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株乌蒙凤鸡源葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验 株乌蒙凤鸡源葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验阎朝华 肖 琨 张 熠 袁华平(.六盘水市农业农村局贵州 六盘水 .六盘水市动物卫生服务中心贵州 六盘水.六盘水市动物疫病预防控制中心贵州 六盘水)摘要:为了查明六盘水某养殖场乌蒙凤鸡死亡的原因通过病理剖检、细菌分离培养、生化试验、鉴定、药敏试验对病死鸡进行诊断和病原菌耐药性分析 结果:病理变化可见皮下点状出血咽喉发炎并伴有炎性渗出物肝脏淤血肿大、质地坚硬、边缘呈锯齿状心包严重积液心脏凹陷鲜血琼脂培养基生长菌落呈灰白色、表面光滑、圆形微凸革兰氏染色镜检可见菌体呈串状排列的阳性球菌生化试验和 测序鉴定为葡萄球菌药敏试验显示分离菌对氨苄西林、丁胺卡那、卡那霉素、头孢拉定、克林霉素 种药物高度敏感对环丙沙星、头孢哌酮中度敏感对青霉素、复方新诺明、多黏菌素 等 种药物耐药 结论:该养殖场乌蒙凤鸡存在葡萄球菌感染建议采用高度敏感药物进行治疗关键词:乌蒙凤鸡葡萄球菌分离鉴定药敏试验中图分类号:.文献标识码:文章编号:()年 月初六盘水市某养殖场乌蒙凤鸡出现跛行、进食减少、产蛋量下降 天后排黄绿色水样粪便腹部肿大皮肤呈紫色或紫黑色腹部羽毛脱落 周内死亡 余只 为查明病因送 只病死鸡到贵州大学动物疫病研究室进行病原分离鉴定以期为该养殖场疫病防控和治疗用药提供参考 材料与方法.材料.检测病料无菌条件下采集 只乌蒙凤鸡的肝脏作为检测病料.主要试剂及仪器鲜血琼脂培养基(贵州大学实验室提供)细菌生化微量鉴定管、药敏纸片(均购自杭州微生物试剂有限公司)革兰氏染色试剂(购自北京索莱宝科技有限公司)葡萄球菌标准株、细菌 提取试剂盒、均购自生工生物工程(上海)股份有限公司 种收稿日期:作者简介:阎朝华()男硕士兽医师研究方向:动物微生物及疫病防控:.通信作者:肖琨()男硕士高级兽医师主要从事兽医科技推广工作:.抗菌药敏片(购自杭州微生物试剂有限公司)扩增仪(型号:杭州朗基科学仪器有限公司)、恒温培养箱(型号:杭州艾普仪器设备有限公司)、生物显微镜(型号:山东佑科仪器设备有限公司).方法.病理剖检剖检病死鸡观察并记录组织器官病理变化特征.细菌分离培养无菌条件下取病理变化明显的肝脏组织接种于鲜血琼脂培养基 恒温箱中培养过夜观察菌落生长情况 挑取优势菌落接种于鲜血琼脂培养基继续培养重复上述步骤直至培养基中长出单一菌落.细菌生化试验挑取纯培养菌落接种于木糖、蔗糖、乳糖、蕈糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、甘露醇、硝酸盐、脲酶、氧化酶微量生化管中 恒温培养箱中过夜按照伯杰细菌鉴定手册判定反应结果.细菌 鉴定按细菌 提取试剂盒说明书提取分离菌 贵州畜牧兽医 年 第 卷 第 期 参照文献合成细菌 通用引物(见表)建立 反应体系 :上、下游引物(/)各 分离菌 (无菌蒸馏水 为阴性对照组葡萄球标准菌悬液 为阳性对照组)无菌双蒸水 反应条件:预变性 变性 退火 延伸 共 个循环 延伸 取 产物 于.