乙肝表面抗原及乙肝两对半检测1.ppt

乙肝表面抗原及乙肝两对半检测(jin c)第一页，共四十页。主要(zhyo)内容检测方法及原理检测方法及原理胶体金免疫层析(cn x)法 酶免疫技术 免疫定量分析法第二页，共四十页。检测(jin c)的方法及原理第三页，共四十页。检测方法(fngf)及原理胶体金免疫胶体金免疫(miny)层析法层析法Part 1 胶体金免疫(mi(miny)ny)层析法 将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。第四页，共四十页。检测(jin c)方法及原理胶体金免疫胶体金免疫(miny)层析法层析法Part 2酶免疫(mi(miny)ny)技术 以酶标记的抗体（或抗原）作为主要试剂，将抗原抗体的特异性和酶高效催化反应的专一性相结合的一种免疫检测技术。酶结合物既保留抗体（或抗原）的免疫学活性，又保留酶对底物的催化活性。特点：灵敏度高、特异性强、准确性好、试剂稳定、方法简便易行第五页，共四十页。检测(jin c)方法及原理Part 2两两对对半半ELISAELISA检测检测(ji(jin c)n c)原原理理 ELISAELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体聚苯乙烯微量聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子小分子(fnz)(fnz)抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISAELISA双抗体夹心法及双抗体夹心法及ELISAELISA间接法。间接法。第六页，共四十页。检测方法(fngf)及原理Part 2两两对对半半ELISAELISA检测检测(ji(jin c)n c)原理原理 1 HBsAg：双抗体夹心法 正比(zhngb)单克隆HBsAbHBsAg多克隆HBsAbHRP 2 HBsAb：双抗原夹心法 正比 HBsAgHBsAbHBsAgHRP 第七页，共四十页。检测(jin c)原理Part 2两两对对半半ELISAELISA检测检测(ji(jin c)n c)原理原理 3 HBeAg：双抗体夹心法 正比 单克隆HBeAbHBeAg多克隆HBeAbHRP 4 HBeAb：竞争(jngzhng)抑制法 反比 多克隆HBeAbHBeAgHBeAbHRP/HBeAb（标本）5 HBcAb：竞争抑制法 反比 HBcAgHBcAbHRP/HBcAb（标本）第八页，共四十页。检测(jin c)方法及原理Part 3免疫免疫(mi(miny)ny)定量分析方法定量分析方法 近年来，随着抗病毒药物的不断问世，以及抗病毒药物近年来，随着抗病毒药物的不断问世，以及抗病毒药物疗效与乙肝病毒及其血清标志物水平之间关系的相关研究疗效与乙肝病毒及其血清标志物水平之间关系的相关研究不断深入，单纯不断深入，单纯HBsAgHBsAg定性检测在疗效的监测，特别是根据其定性检测在疗效的监测，特别是根据其早期变化对远期疗效进行预测方面，显得早期变化对远期疗效进行预测方面，显得(xin de)(xin de)越来越难以满越来越难以满足要求。而且，很多学者对一些新药上市注册临床试验结果足要求。而且，很多学者对一些新药上市注册临床试验结果进行分析发现，进行分析发现，HBsAgHBsAg的定量检测在抗病毒治疗疗效的监测方面的定量检测在抗病毒治疗疗效的监测方面确有非常重要的意义。因此，确有非常重要的意义。因此，HBsAgHBsAg的定量检测就显得十分重要。的定量检测就显得十分重要。第九页，共四十页。检测方法(fngf)及原理Part 3免疫免疫(mi(miny)ny)定量分析方定量分析方法法 要想完成要想完成HBsAgHBsAg定量检测定量检测(jin c)(jin c)，必须满足以下条件：，必须满足以下条件：采用自动分析系统，采用自动分析系统，有可溯源的标准品，有可溯源的标准品，测定结果与标准品之间有线性关系。