=5.3 9 0,P0.0 5)。2 5 0m o l/LF A处理可显著升高N r f 2mR NA表达,降低I L-1、I L-6、TNF-mR NA的表达水平,并显著降低I L-6及MC P-1蛋白表达(F=4.7 2 09 9 0.9 6 7,P0.0 5)。结论 F A可能通过上调N r f 2的表达,抑制烟曲霉菌诱导的HC E C炎症反应中促炎因子的表达,发挥抗炎作用。关键词 阿魏酸;烟曲霉菌;人角膜上皮细胞;炎症 中图分类号 R 7 7 文献标志码 A 文章编号 2 0 9 6-5 5 3 2(2 0 2 3)0 4-0 4 8 5-0 5d o i:1 0.1 1 7 1 2/j m s.2 0 9 6-5 5 3 2.2 0 2 3.5 9.1 2 3 开放科学(资源服务)标识码(O S I D)网络出版 h t t p s:/l i n k.c n k i.n e t/u r l i d/3 7.1 5 1 7.R.2 0 2 3 0 9 2 1.1 4 4 4.0 0 3;2 0 2 3-0 9-2 2 1 2:2 7:1 9A N T I-I N F L AMMA T O R YE F F E C TO FF E R U L I CA C I DI NH UMA NC O R N E A LE P I T H E L I A LC E L L SI N D U C E DB YA S P E R G I L-L U SF UM I G A T U S ZHANGS a s a,L UY e h u i,X I ONGY i h o n g,Y ANGS h a n s h a n,WUY u a n,P ENGX u d o n g(D e p a r t m e n t o fO p h t h a l m o l o g y,T h eA f f i l i a t e dH o s p i t a l o fQ i n g d a oU n i v e r s i t y,Q i n g d a o2 6 6 0 0 3,C h i n a)A B S T R A C T O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h ea n t i-i n f l a mm a t o r ye f f e c to f f e r u l i c a c i d(F A)i nh u m a nc o r n e a l e p i t h e l i a l c e l l s i n-d u c e db yA s p e r g i l l u s f u m i g a t u s.M e t h o d s C C K-8a s s a yw a su s e dt oo b s e r v e t h ee f f e c to fd i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n so fF As o l u-t i o n(0,5 0,1 0 0,1 5 0,2 0 0,2 5 0,3 0 0m o l/L)o nt h ev i a b i l i t yo fh u m a nc o r n e a l e p i t h e l i a l c e l l s(HC E C);R T-P C Rw a su s e dt om e a s u r et h e e f f e c t o fF Ao n t h emR NAe x p r e s s i o n l e v e l s o f t h e i n f l a mm a t o r y f a c t o r s i n t e r l e u k i n-1(I L-1),i n t e r l e u k i n-6(I L-6),t u m o rn e c r o s i s f a c t o r-(TNF-),a n dn u c l e a r f a c t o r e r y t h r o i d2-r e l a t e d f a c t o r 2(N r f 2)a f t e rHC E Cw e r e i n f e c t e dw i t h i n a c t i v a t e dA s p e r g i l l u s f u m i g a t u sh y p h a e;E L I S Aw a su s e dt oo b s e r v e t h ee f f e c to fF Ao nt h ep r o t e i ne x p r e s s i o nl e v e l so ft h e i n f l a mm