性病实验室检方法.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,1.,有试验室责任人，试验人员分工明确,2.,试验室人员应该定时参加培训、进修或专业研讨会,3.,有试验室各项管理制度,4.,制订常规试验室标准操作程序（,SOP,）,性病试验室组织管理,性病实验室检方法专家讲座,第1页,性病试验室质量管理,1,仪器、设备,试验室全部使用仪器应有使用、保养及维修统计有温控仪器需天天统计温度,2,培养基及试剂,严格按配方及技术要求配制培养基及试剂,对配制培养基及试剂应有质检,购置试剂盒应为经国家相关部门检验,合格产品（附相关证实）,全部培养基及试剂保留都应符合要求,性病实验室检方法专家讲座,第2页,性病试验室质量管理,3,质控,（,1,）试验室开展室内质控，包含使用阳性 对照和阴性对照质控品,（,2,）定时进行室间质控和参加外部质控,3,性病实验室检方法专家讲座,第3页,性病试验室诊疗技术,性病是一组传染病，主要经过性接触传染。包含细菌、真菌、病毒、衣原体、支原体、螺 旋体、原虫和寄生虫等,性病试验室诊疗有着及其主要作用,正确诊疗提供科学依据,4,性病实验室检方法专家讲座,第4页,病原体,淋球菌,梅毒螺旋体,生殖器疱疹病毒,生殖道沙眼衣原体,乳头瘤病毒,HIV,病毒,杜克雷噬血杆菌,衣原体,念珠菌,滴虫,疥虫,阴虱,肝炎病毒,病 种,淋病,梅毒,:,生殖器疱疹,:,生殖道沙眼衣原体感染,:,尖锐湿疣,:,HIV,感染,/,艾滋病,:,软下疳,:,性病性淋巴肉芽肿,:,念珠菌性阴道炎,:,滴虫性阴道病,:,疥疮,:,阴虱病,:,肝炎（乙、丙）：,性传输疾病,(STD)/,性传输感染,(STI),性病实验室检方法专家讲座,第5页,主要常见性病试验室检测介绍,梅毒,淋病,生殖道沙眼衣原体感染,性病实验室检方法专家讲座,第6页,惯用梅毒检测方法,病原学检测,血清学检测,性病实验室检方法专家讲座,第7页,病原学检验,原理：,一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器边缘斜射到涂片上梅毒螺旋体而发出亮光，从而可依据其特殊形态和运动方式进行检测。,方法：,病原学检验主要方法有暗视野显微镜检验、镀银染色法和直接荧光法,性病实验室检方法专家讲座,第8页,暗视野显微镜检验,标本采集部位：,一期或二期梅毒皮肤或粘膜损害,有痂者去痂，先用无菌棉球或纱布蘸生理盐水，将皮损拭净，轻压皮损至渗液（防止出血）。然后用载玻片印取渗液，马上检验，未破溃者用手术刀刮破皮疹，取渗出液。,淋巴结穿刺液,以无菌操作法用注射器吸收,0.3-0.5,ml,生理盐水，穿刺入淋巴结，再回吸数次，最终将吸收液涂玻片上，马上检验。,性病实验室检方法专家讲座,第9页,暗视野显微镜检验,制片,标本置于载玻片上，加一滴生理盐水，盖上盖玻片，在,暗室中,于暗视野显微镜上油镜观察,观察,先用低倍镜，再转至高倍镜,梅毒螺旋体在暗背景上呈白色发光，螺旋整齐，运动规律（,旋转、伸缩或蛇行,运动）,性病实验室检方法专家讲座,第10页,梅毒螺旋体特征,螺旋整齐，数目固定,折光性强，较其它螺旋体亮,运动迟缓而有规律，有三种运动方式,围绕其长轴旋转运动,伸缩其螺旋间距离移动,弯曲扭动如蛇行,性病实验室检方法专家讲座,第11页,病原学检验临床意义,病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且含有快速、方便、易操作特点。,螺旋体检验是诊疗早期现症梅毒最正确方法，对于患者早期诊疗、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分主要意义。