EBV抗体谱检测在儿童EBV感染中的应用价值.pdf

*基金项目国家自然科学基金面上项目(81870017)*作者简介方芳袁女袁汉族袁生于 1975 年 12 月袁安徽省芜湖市人袁主任技师袁研究方向院临床免疫学检验遥*通信作者赵金红袁电话院0553-3932619袁E-mail:南 通 大 学 学 报 渊 医 学 版 冤Journal of Nantong University(Medical Sciences)2023 颐 43渊3冤DOI:10.16424/32-1807/r.2023.03.012引文格式院 方芳,张莺莺,奚邦生,等.EBV 抗体谱检测在儿童 EBV 感染中的应用价值J.南通大学学报(医学版),2023,43(3)颐250-252.EB 病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染多见于学龄前儿童，其中婴幼儿常因与家人亲密接触从而通过飞沫传播获得感染，因此又称“亲吻病”。免疫功能正常的 EBV 感染者在初次感染后往往仅为发热或一过性呼吸道症状，但亦可能引发免疫相关性疾病和儿童肿瘤，与机体的免疫功能有关1。而免疫功能下降的患者可能会引起慢性活动性 EBV 感染(chronic active Epstein-Barr virus infection,CAEBV)，其感染症状一般超过 6 个月，可发展为鼻咽癌、嗜血细胞综合征和恶性淋巴瘤等。根据患者产生各类抗体的时间线不同，综合分析抗体类型，对患者免疫状态的评估具有重要意义。本研究检测儿童血液中的包括EBV 衣壳抗原(viral capsid antigens,VCA)-IgG、VCA-IgM、早期抗原(early antigen,EA)-IgG、核抗原(nuclear antigen,NA)-IgG 及亲和力 EB IgG affinity-L、affinity-H 在内的 6 项抗体及 EBV DNA 载量，旨在评价 EBV 抗体谱 6 项指标在儿童 EBV 感染中的应用价值。EBV 抗体谱检测在儿童 EBV 感染中的应用价值*方芳1*袁张莺莺1袁奚邦生1袁窦常胜2袁赵金红3*(皖南医学院弋矶山医院1检验科袁2儿科袁芜湖 241000曰3皖南医学院基础医学院)摘要目的院探讨 EB 病毒(Epstein-Barr virus,EBV)抗体谱在儿童 EBV 感染中的应用遥 方法院选取住院患儿 60例袁根据 EBV DNA 表达量分为 EBV DNA 阳性组(29 例)和 EBV DNA 阴性组(31 例)遥 根据两组患者 EBV 抗体谱结果袁分析儿童 EBV 的感染状态遥 结果院60 例住院儿童 EBV 衣壳抗原(viral capsid antigens,VCA)-IgG 阳性率最高为 80.00%袁其次为核抗原(nuclear antigen,NA)-IgG 48.33%曰通过 VCA-IgG尧VCA-IgM尧NA-IgG 这 3 种抗体袁判断患者的感染状态袁EBV DNA 阳性患儿典型既往感染的比例最高(72.41%)袁EBV DNA 阴性患儿非典型既往感染的比例最高(41.94%)曰EBVDNA 阳性患儿 4 项主要 EBV 抗体均增高遥结论院EBV 在住院儿童中的感染比例较高袁EBV 抗体谱的检测为 EBV 感染的诊断和感染状态分析提供了有效的依据遥关键词EB 病毒曰抗体谱曰儿童曰应用价值中图分类号R725.1文献标志码A文章编号1674-7887渊2023冤03-0250-03Application of EBV antibodies spectrum in diagnosing EBV infected children*FANG Fang1*,ZHANG Yingying1,XI Bangsheng1,DOU Changsheng2,ZHAO Jinhong3*(1Department of Clinical Labo鄄ratory,2Department of Pediatrics,Yijishan Hospital,Wannan Medical College,Wuhu 241000;3School of Basic Medical Sci鄄ences,Wannan Medical College)AbstractObjective:To investigate the application of Epstein-Barr virus(EBV)antibody spectrum in diagnosing EBV-infectedchildren.Methods:A total of 60 hospitalized children were selected and divided