胶体金免疫层析法检测果蔬中毒死蜱前处理的优化.pdf

2023年第36 卷第9 期摘要：采用胶体金免疫层析法检测果蔬中残留毒死蜱，并研究前处理方法条件对检测结果的影响。结果表明：最佳前处理条件为以乙酸乙酯为提取剂、样品用量4g、提取剂用量8 mL、上清液体积6 mL、氮气吹干。前处理方法既快速又准确，能够进行现场检测，具有较好的实用性。关键词：果蔬；毒死蜱；胶体金免疫层析法Optimization of pretreatment during the detection of chlorpyrifosin fruits and vegetables by colloidal gold immunochromatographyJIN Hong-wei,PEI Xiao-long,CHEN Fa-rong,HAN Yan-xu,WU Yue-hao,QI Yu3(1.Shenzhen Guangming District Center for Disease Control and Prevention,2.Shaanxi Institute of Food and Drug Control,Xi an 710061,Shaanxi,China;3.Beijing Itest Technology Co.,Ltd.,Beijing 101102,China)Abstract:Chlorpyrifos in fruits and vegetables was detected by colloidal gold immunochromatography,and the effect of pretreatment conditions on the detection results was studied.The results showed that theoptimal pretreatment conditions were using ethyl acetate as the extractant,sample dosage 4 g,extractantdosage 8 mL,supernatant liquid volume 6 mL,and blowing dry by nitrogen gas.The preprocessingmethod is fast and accurate,capable of on-site detection,and has good practicality.Key words:fruit and vegetable;chlorpyrifos;colloidal gold immunochromatography中图分类号：TS207.5+3毒死蜱是目前使用最广泛的1种广谱性有机磷杀虫剂 ,具有熏蒸、触杀、胃毒作用2】,可用于防治一些害虫。但毒死蜱若使用不当,会威胁生态环境安全。即使是很小剂量的毒死蜱都会对人体造成极大的危害，导致神经系统功能异常、身体瘫痪，甚至死亡3-6 。毒死蜱具有化学性质稳定、不易降解、在农作物上残留活性期较长等特点。GB27632021食品安全国家标准食品中农药最大残留限量标准中严格规定了毒死蜱在不同种类食品中的残留限量，美国环境保护局也对各种有机磷农药在环境和农产品中的残留量作了严格规定。毒收稿日期：2 0 2 3-0 3-2 3基金项目：深圳市科创委基础研究面上项目（JCYJ20210324140406018）；深圳市光明区软科学研究项目（2 0 2 0 R01109）作者简介：金洪伟（197 9一），男，硕士研究生，副主任技师，研究方向为卫生检验、食品科学、食品安全快速检测。粮食与油脂胶体金免疫层析法检测果蔬中毒死蜱前处理的优化金洪伟，裴小龙，陈发荣”，韩琰旭，吴月皓”，齐瑜”（1.深圳市光明区疾病预防控制中心，广东深圳518 10 6；2.