不同分子量澳洲坚果多肽制备工艺与抗氧化活性.pdf

付镓榕，胡小静，马尚玄，等.不同分子量澳洲坚果多肽制备工艺与抗氧化活性 J.食品工业科技，2023，44（20）：414421.doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022120169FUJiarong,HUXiaojing,MAShangxuan,etal.PreparationTechnologyandAntioxidantActivitiesofDifferentMolecularWeightMacadamiaNutPolypeptidesJ.ScienceandTechnologyofFoodIndustry,2023,44(20):414421.(inChinesewithEnglishabstract).doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022120169 营养与保健 不同分子量澳洲坚果多肽制备工艺与不同分子量澳洲坚果多肽制备工艺与抗氧化活性抗氧化活性付镓榕1,2，胡小静3，马尚玄1,2，王芳3，郭刚军1,2,*，黄克昌1,2，杨悦雪1,2，贺熙勇1,2,*（1.云南省热带作物科学研究所，云南景洪666100；2.云南省澳洲坚果农业工程研究中心，云南景洪666100；3.文山学院三七医药学院，云南文山壮族苗族自治州663099）摘要：采用不同蛋白酶水解澳洲坚果粕制备多肽，以 ABTS+自由基清除率为评价指标，筛选制备抗氧化多肽适宜的蛋白酶。利用 DA201-C 大孔树脂纯化、超滤膜逐级分离，获得不同分子量澳洲坚果多肽（MNAP-1、MNAP-2、MNAP-3、MNAP-4）组分，并以谷胱甘肽为对照，研究了其对 DPPH、羟基、ABTS+自由基的清除能力及还原能力。结果表明：制备澳洲坚果抗氧化多肽的适宜蛋白酶为复配蛋白酶，相同浓度下其对 ABTS+自由基清除能力优于中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶与菠萝蛋白酶。不同分子量澳洲坚果多肽呈现不同的抗氧化效果，其对 DPPH、ABTS+自由基具有较强的清除作用，具有一定的羟基自由基清除能力和还原能力。其中，MNAP-4（分子量小于 1000Da）的抗氧化活性最好，其对 DPPH、ABTS+、羟基自由基清除能力及还原能力的半抑制浓度（halfmaximalinhibitoryconcentration，IC50）分别为 0.36、6.75、0.08、3.19mg/mL，低于其他分子量多肽。相关性分析得出不同分子量澳洲坚果多肽与其清除 DPPH 自由基（r=0.947，P0.01）、羟基自由基（r=0.964，P0.01）、ABTS+自由基（r=0.948，P0.01）及还原能力（r=0.856，P0.01）之间存在极显著相关。澳洲坚果复配蛋白酶酶解产物含有抗氧化活性较好的肽类，研究结果可为其抗氧化肽的制备与应用提供一定的理论依据。关键词：澳洲坚果，多肽，不同分子量，制备，抗氧化活性本文网刊:中图分类号：TS229文献标识码：A文章编号：10020306（2023）20041408DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2022120169PreparationTechnologyandAntioxidantActivitiesofDifferentMolecularWeightMacadamiaNutPolypeptidesFUJiarong1,2，HUXiaojing3，MAShangxuan1,2，WANGFang3，GUOGangjun1,2,*，HUANGKechang1,2，YANGYuexue1,2，HEXiyong1,2,*（1.YunnanInstituteofTropicalCrops,Jinghong666100,China；2.YunnanMacadamiaAgriculturalEngineeringResearchCenter,Jinghong666100,China；3.CollegeofNotoginsengMedicineandPharmacy,WenshanUniversity,WenshanZhuangandMiaoAutonomousPrefecture663099,China）Abstract：Macadamia