荔枝核提取物干预非酒精性脂肪肝病的网络药理学分析及验证.pdf

张亚硕，阿如娜，马鑫彦，等.荔枝核提取物干预非酒精性脂肪肝病的网络药理学分析及验证 J.食品工业科技，2023，44（18）：1019.doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022100271ZHANG Yashuo,A Runa,MA Xinyan,et al.Network Pharmacological Analyze and Experimental Verification of Lychee KernelExtract Intervene of Non-alcoholic Fatty Liver DiseaseJ.Science and Technology of Food Industry,2023,44(18):1019.(in Chinesewith English abstract).doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022100271 未来食品 荔枝核提取物干预非酒精性脂肪肝病的网络荔枝核提取物干预非酒精性脂肪肝病的网络药理学分析及验证药理学分析及验证张亚硕，阿如娜，马鑫彦，庞宗然，鲁碧楠*（中央民族大学药学院，北京 100081）摘要：目的：运用网络药理学的方法，研究荔枝核提取物（Lychee kernel extract，LKE）干预非酒精性脂肪性肝病（Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）的作用及分析潜在机制。方法：通过中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）获取荔枝核的成分和作用靶点，通过疾病靶点数据 Genecard 获取 NAFLD 的疾病靶点，然后取交集，通过 Cytoscape 获取通路-靶点互作网络图，利用微生信网站进行 GO 生物过程分析和 KEGG 通路富集分析。建立饮食诱导的肥胖（diet-induced obsisity，DIO）小鼠 NAFLD 动物模型并用 LKE 灌胃给药。HE 染色观察肝脏脂质变化；试剂盒检测 TG、TC、ALT、AST 含量。结果：获得荔枝核潜在活性成分 18 个，与 NAFLD 疾病交集靶点 52 个，关键靶点为 INS、TNF、HSP90AA1，通过 KEGG 通路富集筛选得到信号通路 20 条，主要为癌症通路（pathways in cancer）、动脉粥样硬化通路（Fluid shear stress and atherosclerosis）、糖尿病并发症的信号通路（AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications）；模型组小鼠肝脏病变严重，给药组小鼠肝脏病变相对于模型组明显减轻，给药组小鼠血清转氨酶也明显降低，接近正常组，给药组血脂代谢也趋于正常组，且差异均具有显著性（P0.05）。结论：荔枝核可能通过作用于 INS、TNF、HSP90AA1 等靶点，调节脂质和动脉粥样硬化通路等起到治疗 NAFLD 的作用。关键词：荔枝核提取物，非酒精性脂肪性肝病，网络药理学，DIO 小鼠本文网刊:中图分类号：TS201.2 文献标识码：A 文章编号：10020306（2023）18001010DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2022100271NetworkPharmacologicalAnalyzeandExperimentalVerificationofLycheeKernelExtractInterveneofNon-alcoholicFattyLiverDiseaseZHANGYashuo，ARuna，MAXinyan，PANGZongran，LUBinan*（School of Pharmacy,Minzu University of China,Beijing 100081,China）Abstract：Objective:To investigate the effect and potential mechanism of lychee kernel extract in the intervention of non-alcoholic fatty liver disease(Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)based on network pharmacology.Methods:Thecomponents and action targets of litchi nuclei were obtained from the Pharmacology Database and Analysis Platform(TCMSP)within the Chinese Medicine