学术讨论—NK细胞(2010上).ppt

自然自然(zrn)杀伤杀伤细胞细胞（Natural killer cell,NK）张赟张赟第四军医大学免疫学教研室第四军医大学免疫学教研室第一页，共六十一页。第二页，共六十一页。NK第三页，共六十一页。NK细胞的研究历史细胞的研究历史 NK细胞受体的分类细胞受体的分类 NK细胞受体识别的配体细胞受体识别的配体 NK细胞其它膜分子细胞其它膜分子(fnz)及其识别的配体及其识别的配体 NK细胞的生物学活性细胞的生物学活性 NK细胞的亚群细胞的亚群 NK细胞与临床细胞与临床NK细胞的发育分化细胞的发育分化第四页，共六十一页。70年代初抗肿瘤研究中发现，无需年代初抗肿瘤研究中发现，无需Ab存在和存在和 预先预先(yxin)致敏条件下即可杀伤肿瘤细胞的淋巴细胞致敏条件下即可杀伤肿瘤细胞的淋巴细胞 大颗粒淋巴细胞（大颗粒淋巴细胞（LGL）参与固有免疫（参与固有免疫（innate immunity）如何区别如何区别“自身自身”和和“非己非己”？?早期早期(zoq)研究研究NK细胞细胞(xbo)的研究历史的研究历史第五页，共六十一页。90年代初提出年代初提出“失去自己（失去自己（missing self）”假设假设 发现发现NK细胞细胞受体（受体（种类繁多，种类繁多，活化型活化型或或抑制型抑制型）鉴定出一批鉴定出一批NK细胞受体识别的细胞受体识别的配体配体 NK细胞细胞表面标志表面标志（CD分子和黏附分子等）分子和黏附分子等）信号转导、功能信号转导、功能(gngnng)及及临床研究临床研究的深入的深入90年代有重要突破年代有重要突破第六页，共六十一页。按其配体按其配体是否为是否为MHC I类分子类分子 识别识别MHC I类类(Ia或或Ib)分子的受体分子的受体 识别非识别非MHC I类分子的受体类分子的受体 按受体胞膜外区结构按受体胞膜外区结构(jigu)：IgSF和和CL-SF 按其基因定位按其基因定位分为不同家族分为不同家族 KIR、ILT/LIR、CD94/NKG2、Ly49 和和NKR-P1家族以及家族以及NCR家族家族 按功能：按功能：抑制型受体和活化型受体抑制型受体和活化型受体 NK细胞受体的分类细胞受体的分类第七页，共六十一页。KIR家族家族(jiz)(killer immunoglubulin-like receptor)IgSFILT/LIR家族家族(immunoglubulin-like transcript/leukocyte immunoglubulin-like receptor)IgSFCD94/NKG2家族家族 CL-SFLy49家族家族 CL-SFNKR-P1家族家族 CL-SF NCR家族家族(natural cytotoxicity receptor)IgSF按受体基因定位分为不同按受体基因定位分为不同(b tn)家族家族第八页，共六十一页。NK基因复合体基因复合体NKRP1CD69CD94NKG2Ly49NKRP1CD69CD94NKG2Ly49小鼠小鼠6号号染色体染色体NKRP1A CD69 CD94 NKG2 Ly49L人人12号号染色体染色体1a1c1d1fdeca1a1c1d1fdecadfecadfeca第九页，共六十一页。(n=114)(n=110)(n=17)(n=17)(n=110)HumanChr.19qDAP12DAP12DAP10DAP10CD66NKG7ILTsLAIRsILTsKIRsFc RNKp46GPVIMouseChr.7DAP12DAP10/KAP10CD66NKG7PIRsNKp46GPVI白细胞受体复合体白细胞受体复合体(LRC)的组成的组成(z chn)LRC:leukocyte receptor complex第十页，共六十一页。