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如何制作药敏试纸及药敏实验.doc

1、近年来,随着抗菌药物的广泛应用,尤其是光谱及超光谱的抗菌药物的滥用,导致耐药性菌株逐年增多;环境的污染,以及养殖户的饲养管理意识跟不上,促使细菌性疾病的流行及发病率逐年上升;且使用抗菌素药物预防和治疗的效果越来越不理想,为了减少药物的滥用和耐药性的产生,在临床治疗前进行药敏试验筛选出有效的抗菌药物是十分必要的,正确选用药物是治疗和预防禽病的重要措施之一。笔者根据近几年来的经验选用本公司的现有抗生素药物自制药敏片,通过药敏试验在临床上取得十分好的效果。     一、药敏片的制备     1、纸片的选用    在医疗器械公司购买定性滤纸,用0.6cm的打孔器把滤纸打成圆形纸片,分别装入洁净的青

2、霉素小瓶内,50片/瓶,放入高压蒸汽锅内进行121℃灭菌20min,再放入60-100℃干燥箱烘干,冷却后放入洁净箱备用。     2、抗菌药液的配制   选用本公司的抗菌药物,按我们习惯常用的药物浓度进行配比,如冀农杆特,规格为100g/瓶,习惯常用兑水量为400斤水,即用分析天枰称取0.2g的杆特5ml灭菌生理盐水置于灭菌的青霉素小瓶内,充分溶解后再吸取0.1ml于另一灭菌青霉素瓶内,加入3.9ml的灭菌生理盐水即可。     3、纸片的处理   将以配制好的药物溶解加入装有纸片的青霉素小瓶内,每小瓶加0.5ml,应使纸片均匀的吸取药液,置4-8℃冰箱浸泡1小时左右,再将小瓶置37-5

3、0℃的温箱内2-3小时烘干。制备好的干燥药敏片要密封好,置冰箱内8℃以下冷藏或零下14℃以下冷冻保存备用。     二、培养基制作     1、选用市面上提供的营养琼脂,SS琼脂和麦康凯琼脂按说明配制     (1)SS琼脂培养基的制作:称取SS琼脂粉5.8克,加入蒸馏水100毫升,加热煮沸溶解即可,冷至55℃倾注无菌平皿中备用。     (2)营养琼脂培养基的制作:称取营养琼脂3.8克,加至100ml蒸馏水中摇均匀,溶解煮沸121℃,高压灭菌15分钟,冷却至38℃,倾注无菌平皿中备用。     (3)麦康凯琼脂培养基的制作:称取5克麦康凯琼脂,加入蒸馏水100ml溶解摇均匀,煮沸,

4、高压灭菌10磅15分钟,即可冷却至55℃,倾注无菌平皿中备用。     三、试验方法     1、剖检已死亡或即将死亡的家禽。     2、以无菌手术镊子陆续取出病料(心,肝,肺,脾均可)。     3、在酒精灯上把手术刀,镊子,接种环灭菌,再用接种环采取病料划在备好的培养基上,划线要均匀。     4、将备好的药敏片均匀贴在培养基上(各纸片中心距离不小于2.5cm)。     5、取出培养基观察有无抑菌圈,根据抑菌圈的有无或大小,并测量各种药敏纸片的抑菌圈的直径,单位为毫米,可筛选出敏感的药物。     四、体会     1、为了使试验安全可靠,所有试验操作过程均在超净工作台中进行。     2、制备纸片的滤纸的质量直接影响试验结果,所以要求所用滤纸吸水性要好,均匀,不能含无关的化学物及色素。     3、药物溶解性的高低可以影响药物敏感性试验结果,选用抗菌素配制药液时我们应该注意要反复摇晃使药物充分溶解。     4、制备好的药敏片要避免受潮,因此,要放在干燥器内贴好标签记录好。

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