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95医疗装备 2024 年 1 月第 37 卷第 1 期 Medical Equipment,January.2024,Vol.37,No.1肺型上皮细胞能够分泌一种特殊的涎液化糖链抗原（sialylated carbohydrate antigen，KL-6），KL-6 是一类相对分子质量接近 200 kDa 的糖蛋白1。Peng 等2研究表明，机体内的 KL-6 主要由肺泡型上皮细胞分泌，肺泡型上皮细胞出现增殖、受激发等可引发肺泡细胞受损，因此，可以推断KL-6 水平与肺泡损伤直接相关，可作为临床评价肺部疾病的重要指标之一3-8。血清肿瘤标志物是目前临床开展最为广泛、最简便的肿瘤各期的筛查指标，其中肺癌神经元特异度烯醇化酶（neuron specific eno1ase，NSE）、鳞 状 上 皮 细 胞 癌 抗 原（squamous cell carcinoma，SCC）、细胞角蛋白 19（cytokeratin-19-fragment，CYFRA21-1）及 血 清癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）等为用于肺癌筛查的常用指标。但上述指标对肺癌诊断的特异度、灵敏度欠佳，故对肺癌的诊断不具有特异性。基于此，本研究以磁微粒化学发光免疫术作为技术支撑，建立血清 KL-6 的检测方法，旨在探讨其在肺癌中的诊断价值，并与 NSE、SCC、CEA、CYFRA21-1 进行联合检测，以期为肺癌的诊断提供灵敏度指标，现报道如下。1 资料与方法1.1 一般资料 选取 2023 年 15 月徐州市铜山区中医院收治的 85 例肺癌患者为试验组，其中男 44 例，女41 例；年龄 1970 岁，中位年龄 38（31，46）岁。对照组为随机选取同期体检中心接受健康体检的健康人群 85 名，其中男 40 名，女 45 名；年龄 1970 岁，中位年龄 38（31，46）岁。试验组纳入标准：均经手术、穿刺活检等组织病理学检查结果确诊为肺癌；均行 CT 和高分辨率 CT 扫描；未伴随其他恶性肿瘤；临床资料和影像资料完整。试验组排除标准：有既往放化疗史；伴有其他肺部疾病。本研究经徐州市铜山区中医院医学伦理委员会审批通过（伦理审批号：202301304）均于检查前签署知情同意书。人血清涎液化糖链抗原磁微粒化学发光免疫分析方法的建立及对肺癌的诊断价值张少华1，杜文水21南京华银医学检验所（江苏南京211100）；2徐州市铜山区中医院（江苏徐州221116）摘要 目的建立人血清涎液化糖链抗原（KL-6）磁微粒化学发光免疫分析方法（MCLIA），探讨 KL-6 联合神经元特异度烯醇化酶（NSE）、鳞状上皮细胞癌抗原（SCC）、细胞角蛋白 19（CYFRA21-1）及血清癌胚抗原（CEA）对肺癌的临床诊断价值。方法选取 2023 年 15 月徐州市铜山区中医院收治的肺癌患者 85 例为试验组，随机选取同期健康体检者 85 名为对照组，利用 MCLIA 法测定 NSE、SCC、CEA、CYFRA21-1 血清含量，分析肿瘤标志物单项测定与多项联合检测对肺癌的鉴别诊断价值。结果MCLIA 测定 KL-6 的空白检出限（LoB）为 20 U/ml、最低检出限（LoD）为 50 U/ml，重复性和实验室内精密度分别低于 6%和 8%，在检测范围 5010 000 U/ml 内成线性。KL-6 单一指标检测肺癌的灵敏度为 80%，特异度为 76.5%，曲线下面积（AUC）为 0.838。5 项肺癌血清标志物联合鉴别诊断的灵敏度为 98.8%，特异度为 97.6%，AUC 为 0.997，均高于单项检测。结论人血清 KL-6 全自动定量 MCLIA 检测精密度、灵敏度、线性范围均符合临床要求。联合检测血清 KL-6、NSE、SCC、CEA、CYFRA21-1 诊断肺癌的灵敏度、特异度均较理想，对肺癌的鉴别诊断具有较高的临床应用价值。关键词肺癌；人血清涎液化糖链抗原；神经元特异度烯醇化酶；鳞状上皮细胞癌抗原；血清癌胚抗原；细胞角蛋白 19中图分类号R392.33 文献标识码B 文章编号1002-2376（2024）01-0095-04DOI10.3969/j.issn.1002-2376.2024.01.027收稿日期：2023-11-09临床应用96医疗装备 2024 年 1 月第 37 卷第 1 期 Medical Equipment,January.2024,Vol.37,No.11.2 仪器与试剂受检者入组时剔除溶血、黄疸、脂血等标本，采集空腹静脉血，置入4 冰箱中恒温保存。