测定结果与标准品之间有线性关系。第十页，共四十页。检测方法(fngf)及原理Part 3免疫定量分析免疫定量分析(dnglingfnx)(dnglingfnx)方法方法 化学发光技术是近二十年来发展非常迅速的非放射性免疫分析技术。化学发光免疫测定（Chemiluminesent Immunoassay，CLIA）是免疫测定技术继酶免技术（EIA）、放免技术（RIA）、荧光免疫技术（FIA）之后发展的一项新兴测定技术。由于(yuy)这种测定具备很高的特异性和很小的干扰，因此，如同RIA、FIA等一样利用免疫反应的特异性和化学发光本身的信号特异性形成了目前所说的化学发光免疫测定（CLIA）技术。第十一页，共四十页。检测方法(fngf)及原理Part 3免疫免疫(mi(miny)ny)定量分析方定量分析方法法 原理：化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清从而对人体进行免疫分析的医学检验仪器。将定量的患者血清和辣根过氧化物（HRP）加入到固相包被有抗体的白色不透明微孔板中，血清中的待测分子与辣根过氧化物酶的结合物和固相载体上的抗体特异性结合。分离洗涤未反应的游离成分。然后，加入鲁米诺Luminol发光底液，利用化学反应释放的自由能激发中间体，从基态回到激发态，能量以光子的形式释放。此时，将微孔板置入分析仪内，通过仪器内部的三维传动系统，依次由光子计数器读出各孔的光子数。样品中的待测分子浓度根据标准品建立的数学模型进行定量分析。最后，打印数据报告，以辅助临床(ln chun)诊断。第十二页，共四十页。方法(fngf)步骤 实验实验步骤步骤 备注备注(bizh)(bizh)：因各厂家生产试剂操作方：因各厂家生产试剂操作方法法不同，故参不同，故参见见试剂盒试剂盒说明书说明书第十三页，共四十页。结果(ji gu)判断及临床意义一、结果(ji gu)判断第十四页，共四十页。结果(ji gu)判断Part 1胶体金免疫胶体金免疫(mi(miny)ny)层析法结果判断层析法结果判断 以艾康生物检测试剂盒为例：以艾康生物检测试剂盒为例：阳性（+）：两条红色条带出现，一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）。阳性结果表明：标本中含有待测物质。阴性（-）：仅质控区（C）出现一条红色条带，在测试区（T）内无红色条带出现。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。无效：质控区（C）未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试纸条已变质损坏。在任何情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。注意：测试区（T）内的红色条带可显现出颜色深浅的现象。但是(dnsh)，在规定的观察时间内，不论该色带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应判为阳性结果。第十五页，共四十页。结果(ji gu)判断Part 1胶体金免疫层析胶体金免疫层析(cn(cn x)x)法结果判断法结果判断阳性（+）：仅质控区（C）出现一条(y tio)红色条带，在测试区（T）内无红色条带出现。阳性结果表明：标本中含有待测抗体。弱阳性（+）：质控区（C）出现一条红色条带，在测试区（T）内有非常弱的红色条带出现。弱阳性结果表明：标本中含有少量待测抗体。阴性（-）：两条红色条带出现，一条位于测试区（T）内，另一条位于质控区（C）。阴性结果表明：标本中检测不出待测抗体。无效：质控区（C）未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试纸条已变质损坏。在任何情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。