KIR分子分子(fnz)的结构的结构 D2D2D1D0ITIMsITAM2DL 2DS 2DL4 3DL 3DS SSD1D2D1D2D0SSKKSSSSSSSSSSSSSSD2D1D0SSSSSS第十一页，共六十一页。C2ssILT2ILT5 ILT3ILT1ILT7ILT8 LIR6aILT11 ILT6 R+D D FcR SSITIM ITAMC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssC2ssLIR8 ILT4ILT/LIR家族的组成和分子结构家族的组成和分子结构抑制型受体抑制型受体 活化型受体活化型受体 可溶型受体可溶型受体第十二页，共六十一页。C2ssC2ss -S S -S SVssS S -Vss -S SDAP-2S S NKp46 NKp30 NKp44(CD335)(CD337)(CD336)ITAMNCR的分子结构及其膜相关分子的分子结构及其膜相关分子第十三页，共六十一页。CD94/NKG2的分子结构的分子结构(fn z ji u)S SITIMITAMDAP12ITAMDAP10/DAP12抑制性受体抑制性受体 活化性受体活化性受体 活化性受体活化性受体S SS SCD94 NKG2A(CD159a)CD94 NKG2C(CD159c)NKG2D(CD314)(同源二聚体同源二聚体)第十四页，共六十一页。Ly49分子的结构分子的结构Ly-49A,B,C,E,F,G,ILy-49D,HITIMITAMDAP12抑制性受体抑制性受体 活化性受体活化性受体S SS S第十五页，共六十一页。NKR-P1分子结构分子结构NKR-P1B NKR-P1C(NK1.1/CD161c)ITIMITAM-S SS S第十六页，共六十一页。NK1.1/CD161c单抗在研究单抗在研究(ynji)中的应用中的应用 是小鼠是小鼠NK细胞细胞(xbo)的标志的标志 体内注射体内注射NK1.1 mAb是清除小鼠体内是清除小鼠体内NK细胞的方法细胞的方法 NK1.1+CD3+为小鼠为小鼠NK T细胞标志细胞标志 第十七页，共六十一页。NKNKP815P815促进杀伤促进杀伤抑制杀伤抑制杀伤活化型受体活化型受体抑制型受体抑制型受体重导向杀伤试验确定重导向杀伤试验确定NK活化型活化型/抑制型受体抑制型受体 第十八页，共六十一页。与具有与具有(jyu)ITAM膜相关分子相连的膜相关分子相连的NK细胞受体细胞受体 膜相关分子膜相关分子ITAM基序数基序数相连的相连的NK细胞受体细胞受体3/3CD16、NKp46、NKp303/1CD16、NKp461/1CD16、ILT1、ILT1样蛋白、样蛋白、ILT7ILT8、LIR6a、NKR P1C(CD161c)DAP 12(同源二聚体同源二聚体)1/1KIR2DS1、KIR2DS2、KIR2DS3KIR3DS、NKp44、CD94/NKG2C、ELy49D、Ly49HDAP 10(同源二聚体同源二聚体)1/1NKG2D第十九页，共六十一页。具有具有(jyu)ITAM模体模体NK活化型受体示意图活化型受体示意图 第二十页，共六十一页。MHC/肽，肽，IgG，Ag免疫免疫(miny)受体受体ITAM PLC活化活化(huhu)，磷酸化，磷酸化配体结合配体结合(jih)相应受体相应受体MHC I/肽肽免疫受体免疫受体 DAGIP3激活激活Src家族家族PTK募集和活化募集和活化含含SH2-信号分子信号分子活化转录因子活化转录因子免疫活化免疫活化FynLckLynZAP70PIP2PKCCa2+ITIMSHP-1(SHP-2)使使CD3、ZAPPLC去磷酸化去磷酸化免疫抑制免疫抑制磷酸化或磷酸化或去磷酸化去磷酸化ITAM、ITIM免疫受体与信号转导网络关系免疫受体与信号转导网络关系第二十一页，共六十一页。