KL-6 抗体-ALP、KL-6 抗体-磁性颗粒、重组 KL-6 抗原均购自天津（梅迪赛斯）生物科技有限公司。采用磁微粒全自动化学发光免疫分析仪（天津博奥赛斯公司，Axceed 260 型）检测 NSE、SCC、CEA、CYFRA21-1 水平，检测方法为化学发光免疫法，所用试剂为 Axceed 260 型检测仪配套试剂，检测过程严格依据说明书。1.3 检测指标及方法1.3.1 精密度检测依据美国临床实验室标准化协会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）所制定临床评价方案 5（evaluation protocols 5，EP 5）标准指南9文件进行精密度实验，选取高值和低值质控品和 4 个浓度不同的血清样本，在同一实验内重复测定 2 次，间隔 2 h 以上记录数据。同时根据 EP5 中的 A3 文件标准计算重复性（SR）、实验室精密度（SWL）。1.3.2 检测范围线性验证参照EP 6指南10，选取线性范围（5010 000 U/ml）内患者的低值样本和高值样本，配制 11 组梯度样本，重复测定 2 次。已达到设定要求条件基础上以多项式回归分析计算重复性，分别完成一次多项式拟合、二次多项式拟合、三次多项式拟合。KL-6 检测可接受线性允许误差关系范围为 8.0%，可接受重复性设定范围 6.0%。1.3.3 检测限参照 EP1711标准指南文件确定 KL-6 的空白限 LoB）：空白样本测定结果第 95 百分位数秩号对应浓度结果为 LoB），检出限 LoD：浓度范围LoB 值 15 倍范围内的低浓度样本，第 50 百分位数秩号对应的浓度为 LoD），每天重复测定 4 次，连续测定 3 d，低浓度样本结果确保低于 LoB 的百分比 15.2 ng/ml为阳性 5、SCC1.7 ng/ml为阳性6、CEA5.0 ng/ml 为阳性7、CYFRA21-13.3 ng/ml 为阳性8、KL-6 500 U/ml 为阳性 9。1.4 统计学处理 采用 SPSS 22.0 统计软件进行数据分析。计量资料以 x-s 表示，采用 t 检验。计数资料以率表示，采用 2检验。诊断效能评价使用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线，计算曲线下面积（area under curve，AUC），根据AUC 结果评价血清标志物检测诊断的灵敏度和特异度。P0.05 为差异有统计学意义。2 结果2.1 KL-6 精密度测定结果不同浓度精密度检测结果均值、SD、SR、SWL见表 1。本产品的重复性变异系数（CV%）6.0%（2.4%3.3%），实验室内精密度CV%8.0%（4.3%6.0%）。表 1KL-6 精密度测定结果样品数量 均值（U/ml）SRSWLSDCV%SDCV%质控 180 100.318 3.43.4 7.47.4质控 280 1 926.650 59.73.1132.96.9样本 180 200.824 12.54.8 16.55.6样本 280 861.294 20.72.9 41.37.1样本 380 2 596.931 85.73.3272.97.4样本 480 5 267.565268.65.1389.87.42.2 KL-6 检测线性范围 线性范围结果见表 2，SDr 为 2.6%，0.05），说明预期值与测量值间相关性良好，相关系数 r=0.996。磁微粒化学发光法检测 KL-6 在 5010 000 U/ml 范围内成良好的线性，经计算 KL-6 检测限指标 LoB为 20 U/ml，LoD 为 50 U/ml。表 2KL-6 线性范围检测结果浓度预测结果（U/ml）实测结果（U/ml）L 50 54.0950.9L+0.1H 968 984.5680.8L+0.2H1 916 1 830.5480.7L+0.3H2 864 2 873.7290.6L+0.4H3 812 4 073.4300.5L+0.5H4 760 5 157.9770.4L+0.6H5 708 5 567.2170.3L+0.7H6 656 7 306.3820.2L+0.8H7 604 8 080.6520.1L+0.9H8 552 8 959.629H9 50010 421.847注：KI-6 为人血清涎液化糖链抗原图 1KL-6 梯度浓度预测值与实测值的线性分析图 97医疗装备 2024 年 1 月第 37 卷第 1 期 Medical Equipment,January.2024,Vol.37,No.12.3 KL-6 在肺癌诊断中的应用2.3.1 试验组和对照组血清 KL-6、NSE、SCC、CEA、CYFRA21-1 水平比较 试验组血清 KL-6、NSE、CEA、CYFRA21-1 水平高于对照组，差异有统计学意义（P0.05），见表 3。