基于NLRP3_caspase-1通路沉默I-Aβ1基因对肾小球肾炎系膜增殖的影响.pdf

cacy of doxorubicin by combination with glycyrrhetinic acid as an an鄄giogenesis inhibitor也J页.Phytomedicine,2021;81:153408郾11摇 Ling YH,el鄄Naggar AK,Priebe W,et al.Cell cycle鄄dependent cyto鄄toxicity,G2/M phase arrest,and disruption of p34cdc2/cyclin B1activity induced by doxorubicin in synchronized P388 cells也J页.MolPharmacol,1996;49(5):832鄄41郾12摇 Tyagi AK,Singh RP,Agarwal C,et al.Silibinin strongly synergizeshuman prostate carcinoma DU145cells to doxorubicin鄄inducedgrowth Inhibition,G2鄄M arrest,and apoptosis也J页.Clin Cancer Res,2002;8(11):3512鄄9郾13 摇Wei C,Li X郾 The role of photoactivated and non鄄photoactivatedverteporfin on tumor也J页.Front Pharmacol,2020;11:557429郾14摇 Liu K,Du SM,Gao P,et al.Verteporfin suppresses the proliferation,epithelial鄄mesenchymal transition and stemness of head and necksquamous carcinoma cells via inhibiting YAP1也J页.J Cancer,2019;10(18):4196鄄207郾15摇 Maehama T,Nishio M,Otani J,et al.The role of Hippo鄄YAP signaling insquamous cell carcinomas也J页.Cancer 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基因对肾小球肾炎系膜增殖的影响董丽娜摇 刘国平摇 刘艾芹摇 于磊摇(内蒙古自治区人民医院肾脏内科,内蒙古摇 呼和浩特摇 010017)摇 摇 也摘摇 要页摇 目的摇 探究基于 NOD 受体(NLRP)3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)鄄1 信号通路中沉默免疫应答基因(I鄄A茁1)基因对肾小球肾炎细胞的表现及其系膜细胞的增殖影响。方法摇 将人系膜增生性肾小球肾炎细胞(MsPGN),经培育后分为对照组、过表达组、沉默组,对照组不做处理,过表达组转染 I鄄A茁1 模拟物(mimics)上调载体,沉默组转染 I鄄A茁1 抑制剂(inhibitor)下调载体。测定每组 MsPGN 细胞 I鄄A茁1 转染程度,双荧光素酶报告基因系统验证 NLRP3、caspase鄄1、I鄄A茁1 基因增殖、凋亡,MsPGN 细胞侵袭、迁移水平,NLRP3/caspase鄄1 信号通路表达量。结果摇与对照组比较,过表达组 I鄄A茁1 表达量升高,沉默组 I鄄A茁1 表达量降低,差异有统计学意义(P0郾 05);与过表达组比较,沉默组 I鄄A茁1 表达量显著降低(P0郾 05);双荧光素酶报告基因结果显示,与过表达组相比,沉默组 NLRP3/caspase鄄1 野生型荧光素酶活性显著上升(P0郾 05);与对照组比较,过表达组(24、48、72 h)系膜细胞增殖率降低,凋亡率升高,差异有统计学意义(P0郾 05);沉默组(24、48、72 h)系膜细胞增殖率升高,凋亡率降低,差异有统计学意义(P0郾 05);与过表达组比较,沉默组(24、48、72 h)系膜细胞增殖率升高,凋亡率降低,差异有统计学意义(P0郾 05);与对照组比较,过表达组MsPGN 细胞迁移数、侵袭数增多,沉默组 MsPGN 细胞迁移数、侵袭数减少(P0郾 05);与过表达组比较,沉默组 MsPGN 细胞迁移数、侵袭数减少(P0郾 05);与对照组比较,过表达组 NLRP3、caspase鄄1 升高,沉默组 NLRP3、caspase鄄1 降低(P0郾 05);与过表达组比较,沉默组 NLRP3、caspase鄄1 显著降低(P0郾 05)。