NK细胞细胞(xbo)其它膜分子及其参与其它膜分子及其参与NK细胞的功能细胞的功能 种种 类类 和和 成成 员员参参 与与NK 功功 能能整合素家族整合素家族 VLA1 6(1)促进促进NK杀伤功能杀伤功能,黏附内皮细胞黏附内皮细胞,穿越血管穿越血管,局部浸润局部浸润 LFA-1(CD11a/CD18,2)黏附内皮细胞黏附内皮细胞,迁移到淋巴结和组织迁移到淋巴结和组织 4/7沿血管滚动沿血管滚动选凝素选凝素 CD62L穿越内皮细胞到组织穿越内皮细胞到组织C型凝集素样超家族型凝集素样超家族 CD69活化活化NK细胞细胞碳水化合物碳水化合物 CD57 CD15s沿血管滚动沿血管滚动 CD162R(PEN5)结合结合L selectin,黏附和迁移黏附和迁移Link结构结构 CD44穿越血管和局部浸润穿越血管和局部浸润第二十二页，共六十一页。LAIR-1 and LAIR-2结构结构(jigu)示意图示意图Predicted O-linked glycosylation sitevSSvSSLAIR-1(CD305)LAIR-2(CD306)第二十三页，共六十一页。NK细胞其它膜分子细胞其它膜分子(fnz)及其参与及其参与NK细胞的功能细胞的功能 种种 类类 和和 成成 员员参参 与与NK 功功 能能CD16(Fc RIIIA)活化活化NK,ADCCCD160(BY55)协同受体协同受体CD2(LFA 2)活化性受体活化性受体,黏附内皮细胞黏附内皮细胞,穿越血管穿越血管,局部浸润局部浸润CD226(PTA1/DNAM 1)活化性受体活化性受体CD96活化活化NK表达水平明显增加表达水平明显增加PECAM 1(CD31)黏附内皮细胞黏附内皮细胞CD56不清不清CD223(LAG 3)活化活化NK细胞细胞CD244(2B4)MHC非限制性杀伤非限制性杀伤,活化性受体活化性受体LAIR 1(9.1C3)抑制性受体抑制性受体第二十四页，共六十一页。受体家族受体家族识别配体识别配体KIR家族家族HLA Ia(A,B,C);HLA Ib(G)LIR家族家族HLA I,HLA-GNCR家族家族HA,B7-H6,BTA-3CD49/NKG2家族家族HLA-ENKG2DULBP,MICA/BLy49家族家族H-2 I 类分子类分子NKR-P1家族家族LLT1,CIr-BNK细胞细胞(xbo)受体识别的配体受体识别的配体第二十五页，共六十一页。非经典非经典(jngdin)的的MHC类分子类分子 HLA-E、HLA-F、HLA-G第二十六页，共六十一页。KIR识别经典识别经典MHC I类分子的特异性类分子的特异性 KIR2DL1KIR2DL1 KIR2DL2 KIR2DL2 KIR3DL1 KIR3DL1KIR3DL2KIR3DL2 NKATNKAT4 4 KIR2DL4 KIR2DL4HLAHLA C(C(第一组第一组第一组第一组)HLAHLA C(C(第二组）第二组）第二组）第二组）：ITIMITIM：自身或外来肽段：自身或外来肽段：自身或外来肽段：自身或外来肽段HLAHLA Bw4(77Bw4(77 83aa)83aa)HLAHLA A3A3、A11A11HLAHLA GG和其他和其他和其他和其他NK细胞细胞APC/靶细胞靶细胞：经典的：经典的：经典的：经典的HLA IHLA I类分子类分子类分子类分子 或或或或HLAHLA G G分子分子分子分子第二十七页，共六十一页。ssssLy49家族家族(jiz)识别识别H-2 I类分子类分子H-2类分子类分子(fnz)Ly49第二十八页，共六十一页。