陕西省食品药品检验研究院，陕西西安7 10 0 6 1；3.北京艾旗斯德科技有限公司，北京10 110 2)Shenzhen 518106,Guangdong,China;文献标志码：A检测方法十分重要。目前,检测毒死蜱的方法有气相色谱法、比色光谱法、气相色谱-串联质谱法、超高效液相色谱-串联质谱法7 、电化学传感器等8 ,这些方法均需要昂贵的仪器设备，且耗时较长。本研究在T/SDNY038一2 0 2 2 蔬菜中毒死蜱、克百威和阿维菌素的快速检测胶体金免疫层析的基础上，对胶体金免疫层析法检测毒死蜱的前处理方法进行优化，以期能141文章编号：10 0 8-957 8(2 0 2 3)0 9-0 141-0 4死蜱具有可迁移性，随着毒死蜱的广泛使用，大量被富集在果蔬内,导致果蔬中毒死蜱含量超标的案例也越来越多。因此,研究与探索果蔬中毒死蜱的142够更加准确地检测果蔬中毒死蜱残留量。1材料与方法1.1材料与试剂毒死蜱代谢物检测卡，北京艾旗斯德科技有限公司；香蕉、韭菜、小白菜，市售；乙腈、甲醇、乙酸乙酯,分析纯;0.1mol/L磷酸盐PBS缓冲液（pH7.4），北京艾旗斯德科技有限公司;质量浓度1mg/mL毒死蜱标准溶液，坛墨质检标准物质中心。1.2仪器与设备FA2004B电子天平，上海精密仪器仪表有限公司；WH-2微型旋涡混合仪，上海沪西分析仪器厂有限公司;HH-2数显恒温水浴锅，金坛市城东新瑞仪器厂；UGC-12MF氮吹仪，北京优晟联合科技有限公司;TD5K离心机，上海继谱电子科技有限公司。1.3试验方法1.3.1检测卡检出限的测试进行前处理后，分别吸取10 0 L上述样品滴加至毒死蜱检测卡样品孔处，静置5min等待试验结果,判断检测卡的检出限。1.3.2前处理方法的优化在T/SDNY0382022的基础上分别研究提取剂的选择、样品用量、提取剂用量、吸取上清液的量和复溶夜的量对检测结果的影响 。考虑到丙酮水溶性强，作为提取剂时,分层效果不明显10 ，且有毒,对人体有害,所以本试验选择了乙酸乙酯与乙腈2 种可以替代丙酮的提取剂进行试验。对T/SD-NY0382022蔬菜中毒死蜱、克百威和阿维菌素的快速检测胶体金免疫层析中水浴中浓缩进行改进,改成用氮吹仪进行浓缩，浓缩温度不变。以乙酸乙酯为提取剂、样品与提取剂的料液比1：1（g/m L）上清液体积1.5mL的基础上，依次对样品用量、提取剂种类及用量、上清液体积进行探究。每个因素的最优条件带入下一个因素的研究。其余试验条件如复溶液（和提取剂使用同种溶液）的用量根据优化后的稀释倍数与浓缩倍数进行调整确定。1.3.3优化后前处理方法在样品中的应用验证1.3.3.1阴性样品验证实验准确称取最佳样品用量的韭菜和小白菜样品，分别添加0、8 0、16 0 L的毒死蜱标准溶液，按照优化后的前处理方法进行加标试验，每组试验做2 次平行,判断前处理方法是否合理。粮食与油脂1.3.3.2阳性样品验证实验将确定为阳性的样品采取上述前处理方法进行检验，以阴性样品进行对照，验证优化后的前处理方法是否合理。1.3.4胶体金检测卡的判读结果判定方式见图1。CT2结果与分析2.1检测卡检出限的测试由图2 可知：当样品中毒死蜱添加量为0.0 2mg/kg时,T比C浅,检测结果为阳性。因此,该毒死蜱试纸条的检出限为0.0 2 mg/kg。CT0 mg/kg图2 检测卡检出限结果示意图2.2前处理方法的优化结果2.2.1样品用量的优化结果由表1可知：当样品用量为4g时，试验组开始呈现阳性。这是因为样品用量决定着提取剂用量以及后续的吹干浓缩效果，样品用量越多，提取剂用量也越多，氮吹时间也会越长。因此，选择最佳样品用量为4g。表1不同样品用量的优化结果毒死蜱标准品处理添加量/(mg/kg)香蕉对照组0香蕉试验组0.02注：“_”代表阴性；“+”代表阳性，下同。