羊口疮病毒内脏和口唇感染株B2L和F1L基因的比较分析.pdf

引文格式：吴姣,富国文,四朗玉珍,等.羊口疮病毒内脏和口唇感染株 B2L 和 F1L 基因的比较分析J.云南农业大学学报(自然科学),2023,38(4):580586.DOI:10.12101/j.issn.1004-390X(n).202211017羊口疮病毒内脏和口唇感染株 B2L 和F1L 基因的比较分析*吴姣1，富国文1，四朗玉珍2，曾琴1，白卫兵1，班旦2，樊月圆1*(1.云南农业大学动物医学院，云南昆明650201；2.西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所，西藏拉萨850009)摘要:【目的】分析内脏和口唇感染羊传染性脓疱病病毒主要致病因子 F1L 和 B2L 基因和蛋白的差异，为进一步研究该病毒的致病机制提供参考。【方法】对内脏和口唇感染株 F1L 和 B2L 基因进行 PCR 扩增后克隆测序，运用生物信息学软件对其序列及编码蛋白的二级结构、磷酸化位点和跨膜结构域进行预测和分析。【结果】内脏株和口唇株的 F1L 基因长度均为 1564bp，分别编码 342 和 343 个氨基酸；B2L 基因长度均为1370bp，均编码 378 个氨基酸。内脏和口唇感染株 B2L 基因核苷酸序列同源性为 97.80%，氨基酸序列同源性为 98.15%；两者的 F1L 基因核苷酸序列同源性为 95.49%，氨基酸序列同源性为 87.20%。氨基酸组成显示：内脏和口唇感染株 B2L 蛋白缬氨酸含量最高；口唇株 F1L 蛋白亮氨酸含量最高，内脏株 F1L 蛋白精氨酸含量最高。【结论】羊口疮病毒内脏和口唇感染株的 B2L 基因保守性良好，而 F1L 基因差异明显，本结果可为进一步研究羊口疮病毒致病机制提供参考。关键词:羊口疮病毒；口唇感染株；F1L 基因；B2L 基因；生物信息学分析中图分类号:S852.654文献标志码:A文章编号:1004390X(2023)04058007Comparative Analysis of B2L and F1L Genes in Orf VirusViscera and Lip Infected StrainsWUJiao1，FUGuowen1，Silangyuzhen2，ZENGQin1，BAIWeibing1，Bandan2，FANYueyuan1(1.CollegeofVeterinaryMedicine,YunnanAgriculturalUniversity,Kunming650201,China;2.InstituteofAnimalHusbandryandVeterinary,TibetAcademyofAgricultureandAnimalHusbandrySciences,Lhasa850009,China)Abstract:PurposeToanalyzethedifferencesinthegenesandproteinsofF1LandB2L,themainvirulencefactorsofcontagiousecthymavirusinvisceralandlipinfections,providingarefer-enceforfurtherresearchonthevirulencemechanismofthisvirus.MethodsTheF1LandB2LgenesofthevisceraandlipinfectedstrainswereclonedandsequencedafterPCRamplification,andtheirsequencesandthesecondarystructures,phosphorylationsites,andtransmembranestructuraldomains of the encoded proteins were predicted and analyzed by using bioinformatics software.ResultsTheF1Lgeneofbothvisceraandlipstrainswas1564bpinlength,encoding342and343aminoacids,respectively;theB2Lgenewas1370bpinlength,bothencoding378aminoacids.