into EBV DNA positive group(29 cases)andEBV DNA negative group(31 cases)based on the level of EBV DNA.And the infection status of EBV among children wasanalyzed by comparing the results of EBV antibody spectrum between the two groups.Results:The positive rate of EBV viralcapsid antigen(VCA)-IgG in 60 hospitalized children was the highest(80.00%),followed by nuclear antigen(NA)-IgG,whichwas 48.33%.The infection status of patients was determined by VCA-IgG,VCA-IgM and NA-IgG antibodies.EBV DNA-positive children had the most proportion of typical previous infections(72.41%),and Children who tested negative for EBV DNAhad the highest proportion of previous atypical infections(41.94%).Four major EBV antibodies showed increased levels in chil鄄dren who tested positive for EBV DNA.Conclusion:The study found a high infection rate of EBV in hospitalized children.Thedetection of EBV antibody spectrum provides an effective basis for diagnosing EBV infection and analyzing infection status.Key wordsEpstein-Barr virus;antibodies spectrum;child;applied value250窑窑1资料与方法1.1一般资料选取 2020 年 11 月2021 年 4 月皖南医学院弋矶山医院儿科收治住院的臆14 岁患儿 60 例，主要症状为发热、扁桃体炎和呼吸道感染。根据 CAEBV 诊断标准2，细胞内 EBV DNA102.5拷贝/mL 为阳性。EBV DNA 阳性组 29 例，其中男 16 例，女 13 例，年龄(4.76依3.39)岁，包括传染性单核细胞增多症 6 例，EBV 12 例，其他疾病 11 例；EBV DNA 阴性组 31 例，其中男 22 例，女 9 例，年龄(3.23依3.04)岁，包括 EBV 3 例，其他疾病 28 例。1.2检测方法及判断标准1.2.1EBV 抗体谱检测清晨空腹采集所有患者静脉血 3 mL，使用免疫荧光操作系统(欧蒙，Sprinter XL)及配套试剂检测血清 EBV 抗体谱 6 项指标：VCA-IgG、VCA-IgM、EA-IgG、NA-IgG 及亲和力 EB IgGaffinity-L、affinity-H，使用荧光显微镜(尼康 ECLIPSE80i)判断结果，弱阳性亦判断为阳性。根据 EB 病毒感染实验室诊断及临床应用专家共识2，依据VCA-IgM、VCA-IgG、NA-IgG 的结果对患儿的感染状态进行分类：无感染、急性感染、典型既往感染、非典型既往感染、原发感染恢复期。1.2.2EBV DNA 检测采集静脉血 2 mL 于紫色抗凝管，采用罗氏 480-域 PCR 仪及时检测，试剂购自艾康公司。1.3统计学方法采用 SPSS 24.0 软件进行统计，计数资料以 n(%)表示，计量资料以x 軃 依s 表示，组间比较行 字2检验，检验水准 琢=0.05。2结果2.1EBV抗体谱 6 种抗体的阳性率60 例患儿中，全 部 阴 性 为 20.00%(12/60)，VCA-IgM 阳 性 率 为8.33%(5/60)，VCA-IgG 阳性率为 80.00%(48/60)，EA-IgG 阳 性 率 为 16.67%(10/60)，NA-IgG 阳 性 率 为48.33%(29/60)，IgG affinity-H 阳性率为 43.33%(26/60)，IgG affinity-L 阳性率为 36.67%(22/60)。