第十六页，共四十页。结果(ji gu)判断Part 2酶免疫酶免疫(mi(miny)ny)技术技术 以上海科华试剂盒为例：以上海科华试剂盒为例：1 HBsAg：COV=阴性对照(duzho)平均OD值+0.1 样本OD值/COV值1.0为阳性 样本OD值/COV值1.0为阴性2 HBsAb、HBeAg：COV=阴性对照平均OD值2.1（OD0.05按0.05计算）当样本OD值COV值为阳性 当样本OD值COV值为阴性第十七页，共四十页。结果(ji gu)判断Part 2酶免疫酶免疫(mi(miny)ny)技术技术 3 HBeAb：COV（阴性对照(duzho)平均OD值阳性对照(duzho)平均OD值）0.5 标本OD值COV为阴性，COV为阳性4 HBcAb：原倍血清COV阴性对照平均OD值0.3 1:30稀释血清COV阴性对照平均OD值0.5 标本OD值COV为阴性，COV为阳性第十八页，共四十页。二、临床意义第十九页，共四十页。临床意义 第二十页，共四十页。临床意义 第二十一页，共四十页。临床意义 HBsAgHBsAg的定量检测是目前的定量检测是目前(mqin)(mqin)监测和预测监测和预测抗乙肝病毒治疗后应答的新工具，结合抗乙肝病毒治疗后应答的新工具，结合HBV HBV DNADNA及乙肝病毒及乙肝病毒e e抗原（抗原（HBeAgHBeAg）的阴转和血清）的阴转和血清转换，我们能更准确地预测患者的近期和远期转换，我们能更准确地预测患者的近期和远期抗病毒治疗的疗效。因此，该检测已在临床上抗病毒治疗的疗效。因此，该检测已在临床上得以广泛开展，特别是被用于判定抗病毒治疗得以广泛开展，特别是被用于判定抗病毒治疗疗效，以及根据早期下降的速度和幅度来预测疗效，以及根据早期下降的速度和幅度来预测远期疗效及决定疗程上。远期疗效及决定疗程上。第二十二页，共四十页。临床意义 聚乙二醇干扰素（聚乙二醇干扰素（Peg IFNPeg IFN）-2a-2a治疗乙肝患者的研治疗乙肝患者的研究结果显示，治疗究结果显示，治疗1212周时周时HBsAgHBsAg定量定量1500 IU/ml20000 IU/ml20000 IU/ml（约占治疗人群的（约占治疗人群的16%16%）,则治疗结束停药则治疗结束停药1 1年时的年时的HBeAgHBeAg血清转换率仅为血清转换率仅为19%19%（8/438/43例）。例）。第二十三页，共四十页。临床意义 此外，研究还发现此外，研究还发现(fxin)(fxin)，患者治疗后，患者治疗后HBsAgHBsAg下降下降速度和幅度还与其长期清除率有关。在治疗速度和幅度还与其长期清除率有关。在治疗2424周周HBsAg1500 IU/mlHBsAg1500 IU/ml且同时出现且同时出现HBeAgHBeAg血清转换的患者血清转换的患者中，有中，有20%20%可获得可获得HBsAgHBsAg清除。因此，清除。因此，HBsAgHBsAg定量可以定量可以用于指导治疗。而且，治疗结束时用于指导治疗。而且，治疗结束时HBsAgHBsAg水平越低，水平越低，停药后随访的停药后随访的HBsAgHBsAg清除率越高。清除率越高。第二十四页，共四十页。临床意义 布鲁内托（布鲁内托（BrunettoBrunetto）研究显示，无论是）研究显示，无论是HBeAgHBeAg（+）还是）还是HBeAgHBeAg（-）的慢性乙肝患者，在接受干扰素治疗）的慢性乙肝患者，在接受干扰素治疗4848周后，若周后，若其其HBsAgHBsAg定量定量10 IU/ml10 IU/ml10 IU/ml（占（占88%88%，171/194171/194例），随访例），随访3 3年，仅有年，仅有2%2%（4/1744/174例）的患者例）的患者(hunzh)(hunzh)出现出现HBsAgHBsAg消失。同样，治疗消失。同样，治疗4848周时周时HBsAgHBsAg下降下降2 log2 log的患者，的患者，随访随访3 3年，年，HBsAgHBsAg消失率高达消失率高达42%42%；下；下降降2 log2 log患者中，仅有患者中，仅有3%3%的的HBsAgHBsAg消失。