云南农业大学学报（自然科学），2023，38(4)：580586http:/JournalofYunnanAgriculturalUniversity(NaturalScience)E-mail:收稿日期：2022-11-10修回日期：2023-07-13网络首发日期：2023-08-22*基金项目：西藏自治区“十四五”重大科技专项(XZ202101ZD0001N)。作者简介：吴姣(1999)，女，云南玉溪人，在读硕士研究生，主要从事动物解剖与组织胚胎学研究。E-mail：*通信作者 Correspondingauthor：樊月圆(1979)，女，陕西扶风人，博士，副教授，主要从事人畜共患病研究。E-mail：网络首发地址：https:/ nucleotide sequence homology of the B2L genes of the lip and viscera infected strains was97.80%,andtheaminoacidsequencehomologywas98.15%.Thenucleotidesequencehomologyofthe F1L genes of the lip and viscera infected strains was 95.49%,and the amino acid sequencehomologywas87.20%.TheaminoacidcompositionsshowedthattheB2Lproteinhadthehighestcontentofvalineinbothvisceraandlipstrains;theF1Lproteinhadthehighestcontentofisoleuineinlipstrain,andhadthehighestcontentofarginineinviscerastrain.ConclusionTheB2Lgeneiswellconservedinthevisceraandlipinfectedstrainsofcontagiousecthymavirus,whiletheF1Lgeneisobviouslydifferent,whichmayprovideareferenceforfurtherresearchonthepathogenicmechan-ismofcontagiousecthymavirus.Keywords:orfvirus;lipinfectedstrain;F1Lgene;B2Lgene;bioinformaticsanalysis羊口疮又称羊传染性脓疱病(contagiousec-thymadermatitis，CE)，是一种由传染性脓疱病病毒(contagiousecthymavirus，CEV)引起的人畜共患传染病。该病由接触感染并具有高度的嗜上皮性，主要危害绵羊和山羊，患病羊只在口唇皮肤、口腔黏膜、乳房、蹄部和鼻孔周围出现红色丘疹、红斑、脓疱和结痂等病变1-2，发病率高达100%，羔羊的死亡率高达 93%3；其他反刍动物和哺乳动物也会受到感染4，人类被感染的病例也有被报道，且在世界范围内发病率不断上升5。羊口疮病毒(orfvirus，ORFV)基因组约为140kb，编码 132 个基因，为痘病毒科(Poxviridae)副痘病毒属(Parapoxvirus)的 DNA 双链病毒6。ORFV 有 2 个免疫原性良好的囊膜蛋白，分别为B2L 蛋白与 F1L 蛋白。ZHAO 等7研究表明：表达ORFV011 和 ORFV059 蛋白的 DNA 疫苗 pcDNA-3.1-ORFV011/ORFV059 能显著提高接种效力，且与其他疫苗相比免疫原性显著增强。ORFV011基因也称为 B2L 基因，位于中央核心区，长度为1137bp，编码大小约为 42ku 的 B2L 蛋白8。B2L蛋白能够介导细胞免疫并且刺激机体产生强烈的免疫应答9，在病毒感染宿主后期，B2L 基因以胞外包膜病毒(EEVs)的方式编码免疫原性蛋白，且该蛋白具有一定的脂肪酶活性，既可以增强病毒毒力，也可以降低宿主动物的免疫应答水平，同时能协助病毒在宿主细胞内扩散增殖10。