微生物的分离和培养高三生物一轮复习.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,专题二 微生物的分离和培养,【考纲考点】,考试说明,等级要求,微生物的分离和培养,A,微生物的分离和培养,A,DNA的粗提取与鉴定,B,近五年江苏高考关于本章的考察情况：,09,21和23考察DNA的鉴定和提取,10,32考察DNA粗提取的相关探究活动的实验设计,11,19考察DNA的粗提取与鉴定,12,18考察DNA粗提取与鉴定,13,4DNA粗提取与鉴定，18微生物的培养方法,命题趋势,由上述的分析可以看出这部分知识在每年的生物高考题都有出现，且主,要集中在对DNA粗提取与鉴定试验的考察。,微生物的知识由于在13年考试说明中新添加，其考察的知识点主要以,微生物培养和分离的方法知识为主,。因此复习备考的过程中，要注意加强这部分相关知识的学习。,第一讲 微生物的分离和培养,学习目标：,1.简述培养基的用途和分类,2.说出培养基的基本成分,3.简述无菌技术的概念含义,4.尝试制备牛肉膏蛋白胨培养基,5.尝试通过平板划线法纯化一种微生物,(1),固体培养基、液体培养基和半固体培养基,固体培养基,：（观察菌落和分离提纯微生物）,在一般培养温度下呈固体状态的培养基。,一类是用天然的固体状物质制成的，如用马铃薯块、麸皮、米糠、豆饼粉、花生饼粉制成的培养基，酒精厂、酿造厂等常用这种培养基；,另一类是在液体中添加凝固剂而制成的，如实验室中常用的琼脂固体斜面和固体平板培养基。这种培养基广泛用于微生物的分离、鉴定、保藏、计数及菌落特征的观察等。,液体培养基或培养液或发酵液,：（工业大规模培养,）,呈液体状态的培养基。液体培养基因营养物质分布均匀，与菌体表面接触充分，还能大量溶解微生物的代谢产物等优点，广泛用于微生物的生理、代谢研究以及大规模的工业化生产中。,半固体培养基：（,观察微生物的运动）,加入少量的凝固剂(如0.20.5的琼脂)而制成的培养基。这种培养基常用于观察细菌的运动、厌氧菌的分离和菌种鉴定等。,（2）,天然培养基和合成培养基,天然培养基：（工业生产降低成本）,主要取自动物体液或从动物组织分离提取。,其优点是营养成分丰富，培养效果良好，缺点是成分复杂，来源受限。天然培养基/液的种类很多，包括生物性液体（如血清）；组织浸液（如胚胎浸液）；凝固剂（如血浆）等。,合成培养基：（菌种的分类，鉴定，营养、代谢，遗传、鉴定和生物测定等定量要求较高的研究）,是通过顺序加入准确称量的高纯度化学试剂与蒸馏水配制而成的。,其所含的成分（包括微量元素在内）以及他们的量都是确切可知的。,（3）选择培养基和鉴别培养基：,选择培养基,：,配制特点：,添加或减少某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需微生物的生长。,从而使后者从含有杂菌的标本中分离出。（即,筛选你所需要培养的微生物，令其生长，其余微生物不生长,）,例如：,(1),基本的培养基通过加青霉素，实现分离纯化酵母菌、霉菌；,（2）,加高浓度的食盐分离纯化金黄色葡萄球菌（有高度的耐盐性，可在1015%NaCl肉汤中生长,）,（3）,无氮培养基可分离纯化固氮菌（固氮细菌,）,。,（4）,不含有机碳的培养基可分离纯化自养型细菌如硝化细菌。,鉴别培养基：,配制特点：,在培养基中加入某种指示剂或化学药品，以鉴别不同种类的微生物。（即,只能鉴别出你此种微生物是不是你所需要的微生物，而不能抑制其余种类的微生物生长）,例如：,伊红美蓝培养基,（1）用途：伊红美篮培养基一般用于检测,饮用水和乳制品中是否存在,大肠杆菌等细菌。,（2）原理,：伊红为酸性染料，美篮为碱性染料。当大肠杆菌分解,乳糖产酸,时细菌带正电荷被染成,红色,，再与,美篮,结合形成,紫黑色,菌落，并带有,金属光泽。,例1、要将土壤中的自生固氮菌（如原褐固氮菌）与其它细菌分离出来，应将它们接种到（）,A加入指示剂的鉴别培养基 B含有蛋白胨的固体培养基,C没有有机氮的选择培养基 D营养要素全面的液体培养基,练一练,例2、某同学在做微生物实验时，不小心把,原褐固氮菌和酵母菌,混在一起，为了得到纯度较高的酵母菌，配制好的培养基中应再加入（）A高浓度的食盐 B硝酸盐,C伊红美蓝溶液 D青霉素,例3、在培养,金黄色葡萄球菌时污染了青霉菌,，青霉菌菌落周围区域内金黄色葡萄球菌不能生存。下列相关叙述错误的是（）,A青霉菌和金黄色葡萄球菌之间的关系为竞争,B要保留金黄色葡萄球菌，可用含高浓度食盐的培养基进行选择,C若金黄色葡萄球菌仍然生存，可能发生了抗青霉素的基因突变,D补充适合金黄色葡萄球菌的营养能保存该菌,（二）培养基配制原则,：,（,1）,目的要明确,：根据微生物的种类、培养目的等确定配制培养基的种类，因为不同的微生物对培养物质的需求不同。,（2）,营养要协调,：注意各种营养物质的浓度和比例。,（3）,pH要适宜,：各种微生物适宜生长的pH范围不同。,细菌pH为：6.5-7.5（偏碱）；,放线菌pH为：7.5-8.5；,真菌pH为：5.0-6.0（偏酸）。,微生物需要的四大类营养要素物质是：,（三）培养基的构成,1.碳源 2.氮源 3.无机盐 4.水,凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质。,无机碳源：,CO,2,；NaHCO3；碳酸盐等,有机碳源：,糖类、脂肪酸、蛋白质、花生粉饼、石油等,概念,来源：,不同微生物所利用的碳源不同：,1.微生物的碳源,异养型微生物的碳源为：,含碳有机物（有机碳）,自养型微生物的碳源为：,含碳无机物（无机碳）,无机氮源：,N,2,、NH,4,+,氨盐,、NO,3,-,硝酸盐,、NH,3,。,有机氮源：,尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等,凡是能够为微生物提供N元素的营养物质。,2.微生物的氮源,概念：,来源：,固氮微生物所利用的氮源是：,3.特殊要求,培养基还需要满足微生物生长对,pH,、,特殊营养物质,例如:,生长因子,(微生物生长不可缺少的,微量,有机物）如维生素、某些氨基酸、碱基,)以及,氧气,、,二氧化碳,、,渗透压,等,的要求。,氮气,碳源、氮源、生长因子的比较,来 源,常用原料,功 能,碳源,CO,2,、NaHCO,3,、糖类、脂肪酸、,花生粉饼、石油等,糖类,构成细胞物质和一些代谢产物，有些还是异养生物的主要能源物质,氮源,N,2,、NH,3,、铵盐、硝酸盐、尿素、,牛肉膏和蛋白胨等,铵盐、硝酸盐等,合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物,生长因子,维生素、氨基酸、碱基,酶、核酸等的组成成分,牛肉膏当中含有,肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、矿物质类及维生素类。,的水溶性物质。,牛肉膏为微生物提供碳,源,、,氮源、,能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供,氮源,和,维生素,。