,如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒可能性,性病实验室检方法专家讲座,第12页,暗视野显微镜检验,结果解释,阴性结果不能排除梅毒，可能是：,螺旋体数量不足,已用过抗生素或一些外用药,损害靠近自然消退,性病实验室检方法专家讲座,第13页,14,非梅毒螺旋体抗原血清试验,梅毒螺旋体抗原血清试验,梅毒血清学检测方法,性病实验室检方法专家讲座,第14页,梅毒试验室操作要求,梅毒血清学试验操作和结果分析,标本采集和分离,编号或姓名登记,采血、分离血清和贮存,15,性病实验室检方法专家讲座,第15页,梅毒试验室操作要求,试剂准备,温度、器具校正,试剂、血清和反应板恢复到试验温度,试剂判定,16,性病实验室检方法专家讲座,第16页,梅毒试验室操作要求,试验操作,血清量控制,试剂量控制,旋转仪速度和时间控制,17,性病实验室检方法专家讲座,第17页,非梅毒螺旋体抗原血清试验,1,、原理：,梅毒螺旋体感染人体后，宿主会产生抗类脂抗原抗体，可检测梅毒患者血中抗类脂抗原抗体,2,、方法：,快速血浆反应素环状卡片试验,(RPR),甲苯胺红不加热血清试验（,TRUST,）,性病研究试验室试验,(VDRL),性病实验室检方法专家讲座,第18页,RPR,定性试验,在纸卡圆圈中加入,50L,待检血清，涂满整个圆圈,使用滴管和专用针头（,60,滴,/mL,），加,1,滴抗原悬液,旋转,100rpm,8min,马上判断结果,性病实验室检方法专家讲座,第19页,RPR,定量试验,待检血清用等渗盐水在纸卡圆圈中作,6,个稀释度：原血清，,1:2,，,1:4,，,1:8,，,1:16,，,1:32,按定性试验步骤操作，以出现阳性反应最高稀释度汇报结果,性病实验室检方法专家讲座,第20页,RPR,定量试验,中等至大凝块为阳性（圈,4,和,7,）有明确但很小凝块为弱阳性（圈,2,和,3,）颗粒均匀分布（圈,1,5,8-10,）或稍粗糙（圈,6,）为阴性,性病实验室检方法专家讲座,第21页,非梅毒螺旋体抗原血清试验优缺点,：,优点：,*敏感性特异性好,*,不需要昂贵设备，简单易行,*适合用于大量人群血清筛查,*有效治疗后血清滴度可下降并阴转，故可作疗效观察、判愈、复发。,*,20,分钟可取得试验结果。,*试剂与方法均已标化，各试验室间结果可比较。,*试验可被内部质控和外部质控监控进行。,缺点：,*敏感性和特异性低于螺旋体抗原试验，,BFP,反应和前带现象,性病实验室检方法专家讲座,第22页,非特异性血清试验假阴性：,1,）有,25%40%,未治梅毒在晚期隐性期可自然逆转为阴性，约,30%,心血管和神经梅毒呈阴性。,2,）前带现象（,the prozonphenomenon,）,即为抗原抗体量百分比不适，抑制阳性反应。普通易发生在滴度在,1,：,500,以上标本中。,1%,II,期梅毒会出现前带现象。,3,）操作人员应注意试验温度，试剂盒从冰箱取出后应恢复至室温，室温过低（,10,）可能出现假阴性或结果不准确。,性病实验室检方法专家讲座,第23页,非特异性血清试验生物学假阳性,0.25%0.86%,阳性标本为生物学假阳性，主要出现在本身免疫疾病（全部,BFP,反应,14%,）患者、其它病原体感染（病毒性肺炎、恶性肿瘤和麻风）、妊娠妇女。,应排除技术性、生理性和生物学假阳性，并用特异性试验来证实。,性病实验室检方法专家讲座,第24页,非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义,非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性很好。适合用于大量人群筛查。,早期梅毒硬下疳出现,1,周,-2,周后，血清可呈阳性。,经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染指征。,性病实验室检方法专家讲座,第25页,梅毒螺旋体抗原血清试验,1,、,原理：,用梅毒螺旋体特异蛋白为抗原，检测梅毒患者血中,特异性抗梅毒螺旋体抗原抗体,2,、,方法：,梅毒螺旋体颗粒凝集试验,(TPPA),梅毒螺旋体血球凝集试验,(TPHA),梅毒酶联免疫吸附试验（,ELISA,）,梅毒免疫层析法,-,梅毒快速检测,(RT),荧光螺旋体抗体吸收试验（,FTA-ABS,）,化学发光免疫分析法（,CLIA,）,梅毒,IgM,抗体检测（,IgM,）,梅毒螺旋体蛋白印迹试验（,WB,）,性病实验室检方法专家讲座,第26页,梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验,原理：用经纯化及超声裂解处理梅毒螺旋体为抗原，或重组抗原包被固相，检测特异性梅毒螺旋体抗体,其敏感性和特异性有待深入评价,性病实验室检方法专家讲座,第27页,快速试验,-,免疫渗滤法,在试纸条上包被螺旋体特异性抗原成份，如,47kD,、,15kD,抗原，利用免疫渗滤技术，将试纸条插入待测血清，观察血清与特定抗原成份反应,可在,10,分钟之内得到结果，快速、方便,是特异性螺旋体试验,需要深入验证方可用于临床诊疗,性病实验室检方法专家讲座,第28页,梅毒螺旋体抗原血清试验,梅毒螺旋体颗粒凝集试验：用整菌和其片断做抗原致敏明胶颗粒，此致敏颗粒与人血清或血浆中梅毒螺旋体抗体结合，产生肉眼可见凝集反应。