ORFV059 基因也称为 F1L 基因，位于基因组的中间部位，长度为 1029bp，编码大小约为 39ku的F1L 蛋白，能够诱导机体产生中和抗体，是单克隆抗体的主要结合位点，具有肝素受体结合功能，可促进动物细胞膜与病毒外模的融合，有利于病毒的吸附和侵入11。羊口疮不仅造成养殖业的重大经济损失，还威胁着人类健康。本课题组在西藏发现 1 例与已有唇型、蹄型和外阴型羊口疮病变部位不同的羊口疮病例12，主要表现为内脏病变，不易与其他腹痛疾病区分，且死亡率较高。目前，对于内脏感染型的羊口疮未见报道，因此，本研究对内脏和口唇感染株 F1L 基因和 B2L 基因进行生物信息学分析，以期为后续研究该病致病机理奠定基础。1 材料与方法1.1样品来源2020 年 7 月采集自西藏自治区尼玛县的羊口疮肠道病变组织；2021 年 8 月采集自昆明团结乡某羊场的羊口疮口唇痂皮样品。1.2材料病毒基因组提取试剂盒、琼脂糖凝胶 DNA回收试剂盒和质粒提取试剂盒购自北京天根生化科技有限公司；2PremixTaq、DNAMarkerDL-5000、DNAMarkerDL2000、PMD19-T 载体和DH5 感受态细胞购自 TaKaRa 公司。1.3引物的设计合成根据 NCBI 中 GenBank 数据库已公布的羊口疮病毒(登录号：NC_005336)全基因序列，采用Premier5.0 软件设计引物，用 Oligo7.0 软件评价引物，引物由昆明擎科公司合成。特异性引物序列见表 1。1.4病毒 DNA 提取及 PCR 扩增采用病毒基因组提取试剂盒提取羊口疮病变组织中的羊口疮病毒基因组 DNA，保存于20冰箱以用于后续 PCR 扩增。第4期吴姣，等：羊口疮病毒内脏和口唇感染株 B2L 和 F1L 基因的比较分析581PCR 扩增体系 25.0L，包括 2PremixTaq12.5L，模板 1.0L，10mol/L 上、下游引物各1.0L，用ddH2O 补足体系。反应条件为：98预变性 10s；94 变性 50s，60.5/55 退火15s，72 延伸 1min，35 个循环，72 延伸1min。取扩增产物 5L，经 1%琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。1.5测序琼脂糖凝胶电泳后，对目的条带进行切胶回收，回收产物与 PMD19-T 载体进行连接，再将连接后的产物转化至 DH5 感受态细胞中扩增培养；取扩增菌液 200L 涂布于含氨苄青霉素抗性的 LB 平板，将平板放入 37 培养箱中培养24h 后挑取单个菌落进行培养，利用质粒提取试剂盒提取培养菌质粒后进行 PCR 鉴定。筛选鉴定为阳性的菌液送昆明擎科生物公司测序。1.6生物信息学分析使用 DNAMAN 软件对内脏和口唇感染株B2L 和 F1L 基因的核苷酸和氨基酸序列进行同源性分析；使用 NCBI 的 BLAST 程序，选择已公布的 16 株 ORFV 作为参考，登录号分别为：NC_005336(美国)、AY386263(美国)、AY386264(美国)、DQ184476(新西兰)、KF234407(中国广东)、KF837136(德国)、KP010353(中国福建)、KP010354(中国福建)、KP010355(中国福建)、KP010356(中国福建)、KY053526(中国河南)、MG674916(中国吉林)、MG712417(中国吉林)、MN648218(中国广州)、MN648219(中国吉林)和 MT332357(印度)；使用 DNAstar 软件进行核苷酸同源性分析，并绘制进化树。使用 NCBIORFFinder 分析测序结果的编码区和核苷酸序列相关信息；使用 ProtParam、Pro-tScale、NetPhos-3.1 和 TMHMM2.0 对测序结果的氨基酸序列进行物理性质、疏水性、磷酸化位点和跨膜结构分析；使用 SOPMA 预测二级结构。2 结果与分析2.1PCR 扩增及测序结果以 F1L 和 B2L 特异性引物进行 PCR 扩增，产物经 1%琼脂糖凝胶电泳鉴定，结果(图 1)显示：所得目的片段大小约为 1370 和 1564bp。测序结果显示：内脏株和口唇株的 F1L 基因长度均为1564bp，分别编码 342 和 343 个氨基酸；内脏株和口唇株的 B2L 基因长度均为 1370bp，均编码378 个氨基酸。