山莨菪碱对脂多糖结合血管内皮细胞及诱导NO合成的抑制作用.doc

山莨菪碱对脂多糖结合血管内皮细胞及诱导
NO 合成的抑制作用

【关键词】 山莨菪碱

关键词: 山莨菪碱;内皮，血管;脂多糖类;一氧化氮

摘 要:目的 实验观察山莨菪碱对细菌脂多糖（LPS）结合血

管内皮细胞膜及诱导 NO 生成的影响. 方法 体外分离培养牛主动脉血

管内皮细胞，用免疫组化显色反应显示细菌脂多糖与血管内皮细胞的

结合， 并通过图像分析对结果进行半定量;用高压液相色谱分析细胞培

养液中 NO

3- 的含量，间接反应 NO 的生成水平. 结果 细胞分组处理，间

接法显色后图像分析，结果表明山莨菪碱组的平均灰度值明显低于

LPS 组（P<0.05）;并且对细胞培养液中 NO

3- 的检测显示山莨菪碱组的浓度明显低于 LPS 组 P<0.05）
（ .

结论 山莨菪碱能够抑制 LPS 结合血管内皮细胞，并且能够抑制 LPS

对 NO 合成的诱导作用.

Keywords:anisodamine;endothelium ，

vascular;lipopolysac-charides;nitric oxide

Abstract:AIM To investigate the effect of anisodamine

on lipopolysaccharides attached to the membrane of endothelium

and inducing the releasing of nitric oxide（NO）.METHODS The

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bovine aortic endothelial cells BAEC）
（ were isolated and cultured

for study.The lipopolysaccharides （ LPS ） at-tached to the

membrane of endothelium was detected by im-munocytochemistric

means.The NO 3- level which reflected the releasing of NO in

culture medium was determined by high-performance liquid

chromatography.RESULTS Af-terbeing treated with LPS，the group

incubating with aniso-damine showed there had less LPS attached

on than the group treated with LPS only.And the NO 3- level of

the group in-cubating with anisodamine was lower than the group

treated with LPS only.And the NO 3- level of the group

incubating with anisodamine was lower than the group treated

with LPS only.CONCLUSION This result suggests that anisodamine

can significantly inhibit the LPS attached to the membrane of

endothelium and inducing the releasing of NO.

0 引言

研究与临床实践证明大剂量的山莨菪碱对于抢救内毒素休克

有效， 其研究的结果表明其抗休克的作用机制主要在细胞水平上.近年

对大肠杆菌脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）识别结合细胞膜上

受体， 引发各种病理生理过程的研究日渐深入.本实验旨在通过体外培

养血管内皮细胞，观察山莨菪碱对 LPS 结合血管内皮细胞膜上受体以

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及诱导 NO 合成的影响， 以此进一步揭示山莨菪碱抗内毒素休克的作用

机制.

1 材料和方法

1.1 材料

①药品与试剂:Ⅰ型胶原酶;正辛胺（n-octylamine）;大肠

杆菌脂多糖 E.coil O11B4（lipopolysaccharides，LPS，美国 Sigma

公司）;RPMT-1640 培养基（美国 Gibco 公司）;抗 LPS 单克隆抗体参

照马越云等［1］ 建立的方法制备;Ⅷ因子相关抗原抗体与 CD14 单克

隆抗体（武汉博士德生物技术公司）;辣根过氧化酶（HRP）标记的山

羊抗小鼠 IgG 抗体（华美生物工程公司）;盐酸消旋山莨菪碱（芜湖长

江药业有限公司产品， 批号 9806192）地塞米松
. （天津药业有限公司） ;

②仪器设备:高压液相色谱仪（美国 Beckman 公司）;CMIAS 系列-多功

能彩色病理图像分析系统（北京航空航天大学图像中心）.

1.2 方法

①细胞培养与鉴定:无菌条件下取牛主动脉血管 10～15cm，

管腔注入 1g L-1 Ⅰ型胶原酶，37℃消化 20min，收集消化液，离心洗

涤细胞 2 次，计数，以 1×108 L-1 细胞数接种于含 200g L-1 小牛血

清的 1640 培养液，5mL L-1 CO 2 ，37℃条件下培养，胰酶消化传代，

实验用 6～10 代细胞.培养细胞用Ⅷ因子相关抗原单克隆抗体检测呈

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