不同年龄段儿童 VCA-IgM、NA-IgG、IgG affinity-H 阳性率差异有统计学意义(P0.05)，见表 1。2.2EBV 感染状态的分析EBV DNA 阳性患儿均存在急性或既往感染，其中典型既往感染的比例最高，其次为急性感染；EBV DNA 阴性患儿有较高比例为无 EBV 感染，感染的患儿中非典型既往感染的比例最高，其次为典型既往感染，见表 2。2.3两组 EBV 抗体谱 6 项抗体指标的比较EBVDNA 阳性组的 VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG、NA-IgG 及 IgG affinity-H 阳性率均高于 EBV DNA 阴性组(P0.05)，见表 3。3讨论人群中 EBV 的感染率普遍较高3，儿童尤其是学龄前幼儿免疫系统发育不完全成熟，EBV 易通过飞沫在密闭空间传播。儿童感染可引起传染性单核细胞增多症4，亦与淋巴瘤、鼻咽癌相关5。因此及时、准确地对儿童 EBV 感染进行诊断并对其感染状态进行评估显得尤为重要。纳入本研究 60 例患儿的主要症状为发热、扁桃体炎和呼吸道感染。EBV 抗体谱 6 种抗体中有 1 项或多项阳性为 80.00%(48/60)，高于武汉地区6的结果(64.30%)，与河北地区7报道的 73.71%相似，这可能与临床病例的选择有关。随着年龄的增长，患儿VCA-IgM 和 VCA-IgG 阳性率逐渐增高，与以往研究8结果一致。EBV 感染不同阶段产生的抗体有一定变化，60 例中 VCA-IgM 阳性率较低，为 8.33%。抗体EBV DNA 阳性组(n=29)EBV DNA 阴性组(n=31)字2值P值VCA-IgM 阳性5(17.24)0(00.00)3.79 0.04VCA-IgG 阳性29(100.00)19(61.29)14.03 0.001EA-IgG 阳性10(34.48)0(00.00)10.47 0.001NA-IgG 阳性22(75.86)6(19.35)17.03 36131(7.14)13(92.86)3(21.43)7(50.00)8(57.14)5(35.71)6107 1(14.29)7(100.00)2(28.57)7(100.00)6(85.71)1(14.29)10145 2(40.00)5(100.00)1(20.00)3(60.00)3(60.00)2(40.00)字2值6.776.072.2810.4510.581.81P值0.040.080.510.010.010.68感染状态EBV DNA 阳性组(n=29)EBV DNA 阴性组(n=31)VCA-IgM VCA-IgG NA-IgG无感染0(00.00)12(38.71)急性感染4(13.79)0(00.00)+-典型既往感染21(72.41)6(19.35)-+非典型既往感染*3(10.35)13(41.94)-+-原发感染恢复期#1(03.45)0(00.00)+表 1不同年龄段儿童 EBV 的抗体阳性率(n,%)表 3两组 EBV 抗体谱 6 项抗体指标检测结果比较(n,%)方芳，等.EBV 抗体谱检测在儿童 EBV 感染中的应用价值251窑窑南 通 大 学 学 报(医 学 版)2023 颐 43渊3冤EBV 感染后，患儿血清 VCA-IgM 首先出现，于 714 d达到峰值，12 个月后消失。VCA-IgM 阳性是急性EBV 感染的标志之一9，但血清中的竞争性 IgG 未被充分除去10可导致 IgM 假阴性；儿童 VCA-IgG 阳性率为 80.00%，与国外学者11报道的 50%89%一致。VCA-IgG 稍晚于 VCA-IgM 出现，可终身存在，是既往感染的标志。EBV DNA 早于 VCA-IgM 出现，并于2 周后逐渐回落12。IgG affinity-L 阳性在初次感染较常见，而再次接触亲和力较高2。本研究中 5 例 VCA-IgM、VCA-IgG及 EBV DNA皆为阳性，且 IgG affinity-L阳性，说明患儿为初次现症感染。在恢复的过程中会有 NA-IgG 的存在。但是其产生较缓慢，通常发病 3个月后才能于血清中检测到。本研究显示，EBVDNA 阳性患儿 NA-IgG 的阳性率为 75.86%，在 6 项抗体中阳性率仅低于 VCA-IgG 的 100.00%。且 NA-IgG 阳性患儿 IgG affinity-H 多为阳性，说明多数患儿为既往感染。EBV DNA 和 VCA-IgM 阳性是 EBV 现症感染的主要临床诊断依据。本研究显示，29 例 EBV DNA阳性患儿中仅 5 例为 VCA-IgM 阳性。其主要原因是EBV 感染过程中，感染早期 VCA-IgM 升高并逐渐下降。