两种脱钙液对骨髓穿刺组织DNA质量的影响比较.pdf

少浪费；（）染液可应用于多种动植物组织及病毒感染细胞的超薄切片样本染色。参考文献：杨勇骥实用生物医学电子显微镜技术 上海：第二军医大学出版社，：，：，（）：，（）：张丽芳，姚梅宏，曲利娟，等透射电镜超薄切片染色铅污染的补救方法 临床与实验病理学杂志，（）：刘连璞，朴英杰铅染色液的一种新的保存法 第一军医大学学报，（）：杨传红，赖晃文 铅染液的改良及长期贮存法 电子显微学报，（）：洪涛，王健伟，宋敬东医学病毒图谱 北京：科学出版社，：，（）：冯红丽，肖浩，于海斌微波辅助超薄切片快速染色技术的优化与应用 中华实验和临床病毒学杂志，（）：网络出版时间：网络出版地址：两种脱钙液对骨髓穿刺组织 质量的影响比较李三恩，石晨曦，程丽丽，朱卫东关键词：骨髓穿刺组织；脱钙；混合酸；中图分类号：文献标志码：文章编号：（）：骨髓穿刺组织是病理科常见的标本，随着精准医学的发展和个体化治疗需求的增加，除了进行常规 染色和免疫组化检测外，还需辅助分子生物学检测。良好的 质量是分子生物学检测的前提，脱钙液的选择对 质量有重要影响 ，因此进行分子生物学检测前需要评估脱钙后骨髓穿刺组织 质量。混合酸脱钙液和 脱钙液是本科室两种常用的骨髓穿刺组织脱钙液，在常规组织学染色方面已经取得良好的效果，但其对 质量的影响尚不清楚。本实验通过提取两种脱钙液脱钙骨髓穿刺组织的 ，从浓度、纯度、片段长度及 检测 值比较两种脱钙液对 质量的影响，取得较好效果，现报道如下。材料与方法 材料收集苏州大学附属第一医院存档的骨髓穿刺组织标本 例，所有标本病理诊断均可见淋巴造血系统肿瘤累及。其中，年 月混合酸脱钙液脱钙标本 例，年 月 年 月 脱钙液脱钙标本 例。标本均经 中性福尔马林固定，石蜡包埋组织。接受日期：作者单位：苏州大学附属第一医院病理科，苏州 作者简介：李三恩，女，硕士，主管技师。：朱卫东，男，副主任技师，通讯作者。：脱钙液的配制混合酸脱钙液：甲酸 盐酸（蒸馏水配制）；脱钙液：骨髓穿刺组织脱钙液，购自宁波同盛生物公司。脱钙方法骨髓穿刺组织置于混合酸脱钙液中 或 脱钙液中 ，脱钙液用量为标本体积的 倍以上，用镊子轻弯骨髓组织，当骨髓组织变得柔韧有弹性时，表示脱钙完成。提取连续切 张厚 的蜡卷，置于 的 管中。使用 提取基因组 ，最后用 缓冲液溶解 ；用 检测 浓度和纯度；用 核酸蛋白分析仪评估 片段长度。法按照人 基因突变检测试剂盒说明书，使用两对引物在不同 管分别扩增 个管家基因：内参基因和内控基因，在 荧光 仪上分别选择 和 通道收集内参基因和内控基因的荧光信号，样本上机浓度均为 。评价标准 纯度评价标准 的 的正常范围 ，若比值 时，提示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染；的 的正常值 ，若比值 时，提示样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染 。值评价标准（）内参基因 值正常范围 ，值 时，表明 样品浓度过低、发生降解或可能含有 抑制剂；（）内控基因 值正常值 ，若 值 时，表明 样品发生降解、含有 抑制剂或未加样。统计学分析所有数据采用 软件进行统计学分析，计量资料采用珋 表示，组间比较采用非配对 检验，以 为差异有统计学意义。临床与实验病理学杂志 ；（）结果 浓度和纯度两种脱钙液脱钙骨髓的 浓度和纯度详见表 ，混合酸脱钙组 的 、比值小于正常范围，脱钙组 的 、比值位于正常范围内。本组结果显示：脱钙组 的 比值大于混合酸脱钙组，差异有统计学意义（）；脱钙组 的浓度、比值均大于混合酸脱钙组，但差异无统计学意义（）。片段长度 核酸蛋白分析仪检测两种脱钙液脱钙骨髓的 片段长度，混合酸脱钙组 条带弥散、颜色浅；脱钙组 条带相对集中、颜色深（图）。