琼脂糖凝胶电泳胶回收试剂盒回收 产物送至英潍捷基生物技术有限公司(上海)测序测序结果用 .与 数据库中的绿色气球菌、葡萄球菌、鸡杆菌参考菌株进行 系统进化树分析表 细菌 通用引物引物名称引物序列预扩增长度/值/.药敏试验采用 法进行氨苄西林、丁胺卡那、卡那霉素、头孢拉定、克林霉素、环丙沙星、头孢哌酮、青霉素、复方新诺明、新霉素、苯唑西林、氧氟沙星、四环素、红霉素、多黏菌素 种药物敏感性试验 结果与分析.病理变化剖检病死鸡可见皮下点状出血咽喉发炎并伴有炎性渗出肝脏淤血肿大、质地坚硬、边缘呈锯齿状心包严重积液心脏凹陷.培养菌落及细菌特征在鲜血琼脂培养基生长出表面光滑、圆形微凸、灰白色的菌落革兰氏染色镜检可见呈串状排列的革兰氏阳性球菌(见图).生化特性分离菌可分解葡萄糖、蔗糖、果糖、甘露醇不分解木糖、乳糖、蕈糖、甘露糖 试验、脲酶试验、氧化酶试验为阳性硝酸盐还原试验为阴性与葡萄球菌生化特性相符初步鉴定为葡萄球菌(命名为)菌落形态细菌革兰氏染色镜检()图 菌落形态及菌体特征.鉴定及系统进化树分析该菌 扩增产物长度约 与目的片段相符(见图)系统进化树分析表明分离菌株与 数据库中的 株葡萄球菌参考株(.、.、.、.、.)聚为 支且与.菌株亲缘关系最近与 株绿色气球菌参考株(.、.、.)和 株鸡杆菌参考菌株(.、.、.、.)均处于不同分支亲缘关系较远(见图)综合鉴定分离菌为葡萄球菌:分离菌:阳性对照:阴性对照图 分离菌 扩增.细菌药物敏感性由表 可见:分离菌对氨苄西林、丁胺卡那、卡那霉素、头孢拉定、克林霉素 种药物高度敏感对环丙沙星、头孢哌酮中度敏感对青霉素、复方新诺明、新霉素、苯唑西林、氧氟沙星、四环素、红霉素、多黏菌素 种药物耐药 贵州畜牧兽医 年 第 卷 第 期 图 分离菌 系统进化树表 分离菌药敏试验结果药物名称判定标准(抑菌圈直径/)耐药()中度敏感()高度敏感()测定值/敏感性复方新诺明 氨苄西林 苯唑西林 青霉素 新霉素 丁胺卡那 卡那霉素 氧氟沙星 环丙沙星 头孢哌酮 头孢拉定 克林霉素 四环素 红霉素 多粘菌素 结论根据病理变化、细菌分离培养、革兰氏染色镜检、细菌 鉴定及系统进化树分析确诊分离菌为葡萄球菌()表明该养殖场乌蒙凤鸡存在葡萄球菌感染 建议采用氨苄西林、丁胺卡那、卡那霉素等高度敏感药物防治 讨论.葡萄球菌()是广泛存在于自然界中的细菌主要有金黄色葡萄球菌(.)、白色葡萄球菌(.)、柠檬色葡萄球菌(.)等其中金黄色葡萄球菌是引起化脓性感染的重要人畜共患病原菌 家禽感染葡萄球菌可导致败血性关节炎、化脓性关节炎和坏死性肺炎对家禽养殖业造成严重危害 由于鸡群自身耐受力的差异感染后临床症状各异或不明显需进行实验室检测确诊 本试验虽然对葡萄球菌进行了初步鉴定但未鉴别具体菌种还需对分离菌株进一步鉴定.部分养殖场为减少疫病发生在养殖过程中长期大量使用抗菌药物引起细菌衍生耐药基因造成多重耐药菌株甚至超级细菌的产生 陈欢等在犬鼻腔分离的 株葡萄球菌大部分对青霉素、复 贵州畜牧兽医 年 第 卷 第 期 牛支原体贵州分离株基因的克隆及遗传进化分析牛支原体贵州分离株基因的克隆及遗传进化分析韩帅博 成虹松 王 婕 万芝灵 罗怡泓 盛伊果 牟真权 程振涛(.