一种以复合多糖和蛋白微囊包被乳化脂肪粉中粗脂肪检测方法的建立.pdf

广东饲料2023 年 6 期脂肪含量是食品、饲料中一项重要的营养成分指标，油脂主要成分是脂肪，油脂是饲料中能量和必需脂肪酸的重要来源，并且在促进脂溶性营养物质的吸收、缓解动物热应激、提高饲料的适口性等发挥重要作用。随着行业对油脂的研究探索，乳化油脂、微囊包被乳脂粉在仔猪、繁育母猪等动物的养殖业中得到了较广泛的应用。目前，食品和饲料行业中关于粗脂肪的测定主要依据现有的 2 个国家标准，即食品安全国家标准食品中脂肪的测定（GB5009.6-2016）、饲料中粗脂肪的测定（GB/T 6433-2006）。其中粗脂肪的测定方法有索氏抽提法，碱水解法、酸水解法和盖勃法。但所提的四种检测方法均有其局 限 性。索 氏 抽 提 法（GB5009.6-2016）在测定结合态脂肪时由于脂肪被乳化或包被，结果往往偏低（张晓婷等，2018），且在样品中含糖较高时由于乙醚具有一定极性，能够萃取部分碳水化合物（邱清莲等，2016），导致结果不准，故常用于游离态脂肪的测定。酸水解法和盖勃法（GB 5009.6-2016）都需要在强酸条件下进行，但由于在强酸条件下，糖类物质易发生碳化，磷脂易分解为脂肪酸和碱（孙甜甜，2012），因此不适用于高糖或高磷脂的样品。碱水解法（GB5009.6-2016）适用于乳制品粗脂肪的检测，但不适于水解微囊包被型脂肪粉物质（殷秋妙等，2021）。普适性标准在检测过程中一是操作繁琐，二是对于不同特性物料存在检测偏差大、波动大等不适用的情况。鉴于以上方法的局限性，本研究建立了一种可以准确、高效检测出微囊包被乳化脂肪粉中粗脂肪含量的方法，该方法操作便捷、重复性误差和再现性误差符合相关要求。1 材料与方法1.1 微囊包被乳化脂肪粉试验品制备参照发明专利“一种饲用高蛋白乳状速溶功能性微囊包被乳化脂肪粉的制备方法”（杨 梅 等，2021，申 请 号：202210835881.3），按照 特殊食品 用 脂 肪 粉（T/CNHFA001-2022）质量标准，采用大豆浓缩蛋白、大米浓缩蛋白、发酵菌种、酶制剂、大豆油、椰子油、玉米油、乳化剂、麦芽糊精、乳清粉、全脂奶粉、蔗糖和低聚糖等原料制得微囊包被乳化脂肪粉。一种以复合多糖和蛋白微囊包被乳化脂肪粉中粗脂肪检测方法的建立作者：郭彦林章心明单位：安徽五粮泰生物工程股份有限公司摘要：为了解决新型油脂产品以复合多糖和蛋白微囊包被乳化脂肪粉中粗脂肪检测结果的准确性，本研究建立了一种以复合多糖和蛋白微囊包被乳化脂肪粉中粗脂肪含量的检测方法，通过 120高温加热 1h 破坏乳化和微囊包被下的结合态脂肪，再以石油醚（3060）作为提取溶剂，使用索氏提取法对粗脂肪含量进行测定。该方法测定结果的精密度与回收率符合规范要求。关键词：脂肪粉；微囊包被；乳化；粗脂肪中图分类号S816.2文献标识码 A文章编号1005-8613（2023）06-0040-03淫检测分析淫40窑窑广东饲料2023 年 6 期表 2不同温度加热 2h 粗脂肪测定值（5 次检测结果取平均值）样品名称粗脂肪标示值/%粗脂肪含量检测值/%80100120140A-252522.560.1723.450.2625.080.2823.750.29A-353532.790.2534.250.2235.220.2133.470.41表 1 不同检测方法测定粗脂肪结果（5 次检测结果取平均值）样品名称粗脂肪标示值/%粗脂肪含量检测值/%索氏抽提法酸水解法碱水解法乙醚石油醚A-252527.550.3022.600.4723.520.3327.361.69A-353539.530.3831.580.4233.510.4838.931.75该脂肪粉由安徽五粮泰生物工程股份有限公司生产制备并提供，其外观呈现乳白色不规则细小颗粒，能够快速溶于水，水溶液呈现乳白色，商品名称为“五粮乳”。