2.2.2提取剂的优化结果由图3可知:使用乙酸乙酯作为提取剂时C、T线清晰，并且吹干速度比使用乙睛作为提取剂时2023年第36 卷第9 期阴性阳性图1结果判定示意图0.02 mg/kg样品用量/12一一无效0.04 mg/kg4一+一+5一一+2023年第36 卷第9 期快,用时短,符合快速检测的要求。乙酸乙酯的沸点为7 7，比乙的沸点（8 18 2)低，可以快速挥干得到目标物,而且其毒性更小。因此,本试验采用乙酸乙酯作为提取剂。12图3不同提取剂的检测结果示意图注：1、2 为提取剂乙腈的检测结果；3、4为提取剂乙酸乙酯的检测结果。1、3加标量为0 mg/kg;2、4加标量为0.02 mg/kg。2.2.3提取剂用量的优化结果由表2 可知：当提取剂用量为8 mL时，试验组开始呈现阳性。由于提取剂用量关系到整个试验，用量过少会导致提取不充分，用量过多会使试验整体的提取体系增大，还会增加氮吹时间。因此,选择最佳提取剂用量为8 mL。表2 不同提取剂用量的优化结果毒死蜱标准品处理添加量/(mg/kg)香蕉对照组0香蕉试验组0.022.2.4上清液体积量的优化结果当样品中毒死蜱添加量分别为0、0.0 4、0.80mg/kg时，离心后吸取不同体积的上清液进行氮吹复溶。由图4可知：当吸取2、4mL上清液时，结果出现假阴性；当吸取6 mL上清液时,结果更清晰，阳性效果更明显。因此，选择最佳上清液体积为 6 mL。(a)2 mL图4不同吹干体积试验结果示意图注：（a）、（b）、（c)中从左到右加标量分别为0、0.0 4、0.80 mg/kg。粮食与油脂2.2.5优化后的前处理方法综上，最佳前处理方法如下：称取4g粉碎样品于15mL离心管中,加入8 mL乙酸乙酯进行提取，漩涡振荡1min后于室温以40 0 0 r/min离心5min，离心后吸取上清液6 mL于10 mL离心管中,在40 氮吹仪下空气吹干，吹干后加人12 0 L复溶液进行复溶，然后吸取复溶后的溶液10 0 L滴加到检测卡上进行检测,在5 8 min内观察结果。2.3优化后前处理方法在样品中的应用验证结果34提取剂用量/mL48一一一一一+一+(b)4mL(c)6mL1432.3.1阴性样品加标试验结果由表3可知：韭菜和小白菜的阴性样品表现为“_”，阳性加标样品均表现为“+”,结果完全符合，表明该前处理方法良好。表3优化后阴性加标样品的检测结果加标量/(mg/kg)样品0韭菜小白菜2.3.2阳性样品验证实验结果12采用优化后的处理方法对阳性样品进行前处一理,并用胶体金检测卡检测,检测结果为阳性，且3一次测定结果一致。说明该前处理方法既快速又准+确，能够进行现场检测，具有较好的实用性。+3结论采用胶体金免疫层析法检测果蔬中残留毒死蜱,并研究前处理方法条件对检测结果的影响。结果表明：最佳前处理方法为以乙酸乙酯为提取剂、样品用量4g、提取剂用量8 mL、上清液体积6 mL、氮气吹干。前处理的优化,决定整个试验的时效性和准确度,所以在食品安全快速检测领域，除了检测卡自身的性能之外，配合高效的前处理方法可以提升整个检测过程。该前处理方法既快速又准确，基本满足一般基质中毒死蜱的检测要求，能够进行现场检测,具有较好的应用前景。【参考文献【1王彦，余海，王利杰，等.用于有机磷农药及其水解产物可视化检测的荧光探针制备及性质研究J安庆师范大学学报（自然科学版），2 0 2 1，2 7（1)：6 10.【2】邢平，徐艳飞，王灿灿，等气相色谱法同时检测柑橘0.02+一+0.04+144中毒死蜱和氯氰菊酯残留量的方法研究 J世界农药,2 0 2 1,43(3):47-51.【3】林志钦，庄心悦，张芳，等.果蔬中毒死蜱残留的检测与降解方法研究进展 J中国果菜，2 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