脱钙组 主峰片段长度大于混合酸脱钙组，差异有统计学意义（，表 ，图 ）。图 条带：粉色条带为 、，为混合酸脱钙组，为 脱钙组图 主峰片段长度：两个粉色峰为 、，混合酸脱钙组；脱钙组表 两种脱钙液脱钙骨髓的 浓度、纯度和片段长度比较 质量参数混合酸脱钙组 脱钙组值 浓度（）主峰片段长度（）检测 值从两种脱钙液脱钙骨髓 浓度大于 的样本中各随机选取例，采用 法检测 个管家基因的 值。混合酸脱钙组内参基因和内控基因的平均 值分别为 和 ，均超出质控范围；脱钙组内参基因和内控基因的平均 值分别为 和 ，均在质控范围内（表，图 ）。脱钙组内参基因和内控基因平均 值明显小于混合酸脱钙组，差异均有统计学意义（，表 ）。表 检测两种脱钙液脱钙骨髓的 值管家基因混合酸脱钙组 脱钙组值内参基因 内控基因 图 管家基因 扩增曲线：内参基因；内控基因 讨论骨髓穿刺组织在血液系统疾病的病理诊断、临床分期和随访中具有重要作用。骨髓穿刺组织必须先脱钙才能制备完整的切片 ，高质量的 是分子生物学检测的基础，脱钙液选择不当会严重影响 质量，导致分子生物学检测结果偏倚，影响病理诊断 。骨髓穿刺组织体积小、细胞含量少，加之脱钙、固定、石蜡包埋等不良因素的影响，很难提取足量的 。本实验比较两种不同脱钙液脱钙骨髓的 浓度，发现 脱钙组 浓度接近混合酸脱钙组的 倍，提示 脱钙液脱钙骨髓的 含量更高。脱钙组 的 临床与实验病理学杂志 ；（）、比值均高于混合酸脱钙组，表明 脱钙液脱钙骨髓的 纯度更高。片段长度是衡量 质量的重要标准 ，不同分子检测技术对被检样本 片段长度要求不同，如杂交捕获法靶向 要求样本 片段长度 、试剂盒要求 扩增产物 。本实验通过两种方法检测 片段长度，核酸蛋白分析仪和 检测结果一致。脱钙组骨髓 主峰片段长度为（），高于混合酸脱钙组的（），能满足日常分子检测对 片段长度的需求。脱钙组骨髓 检测的两个管家基因 值均明显小于混合酸脱钙组，提示相同的 投入量，脱钙组所含有效 模板量更高 。混合酸脱钙液脱钙速度快、脱钙时间不易控制，且易酸化组织，片段降解严重。本实验的 脱钙液为商品化、即用型骨髓穿刺组织脱钙液，避免人工配制引起脱钙液浓度或 值 偏差影响脱钙效果，稳定性更好。该商品化 脱钙液主要成分是乙二胺四乙酸二钠，脱钙性质温和，通过与钙离子螯合达到脱钙目的 ，对核酸保存效果好。提取高质量的 是进行分子生物学检测的先决条件，脱钙液选择不当会对 产生不可逆的影响。此次实验表明，与混合酸脱钙液相比，脱钙液脱钙骨髓的 浓度和纯度更高、片段长度更长，检测 值更小。尽管 脱钙液脱钙时间稍长，但能为患者提供分子检测的机会，因此本科室倾向于选择 脱钙液用于骨髓穿刺组织的脱钙。参考文献：，（）：杨军，张标，马恒辉，等 组织提取 样本质量评价的多中心调研 临床与实验病理学杂志，（）：沈吟芳，王谦，郭凌川石蜡包埋中骨髓标准化脱钙的应用 临床与实验病理学杂志，（）：，：，（）：，（）：，（），（）：简讯 临床与实验病理学杂志 征稿启事 临床与实验病理学杂志（），月刊，连续入选北京大学图书馆 中文核心期刊要目总览“临床医学类核心期刊”及科技部中国信息研究所中国科技核心期刊（统计源期刊）。精准医疗被认为是继经验医学、循证医学之后的第三次医学革命，作为当今肿瘤临床研究最活跃的领域之一，精准医疗在肿瘤治疗中正发挥越来越重要的作用；而肿瘤诊断的“金标准”，病理诊断不仅能判定肿瘤的良恶性质、分类和分级，也是临床医师进行预后评估和药物选择的重要依据。为加强病理学与临床的联系，临床与实验病理学杂志 现面向广大医务工作者征集有关精准医学与肿瘤专业领域在基础研究、临床诊断、治疗等方面的最新研究论文或进展评述。本刊对有国家和省部级基金资助的文章，将优先予以发表。本刊网址：，编辑部电话：。临床与实验病理学杂志 ；（）