a t o r yf a c t o r s I L-6a n dm o n o c y t ec h e m o t a c t i cp r o t e i n-1(MC P-1).R e s u l t s T h eg r o u po fHC E Cc e l l s t r e a t e db y3 0 0m o l/LF As o l u-t i o nh a das i g n i f i c a n t l y l o w e r c e l lv i a b i l i t y t h a nt h eo t h e rg r o u p s(F=5.3 9 0,P0.0 5).T r e a t m e n tw i t h2 5 0m o l/LF As i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e dt h emR NAe x p r e s s i o n l e v e l o fN r f 2a n d s i g n i f i c a n t l y r e d u c e d t h emR NAe x p r e s s i o n l e v e l s o fI L-1,I L-6,TNF-,a n d t h ep r o t e i ne x-p r e s s i o n l e v e l o fMC P-1(F=4.7 2 0-9 9 0.9 6 7,P0.0 5).C o n c l u s i o n F Am a ye x e r t a na n t i-i n f l a mm a t o r ye f f e c t b yu p r e g u l a t i n gt h ee x p r e s s i o no fN r f 2a n d i n h i b i t i n g t h e e x p r e s s i o no f p r o-i n f l a mm a t o r y f a c t o r s i n t h e i n f l a mm a t o r yr e s p o n s eo fHC E C i n d u c e db yA s p e r g i l l u s f u m i g a t u s.K E Y WO R D S f e r u l i ca c i d;A s p e r g i l l u s f u m i g a t u s;h u m a nc o r n e a l e p i t h e l i a l c e l l s;i n f l a mm a t i o n 烟曲霉菌是一种常见的真菌性角膜炎的致病真菌1,可黏附于角膜上皮从而免于宿主的免疫清除1-2。真菌感染时,各种免疫细胞在真菌清除方面发挥重要防御作用3-4;但是其引发的过度炎症反应会加重组织损伤5-6。目前临床除了常用药物外7,还需要寻找安全高效的抗炎药物实现抗真菌联合免疫治疗。阿魏酸(4-羟基-3-甲氧基肉桂酸,F A)是一种酚类化合物,可溶于二甲基亚砜(DM S O),它具有抗炎8-9、抗氧化1 0、肝脏保护1 1等功效。L AM-P I A S I等1 2研究发现,F A在脂多糖(L P S)刺激的小鼠R AW 2 6 4.7细胞中发挥抗炎作用。最近C AO等8研究发现,F A可降低促炎因子表达,改善肝损伤的预后,在乙醇性肝损伤中起保护作用1 3。本研究旨在探讨F A在烟曲霉菌诱导的炎症中的抗炎作用,为真菌性角膜炎的治疗提供新思路。现将结果报告如下。4 8 6青 岛 大 学 学 报(医 学 版)5 9卷1 材料和方法1.1 实验材料人角膜上皮细胞(HC E C)由厦门眼科实验室馈赠,将其接种到1 0c m细胞培养皿中,在含有体积分数0.1 0胎牛血清的DMEM培养基中培养(3 7,含体积分数0.0 5C O2培养箱)。烟曲霉菌(C P C C3.0 7 7 2)购自中国微生物菌种保藏中心(S GMC C);F A(1 0 0m g,纯度9 8%)由麦克林试剂公司提供,用体积分数0.0 0 1的DM S O溶解后以1 0 0mm o l/L储备液存放于-8 0;R NA e xp r or e a g e n t裂解液由艾科瑞生物公司提供;酶联免疫吸附试验(E L I S A)试剂盒由B i o l e g e n d公司提供;H i S c r i p t R TS u-p e r M i x(南京诺唯赞生物公司)。1.2 实验方法1.2.1 烟曲霉菌丝制备 将烟曲霉菌接种到沙氏液体培养基中培养4 87 2h(3 7,含体积分数0.0 5C O2培养箱),待培养基中覆盖白色绒毛团块状菌落,将菌落转移至玻璃研磨棒中研磨至匀浆状态,加入体积分数0.7 5乙醇灭活(4,4 8h)后得到灭活烟曲霉菌丝,使用血细胞计数器计数并调整菌丝浓度至11 01 1C F U/L后用于体外细胞实验。