System,the disease targets of NAFLD were obtained using disease target data fromGeneCard,the intersection and pathway-target interaction network diagram were obtained through Cytoscape,and the GObioprocess analysis and KEGG pathway enrichment analysis were performed using Bioinformatics website.This studyestablished an animal model with diet-induced obsisity mouse NAFLD and administered LKE via the gastric route.HEstaining indicated lipid changes in the liver.The biological kits detect content of TG,TC,ALT,and AST.Results:Eighteenpotential active ingredients of litchi nuclei were identified,and 52 targets intersected with NAFLD disease.The key targets 收稿日期：20221101 基金项目：硕士研究生自主科研项目（SZKY2021096）。作者简介：张亚硕（1997），女，硕士研究生，研究方向：临床中药学糖尿病研究，E-mail：。*通信作者：鲁碧楠（1984），女，博士，讲师，研究方向：糖尿病发病机制及中药/民族药干预研究，E-mail：。第 44 卷 第 18 期食品工业科技Vol.44 No.182023 年 9 月Science and Technology of Food IndustrySep.2023 were INS,TNF,and HSP90AA1.KEGG channel enrichment filtered 20 signal pathways,the main ones include:Pathwaysin cancer,fluid shear stress and atherosclerosis,AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications.The liver lesionsof the mice in the model group were severe,the liver lesions of the mice in the drug group were significantly reducedcompared with the model group,and the serum transaminases of the mice in the drug group were also significantly reduced,which was close to the normal group,and the blood lipid metabolism of the drug group also tended to be normal group,andthe differences were significant(P0.05).Conclusion:Litchi nuclei might play a role in the treatment of NAFLD by actingon such targets as INS,TNF and HSP90AA1,and modulate lipid and atherosclerotic pathways.Keywords：lychee kernel extract；non-alcoholic fatty liver disease；network pharmacology；DIO mice 非酒精性脂肪性肝病（Non-Alcoholic Fatty Li-ver Disease，NAFLD）是指除外由酒精和其他对肝脏有明确损害致病因素所引起的，以脂肪在肝细胞内过度沉积为主要病变特征的临床病理综合征1。与肥胖、脂代谢紊乱、糖尿病等多种代谢性疾病有紧密关联2。近年来，NAFLD 发病率逐年攀升，2019 年的一项 Meta 分析显示3，在全球 NAFLD 患病率中亚洲NAFLD 总体患病率为 30%，中国大陆 NAFLD 患病率也接近 30%。NAFLD 是肥胖和 T2DM 常见的并发症，极大的增加了这些慢性代谢性疾病的复杂性，并导致患者食欲不振，体能减弱，腹部会出现胀痛，对患者的生活质量产生了严重的不利影响47。目前针对 NAFLD 多采用饮食调理、加强锻炼、减肥手术治疗代谢状态、抗氧化保肝药等手段，达到了一定的干预作用。