维立西呱通过调控circ PRKCI表达对脂多糖致大鼠心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响.pdf

心电与循环 2023 年第 42 卷第 5 期摘要目的探讨维立西呱对脂多糖（LPS）诱导的大鼠心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响以及其对环状 RNA PRKCI（circPRKCI）表达的调控机制。方法取大鼠心肌细胞 H9C2，采用 LPS 诱导方式构建心肌细胞损伤模型；按随机数字表法分为对照组、LPS 组、LPS+维立西呱-L 组（1 滋mol/L）、LPS+维立西呱-M 组（3 滋mol/L）、LPS+维立西呱-H 组（10 滋mol/L）、LPS+空载体质粒（pcDNA）组、LPS+circPRKCI 过表达载体（pcDNA-circPRKCI）组、LPS+维立西呱-H+阴性对照（sh-NC）组、LPS+维立西呱-H+circPRKCI 慢病毒短发夹 RNA（sh-circPRKCI）组。检测并比较各组 H9C2 细胞肿瘤坏死因子-（TNF-）、白细胞介素 6（IL-6）等炎症因子水平，细胞凋亡率和裂解的胱天蛋白酶（Cleaved Caspase）-3、CleavedCaspase-9 等凋亡相关蛋白表达水平，以及 circPRKCI mRNA 表达水平。结果与对照组比较，LPS 组 TNF-水平、IL-6 水平、细胞凋亡率及凋亡相关蛋白 Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9 蛋白表达水平均明显升高（均 P0.05）；与 LPS 组比较，LPS+维立西呱-L 组、LPS+维立西呱-M 组、LPS+维立西呱-H 组上述指标均明显降低（均 P0.05），且LPS+维立西呱-L 组LPS+维立西呱-M 组LPS+维立西呱-H 组（均 P0.05）。与对照组比较，LPS 组 circPRKCImRNA 表达水平明显降低（P0.05）；与 LPS 组比较，LPS+维立西呱-L 组、LPS+维立西呱-M 组、LPS+维立西呱-H 组circPRKCI mRNA 表达水平均明显升高（均 P0.05），且 LPS+维立西呱-L 组LPS+维立西呱-M 组LPS+维立西呱-H组（均 P0.05）。与 LPS+pcDNA 组比较，LPS+pcDNA-circPRKCI 组 circPRKCI mRNA 表达水平明显升高（P0.05），而TNF-水平、IL-6 水平、细胞凋亡率以及凋亡相关蛋白 Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9 蛋白表达水平均明显降低（均 P0.05）。与 LPS+维立西呱-H+sh-NC 组比较，LPS+维立西呱-H+sh-circPRKCI 组 circPRKCI mRNA 表达水平明显降低（P0.05），而 TNF-水平、IL-6 水平、细胞凋亡率以及凋亡相关蛋白 Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9 蛋白表达水平均明显升高（均 P0.05）。结论维立西呱可抑制 LPS 诱导的大鼠心肌细胞炎症反应和细胞凋亡，其作用机制是上调 circPRKCI mRNA 表达。关键词维立西呱；环状 RNA PRKCI；脂多糖；心肌细胞；细胞凋亡；炎症反应Effect of vericiguat on the inflammatory response and apoptosis of LPS-induced cardiomyocytes through regulation ofcircPRKCI expressionHUA Congjun,HUA Xiuhong,HUANG Chunyan,PAN YibinFirst-authors address:Department of Cardiology,Jinhua Hospital,Zhejiang University School of Medicine(Jinhua Municipal CentralHospital),Jinhua 321000,ChinaCorresponding author:HUA Congjun,E-mail:AbstractObjectiveTo investigate the effects of vericiguat on lipopolysaccharide(LPS)-induced inflammatoryresponse and apoptosis in rat cardiomyocytes H9C2 and to analyze its regulation of circular RNA PRKCI(circPRKCI)expression.MethodsLPS stimulation of H9C2 cells was used to establish a myocardial cell injury model,and randomgroups were established:control