敏感性和特异性靠近最正确，分别为,95%,和,99.9%,。允许做梅毒准确诊疗。,29,性病实验室检方法专家讲座,第29页,注意事项,新溶解“,C”“D”,应置,30,分钟以上才能使用，已溶解“,C”“D”,液用前需恢复至室温并充分摇匀。专用滴管应标明不能混用，不能用来稀释血清。,未致敏孔不发生凝集，不然试验无效。假如标本与非致敏和致敏颗粒均产生凝集，需作重吸收试验。,反应板要清洁洁净，孔内无异物。,试剂保留于,210,，不可冻结，不一样批号试剂间不可混用。,性病实验室检方法专家讲座,第30页,梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义,作为非梅毒螺旋体抗原血清试验,(,如,TRUST,等,),初筛阳性标本确实证试验。,梅毒患者经过抗梅治疗后，,TPPA,等梅毒螺旋体抗体试验仍可阳性，故,TPPA,等试验阳性不能作为疗效观察指标。,TPPA,等阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊疗。,性病实验室检方法专家讲座,第31页,讨论,RPR,检测抗心磷脂,IgM/IgG,抗体,TPPA,检测抗梅毒螺旋体,IgM/IgG,抗体,TP-IgM-ELISA,试验检测抗梅毒螺旋体,IgM,抗体,IgM,抗体最早产生并随疾病治疗而逐步下降或消失,IgM,试验可用早期诊疗,32,性病实验室检方法专家讲座,第32页,梅毒血清学试验结果临床意义总汇,TRUST TPPA,意义,RPR TP-ELISA,VDRL TP-RT,_ _,排除梅毒,一期梅毒早期,+,现症梅毒,(,梅毒孕妇所生,婴儿除外,),+-,生物学假阳性,-+,早期梅毒经治疗后,性病实验室检方法专家讲座,第33页,以临床诊疗为目标检测策略一,非,梅毒螺旋体抗体试验,（详细方法）,阴性,汇报检测方法及阴性结果,阳性,汇报检测方法及阳性结果,梅毒螺旋体试验,（具,体方法）,阴性,汇报检测方法及阴性结果,阳性,汇报检测方法及阳性结果,非,梅毒螺旋体,定量,试验,汇报检测方法及定量结果,性病实验室检方法专家讲座,第34页,以临床诊疗为目标检测策略二,梅毒螺旋体抗体试验,（详细方法）,阴性,汇报检测方法及阴性结果,阳性,汇报检测方法及阳性结果,非,梅毒螺旋体抗体,（详细方法）,阴性,汇报检测方法及阴性结果,阳性,汇报检测方法及阳性结果,非,梅毒螺旋体定量试验？,汇报检测方法及定量结果,性病实验室检方法专家讲座,第35页,二、淋 病,性病实验室检方法专家讲座,第36页,淋病试验室诊疗,淋病在我国发病人数是最多性病,由淋病奈瑟氏菌引发泌尿生殖道化脓性感 染淋菌性尿道炎、淋菌性宫颈炎等,试验室诊疗本病主要为常规方法和分子生物学方法,性病实验室检方法专家讲座,第37页,惯用淋病检测方法,直接显微镜检验,分离培养淋球菌,性病实验室检方法专家讲座,第38页,直接显微镜检验,原理,：,男性,淋菌性尿道炎患者常有大量黄白色脓性分泌物，其多形核白细胞内可找到革兰染色阴性双球菌。,方法：,革兰染色为一传统方法，革兰染色将菌分为二大类，即染成紫色革兰阳性菌及染成红色革兰阴性菌。,性病实验室检方法专家讲座,第39页,直接显微镜检验临床意义,男性淋菌性尿道炎尿道标本,敏感性及特异性可高达,95%,99%,，具诊疗价值。,宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠涂片时,敏感性仅,40,70%,。,不推荐直接显微镜检验诊疗直肠和咽部淋球菌感染。亦不能用于疗后判愈。假如在多形核细胞外见到形态经典革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。,性病实验室检方法专家讲座,第40页,直接显微镜检验临床意义,女性病人敏感性低，其影响原因较多。