结论摇 抑制 I鄄A茁1 可明显改变系膜细胞增殖、凋亡率及 MsPGN 细胞迁移、侵袭数,经过调节 NLRP3/caspase鄄1 信号通路,在防治、调控肾小球肾炎系膜增殖中有重要意义。也关键词页摇 NOD 受体 3;半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶鄄1;免疫应答基因(I鄄A茁1);系膜增生性肾小球肾炎;系膜增殖也中图分类号页摇 R692郾 3摇 也文献标识码页摇 A摇 也文章编号页摇 1005鄄9202(2023)17鄄4264鄄05;doi:10郾 3969/j郾 issn郾 1005鄄9202郾 2023郾 17郾 045基金项目:内蒙古自治区自然科学基金项目(2018MS08008)通信作者:于磊(1977鄄),男,医学博士,主任医师,硕士生导师,主要从事肾脏疾病研究。第一作者:董丽娜(1980鄄),女,硕士在读,主任医师,主要从事原发性与继发性肾脏疾病的诊治研究。摇 摇 肾小球肾炎是一类常见的肾脏炎症类疾病,其中依据病理类型又可分为膜性肾小球肾炎、系膜增生性肾小球肾炎等,且大多数患者治疗后预后性较差也1,2页。近年来肾小球肾炎发病年龄逐渐降低,其发病率逐年加剧升高,严重危害着患者的身心健康也3 6页。肾小球肾炎特点是发病快,前期大多主要表现为上呼吸道感染,随后表现为无症状性血尿等4624中国老年学杂志 2023 年 9 月第 43 卷症状,严重者可发展为肾病综合征也7 9页。肾小球肾炎是根据病理检查、病理形态学诊断的肾炎,是一种以弥漫性肾小球系膜细胞增生和多种程度系膜基质增多为特征的肾脏类炎症也10页。NOD 受体(NLRP)3是近些年新出现的有关基因表达调控的信号通路,在炎症的发生、发展过程中起着明显的控制作用也11页。NLRP3 的激活是肾小球肾炎病理过程中的重要步骤,研究 NLRP3 对于治疗肾小球肾炎具有重要意义。半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)鄄1是半胱氨酸蛋白酶家族中的一种,其存在于人体各种细胞质当中,其起着监督炎症发生、监测细胞死亡的作用也12页。caspase鄄1 是一种重要的转录因子,病理反应主要是提高炎性因子分泌量,使患者病情加重。基于上述研究背景,在本文研究中基于 NLRP3/caspase鄄1 信号通路研究沉默免疫应答基因(I鄄A茁1)是否会优化肾小球肾炎,对肾小球肾炎系膜细胞的增殖功能产生了如何影响,以便为诊断、控制、预防肾小球肾炎提供理论参考。1摇 对象与方法1郾 1摇 材料摇 研究细胞:人系膜增生性肾小球肾炎细胞(MsPGN),购自上海雅吉生物科技有限公司,货号:E01666,本研究操作已获医院伦理委员会审批同意,且严格按照伦理要求相关规定进行。主要试剂:RPMI1640 由上海吉至生化科技有限公司提供,货号:A90022S;胎牛血清由上海江林生物科技有限公司提供,货号:10270鄄106;I鄄A茁1 基因由上海彩佑实业有限公司提供,货号:YS鄄2191F;Trizol 试剂由武汉纯 度 生 物 科 技 有 限 公 司 提 供,货 号:CD鄄102523GM;磷酸盐缓冲液(PBS)由上海广锐生物科技有限公司提供,货号:PR694;NLRP3 抗体由武汉菲恩生物科技有限公司提供,货号:FNab10120;caspase鄄1 抗体由武汉益普生物科技有限公司提供,货号:ATA25867。1郾 2摇 方法1郾 2郾 1摇 肾小球肾炎 MsPGN 细胞培育摇 先用双抗的RPMI1640、12%胎牛血清完全培养基,保存温度为37 益 培养已购买的人系膜增生性肾小球肾炎MsPGN 细胞,每隔4 d 替换新鲜培养液,当细胞融合度达到在 72%以上时,开始传代培养。选择人系膜增生性肾小球肾炎 MsPGN 细胞,并分为对照组、过表达组、沉默组。