然而，对于 NAFLD 的治疗，目前还没有美国食品和药物管理局批准上市的特效药。所以对于NAFLD 的发病机制全面并且不断的深化研究以及开发治疗 NAFLD 新药物至关重要。以中医药为基础开发抗非酒精性脂肪肝药物具有辨证论治和多成分、多靶点、多途径的治疗优势和特色。荔枝核别名荔仁，形状大致为圆形或长圆形，其表面光滑亮泽，颜色呈棕色或棕红色。是我国民间常用的药食两用植物，具有理气、祛寒、止痛等功效。荔枝核的药理研究表明其具有三大作用包括抗氧化、降血糖、保肝8。已有实验证实荔枝核具有抑制乙肝病毒，抗肝纤维化，抗肝损伤等保肝作用9。有动物实验证实，对于肝炎模型动物，肝组织及血清超氧化物歧化酶（SOD），荔枝核具有提高其活力的作用，以及降低丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）活性的作用，使肝细胞免受肝类疾病损伤，从而实现治疗肝损伤作用8。已有实验证实，用给非酒精性脂肪性肝病大鼠模型灌胃荔枝核提取物，可使治疗组大鼠肝脏的脂肪变性、炎症和坏死改善，并显著降低丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇10。但到目前为止，尚不明确荔枝核延缓非酒精性脂肪性肝病的药效物质基础和作用机制。网络药理学通过计算机技术检索各类数据库信息，收集与有效化合物、疾病有关靶点，筛选并预测出最佳靶点及通路11。将网络药理学用于中药药效物质和作用机理的研究，因为中药的特点包括多成分、多靶点、多途径、整体调控等，所以中药结合网络药理学会成为中药研究的新方法12。本研究通过网络药理学的方法，探究预测荔枝核治疗非酒精性脂肪肝的作用机制，并通过功能和通路富集分析得到荔枝核治疗非酒精性脂肪肝的的相关信号通路和靶点，最后通过实验和分子对接进行验证，为荔枝核提取物在防治 NAFLD 的应用和开发方面提供了实验依据。1材料与方法 1.1材料与仪器C57BL/6 雄性小鼠SPF 级，8 周龄，（202 g），60 只，本研究动物实验伦理经中央民族大学生物与医学伦理审查委员会审批通过，审查号为：ECMUC-2021002A0。所有动物实验符合实验动物饲养管理和使用指南要求；荔枝核北京同仁堂提供，中央民族大学药学院临床中药学教研室鉴定为无患子科植物荔枝（Litchi chinensis Sonn.）的干燥种子；盐酸二甲双胍片华润双鹤药业股份有限公司；小鼠血清生化指标试剂盒南京建成生物科技有限公司；4%多聚甲醛固定液Biosharp 公司；HFD 饲料（D12492，60%脂肪供能比）/LFD 饲料（D12450J，10%脂肪供能比）斯贝福生物技术有限公司。正置白光拍照显微镜Nikon 公司；RNA 提取液Servicebio 公司；荧光定量 PCR 仪Bio-rad 公司；冷冻干燥机北京科德远扬科技有限公司。1.2实验方法 1.2.1 筛选荔枝核活性成分有相关文献研究表明，荔枝核具有很多药效成分，其药理作用研究表明有保肝作用8。通过 TCMSP（https:/old.tcmsp- 吸收、分布、代谢及排泄（ADME）进行其活性成分筛选，将口服生物利用度（oral bioavailability，OB）20%、类药性（druglikeness，DL）0.113作为筛选条件。1.2.2 荔枝核活性成分靶点预测在 TCMSP 上筛选出的荔枝核的活性成分通过 Uniprot（https:/www.uniprot.org/）网站将蛋白质名称转化为 Gene Symbol，将“Homo sapiens”设定为物种类型，得到靶点名称并去重14，筛选药物靶点。1.2.3 非酒精性脂肪性肝病靶点获取通过两个数据平台GeneCards（https:/www.genecards.org/）和 OMIM第 44 卷 第 18 期张亚硕，等：荔枝核提取物干预非酒精性脂肪肝病的网络药理学分析及验证 11 （https:/omim.org/），以“non-alcoholic fatty liver dis-ease”“NAFLD”等为检索关键词，获取 NAFLD 靶点；借助 UniProt（https:/www.uniprot.org/）数据库，将“Homo sapiens”设定为物种类型，得到靶点名称并去重，建立疾病靶点库。1.2.4 关键靶点获取分别将荔枝核活性成分靶点和非酒精性脂肪性肝病靶点输入在线平台（https:/bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/）制作靶点韦恩图，获取关键靶点。1.2.5 构建成分-作用靶点网络将药物和疾病的交集基因导入在线平台 STRING（https:/cn.string-db.org/）15，设定物种类型为“Homo sapiens”，可信度值设为 0.4，即可得到 PPI 互作网络图。1.2.6 关键靶点富集分析利用数据库，输入疾病与靶点的交集基因，进行生物富集分析和 GO 分析以及 KEGG 分析，以“Homo sapiens”为物种的设定类型，P0.4 为筛选条件16，下载其 tsv 格式的数据表格，将表格导入Cytoscape3.9.0 软件中，利用 cytoNCA 插件，依据介数中心数根据节点之间路径通过的边数或者边权重的大小进行排序。