2.2生物信息学分析结果2.2.1同源性及系统进化分析口唇和内脏感染株 B2L 基因的核苷酸序列同源性为 97.80%，共发现 25 处变异；两者的氨基酸序列同源性为 98.15%。口唇和内脏感染株 F1L基因的核苷酸序列同源性为 95.49%，共发现45 处变异；两者的氨基酸序列同源性为 87.20%。内脏感染株 B2L 基因与其他参考株的核苷酸同源性为 96.90%99.90%、氨基酸同源性为 97.40%100.00%，F1L 基因与其他参考株的核苷酸同源性为 94.80%96.50%、氨基酸同源性为 87.20%93.50%。口唇感染株 B2L 基因与其他参考株的核苷酸同源性为 97.50%99.10%、氨基酸同源性为97.10%99.20%，F1L 基因与其他参考株的核苷酸同源性为 93.90%95.80%、氨基酸同源性为85.30%87.70%。本研究测定的内脏感染株 B2L基因与中国吉林毒株(MG674916)亲缘性最高，口唇感染株 B2L 基因与印度毒株(MT332357)亲缘性最高(图 2a)。口唇株 F1L 基因位于单独的1 个分支上，与另一分支的中国广州毒株(MN648-218)最为接近；内脏株F1L 基因同样与MN648218最为接近(图 2b)。2.2.2理化性质分析口唇感染株 B2L 基因编码 378 个氨基酸，其中缬氨酸的含量最高(图 3a)；该蛋白相对分子质表 1 引物信息Tab.1Primerinformation基因名称genename引物名称primername引物序列(53)primersequences退火条件annealingconditions片段长度/bpfragmentlengthB2L 011B2L-FCGTCTTTCCGTCTCTCGCCT60.5/15s1370B2L-RTGCTGACCGCTGACGAAATGF1L 059F1L-FCCTCGCTGTTCGTGCTCTG55/15s1564F1L-RATCGTGGGCTCGGTCAAG582云南农业大学学报第38卷量为 41.77ku，理论等电点为 6.01，总平均亲水性为0.012，为亲水性蛋白；不稳定系数为 22.35，为稳定蛋白。内脏株 B2L 基因编码 378 个氨基酸，其中缬氨酸的含量最高(图 3b)；该蛋白相对分子质量为 41.69ku，理论等电点为 6.01，总平均亲水性为 0.009，为疏水性蛋白；不稳定系数为 20.38，为稳定蛋白。口唇株 F1L 基因编码343 个氨基酸，其中亮氨酸的含量最高(图 3c)；该蛋白相对分子质量为 37.59ku，理论等电点为8.53，总平均亲水性为 0.053，为疏水性蛋白；不稳定系数为 31.82，为稳定蛋白。内脏株 F1L 基因编码 342 个氨基酸，其中精氨酸的含量最高(图 3d)；该蛋白相对分子质量为 37.06ku，理论等电点为 12.10，总平均亲水性为0.807，为亲水性蛋白；不稳定系数为 77.12，为不稳定蛋白。ExpasyProtScale 分析结果与上述结果一致。2.2.3磷酸化位点口唇株 B2L 蛋白存在 29 个潜在的磷酸化位点，包括 20 个丝氨酸位点和 9 个苏氨酸位点，其中第 304 位的丝氨酸置信度最高，达 0.865(图 4a)；内脏株 B2L 蛋白存在 22 个潜在的磷酸化位点，包括 16 个丝氨酸位点和 6 个苏氨酸位点，其中第 304 位的丝氨酸置信度最高，达0.865(图 4b)。口唇株 F1L 蛋白含有 14 个丝氨酸位点、9 个苏氨酸位点和 4 个酪氨酸位点，其中第 9 位的丝氨酸置信度最高，达 0.804(图 4c)；内脏株 F1L 蛋白包括 15 个丝氨酸位点和 4 个苏氨酸位点，其中第 254 位的丝氨酸置信度最高，达 0.855(图 4d)。这些磷酸化位点主要能够被PKA、PKB 和 GSK3PKC 等蛋白激酶磷酸化。2 000 bp1 000 bp750 bp500 bp250 bp100 bpMa)b)121 564 bp5 000 bp3 000 bp2 000 bp1 500 bp1 000 bp750 bp500 bp250 bp100 bpM121 370 bp注：1.口唇感染株；2.内脏感染株。