因此，在治疗结束时，消失。因此，在治疗结束时，对于那些对于那些HBV DNA HBV DNA 阴转并出现阴转并出现HBeAgHBeAg血清转换的患者，如果血清转换的患者，如果HBsAgHBsAg水平下降不明显，可考虑延长疗程，以进一步提高水平下降不明显，可考虑延长疗程，以进一步提高HBeAgHBeAg血清转换率和血清转换率和HBsAgHBsAg清除率。清除率。第二十五页，共四十页。临床意义检测检测(jin c)模式分析模式分析Part 4检测(ji(jin c)n c)结果模式分析果模式分析HBsAgHBsAgHBsAbHBsAbHBeAgHBeAgHBeAbHBeAbHBcAbHBcAbPreS1AgPreS1AgPreS1AbPreS1Ab简要意义简要意义乙肝乙肝表面表面抗原抗原乙肝乙肝表面表面抗体抗体乙肝乙肝E抗原抗原乙肝乙肝E抗抗体体乙肝乙肝核心核心抗体抗体乙肝乙肝前前S1抗原抗原乙肝乙肝前前S1抗体抗体HBsAgHBsAg阳性提示阳性提示乙肝乙肝携携带带；HBeAg、pre-S1Ag、阳、阳性提示病毒复制性提示病毒复制,传传染性染性强强；HBsAb、HBeAb阳性阳性提示机体具提示机体具备备免疫力，免疫力，趋趋于恢复，于恢复，pre-S1Ab阳性阳性提示肝提示肝细细胞有阻断胞有阻断乙肝乙肝病毒感染的功能。病毒感染的功能。-没有没有乙肝乙肝病毒感染，不具病毒感染，不具备备免疫力。免疫力。-+-接种疫苗，接种疫苗，乙肝乙肝恢复，具恢复，具备备免疫力。免疫力。-+急性急性乙肝乙肝恢复或接种恢复或接种进进口疫苗，具口疫苗，具备备免疫力。免疫力。-+-+接种疫苗或少量接种疫苗或少量乙肝乙肝病毒感染后恢复，免疫力病毒感染后恢复，免疫力强强。+-表面抗原携带；急性表面抗原携带；急性乙肝乙肝病毒感染潜伏期后期。病毒感染潜伏期后期。+-+-+-急性急性乙肝乙肝早期，病毒复制，有早期，病毒复制，有传传染性。染性。+-+-+-急慢性急慢性乙肝乙肝，病毒复制，有，病毒复制，有传传染性染性（即大三阳）即大三阳）。+-+-+-+急慢性急慢性乙肝乙肝，恢复期或治，恢复期或治疗疗有效，有有效，有传传染性。染性。+-+-急慢性急慢性乙肝乙肝，传传染性弱或没有染性弱或没有传传染性。染性。第二十六页，共四十页。临床意义HBsAgHBsAgHBsAbHBsAbHBeAgHBeAgHBeAbHBeAbHBcAbHBcAbPreS1AgPreS1AgPreS1AbPreS1Ab简要意义简要意义乙肝乙肝表面表面抗原抗原乙肝乙肝表面表面抗体抗体乙肝乙肝E抗原抗原乙肝乙肝E抗抗体体乙肝乙肝核心核心抗体抗体乙肝乙肝前前S1抗原抗原乙肝乙肝前前S1抗体抗体HBsAgHBsAg阳性提示阳性提示乙肝乙肝携携带带；HBeAg、pre-S1Ag、阳性提示病毒复制阳性提示病毒复制,传传染性染性强强；HBsAb、HBeAb阳性提示机体具阳性提示机体具备备免疫力，免疫力，趋趋于恢复，于恢复，pre-S1Ab阳性提示肝阳性提示肝细细胞有阻断胞有阻断乙肝乙肝病毒感染的功病毒感染的功能。能。+-+-急慢性急慢性乙肝乙肝，病毒复制有，病毒复制有传传染性，染性，乙肝乙肝E抗原抗原变变异。异。+-+-急慢性急慢性乙肝乙肝，没有，没有传传染性或染性或传传染性弱染性弱（即小三（即小三阳）阳）。+-+-+急慢性急慢性乙肝乙肝或或乙肝乙肝治治疗疗后恢复期，后恢复期，传传染性弱。染性弱。+-+-急慢性急慢性乙肝乙肝，病毒复制有，病毒复制有传传染性，染性，乙肝乙肝E抗原抗原变变异。异。-+-乙肝乙肝核心抗核心抗隐隐性携性携带带，有，有乙肝乙肝既往有感染史。既往有感染史。-+-急性急性乙肝乙肝恢复期或既往有感染史。恢复期或既往有感染史。-+-+-+乙肝乙肝恢复期或急性恢复期或急性乙肝乙肝既往有既往有轻轻度度乙肝乙肝病毒感病毒感染史。染史。+-+-慢慢乙肝乙肝病毒感染携病毒感染携带带，传传染性弱或没有染性弱或没有传传染性。染性。