1郾 2郾 2摇 肾小球肾炎 MsPGN 细胞内 I鄄A茁1 指标转染摇 对照组不做处理,过表达组转染 I鄄A茁1 模拟物(mimics)上调载体,沉默组转染 I鄄A茁1 抑制剂(in鄄hibitor)下调载体。I鄄A茁1 mimics 序列:上游引物 5忆鄄CAUUGCACUUGUCUCGGUCUGA鄄3忆,下游 5忆鄄AGAC鄄CGAGACAAGUGCAAUGUU鄄3忆;I鄄A茁1inhibitor 序列:上游引物 5忆鄄UAUUGCACUCGUCCCGGCCUCC鄄3忆,下游 5忆鄄AGGCCGGGACGAGUGCAAUAUU鄄3忆,在转染过程中,每组培养基浓度均保持在120 nmol/L。1郾 2郾 3摇 肾小球肾炎 MsPGN 细胞内 I鄄A茁1 指标检测摇 采用实时荧光定量 PCR 法检测 I鄄A茁1 指标。选取转染 72 h 对照组、过表达组、沉默组 I鄄A茁1 细胞,并用 Trizol 试剂提取,将采集到的总 RNA 通过逆转录合成 cDNA,配制反应体系需选用各组 2 滋l 的RNA 样本,0郾 78、1郾 23、4郾 56、0郾 27 滋l 的 RNA 的反转录(RT)、脱氧核苷酸三磷酸酯(dNTPs)、5 ml 缓冲液、逆转录酶(MMLV),保持在 15 益下,35 min。组建 RT鄄PCR 体 系,其 中 包 含 1郾 33 滋l、7郾 67 滋l、1郾 2 滋l、0郾 1 ml 的无核酸酶水、cDNA、引物、探针混合物及通用混合物,小核 RNA 作为内部。其中,I鄄A茁1 序列:上游引物 5忆鄄GGGCGGAATTGCACTTGTC鄄3忆,下游 5忆鄄CTCAACTGGTGGTGTCGTGGAGTC鄄3忆,反应20 min,保持温度在 80 益,接着 50 益 下反应10 min,循环 40 次,记录数值,即为 I鄄A茁1 表达量。1郾 2郾 4摇 双荧光素酶报告基因实验摇 采用 Targetscan靶基因软件利用荧光素酶系统分析 I鄄A茁1 和 NL鄄RP3/caspase鄄1 信号通路的关系,检测荧光素酶活力,将组建的 NLRP3/caspase鄄1 野生型与 NLRP3/caspase鄄1 突变型的双荧光素酶报告载体均与 I鄄A茁1mimics、I鄄A茁1 inhibitor 一起转染到放置肾小球肾炎细胞的培养皿中,经转染 2 d 后,采集细胞,并在室温下,进行裂解,加入荧光素酶底物,其中,内参为荧光素酶活性,读取、记录荧光素酶活性数值。1郾 2郾 5摇 检测肾小球肾炎系膜细胞增殖、凋亡方法摇使用 MTT 法检测肾小球肾炎系膜细胞增殖率,每个组胰酶进行分解,形成单细胞悬液,离心7 min,丢弃上清液,使用5 益的洗液,洗涤2 次。取配制的单细胞悬液,加0郾 23 ml、0郾 5 ml 的噻唑蓝(MTT)、70%乙醇,在-24 益下固定,并在 5 益下,放置 12 h 并离心9 min,洗液洗涤 3 次,置于无光环境下,用碘化丙啶液染色,用 SpectraMax Paradigm 卡盒式多功能酶标仪(美谷分子仪器有限公司 上海)测定 OD 值,计算增殖率。用 Agilent NovoCyte 流式细胞仪(安捷伦科技公司 美国)检测肾小球肾炎系膜细胞凋亡率。1郾 2郾 6摇 检测肾小球肾炎 MsPGN 细胞迁移、侵袭摇使用 Transwell 小室检测每组肾小球肾炎 MsPGN 细胞侵袭数,培养板置于 Transwell 小室,下室倒入120 ng/ml反应溶液、上室倒入细胞悬液、静放 2 d,5624董丽娜等摇 基于 NLRP3/caspase鄄1 通路沉默 I鄄A茁1 基因对肾小球肾炎系膜增殖的影响摇 第 17 期用三羟甲基丙烷溶液对培养板进行处理,PBS 洗涤5 次,每次洗涤 5 min,固定并用苏木素染色,洗涤后显微镜下观察上室细胞数,记录 6 个视野内细胞数的平均值,重复 4 次,取 MsPGN 细胞侵袭数平均值。用划痕实验检测 MsPGN 细胞迁移数,选取 MsPGN细胞用胰蛋白酶分解,获取细胞悬液接种到 6 孔板上,并用 0郾 013 ml 移液器枪头将全部单层 MsPGN细胞,从上至下画一条划痕,用 PBS 洗涤刮下细胞,向干净培养基中加入 3 ml 的溶液,37 益 下培育30 h,弃去培养液,显微镜下观察并记录 4 个视野平均值,重复 4 次,取 MsPGN 细胞迁移数平均值。