配体为非经典配体为非经典(jngdin)MHC I类分子类分子 HLA-E 相应受体：相应受体：CD94/NKG2 调节调节NK活性：活性：CD94/NKG2A抑制性（为主）抑制性（为主）CD94/NKG2C刺激性刺激性 胎盘滋养层表达胎盘滋养层表达HLA-E，抑制母体蜕膜中，抑制母体蜕膜中CD94/NKG2A+NK的杀伤的杀伤(shshng)作用，维持胎盘免疫耐受作用，维持胎盘免疫耐受;肿瘤细胞丢失肿瘤细胞丢失 HLA-I类分子和上调类分子和上调HLA-E分子，分别逃逸分子，分别逃逸CTL和和NK 两种细胞的杀伤两种细胞的杀伤第二十九页，共六十一页。配体为非经典配体为非经典(jngdin)MHC I类分子类分子 HLA-G 相应配体：相应配体：ILT2、ILT4、KIR2DL4 表达表达(biod)：高表达于胎盘外绒毛细胞滋养层高表达于胎盘外绒毛细胞滋养层 作用：作用：抵抗抵抗NK细胞杀伤，维持胎盘免疫特免作用；细胞杀伤，维持胎盘免疫特免作用；黑素瘤可高表达黑素瘤可高表达HLA-G，抑制，抑制NK杀伤杀伤第三十页，共六十一页。NKp46 血凝素血凝素(HA)(如流感病毒如流感病毒)NKp44 HA(如流感病毒如流感病毒),BCGNKp30 BAT3(HLA-B associated transcript 3)B7-H6 HLA-B相关相关(xinggun)转录物转录物3(BAT3)由肿瘤细胞所释放由肿瘤细胞所释放,B7-H6表达于肿瘤细胞表达于肿瘤细胞NCRNCR的配体的配体的配体的配体第三十一页，共六十一页。配体为凝集素分子配体为凝集素分子(fnz)小鼠抑制性受体小鼠抑制性受体NKR-P1B配体配体 C型凝集素相关型凝集素相关b(C type lectin-related b,Clr-B)，同源二聚体，编码基因定位于同源二聚体，编码基因定位于NK基因复合体，肿瘤细胞基因复合体，肿瘤细胞(xbo)表达表达Clr-B水平与对杀伤敏感性相关水平与对杀伤敏感性相关 人抑制性受体人抑制性受体NKR-P1A配体配体 凝集素样转录物凝集素样转录物1(lectin-like transcript 1,LLT1)，与人与人NKR-P1A结合后抑制结合后抑制NK细胞的细胞毒和细胞的细胞毒和IFN-分泌。分泌。胶质瘤细胞高表达胶质瘤细胞高表达LLT1，与肿瘤免疫逃逸有关，与肿瘤免疫逃逸有关第三十二页，共六十一页。其它其它NK细胞膜分子细胞膜分子(fnz)识别的配体识别的配体NK细胞膜分子细胞膜分子结构特征结构特征相相 应应 配配 体体NKR P1A(大鼠大鼠)NKD多种碳水化合物多种碳水化合物CD69NKD不清不清CD2(LFA 2)IgSFLFA 3CD16(Fc R IIIA)IgSFIgG Fc段段CD56(NCAM)IgSFCD56CD96(Tactile)IgSFCD155CD226(PTA1/DNAX 1)IgSFCD155,CD112NKG2DIgSFULBP,MICA/BCD244(2B4)IgSFCD48CD223(LAG3)IgSFMHC II类分子类分子CD57寡糖寡糖L selectin,P seletin、LNCD162R碳水化合物碳水化合物L selectinCD305(LAIR-1)IgSF胶原胶原第三十三页，共六十一页。参与参与(cny)NK细胞识别靶细胞的黏附分子细胞识别靶细胞的黏附分子 NK细胞膜分子细胞膜分子靶细胞上相应配体靶细胞上相应配体IgSF CD2LFA 3 CD16结合靶细胞上的结合靶细胞上的IgG PTA1CD155,CD112 CD96CD155 CD160(BY55)HLA-C整合素整合素 LFA 1ICAM 1,2 Mac 1,p150,95ICAM 1,2CD44HA,FN,MAdCAM 1第三十四页，共六十一页。