宫颈分泌物中杂菌较多，有在形态上类似于淋球菌,简便、有效、价格低廉,性病实验室检方法专家讲座,第41页,淋球菌生物学特征,淋球菌为需氧生长菌,用普通培养基不易培养成功,营养要求高,需在含有动物蛋白培养基中能生长好,生长时营养要求不一,营养需要不一样原因在于不一样菌株其生物合成酶有缺点,42,性病实验室检方法专家讲座,第42页,淋球菌生物学特征,淋球菌喜潮怕干，干燥条件下,1,小时就死亡,不完全干燥条件下，附着衣服或被褥中生存,18,24h,室温则,1,2,天内死亡,-30,可保寸,2,3,个月,-70,为,6,个月,ph,：,7.0,7.5,43,性病实验室检方法专家讲座,第43页,淋球菌培养,1,原理,：淋球菌在适宜培养基上可生长出特征性菌落，依据菌落大小、形态、光泽、边缘、颜色等情况，能够作为淋球菌判定依据之一。,2,、方法特点：,敏感性,81100%,。,特异性,100%,性病实验室检方法专家讲座,第44页,淋球菌培养,培养条件：,35,36,，含,5%,10%CO2,，湿润（,70%,湿度）环境。,CO2,环境可由,CO2,培养箱、,CO2,产气袋及烛缸提供。使用烛缸时，应使用白色、无芳香味无毒性蜡烛。在烛缸底部放些浸水棉球以保持一定湿度。,培养时间：,2448,小时,性病实验室检方法专家讲座,第45页,淋球菌初步判定,初步判定淋球菌依据,菌落特征,氧化酶试验,革兰染色,性病实验室检方法专家讲座,第46页,3,细菌培养,选择性培养基上培养,经典,菌落,氧化酶试验阳性,镜检革,兰氏阴性双球菌,。,性病实验室检方法专家讲座,第47页,性病实验室检方法专家讲座,第48页,淋球菌培养临床意义,培养法为诊疗淋病金标准,.,用于女性感染者、亚临床感染者、以及来自直肠和咽部感染确实诊试验。,性病实验室检方法专家讲座,第49页,生殖道沙眼衣原体感染,性病实验室检方法专家讲座,第50页,惯用生殖道衣原体感染检测方法,抗原检测,酶联免疫吸附试验（,ELISA,）,免疫层析快速检测,核酸检测,性病实验室检方法专家讲座,第51页,酶联免疫吸附试验,1,、原理：,与衣原体特异性单克隆抗体形成抗原抗体复合物，经过酶联显色反应检测衣原体抗原。,2,、方法特点,敏感性：,79,97,特异性,:97,99,试验结果阴性时，不能完全排除沙眼衣原体感染，有可能是沙眼衣原体数量不足或标本采集不妥缘故,性病实验室检方法专家讲座,第52页,结果判读客观性强，适宜于大样本沙眼衣原体感染检测。,在沙眼衣原体高流行率人群临床和健康体检；低流行率（小于,5%,）人群中应用时，结果解释应慎重。,酶联免疫吸附试验临床意义,性病实验室检方法专家讲座,第53页,抗原快速检测,1,、原理：,利用免疫层析法原理，采取胶体金标识沙眼衣原体抗体滤纸条或卡，快速检测标本中沙眼衣原体抗原。,2,、方法特点,简易，方便，快速，尤其适合用于基层单位,标本中需要足够数量沙眼衣原体抗原，不然有假阴性结果,性病实验室检方法专家讲座,第54页,抗原快速检测临床意义,该方法主要适合用于女性患者宫颈标本检测，敏感性较低。,该法快速、简便，无需特殊仪器，所以，较适合基层试验室开展。,性病实验室检方法专家讲座,第55页,核酸扩增检测,1,、原理：核酸扩增技术是经过扩增沙眼衣原体多拷贝基因（如隐蔽性质粒、染色体和,RNA,）检测病原体。,2,、方法包含聚合酶链反应（,PCR,）、连接酶链反应（,LCR,）、等温链置换扩增技术（,SDA,）、转录介导扩增技术（,TMA,）等。当前国内广泛使用有实时荧光,PCR,。,性病实验室检方法专家讲座,第56页,核酸扩增检测临床意义,核酸扩增检测含有很高敏感性和特异性，世界卫生组织已推荐为扩大生殖道沙眼衣原体感染试验室诊疗“金标准”。,核酸扩增检测不但可用于宫颈、尿道标本中沙眼衣原体检测，也可用于男女性尿液标本检测。,开展核酸检测试验室应经过相关部门考评取得开展临床核酸检测技术资格证。,性病实验室检方法专家讲座,第57页,方法评价,核酸检测,是当前为止最好检测方法但存在检测敏感性,上不足,ELISA,抗原检测,严格按操作说明进行操作是非常好检测方法高通量，自动化,快速抗原检测,操作时间短，单人份操作，但敏感性极低,性病实验室检方法专家讲座,第58页,敬请,批评指教！,性病实验室检方法专家讲座,第59页,