group,LPS group,LPS+vericiguat-L group,LPS+vericiguat-M group,LPS+vericiguat-H group,LPS+pcDNA group,LPS+pcDNA-circPRKCI group,LPS+vericiguat-H+sh-NC group,LPS+vericiguat-H+sh-circPR KCI group.vericiguat-H+sh-NC group,LPS+vericiguat-H+sh-circP RKCI group.qRT-PCR维立西呱通过调控 circPRKCI 表达对脂多糖致大鼠心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响华崇俊华秀红黄春艳潘轶斌荫论著DOI：10.12124/j.issn.2095-3933.2023.5.2023-5471作者单位：321000浙江大学医学院附属金华医院（金华市中心医院）心内科（华崇俊、黄春艳、潘轶斌）；金华市第五医院药剂科（华秀红）通信作者：华崇俊，E-mail：427心电与循环 2023 年第 42 卷第 5 期脓毒症是由感染所致的全身性炎症反应综合征，心脏是其常见的受累器官，重症监护室中有60%以上的脓毒症患者主要表现为心功能障碍，其病死率高达 70%1-2。维立西呱是一种可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂，可松弛平滑肌、扩张血管，改善左心室重构以及心肌血管功能3。但关于维立西呱心肌保护的潜在机制以及是否可用于治疗脓毒症心肌损伤等，目前尚未完全阐明。环状 RNA 是由 5 端剪接供体结合 3 端剪接位点生成的 3-5 磷酸二酯键促进环化产生的，可调节血管功能并参与心肌细胞损伤过程4。研究表明，环状 RNA PRKCI（circular RNAPRKCI，circPRKCI）表达上调可减轻心肌细胞氧化损伤5。然而，circPRKCI 在脓毒症心肌损伤中的作用尚未明确。因此，本研究利用脂多糖（lipopolysac-charide，LPS）诱导大鼠心肌细胞 H9C2 建立心肌细胞损伤模型6，以探讨维立西呱对 H9C2 细胞炎症反应、细胞凋亡的影响，现将结果报道如下。1材料和方法1.1药物和试剂维立西呱（批号：20190323）购自重庆迈德凯医药有限公司；LPS（批号：20190512）购自上海康朗生物科技有限公司；Lipofectamine 2000（批号：20191203）购自美国 Invitrogen 公司；Trizol 试剂（批号：20191115）、反转录试剂盒（批号：20190816）、SYBR Green 试剂盒（批号：20200301）均购自北京天根生化科技有限公司；凋亡检测试剂盒（批号：20200108）购自美国 Sigma 公司；circPRKCI 过表达载体（pcDNA-circPRKCI）（批号：20200512）购自上海生工生物工程股份有限公司；空载体质粒（pcDNA）（批号：20200306）购自上海远慕生物科技有限公司；circPRKCI 慢病毒短发夹 RNA（sh-circPRKCI）（批号：20200116）及其阴性对照（sh-NC）（批号：20200203）均购自广州锐博生物公司；肿瘤坏死因子-琢（tumor necrosis factor-，TNF-）（批号：20200307）、白细胞介素 6（interleukin-6，IL-6）（批号：20200318）检测试剂盒均购自上海酶联生物公司；兔抗人裂解的胱天蛋白酶（cleaved cysteine as-partic acid specific protease，Cleaved Caspase）-3 抗体（批号：20191223）、兔抗人 Cleaved Caspase-9（批号：20200209）、山羊抗兔二抗（批号：20200218）均购自武汉艾美捷科技有限公司；甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗体（批号：20200401）购自美国 Abcam 公司。1.2方法1.2.1细胞分组与处理大鼠心肌细胞 H9C2（批号：20201003）购自上海弘顺生物科技有限公司。本实验经浙江大学医学院附属金华医院医学伦理委员会审查通过（批准文号：Zj8790）。取维立西呱溶解于0.9%氯化钠溶液，制备成用 1、3、10 滋mol/L 不同剂量的维立西呱溶液。