贵州大学动物科学学院贵州 贵阳 .贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室贵州 贵阳.德江县平原镇农业服务中心畜牧站贵州 毕节)摘要:为了解牛支原体贵州分离株的遗传进化情况对其基因进行 扩增扩增产物克隆至 载体筛选阳性克隆质粒进行基因序列和同源性分析构建遗传进化树 结果:牛支原体贵州株基因 产物长度约 (命名为)与湖北株、同源性为.且在同一进化分支 结论:牛支原体贵州株基因与湖北株同源性最高亲缘关系最近关键词:牛支原体贵州分离株基因克隆遗传进化中图分类号:.:文献标识码:文章编号:()牛支原体()是 种简单、在无细胞培养基中能够进行自我复制的病原微生物直径.无细胞壁主要由细胞膜、核糖体和环状双链 分子组成形态上很容易与收稿日期:资金项目:“牛支原体肺炎基因工程疫苗的构建”大学生创新创业训练计划项目贵大(省)创字()“贵州省牛羊支原体肺炎综合防控技术研究与示范”贵州省科技计划项目(黔科合支撑一般 号)“动物病原分子特征与致病机理研究”贵州省优秀青年科技人才项目(黔科合平台人才 号)作者简介:韩帅博()男在读本科研究方向:动物病原学:.通信作者:程振涛()男博士教授研究方向:动物病原病理学:.其他细菌区分 牛支原体是引起牛关节炎、乳腺炎、生殖系统疾病的病原体之一临床上容易被忽视严重危害牛养殖业 由于特殊的免疫逃避机制、高变异性和耐盐趋势增加等因素目前国内尚无安全有效的牛支原体疫苗美国研制的 个商品疫苗在实际应用中效果也不理想 试验研究阶段的牛支原体疫苗保护效果不佳存在强副作用甚至加重牛肺脏病变等问题 相关研究表明牛支原体 蛋白具有较强的免疫原性能够引起宿主的黏膜免疫可作为临床诊断和疫苗研究的重要抗原本试验对牛支原体贵州分离株基因的遗传进化进行分析为国内牛支原体的遗传变异情况及疫苗研制提供参考数据方新诺明严重耐药对苯唑西林敏感 董炜等报道 株奶牛源葡萄球菌大部分对青霉素、氨苄西林、红霉素、新霉素耐药对环丙沙星表现敏感 上述研究结果与本试验有一定差异可能是由于分离源不同和养殖过程中抗菌药物的使用差异有关 建议养殖场科学精准使用抗菌药物注意轮换用药避免盲目滥用 参考文献 曹嫚嫚翟怡梦邱军等.一株猪葡萄球菌的分离鉴定、生物学特性研究及全基因组测序分析.微生物学通报():.伍思华邬向东黄靖文等.兔溶血性葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析.黑龙江畜牧兽医():.马晓姣赵艳坤邵伟等.新疆部分地区生乳中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析.中国畜牧兽医():.赵鹤庭严红亚何辉等.一例鸡源金黄色葡萄球菌的分离鉴定与耐药性分析.云南畜牧兽医():.刘琳吴保庆郭晓银等.石榴皮水提物对猪源多重耐药大肠杆菌的抑菌作用研究.中国畜牧兽医():.陈欢李秦玲何楚桥等.犬鼻腔金黄色葡萄球菌的分离及耐药性监测.畜牧与兽医():.董炜李军.奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌血清型鉴定、毒力基因及耐药性检测与分析.中国动物传染病学报():.贵州畜牧兽医 年 第 卷 第 期