nut polypeptides were prepared by enzymatic hydrolysis of macadamia nut meal,and suitableproteasesforthepreparationofmacadamiaantioxidantpolypeptideswerescreenedwithABTS+radicalscavengingeffectsas evaluation indicators.Four constituents(MNAP-1,MNAP-2,MNAP-3,MNAP-4)were obtained by DA201-C收稿日期：20221220基金项目：云南省重大科技专项计划（202202AE090006）；云南省盈江县澳洲坚果产业科技特派团（202104BI090004）；云南省热带作物科技创新体系建设专项（RF2023-15）；“兴滇英才支持计划”项目经费支持；云南省科技人才和平台计划项目。作者简介：付镓榕（1995），男，本科，研究实习员，研究方向：农产品加工与贮藏，E-mail：。*通信作者：郭刚军（1980），男，硕士，副研究员，研究方向：食品加工和植物中天然产物提取分离与功能，E-mail：。贺熙勇（1973），男，硕士，研究员，研究方向：澳洲坚果种质资源、品种选育、栽培技术和产业经济，E-mail：。第44卷第20期食品工业科技Vol.44No.202023年10月ScienceandTechnologyofFoodIndustryOct.2023macroporous resin and dialysis technology.The scavenging capacity against 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical(DPPH),hydroxylradicaland2,2-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonateradicals)radical(ABTS+),andreducingpowerwereinvestigatedbycomparingwithglutathioneascontrols.Theresultsshowedthatthesuitableproteasewascomplexproteaseforthepreparationofmacadamiaantioxidantpolypeptides,whichwasbetterthanneutralprotease,acidprotease,alkalineprotease,papainandbromelainatthesameconcentration.Antioxidantactivitiesofdifferentmolecularweightmacadamianutpolypeptidesweredifferent,whichallhadstrongscavengingcapacityagainstDPPHandABTS+radicals,andalsohadcertainscavengingcapacityagainsthydroxylradicalandreducingpower.MNAP-4(molecularweightlessthan1000Da)hadthestrongestscavengingcapacityagainstDPPH,ABTS+andhydroxylradicalsandthehighestreducingpowerwithhalfmaximalinhibitoryconcentration(IC50)of0.36,6.75,0.08and3.19mg/mL,respectively,whichwaslowerthanothermolecularweightpolypeptides.CorrelationanalysisshoweddifferentmolecularweightmacadamianutpolypeptideshadgoodcorrelationswiththeirDPPH,hydroxylandABTS+radicalsscavengingcapacityandreducingpowerwithrvaluesof0.947,0.964,0.948and0.856(P10000Da）、MNAP-2（5000DaMw10000Da）、MNAP-3（1000DaMw5000Da）、MNAP-4（Mw1000Da）4 种组分，减压浓缩后备用。