,1.无菌范围：,实验操作空间,操作者的手、衣着,消毒.,将用于微生物培养的,器皿、接种用具和培养基,等器具进行灭菌。,为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在,酒精灯火焰附近,进行.,实验操作时应避免已经,灭菌处理的材料用具,与周围的物品相接触.,超净工作台,二.无菌技术：,防止外来杂菌的污染,耐高温需保持干燥的 物品，160170 12小时,接种环、接种针等 金属用具,7075、30min,80、15min,100、56min,消毒,灭菌,定义,方法,较为,温和,理化方法，,杀死,部分有害菌体,（,不,包括芽孢、孢子）,强烈,的理化方法，,杀死,所有微生物,（包括,芽孢、孢子,）,煮沸消毒法,巴氏消毒法,化学药剂,紫外线,灼烧灭菌,干热灭菌,酒精、氯气、石炭酸等,高压蒸汽灭菌,培养基，,100KPa、,121、1530min,2.消毒与灭菌：,1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方,H,2,O 定容至1000ml,Nacl 5g,蛋白胨 10g,牛肉膏 5g,琼脂20.0g,三.大肠杆菌的,纯化,培养：,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,1.计算：,培养基用量,依配方计算各成分的用量,2.称量：,3.溶化：,牛肉膏黏稠，用称量纸称取,牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖,牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解,取纸,蛋白胨、NaCl,琼脂,补水定容,4.调pH、分装、封口：1mol,lNaoH调制微碱,5.灭菌：,6.倒平板：,培养基、培养皿,由,一个细胞,繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，就是菌落,倒平板,约50,防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染,灼烧灭菌，,防止瓶口的微生物污染培养基,1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？,问题讨论,答：,可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。,2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。,3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？,4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。,答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。,纯化大肠杆菌：,1.纯化的方法：,（1）平板划线法：,通过接种环在琼脂,固体培养基,表面连续画线操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，在数次画线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的子细胞群体，这就是菌落。,（2）稀释涂布平板法：,将菌液进行,一系列的梯度稀释，,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂,固体培养基,的表面进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落。,将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环_,在_旁冷却接种环，并打开棉塞,将试管口通过火焰,.,将已_的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液,左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，,划_条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。,.,将试管通过火焰，并塞上棉塞,火焰,冷却,三至五,灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的_开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。,注意不要将最后一区的划线与第一区相连。,末端,烧红,将平板_放入培养箱中培养。,倒置,划3个平板,1个不划线,（空白对照）,问题讨论,1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？,答：操作的,第一步,灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；,每次划线前,灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。,划线结束后灼烧接种环,，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？,答：以免接种环温度太高，杀死菌种。,3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？,答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。,6支试管，分别加入9ml无菌水,1ml,10,1,1ml,10,2,1ml,10,3,1ml,10,4,1ml,10,5,1ml,10,6,稀释涂布平板法：,a.梯度稀释菌液：,菌液,微量 移液器,b.涂布平板：,不超过0.1ml,各梯度分别涂布3个平板,1个不涂布作空白对照,滴,灼,试,涂,稀释10,3,倍,稀释10,4,倍,稀释10,5,倍,2.菌种培养,：,3.实验结果观察,将,接种后,的培养基和一个,未接种,的培养基,放入37恒温箱中培养12h24h后，,观察并记录,四.菌种的保藏：,1.临时保藏：,试管固体斜面培养基上,4,2.长期保存：,菌种易被污染、变异,甘油管藏,1ml甘油1ml菌液,20,(2013.18)某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是(),A培养基分装到培养皿后进行灭菌,B转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线,C接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养,D培养过程中每隔一周观察一次,【真题练习】,