1.2.2 F A溶液制备 用无菌P B S将F A溶液稀释至实验需要浓度(03 0 0m o l/L)用于后续实验,F A溶液中DM S O含量低于1。1.2.3 C C K-8细胞毒性实验检测HC E C存活率9 6孔板中加入HC E C,达到8 0%融合时,向细胞中加入新的DMEM细胞培养液或含不同 浓度F A(03 0 0m o l/L)的DMEM细胞培养液,继续孵育2 4h(3 7,含体积分数0.0 5C O2培养箱),弃去培养液并加入P B S洗去悬浮细胞及药物残留。向9 6孔板中分别加入1 0 0L的DMEM细胞培养液和1 0LC C K-8检测试剂,3 7 孵育2h。使用酶标仪检测各孔4 5 0、6 0 0n m波长处吸光度并计算细胞存活率。1.2.4 实时聚合酶链反应(R T-P C R)检测HC E C中炎症因子及核因子E 2相关因子2(N r f 2)mR NA表达 将细胞加入1 2孔板或9 6孔板,随机分为空白对照组(A组)、单纯F A处理组(B组)、单纯加菌处理组(C组)和加菌+F A处理组(D组),向HC E C加或不加F A(终浓度2 5 0m o l/L)预处理2h,并向每孔中加入灭活烟曲霉菌菌丝(11 01 1C F U/L)6 0L培养2 4h(3 7,含体积分数0.0 5C O2培养箱)。吸弃培养液并加入P B S洗涤3次,各孔中加入5 0 0LR NA e xp r or e a g e n t裂解液,充分研磨并转移入E P管中提取总R NA。采用R NA紫外线可见光度法(N a n o d r o p2 0 0 0,T h e r m oF i s h e r)测定总R NA浓度,应用H i S c r i p t R T S u p e r M i x处理R NA样本并逆转录为c D NA。根据产品说明书方法向c D NA样本中加入D E P C水和S Y B R预混液,进行R T-P C R分析(Q u a n t S t u d i oTM5实时荧光定量P C R系统,T h e r m oF i s h e r)。R T-P C R的引物及其序列见表1。表1 R T-P C R基因引物及其序列基因名称 方向 引物序列(5 3)基因库G A P DHF T G G C A C C C A G C A C A A T G A AR C T A A G T C A T A G T C C G C C T A G A A G C A NM_0 0 1 1 0 1.5I L-1F G C T G A T G G C C C T A A A C A G A T G A AR T C C A T G G C C A C A A C A A C T G A CNM_0 0 0 5 7 6.3I L-6F G C T G A T G G C C C T A A A C A G A T G A AR T C C A T G G C C A C A A C A A C T G A CNM_0 0 0 5 7 6.3T N F-F T G C T T G T T C C T C A G C C T C T TR C A G A G G G C T G A T T A G A G A G A G G TNM_0 0 0 5 9 4.4N r f 2F G G T T G C C C A C A T T C C C A A A T CR C A A G T G A C T G A A A C G T A G C C GNM_0 0 1 3 1 3 9 0 1.11.2.5 E L I S A法检测HC E C炎症因子I L-6及单核细胞趋化蛋白(MC P-1)蛋白表达水平 根据1.2.4方法将HC E C分组并处理,4、50 0 0r/m i n离心后取上清液并转入新的E P管中,应用E L I S A试剂盒采用双抗体夹心法检测各组I L-6和MC P-1蛋白表达水平,按试剂盒说明进行操作。酶标仪检测4 5 0n m及5 7 0n m波长处吸光度,以其表示I L-6和MC P-1蛋白表达水平。1.3 统计学方法使用G r a p hP a dP r i s m9.0软件进行统计学处理。计量资料结果采用xs表示,多组比较采用单因素方差分析(组间两两比较采用B o n f e r r o n i法)及双因素析因设计方差分析。以P0.0 5为差异有统计学意义。2 结 果2.1 不同浓度F A溶液对HC E C活力的影响不同浓 度的F A(0、5 0、1 0 0、1 5 0、2 0 0、2 5 0及3 0 0m o l/L)与HC E C共孵育2 4h后,3 0 0m o l/LF A溶液处理组HC E C存活率低于其他各组,差异均有 统 计 学 意 义(n=6,F=5.3 9 0,P0.0 5)。