1.2.5澳洲坚果多肽的抗氧化活性测定1.2.5.1DPPH 自由基清除率测定参照 Sethi 等21的方法稍作修改。用无水乙醇配制 DPPH 溶液0.2mmol/L，避光保存。精确量取样液 2mL 于试管中，加入 2mL 的 DPPH 溶液并摇匀，在室温避光反应 30min，在 517nm 波长下测其吸光度为 A1，用2mL 无水乙醇代替 DPPH 溶液，测其吸光度为 A2，用 2mL 蒸馏水代替样液，测其吸光度为 A0。按照公式（1）计算 DPPH 自由基清除率。清除率(%)=(1A1A2A0)100式（1）式中：A0表示空白组的吸光值；A1表示多肽液的吸光值；A2表示对照组的吸光值。1.2.5.2羟基自由基清除率的测定参照 Li 等22的方法稍作修改。取 1mL 样液于试管中，加入 1mL9mmol/L 水杨酸-乙醇溶液，1mL9mmol/LFeSO4溶液，再加入 1mL8.8mmol/LH2O2，启动 Fenton 反应，37 水浴 30min，在 510nm 波长下测其吸光度为 A1；用 1mL 蒸馏水代替 H2O2，反应后测其吸光度为 A2；用 1mL 蒸馏水替代样液，反应后测其吸光度为 A0。按照公式（1）计算羟基自由基清除率。1.2.5.3ABTS+自由基清除率的测定参照 Lu 等23的方法稍作修改。将配制好的 140mmol/L 过硫酸钾 440L 加入到 25mL7mmol/L 的 ABTS 溶液中，得到 ABTS+自由基工作液，避光反应 1216h。使用时，用 95%的乙醇稀释，使其吸光度在 0.70.02。取2.85mLABTS 稀释液加入0.15mL 样液，在734nm波长下测其吸光度为 A1，2.85mLABTS 稀释液加入 0.15mL 乙醇溶液，测其吸光度为 A0。按照公式（2）计算 ABTS+自由基清除率。清除率(%)=A0A1A0100式（2）式中：A0表示空白组的吸光值；A1表示多肽液的吸光值。1.2.5.4还原能力的测定参照卢柏山等24的方法。量取 1mL 样液（空白用 1mL 蒸馏水代替，其他试剂依次同下）于烧杯中，依次加入 2.5mLpH6.6的磷酸盐缓冲溶液和 2.5mL1%的铁氰化钾溶液，混匀后于 50 水浴反应 20min，加入 2.5mL10%的三氯乙酸溶液，混匀后 4000r/min 离心 10min，取 2.5mL 上清液于试管中，依次加入 0.5mL0.1%的 FeCl3溶液和 2.5mL 蒸馏水，摇匀静置 15min 后在 700nm 波长下测其吸光度。吸光度与样品的还原能力有关，A 值越大则样品的还原能力越强。1.2.5.5抗氧化能力评价指标的计算以样品的质量浓度为横坐标，抗氧化能力为纵坐标，计算得出线性回归方程及相关系数 r（r 值越接近 1，相关性越好），利用回归方程计算 50%的清除率对应的样品浓度为半抑制浓度（halfmaximalinhibitoryconcentra-tion，IC50）（IC50越小，抗氧化能力越强），回归方程中的斜率越大则抗氧化能力随质量浓度增加越快25。416食品工业科技2023 年10月1.3数据处理所有实验重复三次，结果用平均值标准差（meanSD）表示。采用 MicrosoftExcel2019 进行数据录入、处理与计算线性回归方程；采用 SPSS27.0 统计软件进行数据分析，组间差异用多重比较分析（LSD）、单因素方差分析（One-wayANOVA）进行处理，P0.05 表示差异显著；用皮尔森法（Pearsons）进行相关性分析，P0.01 为极显著性相关。使用Origin2021 对进行作图。2结果与分析2.1蛋白酶种类的筛选多肽 C 端具有大分子疏水性氨基酸会使其具有较高的抗氧化活性，不同蛋白酶对肽键的作用位点不同，产生的多肽 C 端、N 端及相对分子质量不尽相同，所以对蛋白酶进行筛选是极为重要的26。如图 1所示，复配蛋白酶制备的粗多肽对 ABTS+自由基的清除率为 96.23%0.57%，显著高于其它蛋白酶（P0.05）；酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶的清除率最低，分别为 88.79%0.56%、89.24%0.45%，两者之间无显著性差异（P0.05）。因此选择复配蛋白酶水解制备澳洲坚果粗多肽。