表 3试验组和对照组血清 KL-6、NSE、SCC、CEA、CYFRA21-1 水平比较（x-s）组别人数KL-6（U/ml）NSE（ng/ml）SCC（ng/ml）CEA（ng/ml）CYFRA21-1（ng/ml）试验组 85 例 2463.55522.49 25.838.81 1.010.45 101.0316.82 3.823.57对照组 85 名 209.75117.05 10.443.92 0.930.39 2.570.49 1.850.95t38.81014.7101.24053.9504.979P 0.000 0.0000.217 0.0000.000注：KL-6 为涎液化糖链抗原，NSE 为神经元特异度烯醇化酶，SCC 为鳞状上皮细胞癌抗原，CEA 为血清癌胚抗原，CYFRA21-1 为细胞角蛋白 19 2.3.2 肿瘤标志物单项检测与联合检测对肺癌患者的诊断效能比较血 清 KL-6、NSE、SCC、CEA、CYFRA21-1 肿瘤标志物单项检测与联合检测对肺癌患者的诊断效能分析结果比较，ROC 曲线分析显示，5 项肿瘤标志物联合诊断肺癌的灵敏度为 98.80%，特异度为 97.60%，AUC 为 0.997，其灵敏度和 AUC 均分别高于 5 项指标单一检测，见表 4 和图 2。KL-6、NSE、SCC、CEA、CYFRA21-1 5 项 指 标 所 形 成 的鉴别诊断体系诊断肺癌的 AUC 为 0.997（95%CI：0.9921.000，P0.01），最大约登指数为 0.964，灵敏度为98.8%，特异度为97.6%，具有一定诊断价值。表 4肿瘤标志物单项检测与联合检测对肺癌患者的诊断效能比较检测指标约登指数AUC灵敏度（%）特异度（%）KL-60.5650.83880.00 76.50 NSE0.6470.82180.00 84.70 SCC0.130.42516.50 96.50 CEA0.6470.89388.20 76.50 CYFRA21-10.3650.65055.30 81.20 5 项联合0.9640.99798.80 97.60 注：KL-6 为涎液化糖链抗原，NSE 为神经元特异度烯醇化酶，SCC 为鳞状上皮细胞癌抗原，CEA 为血清癌胚抗原，CYFRA21-1 为细胞角蛋白 19 3 讨论血清肿瘤标志物检查在肺癌早期筛查中具有重要的参考预警价值，且能为其分期诊断提供重要参考价值。虽然单项血清肿瘤标志物检查简便、价格低，但诊断灵敏度和特异度欠佳。虽然多项肿瘤标志物联合检测价格相对较贵，但检测效能优于B超、CT 或磁共振等影像学检查，且诊断时间早，尤其注：KL-6 为涎液化糖链抗原，NSE 为神经元特异度烯醇 化酶，SCC 为鳞状上皮细胞癌抗原，CEA 为血清癌胚抗原，CYFRA21-1 为细胞角蛋白 19图 2 5 项血清肿瘤标志物单项及其联合检测诊断肺癌的ROC 曲线对早期微灶肿瘤，多项肿瘤标志物联合检测能至少提前半年以上发现，为肺癌的临床超早期诊断、治疗争取了宝贵的时间。近年来有研究表明，KL-6 血清学水平的高低与肺纤维化患者病情严重程度有较高的相关性，常作为肺纤维化病情评估、预后评价的生物学指标12，但其与肺癌的相关研究报道较少。本研究参考 CLSI 指南标准建立 KL-6 检测精密度评价，确定 KL-6 检测的线性范围和参考区间，结果显示，KL-6 的 LoB 为 20 U/ml、最低检出限 LoD 为 50 U/ml，该方法精密度良好，达到精密度质量规范，在检测范围 5010 000 U/ml 内成线性。该方法的精密性、检测能力及线性范围等均较为准确，符合临床诊断需求，可以作为临床诊断指标。为了进一步探讨 KL-6 在肺癌诊断中的价值，本研究对 KL-6 单一检测和与其他指标联合检测进行价值分析，发现 KL-6 单一指标检测肺癌的灵敏度为 80%，特异度为 76.5%，AUC 为 0.838，其灵敏度、特异度和 AUC 均高于其他 3 项指标NSE、SCC、CYFRA21-1，说 明 KL-6 对 肺 癌 临床辅助诊断价值较高。血清 KL-6、NSE、SCC、CEA、CYFRA21-1 肿瘤标志物联合检测对肺癌患者的诊断效能分析结果显示，联合检测 AUC 为0.997（95%CI：0.9921.000，P0.01），最 大 约登指数 0.964，灵敏度为 98.8%，特异度为 97.6%，具有极高诊断价值。