见图1。后续实验选择2 5 0m o l/L作为研究浓度。图1 不同浓度F A处理组H C E C存活率比较2.2 F A对烟曲霉菌诱导的HC E C炎症因子以及N r f 2mR NA表达的影响R T-P C R法 检 测 结 果 显 示,F A处 理(FF A=7.1 9 51 8.5 6 0,P0.0 1)、灭活菌丝处理(FA F=2 3.1 3 01 4 1.4 6 8,P0.0 0 1)、F A与灭活菌丝处理产生的 交 互 效 应(FF AA F=8.7 3 11 8.5 3 6,P0.0 5);用灭活菌丝处理时,F A处理组的I L-1、I L-6及TNF-mR NA表达较不处理组明显降低(F=1 5.8 8 94 7.4 7 1,P0.0 0 1)。不用F A处理时,灭活菌丝处理和不处理对I L-1、I L-6及TNF-mR NA表达的影响均有统计学意义(F=3 0.1 4 19 4.6 0 3,P0.0 0 1);用F A处理时,灭活菌丝处理和不处理相比,各因子mR NA表达水平差异均有统计学意义(F=4.7 2 02 3.8 6 0,P0.0 5)。双因素析因方差分析还显示,F A处理(FF A=4.8 6 0,P0.0 5)及灭活菌丝处理(FA F=3 7.6 5 2,P0.0 5)。见表2。2.3 F A对烟曲霉菌诱导的HC E C中I L-6以及MC P-1蛋白表达的影响E L I S A方法检测结果显示,F A处理(FF A=2 9 9.1 5 5、3 8 8.5 7 3,P0.0 1)、灭活菌丝处理(FA F=4 2 1.5 9 1、8 0 9.4 0 6,P0.0 1)、F A与灭活菌丝处理产生的 交 互 效 应(FF AA F=2 5 8.2 0 6、2 9 8.7 7 8,P0.0 5);用灭活菌丝处理时,F A处理较不处理I L-6及MC P-1蛋白表达均明显降低(F=5 5 6.6 0 8、6 8 4.4 0 6,P0.0 1)。不用F A处理时,灭活菌丝处理和不处理对I L-6及MC P-1蛋白表达的影响差异均有显著性(F=7 1 5.0 9 7、9 9 0.9 6 4,P0.0 1);用F A处理时,灭活菌丝处理和不处理相比,I L-6及MC P-1蛋白表达水平差异均有统计学意义(F=5.2 7 3、7 6.6 4 8,P0.0 5)。见表3。表2 F A对I L-1、I L-6、T N F-和N r f 2m R N A表达的影响(n=6,xs)组别I L-1*I L-6*TNF-*N r f 2A组1.0 1 40.1 8 5 1.1 3 70.5 8 1 1.0 4 00.3 0 4 1.0 7 60.4 7 7B组0.9 5 70.2 4 7 1.1 1 30.4 8 1 1.0 8 20.1 9 7 1.1 7 30.3 2 3C组3.2 4 10.5 8 0 1 6.9 7 15.4 0 2 2.2 7 40.6 5 0 1.8 5 70.6 2 1D组1.6 5 70.4 5 4 9.0 6 51.4 3 8 1.3 8 00.2 3 1 2.5 3 30.1 3 9 注:*析因设计方差分析显示,FA F=2 3.1 3 01 4 1.4 6 8,P0.0 1;FF A=7.1 9 51 8.5 6 0,P0.0 0 1;FF AA F=8.7 3 11 8.5 3 6,P0.0 1。表3 F A对I L-6及MC P-1蛋白表达的影响(n=8,xs)组别I L-6MC P-1A组2 5 5.4 0 5 5 2.1 9 23 2.6 7 52.8 6 1B组2 1 9.0 9 0 4 9.3 2 43 0.5 2 40.9 9 5C组15 7 2.6 8 11 2 7.3 0 56 6.1 8 13.8 3 1D组5 8 5.4 4 1 8 1.5 6 83 3.4 0 21.1 2 7 注:I L-6及MC P-1蛋 白表达析因设计 方差分析显示,FA F=4 2 1.5 9 1、8 0 9.4 0 6,P0.0 1;FF A=2 9 9.1 5 5、3 8 8.5 7 3,P0.0 1;FF AA F=2 5 8.2 0 6、2 9 8.7 7 8,P0.0 1。3 讨 论真菌性角膜炎是导致病人眼部溃疡、穿孔甚至失明的一种严重的眼部感染性疾病1 4。在亚洲发展中国家的真菌感染中,丝状真菌感染占据主导地位1 5。植物性角膜损伤、角膜接触镜的使用及局部类固醇的使用已被公认为真菌性角膜炎的主要危险因素1 5。真菌侵入宿主角膜组织后,真菌细胞壁上的病原体相关分子模式受体通过释放毒素攻击受损的角膜组织,并被宿主先天免疫细胞表达的模式识别受体识别1 6。