cbbbca酸性蛋白酶碱性蛋白酶中性蛋白酶菠萝蛋白酶木瓜蛋白酶复配蛋白酶020406080100ABTS+自由基清除率(%)图1不同蛋白酶酶解澳洲坚果粕制备多肽对 ABTS+自由基的清除率Fig.1ABTS+radicalscavengingratesofmacadamianutmealpolypeptidesbydifferentproteaseshydrolysis注：不同小写字母表示差异显著（P0.05）。2.2DA201-C 大孔树脂对澳洲坚果多肽的纯化效果2.2.1大孔树脂吸附过程中多糖和无机盐的变化不同型号的树脂适用于分离不同极性的物质，实验中采用对多肽吸附能力较好的 DA201-C 大孔吸附树脂19。如图 2 所示，在多肽上样及蒸馏水洗脱过程中，流出液的总糖及无机盐含量均为先上升后下降的一个趋势，当蒸馏水洗脱体积达到 300mL 时，流出液中总糖及无机盐含量分别为 0.03、0.16mg/mL，且趋于稳定。2.2.2大孔树脂解吸过程中多肽含量的变化多肽液经吸附平衡、蒸馏水洗涤层析柱除去无机盐和糖类物质后，用乙醇溶液进行解吸，流出液每 10mL 收集为 1 管测定其多肽含量，多肽含量变化曲线如图 3所示。从图 3 可以看出，解吸体积为 250mL 时，解吸液中多肽浓度小于 1.0mg/mL，且趋于稳定。陈丽丽等27在利用大孔树脂对草鱼蛋白水解液纯化处理中认为解吸曲线拖尾的原因是部分多肽组分不能很好的溶解在乙醇溶液中，因此在本实验中将洗脱体积选择为 400mL，这样既能避免多肽的损失保证多肽的回收，也能减少解吸液的体积。DA201-C 大孔树脂对澳洲坚果多肽具有较好的吸附效果，本研究的纯化工艺可用于澳洲坚果多肽的纯化，可以有效去除酶解液中的多糖和无机盐。0100200300400500024681012解吸体积(mL)多肽浓度(mg/mL)图3DA201-C 大孔树脂对澳洲坚果多肽的动态解吸曲线Fig.3DynamicdesorptioncurveofmacadamianutpolypeptidesonDA201-Cmacroporousresin2.3不同分子量澳洲坚果多肽的抗氧化活性以谷胱甘肽标准品作为对照，利用多重抗氧化评估体系（DPPH、羟基、ABTS+自由基清除率、还原能力）研究不同分子量澳洲坚果多肽的抗氧化活性。2.3.1不同分子量澳洲坚果多肽对 DPPH 自由基的清除作用DPPH 自由基的清除能力广泛应用于研究物质的体外抗氧化活性28。由图 4 及表 2 可见，4 种不同分子量的多肽及谷胱甘肽对 DPPH 自由基10020030040050060070001234567无机盐浓度总糖浓度多肽上样蒸馏水洗脱体积(mL)浓度(mg/mL)图2DA201-C 大孔树脂对澳洲坚果多肽的动态吸附曲线Fig.2DynamicadsorptioncurveofmacadamianutpolypeptidesonDA201-Cmacroporousresin第44卷第20期付镓榕，等：不同分子量澳洲坚果多肽制备工艺与抗氧化活性417均有较强的清除作用，且清除率随着样品浓度的增加而增强，有较好的量-效关系。在相同浓度下，MNAP-4的清除能力优于 MNAP-1、MNAP-2、MNAP-3，4 种不同分子量的多肽对 DPPH 的清除率具有显著性差异（PMNAP-4（IC500.36mg/mL）MNAP-3（IC50 0.37 mg/mL）MNAP-2（IC50 0.45mg/mL）MNAP-1（IC500.55mg/mL），不同分子量多肽对 DPPH 自由基的清除能力不同，分子量越小清除能力越强。分子量较小的多肽因其具有较小的空间位阻，能更好的与自由基发生反应，表现出较好的DPPH 自由基清除率，这与不同分子量的核桃、红花籽多肽的抗氧化活性研究结果相同，均表现为分子量较小的多肽对 DPPH 自由基清除效果较好2930。EeEdEcEbEaDeDdDcDbDaCeBdCcCbCaBeCdBcBbBaAcAbAaAaAa0.20.40.60.81.0020406080100MNAP-1MNAP-2MNAP-3MNAP-4谷胱甘肽浓度(mg/mL)清除率(%)图4不同分子量多肽对 DPPH 自由基的清除率Fig.4ScavengingratesofdifferentmolecularweightpolypeptidesonDPPHradical注：不同小写字母表示同组分不同浓度差异显著（P0.05）；不同大写字母表示不同组分同浓度差异显著（P0.05）。