1郾 2郾 7摇检测 NLRP3/caspase鄄1 信号通路表达量方法摇 采用 Western 印迹法检测 NLRP3/caspase鄄1 信号通路表达量。选取系膜细胞,采集 20 滋g 蛋白质样本,电泳 95 min,转移到聚偏氟乙烯(PVDF)膜,室温下,封闭处理,添加 1 颐1 500 的 TBST 供给稀释的 NLRP3 一抗,使用浓度为0郾 08%的辣根过氧化氢酶标记 caspase鄄1 二抗,于室温下培育,在避光环境下,采用电化学发光(ECL),进行显色 30 min,然后采用 LABWORK 凝胶图像,进行扫描操作,获取胶片,计算 NLRP3、caspase鄄1 表达量。1郾 3摇 统计学处理摇 采用 SPSS26郾 0 统计软件进行独立样本 t 检验、F 检验。2摇 结摇 果2郾 1摇 I鄄A茁1 转染效率分析摇如表 1 所示,与对照组比较,过表达组 I鄄A茁1 表达量升高及沉默组 I鄄A茁1表达量降低,具有统计学差异(P0郾 05);与过表达组比较,沉默组 I鄄A茁1 表达量降低,具有统计学差异(P0郾 05),说明 I鄄A茁1 转染成功。2郾 2摇 系膜细胞增殖、凋亡率摇如表 1 所示,与对照组比较,过表达组 24、48、72 h 系膜细胞增殖率降低,凋亡率升高,沉默组 24、48、72 h 系膜细胞增殖率升高,凋亡率降低,具有统计学差异(P0郾 05);与过表达组比较,沉默组 24、48、72 h 系膜细胞增殖率升高,凋亡率降低,具有统计学差异(P0郾 05)。2郾 3摇 MsPGN 细胞迁移、侵袭数摇 如表 1 所示,与对照组比较,过表达组 MsPGN 细胞迁移数、侵袭数增多,沉默组 MsPGN 细胞迁移数、侵袭数减少,具有统计学差异(P 0郾 05);与过表达组比较,沉默组MsPGN 细胞迁移数、侵袭数减少,具有统计学差异(P0郾 05)。表 1摇 各组 I鄄A茁1 转染效率分析及系膜细胞增殖、凋亡率、MsPGN 细胞迁移、侵袭数比较(x依s,n=4)组别I鄄A茁1 表达量系膜细胞增殖率(%)24 h48 h72 h系膜细胞凋亡率(%)细胞迁移数(个)细胞侵袭数(个)对照组1郾 26依0郾 5239郾 37依3郾 7148郾 36依4郾 7660郾 32依6郾 1053郾 31依5郾 31200郾 13依19郾 81200郾 18依20郾 37过表达组3郾 79依0郾 541)20郾 31依2郾 091)19郾 37依1郾 861)18郾 35依1郾 731)87郾 23依8郾 731)400郾 35依41郾 211)423郾 35依43郾 131)沉默组1郾 17依0郾 431)2)50郾 21依5郾 031)2)61郾 78依6郾 361)2)84郾 32依8郾 371)2)21郾 46依0郾 021)2)81郾 37依9郾 981)2)99郾 36依9郾 731)2)F 值32郾 43343郾 96355郾 44343郾 01833郾 35444郾 16444郾 619P 值0郾 0010郾 0010郾 0010郾 0010郾 0010郾 0010郾 001摇 与对照组比较:1)P0郾 05;与过表达组比较:2)P0郾 05;表 3 同2郾 4摇 双荧光素酶报告基因结果摇 如表 2 所示,双荧光素酶报告基因结果显示,与沉默组相比,过表达组NLRP3/caspase鄄1 野生型荧光素酶活性升高,具有统计学差异(P0郾 05)。表 2摇 两组荧光素酶活性比较(x依s,n=4)组别NLRP3/caspase鄄1 野生型NLRP3/caspase鄄1 突变型过表达组1郾 45依0郾 140郾 85依0郾 07沉默组0郾 32依0郾 030郾 83依0郾 08t/P 值51郾 140/0郾 0017郾 830/0郾 190摇2郾 5摇 NLRP3/caspase鄄1 信号通路蛋白表达量分析摇如表 3 所示,与对照组比较,过表达组 NLRP3、caspase鄄1 升高,沉默组 NLRP3、caspase鄄1 降低,具有统计学差异(P0郾 05);与过表达组比较,沉默组NLRP3、caspase鄄1 降低,具有统计学差异(P0郾 05)。