如何制作药敏试纸及药敏实验.doc

近年来，随着抗菌药物的广泛应用，尤其是光谱及超光谱的抗菌药物的滥用，导致耐药性菌株逐年增多；环境的污染，以及养殖户的饲养管理意识跟不上，促使细菌性疾病的流行及发病率逐年上升；且使用抗菌素药物预防和治疗的效果越来越不理想，为了减少药物的滥用和耐药性的产生，在临床治疗前进行药敏试验筛选出有效的抗菌药物是十分必要的，正确选用药物是治疗和预防禽病的重要措施之一。笔者根据近几年来的经验选用本公司的现有抗生素药物自制药敏片，通过药敏试验在临床上取得十分好的效果。
    一、药敏片的制备
    1、纸片的选用    在医疗器械公司购买定性滤纸，用0.6cm的打孔器把滤纸打成圆形纸片，分别装入洁净的青霉素小瓶内，50片/瓶，放入高压蒸汽锅内进行121℃灭菌20min，再放入60-100℃干燥箱烘干，冷却后放入洁净箱备用。
    2、抗菌药液的配制   选用本公司的抗菌药物，按我们习惯常用的药物浓度进行配比，如冀农杆特，规格为100g/瓶，习惯常用兑水量为400斤水，即用分析天枰称取0.2g的杆特5ml灭菌生理盐水置于灭菌的青霉素小瓶内，充分溶解后再吸取0.1ml于另一灭菌青霉素瓶内，加入3.9ml的灭菌生理盐水即可。
    3、纸片的处理   将以配制好的药物溶解加入装有纸片的青霉素小瓶内，每小瓶加0.5ml，应使纸片均匀的吸取药液，置4-8℃冰箱浸泡1小时左右，再将小瓶置37-50℃的温箱内2-3小时烘干。制备好的干燥药敏片要密封好，置冰箱内8℃以下冷藏或零下14℃以下冷冻保存备用。
    二、培养基制作
    1、选用市面上提供的营养琼脂，SS琼脂和麦康凯琼脂按说明配制
    （1）SS琼脂培养基的制作：称取SS琼脂粉5.8克，加入蒸馏水100毫升，加热煮沸溶解即可，冷至55℃倾注无菌平皿中备用。
    （2）营养琼脂培养基的制作：称取营养琼脂3.8克，加至100ml蒸馏水中摇均匀，溶解煮沸121℃，高压灭菌15分钟，冷却至38℃，倾注无菌平皿中备用。
    （3）麦康凯琼脂培养基的制作：称取5克麦康凯琼脂，加入蒸馏水100ml溶解摇均匀，煮沸，高压灭菌10磅15分钟，即可冷却至55℃，倾注无菌平皿中备用。
    三、试验方法
    1、剖检已死亡或即将死亡的家禽。
    2、以无菌手术镊子陆续取出病料（心，肝，肺，脾均可）。
    3、在酒精灯上把手术刀，镊子，接种环灭菌，再用接种环采取病料划在备好的培养基上，划线要均匀。
    4、将备好的药敏片均匀贴在培养基上（各纸片中心距离不小于2.5cm）。
    5、取出培养基观察有无抑菌圈，根据抑菌圈的有无或大小，并测量各种药敏纸片的抑菌圈的直径，单位为毫米，可筛选出敏感的药物。
    四、体会
    1、为了使试验安全可靠，所有试验操作过程均在超净工作台中进行。
    2、制备纸片的滤纸的质量直接影响试验结果，所以要求所用滤纸吸水性要好，均匀，不能含无关的化学物及色素。
    3、药物溶解性的高低可以影响药物敏感性试验结果，选用抗菌素配制药液时我们应该注意要反复摇晃使药物充分溶解。
    4、制备好的药敏片要避免受潮，因此，要放在干燥器内贴好标签记录好。