NK细胞参与黏附细胞参与黏附(ninf)、穿越内皮细胞的膜分子、穿越内皮细胞的膜分子作用时相作用时相NK细胞膜分子细胞膜分子配配 体体滚滚 动动L selectin(CD62L)sLeX(CD15s)4/7CD57sLeX(CD15s)E selectin(CD62E),P selectin(CD62P)VCAM 1(CD106),MAdCAM 1,FNP selectin,L selectin(CD62L),LN黏附内皮黏附内皮细细 胞胞LFA 1(CD11a/CD18)VLA 4(4/1)LFA 2(CD2)PECAM 1(CD31)ICAM 1(CD54),ICAM 2(CD102)VCAM 1,FNLFA 3(CD58)PECAM 1穿越血管穿越血管和和 浸浸 润润VLA 1(1/1)VLA 2(2/1)VLA 4(4/1)VLA 5(5/1)VLA 6(6/1)CD44LFA 2CO,LN CO,LN FNFNLNHA,FN,COLFA 3第三十五页，共六十一页。NATURE IMMUNOLOGY VOLUME 9 NUMBER 5 MAY 2008 与活化与活化NK细胞细胞(xbo)功能相关的功能相关的膜分子膜分子第三十六页，共六十一页。细胞毒细胞毒 方式：自然杀伤和方式：自然杀伤和ADCC 途径：脱颗粒途径途径：脱颗粒途径(穿孔素、粒酶穿孔素、粒酶B)和凋亡诱导配体途径和凋亡诱导配体途径 (Fas/FasL、TRAIL/DR4 DR5和和TNF/TNFR)合成和分泌细胞因子发挥免疫合成和分泌细胞因子发挥免疫(miny)效应和免疫效应和免疫(miny)调节功能调节功能：IFN-：活化：活化M，诱导，诱导Th0Th1，Ig类别转换类别转换 TNF：直接杀伤靶细胞和免疫调节作用：直接杀伤靶细胞和免疫调节作用 GM-CSF、M-CSF：可能参与造血调控：可能参与造血调控 IL-10和和TGF-：免疫负调节：免疫负调节 抗原提呈功能：抗原提呈功能：活化活化NK细胞细胞(NKp44+MHC+CD86+)具有抗原提呈功能具有抗原提呈功能,细胞毒活性和细胞因子产生细胞毒活性和细胞因子产生 能力也明显升高能力也明显升高NK细胞细胞(xbo)的生物学活性的生物学活性第三十七页，共六十一页。穿孔素穿孔素/颗粒颗粒(kl)酶途酶途径径颗粒颗粒(kl)Fas/FasL途径途径(tjng)颗粒酶颗粒酶穿孔素穿孔素穿孔素形成穿孔素形成的孔洞的孔洞颗粒酶颗粒酶Caspase 级联反应级联反应凋凋 亡亡细胞毒作用细胞毒作用靶细胞NK第三十八页，共六十一页。数分钟内发生，数分钟内发生，数小时后靶细胞数小时后靶细胞被杀伤被杀伤。快速连续杀伤多个靶细胞，连续杀伤多个靶细胞，自身保持完好自身保持完好。高效定向定向只杀伤靶细胞，而不杀只杀伤靶细胞，而不杀伤邻近的正常细胞。伤邻近的正常细胞。第三十九页，共六十一页。合成合成(hchng)和分泌细胞因子和分泌细胞因子第四十页，共六十一页。NK细胞参与细胞参与(cny)抗感染的作用机制抗感染的作用机制IgG2aIg类转换类转换 ADCCIFN IL-12杀伤杀伤穿孔素穿孔素杀伤杀伤 NOIFN IFN IL-12IL-15IL-18IFN/IFN BNK活化的活化的M/DC靶细胞靶细胞Th2Th1TNF-M/DC第四十一页，共六十一页。NK(人人)免疫耐受免疫耐受 “missing-self”免疫逃逸免疫逃逸 免疫耐受免疫耐受 免疫逃逸免疫逃逸 配体表达配体表达 配体不表达配体不表达 黑素瘤细胞黑素瘤细胞 配体表达配体表达 胶质瘤细胞胶质瘤细胞 高表达高表达HLA-G 高表达高表达LLT-1(HLA-A、B、C)或或GMHC I aLLT-1NKR-P1ACD94/NKG2AILT2KIRMHC Ia(HLA-A或或B)MHC Ib(HLA-E)非成熟非成熟DC不表达不表达 HLA-E,易被易被NK细胞杀伤细胞杀伤 DC“质量控制质量控制”滋养层细胞表达滋养层细胞表达HLA-E,抑制抑制NK细胞功能细胞功能 胎盘免疫耐受胎盘免疫耐受HCMV编码编码UL-18结合结合ILT2,抑制宿抑制宿主主NK细胞杀伤病细胞杀伤病毒感染细胞毒感染细胞人人NK细胞抑制型受体与相应配体结合参与免疫调节细胞抑制型受体与相应配体结合参与免疫调节第四十二页，共六十一页。