将 H9C2 细胞按随机数字表法分为对照组（采用 DMEM 培养基培养 6 h）、LPS 组（加入含 10 mg/L LPS 的培养液培养 6 h7）、LPS+维立西呱-L 组（1 滋mol/L 维立西呱溶液预处理 6 h，弃培养基后加入含 10 mg/L LPS 的培养液培养 6 h8）、LPS+维立西呱-M 组（3 滋mol/L 维立西呱溶液预处理 6 h，弃培养基后加入含 10 mg/L LPS 的培养液培养 6 h8）、LPS+维立西呱-H 组（10 滋mol/L 维立西呱溶液预处理 6 h，弃培养基后加入含 10 mg/L LPS的培养液培养 6 h8）、LPS+pcDNA 组（转染 pcDNA后加入含 10mg/L LPS 的培养液培养 6h）、LPS+pcDNA-was performed to detect the expression of circPRKCI.The expression levels of tumor necrosis factor-琢(TNF-琢)andinterleukin 6(IL-6)were detected by ELISA.Apoptosis rate was detected by flow cytometry.ResultsCompared tothe control group,the expression levels of TNF-琢 and IL-6,apoptosis rate and the protein expression of cleaved-caspase3,cleaved-caspase9 were increased and the expression of circPRKCI was decreased in the LPS group(all P0.05).Compared to the LPS group,the expression levels of TNF-琢 and IL-6,apoptosis rate were decreased,and theexpression of circPRKCI was increased in the LPS+vericiguat-L,LPS+vericiguat-M and LPS+vericiguat-H groups,andthey were dose-dependent(all P0.05).The expression levels of TNF-琢 and IL-6,apoptosis rate were reduced in theLPS+pcDNA-circPRKCI group compared to the LPS+pcDNA group(all P0.05).Compared to the LPS+vericiguat-H+sh-NC group,the expression levels of TNF-琢 and IL-6,apoptosis rate were increased in the LPS+vericiguat-H+sh-circPRKCI group(all P0.05).ConclusionVericiguat could inhibit the inflammatory response,apoptosis and thusattenuate LPS-induced H9C2 cell injury in cardiomyocytes through upregulation of circPRKCI mRNA expression.Key wordsVericiguat;circRNA PRKCI;Lipopolysaccharide;Myocardial cell;Apoptosis;Inflammatory response428心电与循环 2023 年第 42 卷第 5 期circPRKCI 组（转染 pcDNA、pcDNA-circPRKCI 后加入含 10mg/L LPS 的培养液培养 6h）、LPS+维立西呱-H+sh-NC 组（10 滋mol/L 维立西呱溶液预处理转染 sh-NC 的细胞 6 h，再加入含 10 mg/L LPS 的培养液培养 6 h）、LPS+维立西呱-H+sh-circPRKCI 组（10 滋mol/L 维立西呱溶液预处理转染 sh-circPRKCI的细胞 6h，再加入含 10mg/L LPS 的培养液培养 6h）。1.2.2TNF-、IL-6 水平检测采用酶联免疫吸附试验。收集各组 H9C2 细胞上清液，按照 TNF-、IL-6 试剂盒说明书检测 TNF-、IL-6 水平。1.2.3细胞凋亡率检测采用流式细胞术。收集各组 H9C2 细胞，重悬于 1结合缓冲液（500 滋L）中，按照凋亡检测试剂盒说明书进行操作，使用 FACSCalibur 流式细胞仪检测凋亡细胞率。1.2.4细胞凋亡相关蛋白表达水平检测采用蛋白质印迹法。使用 RIPA 裂解液提取各组 H9C2 细胞的总蛋白，采用二喹啉甲酸法检测蛋白浓度，按照每个泳道上样 30 滋g 蛋白样本进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，加入 5%脱脂乳封闭膜 1 h（37）；分别加入 Cleaved Caspase-3 抗体（1颐1 000）、Cleaved Caspase-9 抗体（1颐1 000）、GAPDH 抗体（1颐2 000）在 4 孵育过夜；Tis-盐酸缓冲液冲洗后用二抗（1颐5 000）室温孵育 1 h，然后将膜置于塑料盒；采用 Image-Pro 6.0 软件分析各条带灰度值，以目的蛋白灰度值与 GAPDH 灰度值的比值作为目的蛋白相对表达水平。1.2.5circPRKCI mRNA 表达水平检测采用实时荧光定量聚合酶链反应。收集各组 H9C2 细胞，加入1 mL Trizol 试剂提取细胞总 RNA，反转录合成 cD-NA。