结果见图 2，其中 INS、TNF、HSP90AA1、PPARG、PPARA 为关联最为密切的基因靶点。12 食品工业科技2023 年 9 月 表 1 荔枝核提取物有效成分Table 1 Litchi kernel active ingredients编号化合物英文名称中文名称口服生物利用度（%）类药性MOL010691Ethyl palmitelaidate反式十六碳烯酸乙酯34.930.14MOL000131Eic亚油酸41.90.14MOL001494Mandenol亚油酸乙酯420.19MOL001600Copaene蒎烯29.470.12MOL001641Methyl linoleate亚油酸甲酯41.930.17MOL002573-patchoulene-广藿烯50.690.11MOL002883Ethyl oleate（NF）油酸乙酯32.40.19MOL000357Sitogluside西多葡萄糖苷20.630.62MOL000358Beta-sitosterol-谷甾醇36.910.75MOL000359Sitosterol谷甾醇36.910.75MOL000449Stigmasterol西托糖苷43.830.76MOL002003（-）-Caryophyllene oxide石竹素32.670.13MOL000057Dibp邻苯二甲酸二异丁酯49.630.13MOL000066Alloaromadedrene香树烯53.460.1MOL000675Oleic acid油酸33.130.14MOL000676Dibutyl phthalate邻苯二甲酸二丁酯64.540.13MOL000073Ent-epicatechin表儿茶酸48.960.24MOL000098Quercetin槲皮素46.430.28 表 2 荔枝核提取物其他成分Table 2 Other components of lychee kernel extract编号化合物英文名称中文名称口服生物利用度（%）类药性MOL0106862-Ethoxypropane2-乙氧丙烷34.270MOL010687Leucinol（S）-（-）-2-甲基丁胺72.670MOL010688Lama甲基丙烯酸月桂酯130.1MOL010693Hyaluronic acid_qt透明质酸40.280.06MOL010694Dibutyl acetal二丁烷23.020.02MOL010695（2S）-4-acetyloxybutan-2-yl acetate乙酸龙脑酯37.170.03MOL001393Myristic acid肉豆蔻酸21.180.07MOL001394Oktadekan正十八烷9.810.09MOL001452Protocatechualdehyde原儿茶醛38.350.03MOL000149Inositol肌醇18.860.05MOL001599-cubebol-毕橙茄醇64.810.09MOL001747Tetracosane正二十四烷8.280.24MOL000193（Z）-caryophyllene-石竹烯30.290.09MOL002092Antioxidant No.332,4-二叔丁基酚26.740.06MOL002117-sesquiphellandrene-倍半水芹烯23.680.06MOL000247（Z,Z）-farnesol里哪醇41.140.06MOL002513Xanthorrhizol束骨姜黄醇（RG）32.10.07MOL002850Butylated hydroxytoluene抗氧剂26440.020.07MOL003483Ethyl octoate辛酸乙酯33.050.03MOL003527Tyranton二丙酮醇58.340.01MOL000415Rutin芸香叶苷3.20.68MOL004419Globulol绿花白千层醇19.940.12MOL000514Nonacosane正二十九烷8.120.39MOL005306Acetal醋酸甲地孕酮26.40.01MOL000550Meso-galactitol半乳糖醇10.690.03MOL006312Azulol愈创奥15.150.07MOL006735Furfuranol糠醇48.270.01MOL000677（1R,4R）-4-isopropyl-1,6-dimethyltetralin顺-菖蒲烯17.470.08MOL000069Palmitic acid棕榈酸19.30.1MOL000714Hyacinthin苯乙醛38.650.02第 44 卷 第 18 期张亚硕，等：荔枝核提取物干预非酒精性脂肪肝病的网络药理学分析及验证 13 疾病靶点药物靶点571(72.9%)52(6.6%)160(20.4%)图 1 药物与疾病靶点交集图Fig.1 Intersection of