这一相互作用诱导细胞因子和趋化因子的产生及释放1 7,并招募中性粒细胞及巨噬细胞向感染灶聚集1 8,真菌释放的细胞毒性物质及免疫细胞聚集引发的过度炎症反应使得真菌性角膜炎溃疡愈合缓慢、预后不良。真菌性角膜炎的发病率逐年增高,亟待找到新的治疗药物。4 8 8青 岛 大 学 学 报(医 学 版)5 9卷 F A为从当归、川芎、赤芍等中草药中提取的一种酚酸类化合物,相关研究发现它具有抗氧化1 9、抗炎2 0、抗凋亡9、抗菌2 1、心肌保护2 2及神经保护2 3等药理作用。E RM I S等2 4研究发现,在吲哚美辛诱导的大鼠胃溃疡模型中,F A通过抑制中性粒细胞浸润及降低炎症因子I L-6及T N F 的表达,减轻胃黏膜充血、出血及溃疡的严重程度,从而改善大鼠胃溃疡的预后。而F A在真菌性角膜炎中的作用尚未见报道。本文研究结果显示,2 5 0m o l/LF A对HC E C的活性没有影响,因此2 5 0m o l/LF A可作为安全浓度用于后续实验。真菌性角膜炎早期通过招募固有免疫细胞产生炎症反应,发挥对真菌的清除作用,但持续的炎症反应会加重组织的损伤2 5。中性粒细胞等免疫细胞的持续激活和招募会进一步导致更多的炎症因子及趋化因子的产生和释放2 6,这不利于真菌性角膜炎的预后。本文R T-P C R检测结果表明,加菌刺激组炎症因子I L-1、I L-6及TNF-mR NA表达显著,即在真菌感染早期炎症因子如I L-1、I L-6及T N F-等表达增加,从而诱导炎症细胞的浸润及释放多种炎症递质进一步放大炎症反应来抵御真菌;而加菌处理后给予F A治疗可以显著抑制HC E C中I L-1、I L-6及TNF-mR NA的表达,从而减轻相关炎症反 应。L I等2 7研 究 发 现,在L P S诱 导 的 人HMC 3小胶质细胞的神经炎症模型中,F A通过抑制I L-1、T N F-及一氧化氮的产生及表达发挥抗神经炎症作用。本文研究结果与其相一致。为了进一步确认F A在烟曲霉菌刺激的HC E C中的抗炎作用,本研究应用E L I S A方法检测I L-6及MC P-1蛋白表达,结果显示,2 5 0m o l/L的F A能够显著抑制烟曲霉菌刺激的HC E C炎症反应中I L-6及MC P-1蛋白表达上调。有研究显示,在乙醇诱导的C 5 7 B L/6小鼠肝损伤模型中,F A可以显著降低丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶的血清酶活性,减少乙醇刺激后小鼠肝脏细胞细胞质的空泡性坏死及炎症细胞的浸润,抑制MC P-1和I L-6的表达,减轻乙醇对小鼠肝脏的损害1 3。本文研究结果与其相一致。提示F A可以通过下调真菌性角膜炎炎症因子及趋化因子的过度表达来改善真菌性角膜炎的炎症反应。在真菌性角膜炎病程中,在控制真菌感染后期炎症反应的同时可以着力促进角膜上皮的修复,从而改善真菌性角膜炎的预后。已有研究显示,N r f 2不仅可以抑制促炎因子及炎症标志物的过表达,还可以通过与血红素氧合酶(HO-1)启动子抗氧化反应元件结合上调HO-1的表达,从而进一步抑制促炎因子的过表达,提示N r f 2/HO-1信号通路在炎症反应中发挥负调控作用2 8-2 9。我们实验室早先的研究发现,萜类化合物紫苏醛、衣康酸二甲酯及没食子酸可通过增加N r f 2和HO-1的表达,抑制I L-1、I L-6、I L-8及T N F-等炎症因子的表达,在真菌性角膜炎中发挥强大的抑炎作用2 6,3 0。而F AN等2 6的研究结果显示,紫苏醛通过N r f 2/HO-1信号通路下调I L-1、I L-6及T N F-的表达水平从而发挥强大的抗炎作用。其研究还发现,在烟曲霉菌感染的早期N r f 2表达水平上调,参与烟曲霉菌感染的免疫应答,且N r f 2/HO-1信号通路可通过抑制下游炎症因子的表达水平发挥抗炎作用。本文研究结果显示,单纯加菌处理组N r f 2mR NA的表达增加,而加菌加F A处理组N r f 2mR NA表达相较于单纯加菌处理组显著上调。由此我们认为,在烟曲霉菌刺激的HC E C中,F A通过增加N r f 2的表达水平发挥抗炎作用。综上所述,F A能够通过增强N r f 2的表达和调控炎症因子及趋化因子的表达,减轻烟曲霉菌感染后HC E C的炎症反应。以后的研究可能倾向于探讨F A在体内外烟曲霉菌感染模型中发挥抗炎作用的多种机制,以期推进F A用于真菌性角膜炎治疗的临床研究。