a)B2L 电泳结果，M.DL5000；b)F1L 电泳结果，M.DL2000。Note:1.lipinfectedstrain;2.viscerainfectedstrain.a)theelectrophoresisresultsofB2L,M.DL5000;b)theelectrophoresisresultsofF1L,M.DL2000.图 1 电泳结果Fig.1Electrophoresisresults内脏感染株 viscera infected strain口唇感染株 lip infected strainNC_005336MT332357KP010353MN648218MN648219MG674916AY386264022.5KF234407KY053526DQ184476KF837136AY386263MG712417KP01355KP01354KP0135620DQ184476KF837136KF837136KY053526AY386263MG712417MN648219NC_005336AY386264KP010354MG674916KP010353KP010355MT332357KP010356MN648218内脏感染株 viscera infected strain口唇感染株 lip infected strain45.2a)b)图 2 B2L(a)和 F1L(b)遗传进化树Fig.2PhylogenetictreeofB2L(a)andF1L(b)第4期吴姣，等：羊口疮病毒内脏和口唇感染株 B2L 和 F1L 基因的比较分析5832.2.4跨膜结构内脏株和口唇株 B2L 蛋白均无跨膜结构。口唇株 F1L 蛋白有 2 个跨膜区，分别位于 281303和 310332(图 5)；内脏株 F1L 蛋白无跨膜结构。2.2.5二级结构内脏株 B2L 蛋白的-螺旋、无规则卷曲、延0246B2LF1L81012AlaValLeuIleProGluGlyMetTrpPheAspArgSerThrCysAsnHisTyrLysGInSecPylAlaValLeuIleProGluGlyMetTrpPheAspArgSerThrCysAsnHisTyrLysGInSecPyl氨基酸比例/%amino acid percentageB2LAlaValLeuIleProGluGlyMetTrpPheAspArgSerThrCysAsnHisTyrLysGInSecPyl024681012F1LAlaValLeuIleProGluGlyMetTrpPheAspArgSerThrCysAsnHisTyrLysGInSecPyl024681012036912151821注：Ala.丙氨酸；Val.缬氨酸；Leu.亮氨酸；Ile.异亮氨酸；Pro.脯氨酸；Glu.谷氨酸；Gly.甘氨酸；Met.甲硫氨酸；Trp.色氨酸；Phe.苯丙氨酸；Asp.天冬氨酸；Arg.精氨酸；Ser.丝氨酸；Thr.苏氨酸；Cys.半胱氨酸；Asn.天冬酰胺；His.组氨酸；Tyr.酪氨酸；Lys.赖氨酸；Gln.谷氨酰胺；Sec.硒半胱氨酸；Pyl.吡咯赖氨酸。Note:Ala.alanine;Val.valine;Leu.leucine;Ile.isoleucine;Pro.proline;Glu.glutamic acid;Gly.glycine;Met.methionine;Trp.tryptophan;Phe.phenylalanine;Asp.asparticacid;Arg.arginine;Ser.serine;Thr.threonine;Cys.cysteine;Asn.asparagine;His.histidine;Tyr.tyrosine;Lys.lysine;Gln.glutamine;Sec.seleniumcysteine;Pyl.pyrrolysine.