+-+-急性急性乙肝乙肝趋趋于恢复，于恢复，乙肝乙肝携携带带，病毒复制有，病毒复制有传传染性。染性。-+-提示提示乙肝乙肝病毒早期感染，有病毒早期感染，有传传染性，建意染性，建意检测检测HBV-DNA。第二十七页，共四十页。临床意义 一、何谓一、何谓PreS1AgPreS1Ag？PreS1Ag PreS1Ag是乙型肝炎病毒基因组前是乙型肝炎病毒基因组前S1S1区编码的前蛋区编码的前蛋白，具有很强的免疫原性，是病毒表面抗原白，具有很强的免疫原性，是病毒表面抗原(HBsAg)(HBsAg)的组的组成成分。它只存在于具有传染性的完整成成分。它只存在于具有传染性的完整(wnzhng)(wnzhng)的乙肝的乙肝病毒颗粒上，是黏附和侵袭人体肝细胞的主要因子。病毒颗粒上，是黏附和侵袭人体肝细胞的主要因子。第二十八页，共四十页。临床意义 二、检测二、检测PreS1AgPreS1Ag的意义的意义 1.PreS1Ag1.PreS1Ag的检测能够弥补乙肝的检测能够弥补乙肝五五项检测的不足项检测的不足 PreS1AgPreS1Ag出现在急性乙肝感染的最早期，在转氨酶升高前，即可查出，是早期诊断出现在急性乙肝感染的最早期，在转氨酶升高前，即可查出，是早期诊断乙肝病毒感染的标志。乙肝病毒感染的标志。急性乙肝急性乙肝PreS1AgPreS1Ag转阴越早，预后越好，转阴越早，预后越好，提示提示(tsh)(tsh)病毒清除和病情好转。反之，病毒清除和病情好转。反之，PreS1AgPreS1Ag持续阳性，则提示将发持续阳性，则提示将发展成慢性肝炎。展成慢性肝炎。抗抗HBe(HBe()慢性乙肝约占慢肝的慢性乙肝约占慢肝的30%50%30%50%，检测，检测PreS1Ag(PreS1Ag()，提示病毒在机体内继续复制，具有传染性，患者容易演变，提示病毒在机体内继续复制，具有传染性，患者容易演变为肝硬化或肝癌。加查为肝硬化或肝癌。加查PreS1AgPreS1Ag，弥补了因，弥补了因HBeAgHBeAg的缺失造成的诊治困的缺失造成的诊治困难。难。在乙肝无症状携带者中，有一定比例在乙肝无症状携带者中，有一定比例HBeAb(HBeAb()者，如果者，如果PreS1Ag(PreS1Ag()可反映出病毒并没有被清除，在体内复制仍然活跃，肝可反映出病毒并没有被清除，在体内复制仍然活跃，肝脏存在潜在的病理损伤。脏存在潜在的病理损伤。抗病毒治疗，检测抗病毒治疗，检测PreS1AgPreS1Ag可作为可作为治疗前的患者筛查治疗前的患者筛查(适应症适应症)和治疗后的疗效判断。和治疗后的疗效判断。第二十九页，共四十页。临床意义 2.PreS1Ag2.PreS1Ag检测能够加强检测能够加强HBVDNAHBVDNA检测的作用检测的作用 因因病毒基因变异的影响，个别病毒变异株感染的患者病毒基因变异的影响，个别病毒变异株感染的患者HBVDNAHBVDNA检测为阴性，检测为阴性，PreS1AgPreS1Ag的检测可以防止漏检，并提示可能存在的检测可以防止漏检，并提示可能存在病毒变异迹象。病毒变异迹象。PreS1AgPreS1Ag是免疫测定技术，具有快速、是免疫测定技术，具有快速、直接、简便的特点。直接、简便的特点。PreS1AgPreS1Ag的检测与的检测与HBVDNAHBVDNA检测在乙肝检测在乙肝的诊断方面的诊断方面(fngmin)(fngmin)相互补充和加强，就像相互补充和加强，就像HBVDNAHBVDNA不能替代不能替代乙肝乙肝五五项的检测一样，同样项的检测一样，同样HBVDNAHBVDNA不能替代不能替代PreS1AgPreS1Ag的检的检测。测。第三十页，共四十页。临床意义 三三、何谓何谓PreS1AbPreS1Ab？是是HBVHBV的中和抗体，能阻止的中和抗体，能阻止HBVHBV侵入肝细胞，侵入肝细胞，抗抗-PreS1Ab-PreS1Ab在急性期和恢复早期出现，预示病毒在急性期和恢复早期出现，预示病毒正在或已被清除，疾病预后良好。乙型肝炎病毒正在或已被清除，疾病预后良好。