小鼠小鼠NK细胞抑制型受体与相应配体结合参与免疫调节细胞抑制型受体与相应配体结合参与免疫调节NK(小鼠小鼠)免疫耐受免疫耐受 “missing-self”增加肿瘤细胞增加肿瘤细胞 对对NK杀伤敏感性杀伤敏感性 配体表达配体表达 配体不表达配体不表达 配体表达下调配体表达下调(H-2 D、K、L)MHC IaClr-bNKR-P1BCD94/NKG2AMHC Ib(Qa-1)Ly49第四十三页，共六十一页。NKp46/p30/p44NKp46/p30/p44杀伤杀伤杀伤杀伤(shshng)(shshng)靶细胞示意图靶细胞示意图靶细胞示意图靶细胞示意图 抑制性受体抑制性受体NCRMHC靶细胞靶细胞+不杀伤不杀伤NK第四十四页，共六十一页。NKp46/p30/p44NKp46/p30/p44杀伤靶细胞示意图杀伤靶细胞示意图杀伤靶细胞示意图杀伤靶细胞示意图 抑制性受体抑制性受体NCRNCRMHC靶细胞靶细胞+杀伤杀伤NK第四十五页，共六十一页。KIR HLA杀伤杀伤NCR NKG2D CD226 MICA/BULBPsBAT3CD155/CD122 NK细胞受体细胞受体 肿瘤细胞配体肿瘤细胞配体 NK细胞抑制型和杀伤型受体的细胞抑制型和杀伤型受体的平衡决定平衡决定NK细胞杀伤肿瘤细胞的活性细胞杀伤肿瘤细胞的活性 B7-H6第四十六页，共六十一页。不能杀伤不能杀伤(shshng)NK细胞细胞(xbo)抑制型和杀伤型受体的抑制型和杀伤型受体的平衡决定平衡决定NK细胞杀伤肿瘤细胞的活性细胞杀伤肿瘤细胞的活性 KIR HLANCR NKG2D CD226 MICA/BULBPsBAT3CD155/CD122 NK细胞受体细胞受体 肿瘤细胞配体肿瘤细胞配体第四十七页，共六十一页。敏感的靶细胞敏感的靶细胞不敏感的靶细胞不敏感的靶细胞人人K562髓样白血病细胞髓样白血病细胞Daudi Burkitt淋巴瘤淋巴瘤Molt-4急性急性T淋巴细胞白血病细胞淋巴细胞白血病细胞Raji Burkitt淋巴瘤淋巴瘤JM急性急性T淋巴细胞白血病细胞淋巴细胞白血病细胞LiBr黑色素瘤细胞黑色素瘤细胞Jurkat急性急性T淋巴细胞白血病细胞淋巴细胞白血病细胞U-937前单核细胞前单核细胞某些新鲜肿瘤细胞某些新鲜肿瘤细胞小鼠小鼠Moloney病毒诱导的病毒诱导的T淋巴瘤淋巴瘤Yac-1Benzpyrene诱导的胸腺诱导的胸腺(A/Sn小鼠小鼠)淋巴瘤淋巴瘤EL-4(C57BL/6)MPC-11矿物油诱导的浆细胞瘤矿物油诱导的浆细胞瘤Methlycholanthrene诱导诱导(BALB/c小鼠小鼠)的肥大细胞瘤的肥大细胞瘤P815(DBA/2)X-63人和小鼠人和小鼠NK细胞细胞(xbo)敏感和不敏感靶细胞敏感和不敏感靶细胞(xbo)第四十八页，共六十一页。CD56bri和和CD56dim NK细胞亚群细胞亚群 TRENDS in Immunology 2001,22:11CD56+CD3+CD56dimCD3 CD16bri NK：高细胞毒活性：高细胞毒活性NK亚群；亚群；CD56briCD3 CD16dim NK：分泌细胞因子的：分泌细胞因子的NK亚群亚群第四十九页，共六十一页。