表 3摇 各组 NLRP3/caspase鄄1 信号通路蛋白表达量比较(x依s,n=4)组别NLRP3caspase鄄1对照组1郾 03依0郾 171郾 55依0郾 15过表达组2郾 15依0郾 211)2郾 97依0郾 331)沉默组0郾 88依0郾 081)2)1郾 14依0郾 091)2)F/P 值35郾 492/0郾 00137郾 729/0郾 0013摇 讨摇 论摇 摇 临床研究证实也13页,I鄄A茁1 基因可以调节人体大约 1/4 微小 RNA 表达,其中 I鄄A茁1 在肾小球肾炎、肾结石、肾动脉狭窄等疾病呈现异常,同时与炎症的出现、进展、增加、迁移有着密切联系。I鄄A茁1 参加6624中国老年学杂志 2023 年 9 月第 43 卷肾小球肾炎细胞的发展、产生、侵袭及迁移过程,多种肾脏类疾病与其表达水平关系密切,如在肾萎缩中,经下调 I鄄A茁1 水平增强肾脏稳态健康细胞的抗凋亡、侵袭、迁移能力。I鄄A茁1 经靶向刺激肾小球肾炎细胞大面积转移、增殖,也可通过沉默 NLRP3/caspase鄄1 信号通路蛋白表达,改变 MsPGN 细胞的迁移、侵袭速度,进而影响肾小球肾炎系膜细胞的增殖表现。本研究结果表示,沉默 I鄄A茁1 基因可改变MsPGN 细胞、系膜细胞的生物活性,当抑制 I鄄A茁1表达,MsPGN 细胞的感染能力将会大幅度减弱,对患者病情治愈起到促进效果。NLRP3 信号通路可调控多数炎性因子、逆序靶基因的活性,刺激炎症相关的细胞活化,致使转录因子加速诱导细胞增殖、分化、转移、侵袭能力,增强细胞抗凋亡作用。有研究证实也14 16页,NLRP3 信号通路参加炎症有关调控,经常与促炎性因子、I鄄A茁1 基因等表达物质相互反应,使炎性因子分泌增加,进而加快疾病进展。NLRP3 信号通路调控靶基因细胞周期蛋白失常,可对肾小球肾炎 MsPGN 细胞转移进行预测,起到对肾脏类疾病的预测作用也17 19页。本研究结果表示,NLRP3 信号通路通过与细胞膜受体结合,刺激受体蛋白,影响炎症细胞的分解,改变肾小球肾炎疾病进展。NLRP3 信号通路可通过与 I鄄A茁1基因反应,刺激健康稳态细胞信号传导,发挥调控细胞分化、增殖的极性作用。临床可调控 NLRP3 信号通路蛋白表达,从而实现控制肾小球肾炎 MsPGN 细胞的各项能力,加速患者病情治愈。研究证实也20 22页,caspase鄄1 分布于除红细胞外的各种细胞中,其本身是半胱氨酸蛋白酶家族的一种,形态以酶原形式存在,在肾小球肾炎细胞中起着引诱炎症发生、促进健康稳态细胞死亡等功能。通过本研究可发现,caspase鄄1、NLRP3 两者互相协调,两者兼具促炎性。caspase鄄1 可通过对炎性因子控制,影响患者肾小球肾炎疾病发展,同时破坏着患者肾小球肾炎系膜细胞的存活,严重影响着患者肾脏系膜细胞的增殖率也23页。caspase鄄1 信号通路表达升高能促进病毒感染情况下免疫逃逸,因而判定caspase鄄1 信号通路能降低肾脏中健康稳态细胞效应功能,成为 MsPGN 细胞的一种逃逸方式,进而影响肾小球肾炎的治疗进展。本研究结果表示,NL鄄RP3/caspase鄄1 信号通路影响着肾小球肾炎的进程,NLRP3/caspase鄄1 信号通路对肾小球肾炎耐受机制提供了临床研究线索,对肾小球肾炎的治疗、联合治疗具有重要意义。虽然本研究认为,沉默 I鄄A茁1 基因可改变肾小球肾炎系膜增殖情况,但目前临床上并未有研究经其应用于肾小球肾炎 NLRP3/caspase鄄1 信号通路的研究中,因此上述研究需后续研究进一步分析验证。综上所述,基于 NLRP3/caspase鄄1 信号通路中的 I鄄A茁1 基因互相表达、呈紧密联系,其对肾小球肾病细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等各项指标起到明显的调节作用,通过调控 NLRP3/caspase鄄1 信号通路表达,从而使肾小球肾病炎症细胞凋亡,优化系膜细胞增殖表达,为临床诊治肾小球肾病提供理论依据。4摇 参考文献1摇 赵丽丽,焦晨峰,梁少姗,等 郾 利妥昔单抗治疗冷球蛋白血症相关膜增生性肾小球肾炎的疗效也J页.肾脏病与透析肾移植杂志,2021;30(1):14鄄8郾2摇 于颖吉,蔡威巍,牟筱倩,等 郾 miR鄄10b 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类清道夫受体在高糖诱导系膜细胞炎症损伤中的作用机制也J页.