drug and disease target 表 3 52 个交集基因Table 3 52 intersecting genes交集基因交集基因INSNOS3PPARGEIF6TNFCYP3A4PPARAICAM1SERPINE1GSTM1UCP2TP53CRPPON1ACACAHIF1AFABP1NFE2L2IL1BCYP1A2LPLIL1AIL10CCL2GCGCOL3A1HMOX1CHUKSOD1F2HMGCRADRB2CETPNR1I2INSRUCP3GSTP1F10CXCL10RELASPP1PPARDPTGS2CATCAV1HSP90AA1EGFRTHBDINSAHSA1CTSDNOS3 2.4GO 和 KEGG 富集分析对荔枝核治疗 NAFLD 的潜在的 52 个靶点通过 metascape 数据库进行 GO 富集分析，结果显示（如图 3）GO 功能富集分析中得到生物过程（BP）条目 484 条，细胞组成（CC）条目 7 条，分子功能（MF）条目 74 条，GO 富集分析可得 22 个差异基因参与的生物过程主要是氧化应激的过程（response to oxida-tive stress）（P0.01），细胞组分主要是膜微区（mem-brane microdomain）、脂筏（membrane raft）（P0.01），分子功能主要为蛋白酶结合（P0.01）；KEGG 通路富集筛选取前 20 条信号通路（P0.05），结果显示（如图 4）涉及癌症通路（pathways incancer）、动脉粥样硬化通路（Fluid shear stress andatherosclerosis）、糖尿病并发症的信号通路（AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications）、氧化应激通路（Chemical carcinogenesis-reactive oxygenspecies）等，通过微生信网站将结果可视化。2.5“成分-靶点-通路-疾病”网络图构建及分析通过 Cytoscape 3.9.0 软件构建“成分-靶点-通路-疾病”四部分联系网络图，结果显示（如图 5）Excel“荔枝核成分-靶点”“靶点-作用通路”“疾病-作用通路”的列表，将其导入 Cytoscape3.9.0 中构建网络。按“介数中心数”值调节节点在网络中的大小。18 个有效成分中，与通路直接作用的成分有 5 个，分别是 EIC、亚油酸甲酯（METHYL LINOLEATE）、-广藿烯（-patchoulene）、谷甾醇（sitogluside）、钴烯（copaene）等，也充分说明荔枝核是多成分-多靶点在NAFLD 中发挥作用。2.6分子对接结果如图 6，根据 PPI 互作网络分析的靶点结果，对续表2编号化合物英文名称中文名称口服生物利用度（%）类药性MOL007209Adamantane金刚烷53.570.05MOL000723Trans-2,4-decadienal反式-2,4-癸二烯醛51.030.02MOL007294Procyanidin A2原花青素A212.250.4MOL000860Stearic acid硬脂酸17.830.14MOL000879Methyl palmitate棕榈酸甲酯18.090.12MOL000885Dodekan正十二烷17.740.02 图 2 荔枝核蛋白互作网络图Fig.2 Litchi nucleoprotein interaction network diagram 14 食品工业科技2023 年 9 月 GO:1901652:response to peptideGO:0031667:response to nutrient levelsGO:0000302:response to reactive oxygen speciesGO:0062012:regulation of small molecule metabolic processGO:2001233:regulation of apoptotic signaling pathwayGO:0009410:response to xenobiotic stimulusGO:1905952:regulation of lipid localizationGO:2000377:regulation of reactive oxygen species metabolic processGO:0009266:response to temperature stimulusGO:0032102:negative regulation of response to external stimulusGO:0003013:circulatory system processGO:1902893:regulation of miRNA transcriptionGO:0043408:regulation of MAPK cascadeGO:0045596:negative regulation of