随着浓度的增加，清除率的增加速率大小顺序为MNAP-3、MNAP-2、MNAP-4、MNAP-1、谷胱甘肽。当浓度达到 10.0mg/mL，4 种多肽的清除率均高于谷胱甘肽且具有显著性差异（PMNAP-3（IC508.37mg/mL）MNAP-2（IC5015.35mg/mL）MNAP-1（IC5023.94mg/mL）谷胱甘肽（IC5054.78mg/mL），不同分子量多肽对羟基自由基的清除能力不同，分子量越小清除能力越强，这与桃仁多肽的研究结果相同32，这是由于分子量较小的多肽可阻断自由基链式反应，促使自由基转化成更加稳定的物质，表现出更好的羟基自由基清除能力。MNAP-1MNAP-2MNAP-3MNAP-4谷胱甘肽DeEdDcDbDaCeCdBcCbCaBeBdAcBbBaAeAdAcAbAaCDeDdCcEbEa010203040506070246810浓度(mg/mL)清除率(%)图5不同分子量多肽对羟基自由基的清除率Fig.5Scavengingratesofdifferentmolecularweightpolypeptidesonhydroxylradical表3不同分子量多肽对羟基自由基清除率的回归方程分析Table3Regressionequationonscavengingratesofhydroxylradicalofdifferentmolecularweightpolypeptides样品回归方程IC50（mg/mL）rMNAP-1y=17.27ln（x）4.8423.940.9557MNAP-2y=19.99ln（x）4.6015.350.9883MNAP-3y=22.07ln（x）+3.108.370.9605MNAP-4y=19.58ln（x）+12.616.750.9735谷胱甘肽y=12.04ln（x）+1.8054.780.9964418食品工业科技2023 年10月2.3.3不同分子量澳洲坚果多肽对 ABTS+自由基的清除作用ABTS+自由基清除率广泛运用于体外抗氧化活性的评价3334。由图 6 及表 4 可见，4 种不同分子量的多肽及谷胱甘肽对 ABTS+自由基的清除能力均随样品质量浓度的增加而增大。MNAP-4、谷胱甘肽的清除率高于 MNAP-1、MNAP-2、MNAP-3，浓度为 0.2、0.4mg/mL 时，4 种不同分子量多肽的清除率低于谷胱甘肽，MNAP-2 与 MNAP-3 的清除率无显著差异（P0.05）。随着浓度的增加，清除率的增加速率大小顺序为 MNAP-3、MNAP-2、MNAP-1、MNAP-4、谷胱甘肽。当浓度达到 0.6mg/mL 时，MNAP-4 的清除率为 93.25%0.25%，高于谷胱甘肽的清除率 91.37%0.08%。当浓度达到 1.0mg/mL 时，MNAP-4 的清除率为 97.05%0.18%优于其它评价样品，MNAP-2 与 MNAP-3 的清除率分别为 88.14%0.42%、89.47%0.58%，两者之间无显著性差异（P0.05）。从评价样品对自由基清除能力的 IC50值来看，不同分子量多肽及谷胱甘肽对 ABTS+自由基清除能力大小顺序为：谷胱甘肽（IC500.00003mg/mL）MNAP-4（IC500.08mg/mL）MNAP-2、MNAP-3（IC500.24mg/mL）MNAP-1（IC500.45mg/mL），MNAP-4对 ABTS+自由基的清除能力最强，这可能是由于ABTS+自由基是一种亲水性自由基，分子量小的多肽的亲水性较好，更易与 ABTS+自由基发生反应，从而表现出更好的 ABTS+自由基清除能力，这与油茶饼粕多肽的研究结果相同35。MNAP-2、MNAP-3 的清除能力相近，这可能是由于 MNAP-2、MNAP-3 两者的亲水性相似，导致两者对 ABTS+自由基的清除能力相近36。2.3.4不同分子量澳洲坚果多肽还原能力分析还原能力是指其将 Fe3+还原为 Fe2+的能力，也是评估抗氧化活性的重要指标之一，吸光值越大还原力越强37。从图 7 及表 5 可以看出，不同分子量的多肽及谷胱甘肽均具有还原能力，还原能力与浓度呈正相关。MNAP-4 的还原能力优于 MNAP-1、MNAP-2、MNAP-3 及谷胱甘肽。在浓度2.0mg/mL 时，MNAP-4的还原能力为 0.3660.001，优于其它评价样品，谷胱甘肽还原能力最弱为 0.2240.002。