综上所述，基于磁微粒全自动化学发光免疫技术建立的血清 KL-6 检测方法，符合 CLSI 的 EP5（下转第 101 页）101医疗装备 2024 年 1 月第 37 卷第 1 期 Medical Equipment,January.2024,Vol.37,No.1状况的影响 J.检验医学与临床，2018，15（6）：871-873.10 张凤英，杨志敏，王世敏，等.扁桃体啄治法治疗儿童鼾眠的临床效果 J.中国医药导报，2019，16（27）：114-117.11 刘然，史敏，黄永，等.鼻内镜下扁桃体腺样体等离子切除术对重度鼾症所致发育不良的治疗效果 J.中国内镜杂志，2019，25（4）：32-36.12 吴昊，王东海.低温等离子腺样体切除联合双侧扁桃体切除治疗儿童鼾症的疗效观察 J.解放军预防医学杂志，2017，35（2）：139-141.13 杨书勋.儿童鼾症患者应用低温等离子腺样体切除联合双侧扁桃体切除对出血量、总有效率的影响 J.临床医药文献电子杂志，2020，7（3）：45.14 李蕊叶，祝康，王玲，等.鼻内镜下低温等离子扁桃体腺样体切除术治疗小儿鼾症的效果 J.临床医学研究与实践，2019，4（30）：116-118.15 梁全.低温等离子扁桃体消融切除术联合鼻镜低温等离子腺样体消融术治疗小儿鼾症 J.医学理论与实践，2020，33（6）：961-962.16 中国医师协会耳鼻咽喉头颈外科医师分会.儿童扁桃体腺样体低温等离子射频消融术规范化治疗临床实践指南 J.临床耳鼻咽喉头颈外科杂志，2021，35（3）：193-199.17 杨仲刚，张秀君，信树明，等.低温等离子消融术在儿童扁桃体腺样体切除术中的应用效果 J.河北医药，2021，43（9）：1364-1367.18 陈公平，林其昌，黄建钗，等.阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者血清肿瘤坏死因子-、白细胞介素-6水平的检测及临床意义 J.福建医科大学学报，2010，44（5）：359-362.19 Hui M,Li Y,Ye J,et al.Obstructive sleep apnea-hypopneasyndrome(OSAHS)comorbid with diabetes rather than OSAHS alone serves anindependent risk factor for chronic kidney disease(CKD)J.Ann Palliat Med,2020,9(3):858-869.20 Gottlieb DJ,Punjabi NM.Diagnosis and Management of Obstructive Sleep Apnea:a ReviewJ.JAMA,2020,323(14):1389-1400.21 Savini S,Ciorba A,Bianchini C,et al.Assessment of obstructive sleep apnoea(OSA)in children:an updateJ.Acta Otorhinolaryngol Ital,2019,39(5):289-297.标准指南文件制定的相关性能指标参数，可作为临床实验室 KL-6 的检测方法与试剂。KL-6 单一诊断肺癌的价值虽较高，但联合检测血清 KL-6、NSE、SCC、CEA、CYFRA21-1的诊断灵敏度为98.8%，特异度为 97.6%，对于明确诊断肺癌具有较高的临床应用价值。参考文献1 Kohno N,Akiyama M,Kyoizumi S,et al.Detection of soluble tumor-associated antigens in sera and effusions using novel monoclonal antibodies,KL-3 and KL-6,against lung adenocarcinomaJ.Jpn J Clin Oncol,1988,18(3):203-216.2 Peng DH,Luo Y,Huang LJ,et al.Correlation of Krebs von den Lungen-6 and Fibronectin with pulmonary fibrosis in Coronavirus Disease 2019J.Clinica Chimica Acta,2021,517(8):48-53.3 Wang C,Wang Q,Liu T,et al.Krebs von den Lungen-6(KL-6)as a diagnostic marker for pulmonary fibrosis:A 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