乙型肝炎病毒 前前S1S1抗体抗体 可作为急性乙型肝炎临床预后早期诊断可作为急性乙型肝炎临床预后早期诊断(zhndun)(zhndun)的血清学指标。的血清学指标。第三十一页，共四十页。临床意义 四、四、PreS1AbPreS1Ab意义：意义：1 1前前S1S1抗体是急性抗体是急性 HBV HBV 感染最早期出现的抗体比感染最早期出现的抗体比 HBsAb HBsAb 和抗和抗 HBcIgM HBcIgM 出现早，起到了临床预后早期诊断的作用。前出现早，起到了临床预后早期诊断的作用。前S1S1抗体出现提示预抗体出现提示预后良好。前后良好。前S1S1抗体参与病毒的清除，前抗体参与病毒的清除，前S1S1抗原抗原/抗体的反转预示疾病将进入抗体的反转预示疾病将进入恢复期，急性乙型肝炎患者前恢复期，急性乙型肝炎患者前S1S1抗原阴转越早，前抗原阴转越早，前S1S1抗体阳转越早预后越抗体阳转越早预后越好。好。2 2对慢性乙型肝炎患者长期动态、随访对慢性乙型肝炎患者长期动态、随访 出现血清前出现血清前S1S1抗体阳性者，抗体阳性者，HBVDNAHBVDNA阴转率显著增高或阴转率显著增高或 HBVDNA HBVDNA 含量显著下降，预示疾病恢复良好。含量显著下降，预示疾病恢复良好。3 3乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒 前前S1S1抗体抗体 可作为临床抗病毒疗效疾病预后的血清可作为临床抗病毒疗效疾病预后的血清学指标。学指标。4 4总之，乙型肝炎患者前总之，乙型肝炎患者前S1S1抗体出现与否，与病程的进展以及抗体出现与否，与病程的进展以及(yj)(yj)预后有较密切的关联。前预后有较密切的关联。前S1S1抗体的检测对乙肝的诊断及治疗有较为重要抗体的检测对乙肝的诊断及治疗有较为重要的临床意义。的临床意义。第三十二页，共四十页。三、注意事项第三十三页，共四十页。注意事项 1 1 标本采集与处理的影响标本采集与处理的影响标本收集后应尽快分离出血清或血浆以避免溶血。检测时应尽量使用新鲜的标本。标本若不能及时送检，可在2-8冷藏3天。长期保存需冷冻于-20，忌反复冻融。标本严重溶血及混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样的活性，催化底物显色造成假阳性。标本凝固不全，正常血液采集后1/2-2h开始凝固，18-24h血块完全收缩。在工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；因此(ync)血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。第三十四页，共四十页。注意事项 2 2 试剂影响试剂影响因各厂家(chn ji)对检测标本要求、操作步骤不同，故认真阅读检测试剂说明书能避免不必要的实验误差（特别是胶体金免疫法）。不同厂家生产的试剂灵敏度与特异性存在一定的差别，不同厂家试剂的特异性和敏感性分别为89.4%-99.3%、78-89%,存在较大差异。有的厂家酶标板孔间A值差大于15%；标记酶的活性及显色液的稳定比较差。使用质劣的试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。因此选择高质量的试剂是保证结果准确的关键之一不同方法学的检测试剂，会使两对半结果出现一些不同。例如：在实际工作中常用ELISA检测HBsAg结果为阴性，而电化学发光检测为阳性。除方法学的灵敏度外；还存在使用单抗或多克隆抗体试剂的差别。单抗对变异抗原或亚型乙肝标志物检测存在差异。第三十五页，共四十页。注意事项 3 3 干扰物质的影响干扰物质的影响 大约大约40%40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度(chngd)(chngd)影响检测结果；常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性影响检测结果；常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig(s)Ig(s)抗体、交叉反应物抗体、交叉反应物质和其它物质等。