参照实时荧光定量聚合酶链反应试剂盒说明书进行操作，使用美国 ABI StepOnePlus 实时荧光定量聚合酶链反应仪检测 circPRKCI 阈值，以 GAPDH为内参，采用 2-驻驻Ct法计算 circPRKCI mRNA 表达水平。1.3统计学处理采用 SPSS 26.0 统计软件。计量资料以表示，两组间比较采用两独立样本 t 检验；多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用 SNK-q 检验。P0.05 为差异有统计学意义。2结果2.1维立西呱对 LPS 诱导的心肌细胞炎症反应的影响与对照组比较，LPS 组 TNF-、IL-6 水平均明显升高（均 P0.05）；与 LPS 组比较，LPS+维立西呱-L 组、LPS+维立西呱-M 组、LPS+维立西呱-H 组 TNF-、IL-6 水平均明显降低（均 P0.05），且 LPS+维立西呱-L 组LPS+维立西呱-M 组LPS+维立西呱-H 组（均 P0.05），见表 1。2.2维立西呱对 LPS 诱导的心肌细胞凋亡的影响与对照组比较，LPS 组细胞凋亡率及凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9 蛋白表达水平均明显升高（均 P0.05）；与 LPS 组比较，LPS+维立西呱-L 组、LPS+维立西呱-M 组、LPS+维立西呱-H 组细胞凋亡率及凋亡相关蛋白 CleavedCaspase-3、Cleaved Caspase-9 蛋白表达水平均明显降低（均 P0.05），且 LPS+维立西呱-L 组LPS+维立西呱-M 组LPS+维立西呱-H 组（均 P0.05），见图 1 和表 2。2.3维立西呱对 LPS 诱导的心肌细胞中 circPRKCImRNA 表达水平的影响与对照组比较，LPS 组circPRKCI mRNA 表达水平明显降低（P0.05）；与LPS 组比较，LPS+维立西呱-L 组、LPS+维立西呱-M 组、LPS+维立西呱-H 组 circPRKCI mRNA 表达水平均明显升高（均 P0.05），且 LPS+维立西呱-L 组LPS+维立西呱-M 组LPS+维立西呱-H组（均 P0.05），见表 3。2.4circPRKCI 过表达对 LPS 诱导的心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响与 LPS+pcDNA 组比较，LPS+pcDNA-circPRKCI 组 circPRKCI mRNA 表达水平明显升高（均 P0.05），而 TNF-水平、IL-6 水平、细胞凋亡率以及凋亡相关蛋白 Cleaved Caspase-3、组别LPS+维立西呱-L 组LPS+维立西呱-M 组LPS+维立西呱-H 组LPS 组对照组F值P值注：LPS 为脂多糖；TNF-为肿瘤坏死因子-；IL-6 为白细胞介素 6；与 LPS 组比较，aP0.05；与 LPS+维立西呱-L 组比较，bP0.05；与 LPS+维立西呱-H 组比较，cP0.05；与对照组比较，dP0.05表 1维立西呱对 LPS 诱导的心肌细胞炎症反应的影响（ng/L）n33333TNF-102.7110.88a73.726.71abc45.874.56ab143.0513.39d26.295.7680.9830.05IL-666.516.48a43.683.91abc23.425.81ab98.4410.08d15.214.4880.6430.05429心电与循环 2023 年第 42 卷第 5 期注：LPS 为脂多糖；Cleaved Caspase 为裂解的胱天蛋白酶；GAPDH 为甘油醛-3-磷酸脱氢酶图 1维立西呱对 LPS 诱导的心肌细胞凋亡的影响（A：凋亡相关蛋白 Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9 蛋白表达的电泳图；B：流式细胞图）组别LPS+维立西呱-L 组LPS+维立西呱-M 组LPS+维立西呱-H 组LPS 组对照组F值P值注：LPS 为脂多糖；Cleaved Caspase 为裂解的胱天蛋白酶；与 LPS 组比较，aP0.05；与 LPS+维立西呱-L 组比较，bP0.05；与LPS+维立西呱-H 组比较，cP0.05；与对照组比较，dP0.05表 2维立西呱对 LPS 诱导的心肌细胞凋亡的影响n33333细胞凋亡率（%）21.612.09a16.221.36abc8.630.77ab27.012.15d5.711.4287.2170.05Cleaved Caspase-3 蛋白表达水平0.340.03a0.230.03abc0.120.02ab0.470.04d0.070.0294.7500.05Cleaved Caspase-9 蛋白表达水平0.480.04a0.360.03abc0.210.02ab0.620.03d0.150.02132.6070.05Cleaved Caspase-9 蛋白表达水平均明显降低（均P0.05），见图 2 和表 4。