随着浓度的增加，还原能力的增加速率大小顺序为 MNAP-4、MNAP-3、谷胱甘肽、MNAP-1、MNAP-2。当浓度达到 10.0mg/mL 时，4 种不同分子量多肽的还原能力均优于谷胱甘肽，MNAP-4 的还原能力最优为1.0060.003，MNAP-1、MNAP-2 的还原能力分别为 0.8800.005、0.8850.003，两者之间无显著性差异（P0.05）。从评价样品对自由基清除能力的IC50值来看，不同分子量多肽及谷胱甘肽还原能力大小顺序为：MNAP-4（IC503.19mg/mL）MNAP-2（IC503.45mg/mL）MNAP-3（IC503.61mg/mL）MNAP-1（IC504.08mg/mL）谷胱甘肽（IC504.35mg/mL），MNAP-4 表现出最强的还原能力，这是由于肽段越短使具有较多电子的基团暴露越充分，因此还原能力MNAP-1MNAP-2MNAP-3MNAP-4谷胱甘肽DeDdEcEbDaCeCdDcDbDaCeCdCcCbCaBeBdAcAbAaAeAdBcBbBa0204060801001200.20.40.60.81.0浓度(mg/mL)清除率(%)图6不同分子量多肽对 ABTS+自由基的清除率Fig.6ScavengingratesofdifferentmolecularweightpolypeptidesonABTS+radical表4不同分子量多肽对 ABTS+自由基清除率的回归方程分析Table4RegressionequationonscavengingratesofABTS+radicalofdifferentmolecularweightpolypeptides样品回归方程IC50（mg/mL）rMNAP-1y=34.99ln（x）+78.240.450.9489MNAP-2y=27.26ln（x）+88.660.240.9944MNAP-3y=28.83ln（x）+90.960.240.9979MNAP-4y=19.24ln（x）+99.810.080.9824谷胱甘肽y=4.27ln（x）+94.210.000030.9861MNAP-1MNAP-2MNAP-3MNAP-4谷胱甘肽DeCdDcEbCaBeAdBcCbCaCeBdCcBbBaAeCdAcAbAaEeDdDcDbDa0.20.40.60.81.001.2246810浓度(mg/mL)还原能力图7不同分子量多肽的还原能力Fig.7Reducingpowerofdifferentmolecularweightpolypeptides表5不同分子量多肽还原能力的回归方程分析Table5Regressionequationonreducingpowerofdifferentmolecularweightpolypeptides样品回归方程IC50（mg/mL）rMNAP-1y=0.3725ln（x）0.02364.080.9877MNAP-2y=0.3624ln（x）+0.05103.450.9985MNAP-3y=0.3870ln（x）+0.00293.610.9825MNAP-4y=0.4162ln（x）+0.01713.190.9641谷胱甘肽y=0.3812ln（x）0.06064.350.9869第44卷第20期付镓榕，等：不同分子量澳洲坚果多肽制备工艺与抗氧化活性419最强，这与松仁、核桃、桃仁等多种植物蛋白的研究结果相同16,29,32。而分子质量相对较高的 MNAP-2 可能是因为具有较多电子致密的基团暴露在外，转移电子的能力也较强而表现出高于 MNAP-3 的还原能力32。2.4不同分子量澳洲坚果多肽与抗氧化活性相关性分析用皮尔森法（Pearsons）对不同分子量澳洲坚果多肽与抗氧化活性指标的 IC50值进行相关性分析。结果如表 6 所示，不同分子量澳洲坚果多肽与清除DPPH 自由基（r=0.947，P0.01）、羟基自由基（r=0.964，P0.01）、ABTS+自由基（r=0.948，P0.01）及还原能力（r=0.856，P0.01）之间存在极显著相关。多肽分子量的大小对其抗氧化活性影响巨大，结合 2.3 中的分析可知分子量小于 1000Da 的澳洲坚果多肽抗氧化活性最好，这可能是分子量小的多肽空间位阻较小，活性基团（巯基、酚羟基）暴露，更好的与自由基发生反应，表现出更好的抗氧化活性。Feng 等38认为多肽的抗氧化活性与分子量大小、氨基酸组成种类及排列顺序有关，Lin 等39研究水解蛋清蛋白发现分子质量小于 1000Da 的组分抗氧化活性明显高于其他分子质量组，Zou 等40发现的不同来源的 42 种抗氧化肽在 1000Da 以下的 36 肽具有更好的自由基清除活性。