雾化吸入布地奈德混悬液在中国健康成年试验参与者的生物等效性研究.pdf

药学与临床研究药学PharmaceuticalandClinicalResearch研究雾化吸人布地奈德混悬液在中国健康成年试验参与者的生物等效性研究程凤,吴莎,张福成，肖大伟1*1南京高新医院I期临床试验部，南京2 118 9 9；2 正大天晴药业集团股份有限公司临床运营部，南京2 1110 0摘要目的：评价空腹状态下单剂量雾化吸入布地奈德混悬液受试制剂和参比制剂在中国健康成年试验参与者中的生物等效性和安全性。方法：采用单中心、随机、开放、四周期、两序列、完全重复交叉设计,40 例试验参与者被随机分为TRTR序列组和RTRT序列组，每周期单次空腹经口雾化吸入受试制剂或参比制剂2 mL:0.5mg，用经方法学验证的液相色谱串联质谱分析方法测定血浆中布地奈德的浓度,PhoenixWinNonlin(8.3.1)软件非房室模型分析方法对血浆中布地奈德的药代动力学（PK)参数进行分析，评价两种制剂的生物等效性；记录给药后至随访结束的所有不良事件。结果：试验参与者空腹吸入受试制剂和参比制剂后，血浆中布地奈德的主要PK参数如下：Cmx分别为（12 10 6 9 3）和（10 2 0 49 4)pgmL-;AUCo分别为（16 6 0 546）和（1530 477)hpgmL-1;AUCo分别为（17 10 554)和（158 0 48 6)hpgmL-1;tmx分别为0.0 8(0.0 8,0.7 5)和0.0 8(0.0 8,0.50)h;ti/2分别为（3.57 1.2 6)和(3.310.9 8)h。受试制剂和参比制剂Cmx/AUCo和AUCo的几何均值比值的9 0%置信区间分别为10 4.7 5%12 1.0 7%、10 4.9 3%111.38%和10 4.8 9%111.22%（均在8 0.0 0%12 5.0 0%范围内），不良事件发生率为5.0%。结论：在空腹条件下，雾化吸入布地奈德混悬剂受试制剂和参比制剂具有生物等效性，安全性良好。关键词布地奈德；混悬剂；生物等效性；安全性；中国健康试验参与者中图分类号R969.1文献标志码A文章编号16 7 3-7 8 0 6(2 0 2 4)0 2-12 7-0 5哮喘是世界上最常见的慢性疾病之一，其特征为可逆性气道阻塞、气道炎症和对多种刺激的气道反应性增高。我国2 0 岁及以上人群哮喘患病率4.2%,而伴气流受限的哮喘患病率1.1%。研究估计，约450 0 万成人患有哮喘，其中130 0 万成人患有气流受限的哮喘，但患者的临床用药需求未被完全满足，临床上急需安全有效、价格适当的药品2 。糖皮质激素是控制哮喘最有效的药物。吸入型糖皮质激素由于其局部抗炎作用强、全身不良反应少，已成为目前哮喘长期治疗的首选药物。常用药物有倍氯米松、布地奈德、氟替卡松、环索奈德、莫米松等。糖皮质激素在哮喘炎症中的确切作用机制尚不清楚。炎症是哮喘发病机制中的一个重要部分。布地奈德是一种抗炎性皮质类固醇药物，具有强效糖皮质激素活性和弱盐皮质激素活性。它能增强内皮细胞、平滑肌细胞和溶酶体膜的稳定性,抑作者简介程凤,女,主管药师E-mail:*通信作者肖大伟，男，主任药师E-mail：x i a o d a w e i c r o p r o.c o m收稿日期2023-09-18制免疫反应和降低抗体合成，从而使组胺等过敏活性介质的释放减少和活性降低，并能减轻抗原抗体结合时激发的酶促过程，抑制支气管收缩物质的合成和释放而减轻平滑肌的收缩反应 3。布地奈德混悬剂通过雾化吸入给药可以产生较强的局部抗炎作用，有效控制气道炎症，同时布地奈德能增强纤毛运动功能，具有减轻气道黏膜水肿、抑制炎症因子渗出及促进气道上皮增生等作用，因此可以减少哮喘发作频率和严重程度,降低病死率。在针对哮喘患者进行的一系列包括吸人驱动剂、多剂量干粉吸人剂、雾化吸入混悬剂在内的不同配方及给药系统的广泛吸人类布地奈德制剂的研究表明，局部抗炎活性与糖皮质激素全身给药治疗相比显示出了优势。