2.5沉默 circPRKCI 表达对 LPS 诱导的心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响与 LPS+维立西呱ABCleaved Caspase-3Cleaved Caspase-9GAPDH对照组LPS 组100101102103104100101102103104膜联蛋白-异硫氰酸荧光素膜联蛋白-异硫氰酸荧光素LPS+维立西呱-L 组LPS+维立西呱-M 组LPS+维立西呱-H 组104103102101100100101102103104膜联蛋白-异硫氰酸荧光素100101102103104膜联蛋白-异硫氰酸荧光素100101102103104膜联蛋白-异硫氰酸荧光素104103102101100104103102101100104103102101100104103102101100430心电与循环 2023 年第 42 卷第 5 期组别LPS+维立西呱-L 组LPS+维立西呱-M 组LPS+维立西呱-H 组LPS 组对照组F值P值注：LPS 为脂多糖；circPRKCI 为环状 RNA PRKCI；与 LPS组比较，aP0.05；与 LPS+维立西呱-L 组比较，bP0.05；与LPS+维立西呱-H 组比较，cP0.05；与对照组比较，dP0.05表 3维立西呱对 LPS 诱导的心肌细胞中 circPRKCImRNA 表达水平的影响n33333circPRKCI mRNA 表达水平0.530.05a0.720.06abc0.870.08ab0.320.04d1.000.0077.6280.05组别LPS+pcDNA-circPRKCI 组LPS+pcDNA 组t 值P值注：circPRKCI 为环状 RNA PRKCI；LPS 为脂多糖；pcDNA 为空载体质粒；pcDNA-circPRKCI 为 circPRKCI 过表达载体；TNF-为肿瘤坏死因子-；IL-6 为白细胞介素 6；Cleaved Caspase 为裂解的胱天蛋白酶表 4circPRKCI 过表达对 LPS 诱导的心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响n33circPRKCI mRNA表达水平1.090.110.330.0411.2460.05TNF-（ng/L）56.724.90148.5911.8612.4000.05IL-6（ng/L）37.203.88102.1110.4210.1110.05细胞凋亡率（%）12.663.2231.584.575.8620.05Cleaved Caspase-3蛋白表达水平0.200.030.480.058.3170.05Cleaved Caspase-9蛋白表达水平0.300.030.630.068.5210.05注：circPRKCI 为环状 RNA PRKCI；LPS 为脂多糖；pcDNA 为空载体质粒；pcDNA-circPRKCI 为 circPRKCI 过表达载体；Cleaved Caspase 为裂解的胱天蛋白酶；GAPDH 为甘油醛-3-磷酸脱氢酶图 2circPRKCI 过表达对 LPS 诱导的心肌细胞凋亡的影响（A：凋亡相关蛋白 Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9 蛋白表达的电泳图；B：流式细胞图）-H+sh-NC 组 比 较，LPS+维 立 西 呱-H+sh-cir-cPRKCI 组 circPRKCI mRNA 表达水平明显降低（P0.05），而 TNF-水平、IL-6 水平、细胞凋亡率以及凋亡相关蛋白 Cleaved Caspase-3、Cleaved Cas-pase-9 蛋白表达水平均明显升高（均 P0.05），见图 3 和表 5。3讨论LPS 可诱导炎症因子分泌，而炎症因子可加剧心肌细胞凋亡，导致心肌损伤9。研究表明，环状RNA HIPK3 可促进 LPS 诱导的 H9C2 细胞凋亡，进而诱发心脏功能障碍10；环状 RNA TLK1 可介导线粒体 DNA 损伤，从而促进 LPS 诱导的 H9C2 细胞凋亡11。由此推测，环状 RNA 可能作为脓毒症心肌损伤相关治疗靶点。研究表明，维立西呱可促进小动脉血管舒张、血管重塑，从而减轻右心室功能损伤，抑制心肌肥厚、肺小血管重构，减轻心肌细胞线粒体损伤12。此外，维立西呱还可抑制氧化反应，降低肺动脉压力，减少右心室肥厚发生13。但目前关于维立西呱对心肌损伤的内在作用机制尚未明确。本研究结果显示，LPS诱导的心肌损伤细胞中 TNF-、IL-6 水平均明显升高，与 Gong 等14研究结果相似。此外，随着维立西呱剂量的增加，TNF-、IL-6 水平呈下降趋势，提示维立西呱可能通过降低炎症因子水平来减轻 LPSCleaved Caspase-3Cleaved Caspase-9GAPDH104103102101100100101102103104膜联蛋白-异硫氰酸荧光素LPS+pcDNA 组膜联蛋白-异硫氰酸荧光素100101102103104LPS+pcDNA-circPRKCI 组AB104103102101100431心电与循环 2023 年第 42 卷第 5 期诱导的 H9C2 细胞损伤。相关文献报道促炎症因子大量释放可促进凋亡相关蛋白表达，而胱天蛋白酶9、胱天蛋白酶 3 激活后可导致细胞凋亡15。