表6不同分子量的澳洲坚果多肽与抗氧化活性相关性Table6Correlationsbetweenmacadamianutpolypeptideswithdifferentmolecularweightsandantioxidantactivities成分DPPH自由基羟基自由基ABTS+自由基还原能力不同分子量澳洲坚果多肽r=0.947*r=0.964*r=0.948*r=0.856*注：*表示相关性极显著（P0.01）。3结论本文研究了不同蛋白酶酶解澳洲坚果粕的ABTS+自由基清除能力，采用 DA201-C 大孔吸附树脂、超滤分级等技术对澳洲坚果多肽进行分离纯化得到不同分子量多肽，考察其清除 DPPH、羟基、ABTS+自由基能力及还原能力，分析得出不同分子量多肽与抗氧化活性之间存在显著相关性。筛选得到了抗氧化活性高的多肽组分 MNAP-4（Mw1000Da），后续可对其进一步纯化，研究其多肽结构及体内抗氧化活性，为新型抗氧化肽功能性产品的开发与工业化应用提供理论依据，促进澳洲坚果产业的发展。参考文献1BIRCHJ,YAPK,SILCOCKP.CompositionalanalysisandroastingbehaviourofgevuinaandmacadamianutsJ.InternationalJournalofFoodScienceandTechnology，2010，45：8186.2MAROLAC,PIOR,PENONIEDOSS,etal.Chemicalcharacterizationandfattyacidsprofileinmacadamiawalnutculti-varsJ.CinciaRural，2012，42（12）：21662171.3杜丽清,曾辉,邹明宏,等.澳洲坚果果仁氨基酸含量的差异性分析J.经济林研究，2008，26（4）：4952.DULQ,ZENGH,ZOU M H,et al.Differences analysis of amino acid contents inmacadamiakernelJ.Non-WoodForestResearch，2008，26（4）：4952.4张齐,阎怡竹,刘清清,等.文冠果降血压肽的制备及其活性研究J.西北大学学报（自然科学版），2018，48（4）：551556.ZHANGQ,YANYZ,LIUQQ,etal.Preparationandbioactivi-tyofantihypertensivepeptidesfromXanthoceras sorbifoliaB.J.JournalofNorthwestUniversity(NaturalScienceEdition)，2018，48（4）：551556.5贺熙勇,聂艳丽,吴霞,等.云南澳洲坚果产业高质量发展的建议J.中国南方果树，2022，51（4）：205210.HEXY,NIEYL,WUX,etal.Suggestionsofmacadamiaindustryforhigh-qualitydevelopmentinYunnanProvinceJ.SouthChinaFruits，2022，51（4）：205210.6贺熙勇,陶亮,柳觐,等.我国澳洲坚果产业概况及发展趋势J.热带农业科技，2015，38（3）：1216,19.HEXY,TAOL,LIUJ,etal.Overviewofmacadamiaindustryanditsdevelopmenttrend in ChinaJ.Tropical Agricultural Science&Technology，2015，38（3）：1216,19.7郭刚军,建邹云,胡小静,等.液压压榨澳洲坚果粕酶解制备多肽工艺优化J.食品科学，2016，37（17）：1718.GUOGJ,ZOUJY,HUXJ,etal.Optimizingthepreparationofcrudepep-tidesfromhydraulicmacadamianutmealbyenzymatichydrolysisJ.FoodScience，2016，37（17）：1718.8ZHANGSH,LUOL,SUNXY,etal.Bioactivepeptides:Apromisingalternativetochemicalpreservativesforfoodpreserva-tionJ.Journal of Agricultural and Food Chemistry，2021，69：1236912384.9范方宇,阚欢,郭安,等.