免疫凝集反应及临床应用专家讲座.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等,颗粒性,抗原，或,可溶性,抗原（或抗体）与,载体颗粒,结合成致敏颗粒后，它们与对应抗体（或抗原）发生特异性反应，,在,一定条件,下,，形成肉眼可见凝集现象。,凝集反应定义,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第1页,反应阶段：,抗原抗体特异性结合阶段,出现肉眼可见凝集现象,凝集反应,反应特点：,IgM,作用比,IgG,大数百倍,IgG,与抗原结合后，常不出现凝集反应，称不完全抗体,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第2页,可见反应形成,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第3页,电解质：,稀释液,或,缓冲,液（,8.5g/L NaCl,）,pH,：,pH6,pH9,（,pH3,为细菌抗原等电点）,温度：,15,40,，,37,最,适（,4,特例,）,反应时间：,不一样反应时间,不一样,外力：,震荡或搅拌,环境,原因,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第4页,分类：直接与间接凝集反应,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第5页,颗粒性抗原,直接与抗体结合，在电解质作用下，出现肉眼可见凝集现象,。,包含：,玻,片凝集,试验,试管凝集试验,直接凝集反应,direct agglutination,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第6页,玻片,凝集试验：,定性,已知抗体检测抗原,简便,、,快速,菌种,诊疗或分,型,ABO,血型,判定,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第7页,试管凝集试验：,半定量,已知抗原检测抗体,易引发,抗原非特异性,凝集,肥达试验,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第8页,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,弃掉,0.5,试管凝集试验原理,结果,1 2 3 4 5 6 7,菌液,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第9页,+,很小凝集颗粒,混浊,-,无凝集现象,与对摄影同,+,小、部分凝集块,中等混浊,+,大多凝集管底,轻度混浊,+,大凝集块,清亮,凝集程度,沉淀,上清,试管凝集试验结果判断,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第10页,管底沉淀,凝集程度,最高稀释百分比,待测血清滴度,试管凝集试验,结果判断,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第11页,将,可溶性抗原或抗体,吸附于,颗粒性载体,表面，然后与对应抗体或抗原反应，在电解质作用下，出现肉眼可见凝集现象,间接凝集反应,indirect agglutination,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第12页,RBC,、白陶土、活性炭、一些细菌、聚苯乙烯胶乳颗粒,良好载体有以下几点基本要求：在生理盐水或缓冲液无自凝倾向；大小均匀；比重与介质相同，短时间内不能沉淀；无化学或血清学活性；吸附抗原（或抗体）后，不影响其活性。,当前应用最广是人,O,型红细胞和绵羊红细胞。而后者应用更广，因为其起源方便。另外绵羊红细胞表面有大量（约,1 000,个以上）糖蛋白受体，极易吸附一些抗原物质，吸附性能好。,载体种类,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第13页,正向间接凝集试验,反向间接凝集试验,间接凝集抑制试验,协同凝集试验,间接凝集反应,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第14页,用抗原致敏载体-检测抗体,正向间接凝集反应,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第15页,反向间接凝集反应,用抗体致敏载体-检测抗原,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第16页,间接凝集抑制反应,用抗原致敏载体-检测抗原,有凝集颗粒为,阴性,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第17页,反向间接凝集试验，载体为金黄色葡萄球菌,金黄色葡萄球菌细胞壁成份,A,蛋白，和,IgG,Fc,段结合，使,Fab,段暴露在菌体表面，,Fab,段依然保持正常抗体活性。,利用这种特征能够将特异性,IgG,结合在菌体上，形成致敏颗粒，检测特异性抗原。,协同凝集反应,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第18页,原理图,IgG,SPA,SPA-IgG,待测抗原,SPA-IgG-,待测抗原凝集颗粒,混合,加入,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第19页,间接血凝试验,胶乳凝集试验,明胶凝集试验,按载体分类间接凝集试验,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第20页,以红细胞为载体间接凝集试验。,将已知抗原,(,或抗体）致敏红细胞，与对应抗体（或抗原）特异结合，出现红细胞凝集现象。,间接血凝试验,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第21页,红细胞,抗原,致敏,致敏红细胞,红细胞凝集,间接血凝试验,待测抗体,间接血凝试验原理,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第22页,-,：红细胞沉积于孔底,+,：红细胞沉积于孔底，周围有散在少许凝集,+,：红细胞形成凝集，面积较小，边缘较涣散,+,：红细胞形成片层凝集，面积略多于,+,+,：红细胞形成片层凝集，均匀充满孔底，或边缘皱缩如花边状,血凝试验强度,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第23页,与普通间接血凝试验不一样之处为反应中,红细胞是未经致敏受检者新鲜红细胞,主要试剂材料为,抗红细胞单克隆抗体,，能与红细胞结合，但不引发凝集反应,这种抗体与另一特异性抗体连接成,双功效抗体,可用于检测标本中抗原,如与特异性抗原连接，则可用于检测标本中抗体,反应中,标本为受检者全,血,HIV,抗体、,HBV,抗原检测,本身红细胞凝集试验,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第24页,胶乳凝集试验,以聚苯乙烯胶乳为载体颗粒间接凝集反应,胶乳为人工合成载体，性能比红细胞稳定，均一性好,但与蛋白质结合能力以及聚集性能不如红细胞,所以作为间接凝集反应，胶乳凝集敏感度不及血凝试验,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第25页,明胶凝集试验,以明胶为载体颗粒间接凝集反应,用粉红色明胶颗粒吸附病毒抗原或重组抗原,当致敏明胶颗粒与样品血清作用时，若血清含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见粉红色凝集,惯用于抗,HIV-1,抗体和抗精子抗体检测,梅毒,螺旋体明胶颗粒凝集试验,(TPPA),免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第26页,抗球蛋白参加血凝试验,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第27页,抗球蛋白参加血凝试验,又称,Coombs,试验，利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合特异性抗体，使红细胞凝集,用于检测抗红细胞不完全抗体,不完全抗体：能与颗粒抗原牢靠结合，但普通不出现可见反应，多为,7S,IgG,诊疗免疫性溶血性贫血主要方法,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第28页,抗球蛋白参加血凝试验,分为两种方法：,直接,Coombs,试验,间接,Coombs,试验,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第29页,直接,Coombs,试验,检测红细胞上不完全抗体,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第30页,新生儿溶血症,本身免疫性溶血症,特发性本身免疫性贫血,医源性溶血,临床应用,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第31页,间接,Coombs,试验,检测血清中游离不完全抗体,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第32页,检测母体,Rh(D),抗体,检测红细胞不相容输血所产生血型抗体,临床应用,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第33页,免疫凝集反应及临床应用专家讲座,第34页,