1.2 主要仪器SZF-06A 脂肪仪（上海华睿仪器有限公司）；DHG-9240 电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；电子天平（0.001g 奥豪斯仪器有限公司）；扁平称量瓶。1.3 试剂与材料石油醚（3060）、乙醚均为分析纯（上海国药化学试剂）；微囊包被乳化脂肪粉 A-25、微囊包被乳化脂肪粉 A-35 样品均为安徽五粮泰生物工程股份有限公司的试验样品。1.4 试验方法称取 20 g 微囊包被乳化脂肪粉样品均匀平铺于扁平称量瓶中，放入恒温干燥箱中加热固定时间，取出置于干燥器中冷却，冷却至室温后取适量样品检测加热后样品水分及挥发物含量，再称取称量瓶中试样 34 g，准确至 0.001 g，全部移至滤纸筒内。将滤纸筒放入索氏抽提器的抽提筒内，连接已干燥至恒重的接收瓶，接收瓶内加入 80 mL 乙醚或石油醚，于水浴上加热，使乙醚或石油醚不断回流抽提，一般抽提 6 h。提取结束时，用磨砂玻璃棒接取 1 滴提取液，磨砂玻璃棒上无油斑表明提取完毕。回收乙醚或石油醚，取下接收瓶，于 100 5 干燥 1 h，放干燥器中冷却 0.5 h 后称至恒重（前后两次质量差不超过 2 mg）。加热温度、加热时长、萃取溶剂等技术参数通过试验筛选确定。试样中（粗）脂肪的含量按式（1）计算：X=m1-m0m2（100-m）100%(1)式中：X：试样中脂肪的含量（以干基计），%；m1：恒重后接收瓶和脂肪的含量，g；m0：接收瓶的质量，g；m2：试样的质量，g；W：试样的含水量，%；100：换算系数。1.5 数据统计分析试验结果采用 Excel 统计软件进行结果分析，数据结果采用“平均值标准差”表示。2 结果与分析2.1 方法的建立2.1.1 萃取方法的选择取 A-25、A-35 样品适量，分别按照食品安全国家标准食品中脂肪的测定（GB5009.6-2016）中索氏抽提法、碱水解法、酸水解法进行粗脂肪测定。结果（均以干基计）比较见表 1。结果表明，由于试验样品中糖和蛋白含量高，在以乙醚为萃取剂的索氏抽提法测脂肪结果明显偏高，以石油醚（3060）为萃取剂的索氏抽提法测脂肪结果偏低；碱水解法由于脂肪含量高且被微囊包被，结果重复性差（郑丽卿等，2015）；酸水解法由于样品中含有磷脂，导致检测结果偏低。结合样品含磷脂、微囊包被、高糖含量的特性，酸水解法、碱水解法难以适用。根据索氏抽提法原理，通过高温加热，使物料结合态脂肪转化为游离态脂肪，从而进行测定。2.1.2 烘干温度筛选为保证对结合态脂肪破坏效果，选择 2 h 作为加热时间，研究 4 种加热温度 80、100、120、140 对粗脂肪测定的影响。其检测结果（均以干基计）见表 2。结果表明，随着加热温度升高到一定值，粗脂肪测定值越接淫检测分析淫41窑窑广东饲料2023 年 6 期表 3120加热不同时间粗脂肪测定值（5 次检测结果取平均值）样品名称粗脂肪标示值/%粗脂肪含量检测值/%0.5 h1 h1.5 h2 hA-252523.710.2225.020.2525.040.2825.040.23A-353534.280.2435.250.1435.080.2535.170.12表 4重复性与准确度试验称样量/g豆油添加量/g原样粗脂肪测定值/%添加回收率/%3.0050.20235.1299.783.0210.21735.1999.943.0080.40935.2499.893.0110.41335.0799.923.0030.41135.1299.16近标示值。