参考文献1R A T I T ON GB,P E A R LMAN E.P a t h o g e n i cA s p e r g i l l u sa n dF u s a r i u ma s i m p o r t a n tc a u s e so fb l i n d i n gc o r n e a l i n f e c t i o n s-t h er o l eo fn e u t r o p h i l s i n f u n g a l k i l l i n g,t i s s u ed a m a g ea n dc y-t o k i n ep r o d u c t i o nJ.C u r r e n t O p i n i o n i n M i c r o b i o l o g y,2 0 2 1,6 3:1 9 5-2 0 3.2THOMA SPA,L E C KAK,MYA T TM.C h a r a c t e r i s t i c c l i n i-c a l f e a t u r e sa sa na i dt ot h ed i a g n o s i so fs u p p u r a t i v ek e r a t i t i sc a u s e db yf i l a m e n t o u sf u n g iJ.T h eB r i t i s hJ o u r n a lo fO p h-t h a l m o l o g y,2 0 0 5,8 9(1 2):1 5 5 4-1 5 5 8.3WUTG,W I L HE LMU SKR,M I T C HE L LBM.E x p e r i m e n-t a lk e r a t o m y c o s i s i nam o u s em o d e lJ.I n v e s t i g a t i v eO p h t h a l-m o l o g y&V i s u a lS c i e n c e,2 0 0 3,4 4(1):2 1 0-2 1 6.4HE I N E KAMPT,S CHM I D TH,L A P PK,e t a l.I n t e r f e r e n c eo fA s p e r g i l l u s f u m i g a t u sw i t ht h e i mm u n er e s p o n s eJ.S e m i-n a r s i nI mm u n o p a t h o l o g y,2 0 1 5,3 7(2):1 4 1-1 5 2.5KA R TH I K E YANRS,L E A LSMJ r,P R A J NA N V,e ta l.E x p r e s s i o no f i n n a t ea n da d a p t i v e i mm u n em e d i a t o r s i nh u m a nc o r n e a lt i s s u ei n f e c t e dw i t hA s p e r g i l l u so rf u s a r i u mJ.T h e 4期张飒飒,等.阿魏酸在烟曲霉菌诱导人角膜上皮细胞中的抗炎作用4 8 9 J o u r n a l o f I n f e c t i o u sD i s e a s e s,2 0 1 1,2 0 4(6):9 4 2-9 5 0.6M I R C E S C U M M,L I P UMA L,VAN R OO I J E N N,e ta l.E s s e n t i a l r o l e f o rn e u t r o p h i l sb u tn o ta l v e o l a rm a c r o p h a g e sa te a r l yt i m ep o i n t s f o l l o w i n ga s p e r g i l l u sf u m i g a t u s i n f e c t i o nJ.T h e J o u r n a l o f I n f e c t i o u sD i s e a s e s,2 0 0 9,2 0 0(4):6 4 7-6 5 6.7S AHAYP,S I N GHA LD,NA G P A LR,e t a l.P h a r m a c o l o g i ct h e r a p yo f m y c o t i ck e r a t i t i sJ.S u r v e y o f O p h t h a l m o l o g y,2 0 1 9,6 4(3):3 8 0-4 0 0.8C AOLP,L IZH,YAN GZZ,e ta l.F e r u l i ca c i dp o s i t i v e l ym o d u l a t e st h ei n f l a mm a t o r yr e s p o n s et os e p t i cl i v e ri n