疟原虫血涂片制作作业指导书.doc

疟原虫血涂片制作作业指导书1. 目的指导实验室人员制作血涂片,完成疟原虫检测工作2. 适用范围适用于实验室检测人员3. 职责 疟原虫血涂片制作人员负责涂片编号及保存，4。作业指导4.1样本采集及要求 4。1。1采用抗凝管采血：或在采血管里加入抗凝剂，将采集血样加入并摇匀，备用 4。1.2指尖血、静脉全血（抗凝血)样本均可适用4.2血涂片的制作： 4。2.1血膜种类和位置 薄血膜:占玻片的近1/2。将血液涂呈薄膜状,血细胞平辅在玻片上面 厚血膜：占玻片的1/6。血液涂成圆形，血量多 4。2。2厚血膜的制作用推片的一角，刮取约4 5ul(火柴头大小)，使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外旋转，转4 8圈直径0.8 1cm圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易于脱落,过薄达不到检出率的要求。厚血膜厚度以油镜视野可见5 10个白细胞为宜。厚血膜血量:45ul微升，外形:圆形，直径0。81。0cm 4.2.3薄血膜制作取洁净的载玻片2张,1张以左手拇指，食指夹持载玻片两端,用另一张边缘平滑的载玻片做推片,用推片一端边缘的中点取血约11。5ul的血量(小米粒大小）,使血滴与平置的载玻片接触,并形成2530度夹角,待血液向两侧扩展宽约2cm时,均匀而迅速地轻轻向左推出（约2。5cm长）薄血膜血量:11.5ul位置：玻片1/2外形：薄度均匀、无痕、长度：2。02.5cm 4.2。4血膜编号：血膜编号： 血膜制成后，以防差错,待薄血膜干后用B2铅笔，在薄血膜的右上角或血膜底部，写上受检者的个人编号。4.3血涂片固定及染色 4。3。1甲醇固定薄血膜 载玻片略向下倾斜，从一侧挤出甲醇，试管平推下划即可.甲醇不能触碰到厚血膜 4。3.2单张染色法在量筒内加2ml缓冲液或ph7。07。2净水， 滴加吉氏原液4滴（每ml2滴），混匀,然后滴在已充分干躁的厚薄血膜上，染色30min。 1张玻片需2ml水，2滴ml染液，染色25-30min4。3.3染色效果 血膜蓝中带紫色，如果血膜颜色偏红色， 说明染色偏酸性；血膜偏蓝色, 则为偏碱性。4.4注意事项与其它因素 4。4.1载玻片必须清洁无油污，拿玻片时拿侧楞，固定薄血膜时，甲醇不要触碰到厚血膜，放置3天以上的血片，在染色之前先用清水滴加在厚血膜上进行溶血，再进行染色，厚血膜干燥时不要高温加热，充分干燥后方可染色已稀释的吉氏染液，须在30分钟内用完，冲染液时，要漂洗以免冲掉厚血膜，将血膜标本(血膜面朝下）插于凉干板上晾干。 4。4。2薄血膜过厚原因:使用血滴过大 、玻片与推片之间夹角过大 、展开血膜的动作太快 4.4.3血膜脱落原因、载玻片不干净、血量多血膜厚 、血膜没干透 、冲洗方法不当 4。4.4.染料溶剂的质量 染液(母液）在使用时避免水对其污染，用专用无水的滴管取染液。染液的新旧 ： 新配制的染液因色素尚未充分溶解，染色力较弱且常呈现偏碱性。染液存放时间越久,染色力越强。通常在染液配制12周后才使用，盛装染液的瓶子应加塞盖密，以防吸潮而影响染液质量。染液稀释后使用时间:吉氏染液的主要成份是美蓝、伊红和由美蓝氧化产生的天青，三者能在酒精溶液中溶解，但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生沉淀。因此，必须在稀释染液当时使用，一般在半小时内染色力最强。染液的稀释浓度染液的浓度高其着色快而深，染液的浓度低其着色慢而浅或发绿.染色时间 染色时间长染色效果好，反之较差。室温高则着色快，染色时间可略缩短，气温低可适当延长.染色用水染液的稀释用水偏酸或偏碱，可用缓冲蒸馏水调整。染色后发现血膜颜色偏蓝（偏碱）或偏红（偏酸）时，可用与之相反的酸、碱度水冲洗血片予以纠正染色后不要直接将染液倒掉 沿玻片或染色缸边缘加水使染液表面一层溢出，并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒沾污血膜。 4.4。5刚涂制的血膜要平放在标本盒内，厚血膜未干前勿使标本盒倾斜,以免血膜倾向一侧，造成血膜厚薄不均，厚处不易溶血和着色而影响检查结果