图 3 口唇株(左)和内脏株(右)B2L 蛋白和 F1L 蛋白的氨基酸组成Fig.3AminoacidcompositionofB2LproteinandF1Lproteininlip(left)andvisceral(right)strains001B2LB2LF1LF1L50100150序列位点sequence position磷酸化潜在性phosphorylation potential200250300350001501001502002503003500015010015020025030000150100150200250300丝氨酸 serine苏氨酸 threonine酪氨酸 tyrosine阈值 threshold图 4 口唇株(左)和内脏株(右)B2L 蛋白与 F1L 蛋白磷酸化位点预测Fig.4PhosphorylationsitepredictionofB2LproteinandF1Lproteininbothlip(left)andvisceral(right)strains584云南农业大学学报第38卷伸链和-转角分别占 30.24%、39.15%、23.54%和6.88%；口唇株 B2L 蛋白的上述结构分别占32.01%、39.15%、23.02%和 5.82%；内脏株 F1L蛋白的上述结构分别占 37.24%、49.56%、5.28%和 7.92%；口唇株 F1L 蛋白的上述结构分别占36.55%、45.03%、15.20%和 3.22%。3 讨论ORFV 能够感染反刍动物和人类，随着中国养羊业的不断壮大，该病毒带来的危害也越来越严重13。由于本研究发现的内脏感染株在发病早期并没有可通过眼观发现的病理变化，而是表现出类似于其他腹痛疾病的腹痛和躺卧等症状，易导致误诊，延误最佳治疗时间，给畜牧业带来疫情防控难度的同时也造成养殖户的经济损失。目前国内外还未见关于内脏感染 ORFV 毒株的报道，因此，利用生物信息学方法对该毒株 B2L和 F1L 基因进行比较分析，可为深入研究 OR-FV 的分子机制提供依据，有助于阐明 ORFV 的致病机制。同源性分析结果显示：内脏株和口唇株 B2L的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为 97.80%和98.15%，可见该基因在不同感染部位的毒株之间变异程度不大，此结果与 HOSAMANI 等14的研究结果相符。此外，内脏株 B2L 的核苷酸和氨基酸序列与其他地区参考株的同源性分别为 96.90%99.90%和 97.40%100.00%，口唇株 B2L 的核苷酸和氨基酸序列与其他地区参考株的同源性分别为 97.50%99.10%和 97.10%99.20%，也证明了B2L 基因在不同 ORFV 分离株中保守性良好15-17，可用于 ORFV 分离株之间的遗传和系统发育分析。根据绘制的遗传进化树，可将对比的 18 株序列分为 2 大支，内脏株和口唇株在同一大支，但二者遗传距离较远，其中内脏株 B2L 基因片段与中国吉林分离株(MG674916)的遗传距离最近，口唇株 B2L 基因片段与印度分离株(MT33-2357)的遗传距离最近。这也提示需要加强海关检疫以防止国外毒株传入国内，同时严格要求动物运输检疫，防止病株在各省传播流行。口唇株F1L 的核苷酸和氨基酸序列与其他参考株的同源性分别为 93.90%95.80%和 85.30%87.70%。内脏株 F1L 核苷酸和氨基酸序列与其他参考株的同源性分别为 94.80%96.50%和 87.20%93.50%。与 B2L 基因相比，F1L 基因的氨基酸序列差异性较大。YOGISHARADHYA 等18研究表明：F1L蛋白 C 端高度保守，而 N 端具有异质性，是否是因为 N 端发生变异而导致该基因氨基酸序列差异较大还有待考证。YOGISHARADHYA 等18和WANG 等19研究表明：F1L 基因与 B2L 基因一样有着良好的保守性，与本研究结果不符。值得注意的是，遗传进化树结果显示：口唇株和内脏株与中国广州分离株(MN648218)F1L 基因遗传关系最近，与国外分离株较远，反映了本研究分离的 2 个毒株属于国内流行毒株，而不是从国外传入。此结果与 B2L 基因进化树结果并不一致且相差较大，推测是由于 F1L 基因在进化过程中碱基的缺失和变异导致氨基酸同源性较低，影响了遗传系统发育分析结果20。本研究还发现：内脏株和口唇株的 B2L 蛋白氨基酸长度一致，而 F1L蛋白氨基酸长度不同，内脏感染株更短；ZHAO等21对中国吉林分离株的研究也发现该情况，推测此变异与该病毒的适应性有关。