120 下测定结果与标示值基本吻合。但由于油脂在长时间高温下会形成小分子挥发性物质（郑良清等，2016），140下加热 2 h 后，粗脂肪测定值出现回落结果偏低。2.1.3 加热时间筛选从烘干温度筛选试验中可以看出 120 下，样品加热 2 h后粗脂肪测定值与标示值较吻合。研究不同加热时间下粗脂肪测定值情况有利于节约试验时间，提升检测效率。120 下 4 种不同加热时间 0.5 h、1 h、1.5 h、2h 粗脂肪测定值（均以干基计）见表 3。结果表明，随着加热时间的延长，在 1 h 时样品粗脂肪检测值与标示值开始吻合，再继续增加加热时间，测定值基本保持不变。120 下加热 1 h 可以认定结合态脂肪完全转变为游离态脂肪。2.2 重复性与正确度验证对 A-35 样品粗脂肪测定 5次，测定结果见表 4。粗脂肪平均含量为 35.15%，RSD 为 0.20%，大 豆 油 的 平 均 回 收 率 为99.74%，RSD 为 0.33%。测定结果符合 GB/T 27404-2008 试验室质量控制规范中对测定结果的精密度和回收率的要求。3 讨论与结论本研究中的样本由于其自身特性，含磷脂、包被、高油、高蛋白、高糖等特性，在尝试了食品与饲料粗脂肪国标检测方法后，发现均不适用。通过高温热处理破坏磷脂稳定性（黄仪友等，2017）及包被结构，以石油醚作为萃取剂避免因乙醚极性大对糖类的提取，进而建立了该方法。方法为：称取样品 20 g 均匀平铺于扁平称量瓶中，放入120恒温干燥箱中 1h，取出置于干燥器中冷却，冷却至室温后取适量样品检测加热后样品水分及挥发物含量，再称取称量瓶中试样 34 g，准确至 0.001 g，全部移至滤纸筒内。将滤纸筒放入索氏抽提器的抽提筒内，连接已干燥至恒重的接收瓶，接收瓶内加 入 80 mL 石 油 醚（3060），于水浴上加热，使石油醚不断回流抽提，抽提 6 h 提取完毕。提取结束时，用磨砂玻璃棒接取 1 滴提取液，磨砂玻璃棒上无油斑表明提取完毕。回收石油醚，取下接收瓶，于 100 5 干燥 1 h，放干燥器中冷却 0.5 h后称至恒重。该方法测定结果的精密度与回收率符合试验室质量控制规范中相关要求。参考文献：1 国家饲料质量监督检验中心(北京)，GB/T 6433-2006 饲料中粗脂肪的测定 S，北京：中国标准出版社，2008：1-10.2邱清莲，蔡伟江，房家祥，石油醚与乙醚测定含糖类样品中脂肪含量的准确率比较 J，食品安全质量检测学报，2016，7(8)：3393-3397.3郑丽卿，崔锦良，方志成等，植脂末中脂肪测定方法研究J，食品安全导刊，2015，0(11X)：103-104.4 中国合格评定国家认可中心，中华人民共和国浙江出入境检验检疫局.GB/T 27404-2008 试验室质量控制规范食品理化检测S，北京：中国标准出版社，2008:1-32.5中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会，国家食品药品监督管理总局，GB 5009.6-2016 食品安全国家标准食品中脂肪的测定S，北京：中国标准出版社，2017:1-16.6T/CNHFA 001-2022，特殊食品用脂肪粉 S.淫检测分析淫42窑窑