本研究结果显示，经不同剂量的维立西呱处理后，LPS 诱导的 H9C2 细胞凋亡率及 Cleaved Caspase-3、CleavedCaspase-9 蛋白表达水平均明显降低，且呈剂量依赖性，提示维立西呱可抑制 LPS 诱导的 H9C2 细胞凋亡，进而减轻心肌细胞损伤。circPRKCI 在 LPS 诱导的肾小管上皮细胞中表达下调，可充当微小 RNA-545 的海绵分子，而上调circPRKCI mRNA 表达可增强细胞活力，削弱细胞凋亡能力，减轻细胞炎症损伤16。circPRKCI 在 LPS诱导的成骨细胞中表达下调，而上调其表达可抑制细胞凋亡17。本研究结果显示，在 LPS 诱导的心肌损伤细胞中 circPRKCI mRNA 表达水平明显降低，但经维立西呱处理后 circPRKCI mRNA 表达水平明显升高。本研究进一步发现，circPRKCI 过表达可降低TNF-、IL-6 水平，抑制 H9C2 细胞凋亡。既往研究表 明，circPRKCI 过 表 达 可 竞 争 性 结 合 微 小RNA-545、微小 RNA-589 来减轻神经细胞损伤18。circPRKCI 通过吸附微小 RNA-106b-5p 间接调控靶基因生长因子受体结合 2-相关结合蛋白 1 表达，促进肾小管上皮细胞增殖，抑制细胞凋亡以及炎症、氧化应激反应，减轻肾小管上皮细胞损伤19。由此 推 测，circPRKCI 可 能 通 过 靶 向 调 控 微 小RNA-545、微小 RNA-589、微小 RNA-106b-5p、生长因子受体结合 2-相关结合蛋白 1 表达，进而减轻 LPS 诱导的 H9C2 细胞损伤。为进一步验证 cir-cPRKCI 是否可作为维立西呱减轻心肌细胞损伤的潜在靶标，本研究将 sh-circPRKCI 转染至维立西呱处理后的 H9C2 细胞，结果显示 TNF-水平、IL-6水平、细胞凋亡率以及 Cleaved Caspase-3、CleavedCaspase-9 蛋白表达水平均明显升高，提示维立西呱可通过调节 circPRKCI mRNA 表达逆转 LPS 诱导的H9C2 细胞心肌损伤，但 circPRKCI 具体调控哪些途径来参与 H9C2 细胞损伤过程仍需进一步深入研究明确。综上所述，维立西呱可抑制 LPS 诱导的大鼠心肌细胞炎症反应和细胞凋亡，其作用机制是上调circPRKCI mRNA 表达。笔者下一步将开展裸鼠移组别LPS+维立西呱-H+sh-circPRKCI 组LPS+维立西呱-H+sh-NC 组t 值P值注：circPRKCI 为环状 RNA PRKCI；LPS 为脂多糖；sh-circPRKCI 为 circPRKCI 慢病毒短发夹 RNA；sh-NC 为阴性对照；TNF-为肿瘤坏死因子-；IL-6 为白细胞介素 6；Cleaved Caspase 为裂解的胱天蛋白酶表 5沉默 circPRKCI 表达对 LPS 诱导的心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的影响n33circPRKCI mRNA表达水平0.270.031.000.0042.1470.05TNF-（ng/L）118.3910.3344.534.9411.1720.05IL-6（ng/L）80.577.7720.992.3412.7170.05细胞凋亡率（%）20.641.558.050.7212.7590.05Cleaved Caspase-3蛋白表达水平0.410.040.110.0211.6190.05Cleaved Caspase-9蛋白表达水平0.530.040.200.0212.7810.05注：circPRKCI 为环状 RNA PRKCI；LPS 为脂多糖；sh-circPRKCI 为 circPRKCI 慢病毒短发夹 RNA；sh-NC 为阴性对照；Cleaved Caspase 为裂解的胱天蛋白酶；GAPDH 为甘油醛-3-磷酸脱氢酶图 3沉默 circPRKCI 表达对 LPS 诱导的心肌细胞凋亡的影响（A：凋亡相关蛋白 Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9 蛋白表达的电泳图；B：流式细胞图）ABCleaved Caspase-3Cleaved Caspase-9GAPDH104103102101100LPS+维立西呱-H+sh-NC 组LPS+维立西呱-H+sh-circPRKCI 组100101102103104膜联蛋白-异硫氰酸荧光素100101102103104膜联蛋白-异硫氰酸荧光素104103102101100432心电与循环 2023 年第 42 卷第 5 期植瘤实验，以验证维立西呱的潜在治疗作用。参考文献1张庆军,王辉,张苗苗,等.匹诺塞林调控 miR-486-5p 表达对LPS 致心肌细胞氧化应激和细胞凋亡的影响J.