澳洲坚果蛋白质提取及多肽的制备J.农业机械，2011（35）：131135.FANFY,KANH,GUOA,etal.Proteinextractionandpolypeptidepreparationfrommacada-mianutJ.FarmMachinery，2011（35）：131135.10刘恩岐,贺菊萍,陈振家,等.黑豆蛋白质酶水解物体外抗氧化活性的研究J.中国粮油学报，2009，24（11）：3841.LIUEQ,HEJP,CHENZJ,etal.StudyonantioxidantactivityofblackbeanproteinhydrolyzedbyenzymeJ.JournaloftheChineseCere-alsandOilsAssociation，2009，24（11）：3841.11马尚玄,郭刚军,黄克昌,等.不同分子量澳洲坚果多肽氨基酸组成与抑菌活性J.食品工业科技，2021，42（7）：8388.MASX,GUOGJ,HAUNGKC,etal.AminoacidcompositionsandantibacterialactivitiesofdifferentmolecularweightmacadamianutpolypeptidesJ.ScienceandTechnologyofFoodIndustry，2021，42（7）：8388.12FENGYX,RUANGR,JINF,etal.Purification,identifica-tion,andsynthesisoffivenovelantioxidantpeptidesfromChinesechestnut(Castanea mollissima Blume)protein hydrolysatesJ.LWT，2018，92：4046.13AGRAWALH,JOSHIR,GUPTAM.Isolation,purificationandcharacterizationofantioxidativepeptideofpearlmillet(Pen-nisetum glaucum)protein hydrolysateJ.Food Chemistry，2016，204：365372.14崔婷婷,贾爱荣,张绵松,等.大孔吸附树脂分离纯化海蜇 ACE 抑制肽的工艺研究J.食品工业科技，2022，43（10）：216222.CUITT,JIAAR,ZHANGJS,etal.SeparationandpurificationofACEinhibitorypeptidefromjellyfishbymacroporousresinJ.ScienceandTechnologyofFoodIndustry，2022，43（10）：216222.15LIZY,HEY,HEHY,etal.PurificationidentificationandfunctionanalysisofACEinhibitorypeptidefromUlvaproliferapro-teinJ.FoodChemistry，2022，401：134127.420食品工业科技2023 年10月16卢红妍,杨行,方丽,等.松仁清蛋白抗氧化肽的分离纯化及结构鉴定J.食品科学，2019，40（24）：4045.LUHY,YANGH,FNAGL,etal.Isolation,purificationandstructuralidentifica-tionofantioxidantpeptidesderivedfromenzymatichydrolysisofpinenutkernel(Pinus koraiensis Sieb.etZucc.)albuminJ.FoodScience，2019，40（24）：4045.17杜丽清,帅希祥,涂行浩,等.澳洲坚果蛋白肽制备工艺及抗氧化活性研究J.热带农业工程，2016，40（Z1）：16.DULQ,SHUAIXX,TUXH,etal.Analysisonthepreparationtechnologyof protein peptide and antioxidant activity of macadamia nutJ.TropicalAgricult