cell differentiationGO:0050999:regulation of nitric-oxide synthase activityGO:0009636:response to toxic substanceGO:0009314:response to radiationGO:1903034:regulation of response to woundingGO:0050708:regulation of protein secretionGO:0001890:placenta development0.02.55.07.510.012.515.017.520.0log10(P)图 3 GO 荔枝核治疗 NAFLD 疾病的主要靶点的 GO 富集分析结果Fig.3 GO enrichment analysis results of the main targets of GO litchi nucleus in the treatment of NAFLD disease Fluid shear stress and atherosclerosisPathways in cancerLipid and atherosclerosisAGE-RAGE signaling pathway in diabetic complicationsChemical carcinogenesis-reactive oxygen speciesInfluenza AIL-17 signaling pathwayHuman cytomegalovirus infectionCoronavirus disease-COVID-19TNF signaling pathwayChagas diseaseAlcoholic liver diseaseYersinia infectionToll-like receptor signaling pathwayNOD-like receptor signaling pathwayNF-kappa B signaling pathwayHepatitis CC-type lectin receptor signaling pathwayAmoebiasisDescriptionKEGG-Enrichment0.150.200.250.30GeneRatiolog10(P value)Count252015106810121416图 4 KEGG 富集分析结果Fig.4 Results of KEGG enrichment analysis 图 5 “成分-靶点-通路-疾病”相互作用网络图Fig.5 Component-target-pathway-disease interaction network diagram 第 44 卷 第 18 期张亚硕，等：荔枝核提取物干预非酒精性脂肪肝病的网络药理学分析及验证 15 互作关系最密切的五个靶点做了分子对接验证，我们得到以下结果：化合物和靶点蛋白存在很好的结合作用。且五个对接结果的结合能均小于3.8 kJ/mol，具体结合能见表4，据结合模式可以很清晰的看到化合物与蛋白口袋相结合的氨基酸残基，如：LZH 与 INS、HSP90AA1、PPARA、PPARG 结合的活性氨基酸残基有ALA-14、ASN-106、GLN-277、TYR-119、GLU-314 等。表 4 分子对接结合能Table 4 Molecular docking binding energy结合主体结合能（kJ/mol）INS与反式十六碳烯酸乙酯3.8HSP90AA1与西托糖苷7.8TNF与亚油酸5.8PPARA与亚油酸7.1PPARG与亚油酸6.7 2.7荔枝核提取物对小鼠肝脏脂肪病变的影响如图 7 所示，正常组（CON）小鼠的肝细胞排列有序，厚薄均匀且富含弹性的结缔组织构成了正常组的肝细胞，肝小叶中央为中央静脉，肝细胞和肝血窦在其周围以放射状形状排布，肝细胞排列规则、整齐，肝窦无明显扩张或挤压；未见明显炎症改变（如图中方框圈出区域）。模型组（MOD）小鼠中央静脉、汇管区周围及肝实质内均可见大量的肝细胞呈气球样变，细胞肿胀，胞质疏松淡染，多见胞质呈空泡状，多见肝细胞脂肪变性，可以看到，胞质内有数量不等的圆形空泡（如图中方框圈出区域）。荔枝核提取物介入治疗后，给药组低中高剂量组中肝脏组织结构均得到改善，肝细胞排列有序，组织结构清晰，脂质液泡不明显，接近于对照组（如图中方框圈出区域），意味着荔枝核提取物可以减少肝脏组织中的脂肪沉积并改善肝脏组织结构。2.8荔枝核提取物对小鼠血清转氨酶和脂代谢的影响如图 8 与对照组相比，谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）的活性在模型组中显著升高，经荔枝核提取物干预后有所降低，说明荔枝核提取物对NAFLD 小鼠肝功能保护具有良好效果。如图 9 与模型组相比，荔枝核提取物可以明显降低小鼠血清胆固醇（TC）（图 9A）、甘油三酯（TG）（图 9B）和低密度脂蛋白（LDLC）（图 9C）含量及提高高密度脂（HDLC）（图 9D）蛋白含量，这一结果说明荔枝核提取物有明显改善 NAFLD 小鼠血脂代谢紊乱的作用。