河北医药,2022,44(5):682-686.DOI:10.3969/j.issn.1002-7386.2022.05.009.2Koyani CN,Plastira I,Sourij H,et al.Empagliflozin protects heartfrom inflammation and energy depletion via AMPK activation J.Pharmacol Res,2020,158(1):104870-104880.DOI:10.1016/j.phrs.2020.104870.3李晨,李鑫,刘春蕾,等.马西替坦联合维利西呱治疗缺氧性肺高压大鼠的作用机制J.解放军医学院学报,2021,42(10):1058-1063.DOI:10.3969/j.issn.2095-5227.2021.10.011.4Li J,Jiang R,Hou Y,et al.Mesenchymal stem cells-derived exo-somes prevent sepsis-induced myocardial injury by a circRTN4/miR-497-5p/MG53 pathwayJ.Biochem Biophys Res Commun,2022,618(1):133-140.DOI:10.1016/j.bbrc.2022.05.094.5刘颁,姜丕桥,熊桂丽,等.circPRKCI 靶向 miR-217 对缺氧/复氧诱导心肌细胞损伤的影响J.中西医结合心脑血管病杂志,2022,20(4):632-637.DOI:10.12102/j.issn.1672-1349.2022.04.009.6Fu G,Wang B,He B,et al.LPS induces cardiomyocyte necroptosisthrough the RIPK3/PGAM5 signaling pathwayJ.J Recept SignalTransduct Res,2021,41(1):32-37.DOI:10.1080/10799893.2020.1783682.7刘丹,尹东,曾姝,等.川芎嗪对 LPS 致心肌细胞损伤的影响及机制研究J.中国药理学通报,2012,28(11):1531-1535.DOI:10.3969/j.issn.1001-1978.2012.11.012.8Cai Y,Zhang B,Shalamu A,et al.Soluble guanylate cyclase(sGC)stimulator vericiguat alleviates myocardial ischemia-reperfusion in-jury by improving microcirculationJ.Ann Transl Med,2022,10(12):662-672.DOI:10.21037/atm-22-2583.9Zhu H,Zhang L,Jia H,et al.Tetrahydrocurcumin improves lipopo-lysaccharide-induced myocardial dysfunction by inhibiting oxida-tive stress and inflammation via JNK/ERK signaling pathway regu-lationJ.Phytomedicine,2022,104(1):154283-154293.DOI:10.1016/j.phymed.2022.154283.10Fan S,Hu K,Zhang D,et al.Interference of circRNA HIPK3 al-leviates cardiac dysfunction in lipopolysaccharide-induced micemodels and apoptosis in H9C2 cardiomyocytesJ.Ann Transl Med,2020,8(18):1147-1157.DOI:10.21037/atm-20-5306.11Qiu Y,Yu Y,Qin XM,et al.CircTLK1 modulates sepsis-inducedcardiomyocyte apoptosis via enhancing PARP1/HMGB1 axis-me-diated mitochondrial DNA damage by sponging miR-17-5pJ.JCell Mol Med,2021,25(17):8244-8260.DOI:10.1111/jcmm.16738.12Armstrong PW,Pieske B,Anstrom KJ,et al.Vericiguat in patientswith heart failure and reduced ejection fractionJ.N Engl J Med,2020,382(20):1883-1893.DOI:10.1056/NEJMoa1915928.13Trujillo ME,Arrington L,Patel Y,et al.Population pharmacoki-netics and pharmacodynamics of vericiguat in patients with heartfailure and reduced ejection fractionJ.Clin Pharmacol Ther,2022,1