口唇株的 F1L 蛋白为稳定蛋白，具有疏水性；内脏株为不稳定蛋白，具有亲水性，两者原子组成数量以及蛋白分子量也有细微差异，这可能与氨基酸突变有关22。蛋白质磷酸化的主要作用是调控蛋白质的活力与功能，据此推测磷酸化位点的差异会导致内脏株和口唇株在蛋白质活力和功能上存在差别。经预测，内脏株 F1L 蛋白无跨膜结构，而口唇株 F1L 蛋白有 2 个跨膜区，且该蛋白的氨基酸组成差异较大。内脏株和口唇株F1L 蛋白-螺旋占比分别为 37.24%和 36.55%，无规则卷曲占比分别为 49.56%和 45.03%，两者均以无规则卷曲为主要结构，这与维持病毒膜蛋白的稳定性紧密相关。-螺旋及-折叠结构具有较高的化学键能，能维持其高级结构的稳定，但501001502002503000.20.40.60.81.01.20可能性氨基酸位置site of amino acid跨膜 transmembrane膜内 inside膜外 outsideprobability图 5 口唇株 F1L 蛋白跨膜结构预测Fig.5TransmembranestructurepredictionofF1Lproteininlipstrain第4期吴姣，等：羊口疮病毒内脏和口唇感染株 B2L 和 F1L 基因的比较分析585不利于抗原抗体的结合；而-转角和无规则卷曲区域处的结构较松散，易发生扭曲变构，位于蛋白质分子表面，易与抗体分子接近及结合23。内脏株和口唇株的二级结构存在微小差异，都以无规则卷曲占比最高，由此可推测该蛋白结构松散，在此结构上分布抗原表位较多。可见，内脏和口唇感染株 B2L 基因保守性良好，而在 F1L 基因上存在明显差异，可对该基因进行进一步研究。4 结论本研究运用生物信息学方法对羊口疮病毒(ORFV)内脏感染株和口唇感染株的 B2L 和 F1L基因及其编码的蛋白进行分析，发现内脏感染株和口唇感染株的 F1L 蛋白氨基酸组成和长度差异较大，该差异是否是造成 2 株毒株感染部位不同的原因还需深入研究。本结果可为进一步研究ORFV 的致病机制提供参考。参考文献SADIQMA,ABBAY,JESSEF,etal.Severepersist-entcaseofcontagiousecthyma(orf)ingoatsJ.JournalofAnimalHealthandProduction,2017,5(1):24.DOI:10.1007/s10875-014-0111-7.1邹东.羊口疮的治疗及预防方法J.畜牧兽医科技信息,2021(1):89.DOI:10.3969/J.ISSN.1671-6027.2021.01.073.2LINFY,TSENGYY,CHANKW,etal.SuppressionofinfluenzavirusinfectionbytheorfvirusisolatedinTaiwanJ.JournalofVeterinaryMedicalScience,2015,77(9):1055.DOI:10.1292/jvms.14-0663.3SPYROUV,VALIAKOSG.OrfvirusinfectioninsheeporgoatsJ.VeterinaryMicrobiology,2015,181(1/2):178.DOI:10.1016/j.vetmic.2015.08.010.4KASSAT.Areviewonhumanorf:aneglectedviralzo-onosisJ.Research and Reports in Tropical Medicine,2021,12:153.DOI:10.2147/RRTM.S306446.5FLEMINGSB,WISELM,MERCERAA.Moleculargeneticanalysisoforfvirus:apoxvirusthathasadaptedtoskinJ.Viruses,2015,7(3):1505.DOI:10.3390/v7031505.6ZHAOK,HEWQ,GAOW,etal.OrfvirusDNAvac-cines expressing ORFV 011 and ORFV 059 chimericprotein enhances immunogenicityJ.Virology 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