中华儿科杂志,2021;59(5):393鄄9郾12摇 蒋红利,马红叶,薛瑾虹,等郾 绒毛蛋白1 在单侧肾切除 Habu 肾炎小鼠模型中的作用也J页.实验动物与比较医学,2020;40(1):1鄄8郾13摇 Nath AK,Ghatak A,Dey A,et al.Intermediates involved in serotoninoxidation catalyzed by Cu bound A茁 peptides也J页.Chem Sci,2020;22;12(5):1924鄄9郾14摇 Liu J,Yu X,Li C,et al.Beh觭et忆s syndrome in a Chinese pedigree ofNLRP3鄄associated autoinflammatory disease:a coexistence or novelpresentation也J页?Front Med(Lausanne),2021;8:695197郾15摇 Wang LY,Sun XJ,Chen M,et al.The expression of NOD2,NLRP3and NLRC5 and renal injury in anti鄄neutrophil cytoplasmic antibody鄄7624董丽娜等摇 基于 NLRP3/caspase鄄1 通路沉默 I鄄A茁1 基因对肾小球肾炎系膜增殖的影响摇 第 17 期associated vasculitis也J页.J Transl Med,2019;17(1):197郾16摇 Wu CY,Hua KF,Yang SR,et al.Tris DBA ameliorates IgA nephrop鄄athy by blunting the activating signal of NLRP3 inflammasomethrough SIRT1鄄 and SIRT3鄄mediated autophagy induction也J页.J CellMol Med,2020;24(23):13609鄄22郾17摇 Wu CY,Hua KF,Chu CL,et al.Tris DBA ameliorates acceleratedand severe lupus nephritis in mice by activating regulatory T cellsand autophagy and inhibiting the NLRP3 inflammasome也J页.J Immu鄄nol,2020;15;204(6):1448鄄61郾18摇 Yang SR,Hsu WH,Wu CY,et al.Accelerated,severe lupus nephri鄄tis benefits from treatment with honokiol by immunoregulation anddifferentially regulating NF鄄资B/NLRP3 inflammasome and sirtuin 1/autophagy axis也J页.FASEB J,2020;34(10):13284鄄99郾19摇Wu CY,Hua KF,Hsu WH,et al.IgA nephropathy benefits fromcompound K treatment by inhibiting NF鄄资B/NLRP3 inflammasomeand enhancing autophagy and SIRT1 也 J页.J Immunol,2020;205(1):202鄄12郾20摇 邱鹏,倪晓娜郾 基于 NLRP3/caspase鄄1 通路研究丹参提取物对系膜增生性肾小球肾炎大鼠的保护作用也J页.临床肾脏病杂志,2020;20(1):62鄄8郾21摇 林艳梅,彭庆海,陈杰,等 郾 基于 NLRP3 炎性小体通路探讨金樱子乙醇提取物对系膜增生性肾小球肾炎大鼠的保护作用也J页.中国免疫学杂志,2020;36(5):560鄄5郾22摇 张亚辉,张红梅 郾 丹参乙酸镁对系膜增生性肾炎大鼠肾功影响也J页.