j u r yt h r o u g h t h e G S K-3/N F-B/C R E B p a t h w a yJ.L i f eS c i e n c e s,2 0 2 1,2 7 7:1 1 9 5 8 4.9ME I ZR,HON GY,YAN GHY,e t a l.F e r u l i c a c i da l l e v i a t e sh i g hf a td i e t-i n d u c e dc o g n i t i v e i m p a i r m e n tb y i n h i b i t i n go x i d a-t i v es t r e s sa n da p o p t o s i sJ.E u r o p e a n J o u r n a l o fP h a r m a c o l o-g y,2 0 2 3,9 4 6:1 7 5 6 4 2.1 0P I C ON EP,NU Z Z OD,D IC A R L O M.F e r u l i c a c i d:an a t u r a la n t i o x i d a n ta g a i n s t o x i d a t i v e s t r e s si n d u c e d b y o l i g o m e r i cA-b e t ao ns e au r c h i ne m b r y oJ.T h eB i o l o g i c a lB u l l e t i n,2 0 1 3,2 2 4(1):1 8-2 8.1 1YAN GCF,L IL,MAZH,e t a l.H e p a t o p r o t e c t i v ee f f e c to fm e t h y l f e r u l i ca c i da g a i n s tc a r b o nt e t r a c h l o r i d e-i n d u c e da c u t el i v e r i n j u r yi nr a t sJ.E x p e r i m e n t a la n dT h e r a p e u t i c M e d i-c i n e,2 0 1 8,1 5(3):2 2 2 8-2 2 3 8.1 2L AMP I A S IN,MON T ANA G.T h em o l e c u l a re v e n t sb e h i n df e r u l i ca c i dm e d i a t e dm o d u l a t i o no f I L-6e x p r e s s i o n i nL P S-a c-t i v a t e dR a w2 6 4.7c e l l sJ.I mm u n o b i o l o g y,2 0 1 6,2 2 1(3):4 8 6-4 9 3.1 3L IC,L IL,YAN G CF,e ta l.H e p a t o p r o t e c t i v ee f f e c t so fM e t h y l f e r u l i ca c i do na l c o h o l-i n d u c e dl i v e ro x i d a t i v e i n j u r yi nm i c eb yi n h i b i t i n gt h eNO X 4/RO S-MA P Kp a t h w a yJ.B i o-c h e m i c a l a n dB i o p h y s i c a lR e s e a r c hC o mm u n i c a t i o n s,2 0 1 7,4 9 3(1):2 7 7-2 8 5.1 4HUAN GJF,Z HON GJ,C HE NGP,e t a l.Ah y d r o g e l-b a s e dh y b r i dt h e r a n o s t i cc o n t a c tl e n sf o rf u n g a lk e r a t i t i sJ.A C SN a n o,2 0 1 6,1 0(7):6 4 6 4-6 4 7 3.1 5MAHMOUD IS,MA S OOM I A,AHMA D I K I A K,e ta l.F u n g a l k e r a t i t i s:a no v e r v i e wo f c l i n i c a l a n d l a b o r a t o r ya s p e c t sJ.M y c o s e s,2 0 1 8,6 1(1 2):9 1 6-9 3 0.1 6T I ANX,P E N GXD