2.9荧光定量 PCR 实验验证分别对各组取 3 只样本对其进行 PCR 操作，同时选用 PPI 互作网络得到的关系最密切的前三个基因做目的基因。由图 10 可知，与模型组相比，荔枝核提取物对 INS（A）基因表达影响不大，INS 基因表达倍数基本相同；与模型组相比，荔枝核提取物高剂量组有降低主要调控炎症反应的肿瘤坏死因子TNF（B）基因的表达的趋势，由于样本量较少，统计 AINS-EPTNF-EICPPARA-EICPPARG-EICHPS90AA1-xttgCDEB图 6 LZH 与 INS、TNF、HSP90AA1、PPARG、PPARA 结合Fig.6 LZH is combined with INS,TNF,HSP90AA1,PPARG,PPARA注：A 为 INS 与反式十六碳烯酸乙酯结合，B 为 HSP90AA1 与西托糖苷结合，C 为 TNF 与亚油酸结合，D 为 PPARA 与亚油酸结合，E 为 PPARG 与亚油酸结合。ConLZH-LLZH-MLZH-HMODMET200图 7 小鼠肝脏 HE 染色结果（200）Fig.7 Results of HE staining of mouse liver(200)注：LZH-L 为荔枝核提取物低剂量组，LZH-M 为荔枝核提取物中剂量组，LZH-H 为荔枝核提取物高剂量组。16 食品工业科技2023 年 9 月 AAST(U/L)300400*2001000对照组模型组二甲双胍组LZH-65LZH-260LZH-1040BALT(U/L)150200100500对照组模型组二甲双胍组LZH-65LZH-260LZH-1040图 8 小鼠血清转氨酶 AST、ALT 的变化Fig.8 Changes of serum aminotransferase AST and ALT in mice注：与模型组比较，*表示有显著差异 P0.05；*表示有极显著差异 P0.01；*表示 P0.001；*表示 P0.05）,实验数据量少，存在一定的局限性；由图 10C 可得，热休克蛋白 HSP90AA1 基因表达在模型组中表达量较高，HSP90AA1 其具有高度保守性，具有包括细胞保护、抗凋亡和免疫调节等多种生物学功能，给药低中 CHSP90AA1基因表达倍数2.01.01.50.50.0对照组模型组阳性药组LZH-低剂量组LZH-中剂量组LZH-高剂量组图 10 荧光定量 INS、TNF、HSP90AA1 基因表达Fig.10 Fluorescence quantitative expression of INS,TNF,HSP90AA1 genes 18 食品工业科技2023 年 9 月剂量组对 HSP90AA1 的基因表达影响不大，但是阳性药组却可以降低 HSP90AA1 的基因表达，本实验具有一定的局限性，并且 HSP90AA1 基因在肝脏方面的文献报道较少，荔枝核药物对 NAFLD 疾病的治疗作用在 HSP90AA1 基因表达上尚不明确，有待进一步研究。本实验运用网络药理学，预测了荔枝核提取物治疗非酒精性脂肪性肝病的活性成分与重要靶点，然后用 STRING 数据库对荔枝核有效成分与 NAFLD疾病靶点做互作网络分析，并进一步采用分子对接对互作网络关系密切的五个靶点进行验证，以及动物体外实验对荔枝核提取物的药效进行了进一步探索，初步明确了荔枝核提取物的主要活性成分可能是多靶点、多途径抑制脂质从头合成和氧化应激从而发挥抗脂肪肝作用，为后续荔枝核提取物的抗非酒精性脂肪性肝病分子机制作用的深入研究思路提供了一定方向。参考文献 1 CHALASANI N,YOUNOSSI Z,LAVINE J E,et al.The di-agnosis and management of nonalcoholic fatty liver disease:Prac-tice guidance from the American Association for the study of liverdiseasesJ.Hepatology，2018，67（1）：328357.2 王宇威,刘近春,安秀琴,等.肠道微生态与非酒精性脂肪性肝 病 研 究 进 展 J.中 国 现 代 医 生，2022，60（15）：192196.WANG Yuwei,LIU Jinchun,AN Xiuqin,et al.Research progresson intestinal microecology and nonalcoholic fatty liver diseaseJ.Modern Chinese Doctor，2022，60（15）：192196.3 LI J,ZOU B,YEO Y H,et al.Prevalence,incidence,and out-come of non-alcoholic 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