医学分子生物学杂志,2020;17(3):249鄄54郾23摇 Liu Z,Wang C,Yang J,et al.Caspase鄄1 engages full鄄length gasder鄄min D through two distinct interfaces that mediate caspase recruit鄄ment and substrate cleavage也J页.Immunity,2020;53(1):106鄄14郾也2022鄄04鄄11 修回页(编辑摇 王一涵)蝎毒注射液对 AD 模型大鼠空间认知障碍改善作用及对海马IGF鄄1/PI3K/Akt 信号通路的影响范红波1摇 黄欣媛2(1 湖北职业技术学院医学基础部,湖北摇 孝感摇 432000;2 湖北工程学院生命科学技术学院)摇 摇 也摘摇 要页摇 目的摇 探讨蝎毒注射液(SVI)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的空间认知能力和海马组织中胰岛素样生长因子(IGF)鄄1/磷脂酰肌醇鄄3 激酶(PI3K)/蛋白激酶 B(Akt)信号通路表达的影响,为探索 SVI 治疗 AD 作用机制提供依据。方法摇 以双侧海马注射 茁鄄淀粉样蛋白(A茁)25 35制备 AD 模型大鼠,分为假手术对照组、AD 模型组、SVI 低、中、高剂量组,每组12 只。SVI 低、中、高剂量组于 AD 造模后给予 1 次/d 腹腔注射 SVI(5、10、20 滋g/kg),1 次/d,连续 10 d。治疗结束后用 Morris水迷宫测试各组空间认知功能,选取 SVI 中剂量组作为 SVI 干预组,取各组海马组织,免疫组织化学法检测 IGF鄄1 含量,逆转录(RT)鄄聚合酶链反应(PCR)法检测 IGF鄄1、PI3K 和 Akt 的 mRNA 表达,Western 印迹检测 PI3K、Akt、p鄄Akt(Ser473)蛋白表达情况。结果摇 与假手术对照组相比,AD 模型组空间认知功能受损,逃避潜伏期延长,平台穿越次数和目标象限停留时间显著减少(P0郾 01)。与 AD 模型组相比,SVI 低、中、高剂量组逃避潜伏期显著缩短,平台穿越次数和目标象限停留时间显著增加,认知功能得到明显改善(P0郾 01)。与假手术组相比,AD 模型组海马中 IGF鄄1、PI3K、Akt mRNA 和 PI3K、Akt、p鄄Akt(ser473)蛋白表达水平明显降低(P0郾 05);与 AD 模型组相比,SVI 干预组 mRNA 水平及 PI3K、p鄄Akt(ser473)、p鄄Akt/Akt 蛋白水平显著升高(P0郾 05)。结论摇 SVI 能够改善 AD 模型大鼠的空间学习记忆障碍,可能与促进海马组织中 IGF1 表达、激活 PI3K/Akt信号通路有关。也关键词页摇 蝎毒注射液(SVI);阿尔茨海默病(AD);胰岛素样生长因子(TGF)鄄1;磷脂酰肌醇鄄3 激酶(PI3K)/蛋白激酶 B(Akt)信号通路也中图分类号页摇 R741郾 02摇 也文献标识码页摇 A摇 也文章编号页摇 1005鄄9202(2023)17鄄4268鄄04;doi:10郾 3969/j郾 issn郾 1005鄄9202郾 2023郾 17郾 046基金项目:湖北省教育厅科研项目(B2018459);湖北职业技术学院校级科研课题(2017B02)通信作者:黄欣媛(1985鄄),女,博士,讲师,主要从事生物活性多肽的作用机制研究。第一作者:范红波(1978鄄),男,硕士,讲师,主要从事神经退行性疾病的病理机制研究。摇 摇 阿尔茨海默病(AD)是老年人常见的以渐进性记忆和认知衰退为特征的神经退行性疾病,其发病机制与大脑皮质和海马中 茁鄄淀粉样蛋白(A茁)沉积形成老年斑密切相关也1页。AD 病因复杂,中药诊治在 AD 治疗中得到重视。蝎毒是传统中医药材,有镇痛、抗炎、抗肿瘤等药理作用,治疗神经系统疾病已有多年历史。国内已有商品化的蝎毒蛋白药物制品 蝎毒注射液(SVI),目前该药在临床上仅用于镇痛。有研究表明,蝎毒蛋白中的耐热组分 蝎毒耐热蛋白(SVHRP)能够改善 AD 模型大鼠学习记忆障碍也2,3页,研究也发现 SVI 能够增加 AD 大鼠皮质及海马脑源性神经营养因子(BDNF)的表达,改善学习记忆能力也4页。胰岛素样生长因子(IGF)鄄18624中国老年学杂志 2023 年 9 月第 43 卷