如质和其它物质等。如RFRF因子可与标记二抗的因子可与标记二抗的FCFC段法结合造成假阳性，段法结合造成假阳性，补体从补体从C1qC1q活化，使一抗和酶标二抗的抗体分子发生变构，活化，使一抗和酶标二抗的抗体分子发生变构，FcFc的的C1qC1q分分子结合点暴露出来，则补体子结合点暴露出来，则补体C1qC1q可将二者连接起来造成假阳性，采用可将二者连接起来造成假阳性，采用56563030分钟灭活补体可降低假阳性率，高浓度的分钟灭活补体可降低假阳性率，高浓度的AFPAFP（如孕妇），（如孕妇），在储存过程中可能形成二聚体会导致本底过深影响检测结果。在储存过程中可能形成二聚体会导致本底过深影响检测结果。第三十六页，共四十页。注意事项 4 4 药物的影响药物的影响高效价的乙肝免疫球蛋白会与高效价的乙肝免疫球蛋白会与HBsAgHBsAg形成复合物，影响形成复合物，影响HBsAgHBsAg的检出，所以一些的检出，所以一些HBsAgHBsAg阳性患者注射乙肝免疫球蛋白后，阳性患者注射乙肝免疫球蛋白后，HBsAgHBsAg检测会呈阴性反应，导致乙肝检测会呈阴性反应，导致乙肝两对半少见模式的出现，如我们常遇到乙肝大三阳的孕妇，为阻断乙肝母两对半少见模式的出现，如我们常遇到乙肝大三阳的孕妇，为阻断乙肝母婴垂直婴垂直(chuzh)(chuzh)传播时，在孕第传播时，在孕第8 8、9 9、1010月常规注射月常规注射200mg200mg乙肝免疫球蛋白，不仅乙肝免疫球蛋白，不仅影响孕妇影响孕妇HBsAgHBsAg的检出；而且其所生产的的检出；而且其所生产的新新生儿也常出现生儿也常出现HBsAgHBsAg阴性，阴性，HBeAg HBeAg 阳性和阳性和HBcAbHBcAb阳性等少见模式、可能是乙肝免疫球蛋白属阳性等少见模式、可能是乙肝免疫球蛋白属IgGIgG抗体能通过胎抗体能通过胎盘进入胎儿体内与胎儿血液中的盘进入胎儿体内与胎儿血液中的HBsAgHBsAg结合形成复合物；则新生儿结合形成复合物；则新生儿HBsAgHBsAg检测呈检测呈阴性；用阴性；用0.5M0.5M的盐酸处理标本的盐酸处理标本1 1小时可提高出率。小时可提高出率。为预防乙肝，部分为预防乙肝，部分HBsAgHBsAg阴性人群在接种乙肝疫苗后的阴性人群在接种乙肝疫苗后的1-21-2周内，血清中可检出周内，血清中可检出HBsAgHBsAg成份，形成一过性成份，形成一过性HBsAgHBsAg阳性，这可能是乙肝疫苗主要成分是阳性，这可能是乙肝疫苗主要成分是HBsAg.HBsAg.，有方法能够把它检出；如电化学发光法，建议接种乙肝疫苗后有方法能够把它检出；如电化学发光法，建议接种乙肝疫苗后1 1个月内不应个月内不应作作HBsAgHBsAg检测。检测。第三十七页，共四十页。注意事项 5 5 HBsAgHBsAg检测出现假阳性的几种原因检测出现假阳性的几种原因 待测标本溶血或含有血细胞。待测标本长菌或其它原因混浊。洗板时洗涤液溢出，污染其它孔。洗板机内部管道有真菌生长(shngzhng)。洗板机设置不当。手工洗板时，拍干用纸未更换。实验中，实际孵育时间过长，温度过高。第三十八页，共四十页。第三十九页，共四十页。内容(nirng)总结乙肝表面抗原及乙肝两对半检测。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。化学发光技术是近二十年来发展非常迅速的非放射性免疫分析技术。原理：化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清从而对人体进行免疫分析的医学检验仪器。样本OD值/COV值1.0为阳性。样本OD值/COV值1.0为阴性。COV=阴性对照平均OD值2.1（OD0.05按0.05计算(j sun)）。标本若不能及时送检，可在2-8冷藏3天。谢 谢第四十页，共四十页。