EBV 感染患儿 IgM 转阴后仍然存在病毒血症的可能性。由于患儿存在个体差异，有可能出现抗体缺失、延迟或长期存在的现象12。故单独一项抗体的检测明显不能满足临床需求。EBV 抗体谱的检测为 EBV感染的诊断和感染状态分析提供了有效的依据。本研究发现，5 例 VCA-IgM 阳性患儿中，4 例为急性感染，1 例为原发感染恢复期。VCA-IgG 存在于既往和急性感染中，NA 在现症感染晚期出现7。本研究还发现，EBV DNA 阳性患儿 100.00%存在急性或既往感染，与既往研究13报道相似。EBV DNA 阴性患儿有38.71%为无 EBV 感染，而既往感染的比例60%。患儿 EBV DNA 载量增高是存在 EBV 病毒血症的直接依据，可反映 EBV 感染的病毒复制状况14。本研究显示，EBV DNA 阳性组的 VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG 及 NA-IgG 阳性率均高于 EBVDNA 阴性组，且 VCA-IgM 和 EA-IgG 阳性的患者EBV DNA 皆为阳性。说明 EBV DNA 载量增高对于现症感染有现实意义，但 EBV 抗体谱是判断患儿EBV 感染类型的有效指标。综上所述，EBV 抗体谱的检测为 EBV 感染的诊断和感染状态分析提供了有效的依据，具有良好的检测价值，与 EBV DNA 互为补充，为儿童 EBV 感染提供有效的实验室依据。参考文献1ZERBE C S,MARCIANO B E,KATIAL R K,et al.Pro鄄gressive multifocal leukoencephalopathy in primary immunedeficiencies:Stat1 gain of function and review of the litera鄄tureJ.Clin Infect Dis,2016,62(8):986-994.2全国儿童 EB 病毒感染协作组,中华实验和临床病毒学杂志编辑委员会.EB 病毒感染实验室诊断及临床应用专家共识J.中华实验和临床病毒学杂志,2018,32(1):2-8.3刘杰,王利娟,谷愉愉,等.体检人群 EB 病毒感染情况分析J.国际检验医学杂志,2020,41(10):1158-1160.4刘坦,孟晓峰,杜世杰.豫西地区学龄儿童 EB 病毒感染情况分析J.国际医药卫生导报,2018,24(11):1750-1752.5吴克复,郑国光,马小彤,等.EB 病毒感染的多样性及其意义J.中国肿瘤临床,2021,48(7):330-335.6赵荣,韩彦,邓伊,等.837 例住院患儿 EB 病毒感染特点及临床分析J.检验医学与临床,2019,16(17):2444-2446.7闫江泓,贾莉,李文辉,等.河北省儿童医院住院患儿 EB病毒感染流行病学特征J.检验医学,2020,35(4):323-326.8王博,齐莹,阮强.儿童 EB 病毒感染的流行病学调查及血清学特征分析J.中华实用儿科临床杂志,2020,35(18):1403-1406.9董玉琳,杨舒.儿童 EB 病毒感染核酸与抗体检测的临床应用J.国际感染病学(电子版),2018,7(3):7-9.10NILLER H H,BAUER G.Epstein-barr virus:clinicaldiagnosticsM/EpsteinBarrVirus.NewYork:HumanaPress,2017:33-55.11AL HAMED R,BAZARBACHI A H,MOHTY M.Epstein-Barr virus-related post-transplant lymphoproliferative dis鄄ease(EBV-PTLD)in the setting of allogeneic stem celltransplantation:a comprehensive review from pathogenesisto forthcoming treatment modalitiesJ.Bone Marrow Trans鄄plant,2020,55(1):25-39.12王萌萌,梁日文,孔凡虹,等.深圳市罗湖区儿童 EB 病毒感染情况及流行病学分析J.临床检验杂志,2020,38(4):310-312.13庾少梅,曾博煌,陈观凤.EB 病毒多抗体联合检测在儿童 EB 病毒感染诊断中的应用研究J.江西医药,2020,55(11):1718-1719,1727.14沈军,曹凌峰,施鹏,等.原发性 EB 病毒感染患儿的临床和实验室检查特征分析J.中华传染病杂志,2020,38(5):279-282.收稿日期 2022-03-01252窑窑