CD56bright NK亚群亚群/NK1CD56dim NK亚群亚群/NK2生物学活性生物学活性CD56Brightdim占占NK细胞百分率细胞百分率10%(妊娠妇女子宫中占多数妊娠妇女子宫中占多数)90%胞浆颗粒胞浆颗粒(粒酶粒酶B、穿孔素、穿孔素)少少多多天然杀伤活性天然杀伤活性+ADCC+体外增殖能力体外增殖能力(IL-2和和IL-15刺激刺激)高高低低NK细胞受体细胞受体CD16+/(“”占占CD56brightNK细胞的细胞的50%70%)+(ADCC+),(95%CD56dim)KIR+/+CD94/NKG2A(抑制型受体抑制型受体)+(大部分大部分)+/NKRP1A+NKG2D(活化型受体活化型受体)+细胞因子受体细胞因子受体IL-2R(高亲和力高亲和力)+(对低浓度对低浓度IL-2反应反应)IL-2R(中亲和力中亲和力)+IL-15R+c-kit(SCFR/CD117)+人人NK细胞细胞(xbo)的两个亚群的两个亚群第五十页，共六十一页。CD56bright NK亚群亚群/NK1CD56dim NK亚群亚群/NK2趋化因子受体趋化因子受体CCR7+(与迁移到外周淋巴器官有关与迁移到外周淋巴器官有关)CXCR3+(对对I-TAC和和IP-10反应反应)+/CXCR1+(对对IL-8反应反应)CX3CR1+(对对fractalkine反应反应)黏附分子黏附分子CD2+CD62L+(与迁移到外周淋巴器官有关与迁移到外周淋巴器官有关)+/PSGL-1+(70%)LFA-1(+)+CD44+CD49e+分泌细胞因子分泌细胞因子IFN-+(IL-12/IL-18活化后活化后)(IL-12/IL-18刺激后略上调刺激后略上调)LT+IL-10+(IL-12/IL-15活化后活化后)IL-13+GM-CSF+(IL-15/IL-18活化后活化后)人人NK细胞细胞(xbo)的两个亚群的两个亚群第五十一页，共六十一页。人人NK1、NK2和和活化活化NK细胞的比较细胞的比较第五十二页，共六十一页。研究课题的撰写研究课题的撰写(zhun xi)第五十三页，共六十一页。To start an application找到一个问题：立论依据找到一个问题：立论依据 Science begins with wonder.“It is owing to wonder that people began to philosophize,and wonder remains the beginning of knowledge.”工作工作(gngzu)中遇到的问题中遇到的问题?社会公众关心的热点社会公众关心的热点?读书思考的结果读书思考的结果?规划出一个解决的方案：研究内容规划出一个解决的方案：研究内容 Anyone can wonder at this remarkable-yet commonplace-phenomenon,but the scientist seeks to discover how development actually occurs.建立了可靠的研究信誉和资质：研究基础和条件建立了可靠的研究信誉和资质：研究基础和条件开始申请书的撰写开始申请书的撰写第五十四页，共六十一页。立立 论论 依依 据据国内外研究现状：国内外研究现状：领域的基本知识介绍领域的基本知识介绍(Biology)所研究的问题的研究现状所研究的问题的研究现状(Molecule)如果有预试验结果如果有预试验结果(ji gu)，最好包含在内，最好包含在内(Biology)以自己的主要研究内容和研究意义结尾以自己的主要研究内容和研究意义结尾 围绕课题的思路进行综述，层次清晰，观点鲜明，把自己的研究思路暗含在对文献的综围绕课题的思路进行综述，层次清晰，观点鲜明，把自己的研究思路暗含在对文献的综述中述中 步步提示存在问题步步提示存在问题,最后用自己的研究提出解决办法最后用自己的研究提出解决办法主要参考文献：主要参考文献：准确、格式规范一致，与正文对应准确、格式规范一致，与正文对应(显示你的科学态度显示你的科学态度!)第五十五页，共六十一页。研究目标研究目标(mbio)、研究内容和拟解决的关键问题、研究内容和拟解决的关键问题（此部分为重点阐述内容）（此部分为重点阐述内容）研究目标：本课题的总体研究目标，要一目了然研究目标：本课题的总体研究目标，要一目了然 通过通过xxx，阐明，阐明xxx，为，为xxx奠定基础奠定基础.研究内容：围绕着上述研究目标，打算开展几个方面的实验研究？每个方面都进行哪些研究内容：围绕着上述研究目标，打算开展几个方面的实验研究？每个方面都进行哪些(nxi)实验？例如对一个新基因的功能研究：实验？例如对一个新基因的功能研究：1、在生物信息学预测的基础上，进行表达范围分析（、在生物信息学预测的基础上，进行表达范围分析（Northern,RT-PCR,原位杂交）、细胞内原位杂交）、细胞内定位分析（免疫荧光染色、融合蛋白表达）定位分析（免疫荧光染色、融合蛋白表达）2、在体外对细胞功能的影响：转染、干扰；增殖、凋亡、分化、迁移、形态变化、等等、在体外对细胞功能的影响：转染、干扰；增殖、凋亡、分化、迁移、形态变化、等等3、作用机制研究：转录调控？信号转导？上、下游分子？相互作用蛋白？、作用机制研究：转录调控？信号转导？上、下游分子？相互作用蛋白？4、体内功能研究：、体内功能研究：KO？转基因小鼠？病例相关的分析？转基因小鼠？病例相关的分析？拟解决的关键问题：拟解决的关键问题：进行上述内容的研究时，可能会遇到什么障碍，以及应对措施进行上述内容的研究时，可能会遇到什么障碍，以及应对措施第五十六页，共六十一页。拟采取的研究拟采取的研究(ynji)方案及可行性分析方案及可行性分析（包括有关方法、技术路线、实验手段（包括有关方法、技术路线、实验手段(shudun)、关键技术等说明、关键技术等说明）研究方法：研究方法：用用xxx观察分析观察分析xxx技术路线：技术路线：最好图示最好图示实验研究方案：实验研究方案：结合技术路线，把研究内容里的各项实验具体化结合技术路线，把研究内容里的各项实验具体化简、繁得当！尤其不能过分简单简、繁得当！尤其不能过分简单绝对不能出错绝对不能出错!拿不准的事情要多咨询有关专家拿不准的事情要多咨询有关专家!第五十七页，共六十一页。项目项目(xingm)特色与创新之处特色与创新之处项目特色：项目特色：具有特殊的研究意义？具有特殊的研究意义？抓住了有特色的研究问题？抓住了有特色的研究问题？从特殊的角度研究问题？从特殊的角度研究问题？建立了独特的实验平台和方法？建立了独特的实验平台和方法？在基础临床结合上有独到之处？在基础临床结合上有独到之处？创新之处：创新之处：与现在的研究前沿与现在的研究前沿(qinyn)相比，通过本课题的研究会产生哪些新知识？能解决什相比，通过本课题的研究会产生哪些新知识？能解决什么样的科学问题？会有什么样的社会贡献？么样的科学问题？会有什么样的社会贡献？第五十八页，共六十一页。年度研究计划和预期年度研究计划和预期(yq)结果结果（包括拟组织（包括拟组织(zzh)的重要学术交流活动、国际合作与交流计划等）的重要学术交流活动、国际合作与交流计划等）年度计划：年度计划：合理划分，三年合理划分，三年预期结果：预期结果：1、理论成果：阐明、理论成果：阐明xxx，解决，解决xxx问题问题 2、发表论文、发表论文 3、可能产生的专利、可能产生的专利 4、人才培养、人才培养第五十九页，共六十一页。第六十页，共六十一页。内容(nirng)总结自然杀伤细胞。如何区别“自身”和“非己”。体内注射NK1.1 mAb是清除小鼠体内NK细胞的方法。3/3。表达：高表达于胎盘外绒毛细胞滋养层。作用：抵抗(dkng)NK细胞杀伤，维持胎盘免疫特免作用。VLA4(4/1)。VLA2(2/1)。VLA4(4/1)。途径：脱颗粒途径(穿孔素、粒酶B)和凋亡诱导配体途径。NK细胞的50%70%)。4、人才培养第六十一页，共六十一页。