这一现象可以解释为局部给药所获得的相对更强的局部抗炎作用，避免了口服吸收药物显著的肝脏首过降解效应(8 5%9 5%)以及低效能的代谢产物。目前，国内已有雾化吸入布地奈德混悬液治疗小儿肺炎的研究5,结果显示其安全性和有效性均修回日期2 0 2 4-0 3-0 6较高，但无相关生物等效性研究数据。本研究考察1272024Apr;32(2)雾化吸入布地奈德混悬液在中国健康成年试验参与者的生物等效性研究空腹状态下单次经口雾化吸入布地奈德混悬剂在中国健康人体的生物等效性和安全性，旨在为该药的注册申报提供参考依据。1材料、对象与方法1.1药品与仪器吸入用布地奈德混悬液（受试制剂）,规格：2 mL：0.5mg，批号：2 10 40 9 19 7,正大天晴药业集团股份有限公司；吸入用布地奈德混悬液（参比制剂）,规格：2 mL：0.5mg,批号：32 7 118,AstraZenca PtyLtd;布地奈德，纯度:9 8.0%(LCMS)，批号：2-AGE-126-1,TRC公司；布地奈德-d8,纯度：9 8.8%HPLC)，批号：TM-ALS-11-033,Alsachim 公司。UPLC高效液相色谱仪（美国Waters公司）；SciexAPI5500型三重四级杆质谱仪（美国Sciex公司。1.2试验参与者选择本研究经南京高新医院伦理委员会批准（伦理批号：2 0 2 0 -0 17-0 4;临床试验登记号：CTR20220720)。所有试验参与者均在试验开始前获取知情同意并签署知情同意书。人组40 例试验参与者,其中男性31例（7 7.5%），女性9 例（2 2.5%）；汉族37 例(92.5%），其他民族3例（7.5%）；平均年龄为（2 8.7 6.0)周岁，平均身高为(16 6.56.1)cm，平均体质量为(6 3.2 7.3)kg。1.2.1入选标准（年龄18 50 周岁的中国健康成年人，性别不限；体质量男性50.0 kg，女性45.0kg,且体质量指数(body mass index,BMI)18.5 27.0kgm;签署知情同意书,和研究者进行良好的沟通，理解并遵守本项研究的各项要求。1.2.2排除标准患有呼吸系统疾病（活动性或静止性结核病、哮喘、慢性阻塞性肺疾病、近期罹患上呼吸道感染）、严重咽炎、口腔溃疡、口腔霉菌感染；过敏体质，或对本品过敏者；筛选前1周至试验结束后2 个月内发生非保护性性行为或有妊娠计划，试验期间不愿采取一种或一种以上的非药物避孕措施（如完全禁欲、放置宫内节育器、伴侣结扎等）；各项体格检查或实验室检查结果异常有临床意义者；试验前3个月内参加过其他临床试验或使用过本试验相关药物；妊娠或哺乳期女性等。1.3分组、治疗方法与血样采集方案按单次给药、随机、开放、四周期、两序列、完全重复交叉设计。于给药前1天进行给药培训，熟练掌握吸人给药技巧，给药前1天晚餐后至少禁食10 h，在给药当天空腹状态下，按照随机数字表，128在净化室雾化吸人布地奈德2 mL:0.5mg，吸入时长为10min,试验参与者给药前9 0 min内及给药开始(开雾化泵记时作为0 min）后2、5、10、15、2 0、30、45min，1、2、3、4.6.9、12、14、2 4h 采血点，每个时间点取血约6mL(弃去约1mL导管血)置于含有EDTA-K2抗凝剂的真空采血管中,置离心机温度4,2 9 0 0 g,离心5min。移取上层血浆分为两份转移至贴有标签的冻存管中,其中取至少1.5mL放于测试分析管，剩余作为备份。所有样本置于-6 0 及以下冰箱保存至样本转运，直至分析，采用LC-MS/MS法分别测定每周期试验参与者吸入受试制剂和参比制剂后血浆中布地奈德的浓度。1.4测定方法间本研究方法学建立和生物样本检测由科文斯医药研发（上海）有限公司完成。1.4.1色谱条件色谱柱：Waters,Cis(502.1 mm);流动相：A相为10 mmolL-I碳酸氢铵水溶液,B相为Me0H:ACN(50:50,V/V)溶液;流速:0.6 mLmin*l;柱温：50;进样体积：15.0 0 L。1.4.2质谱条件电喷雾电离离子源（ESI+)；喷雾器电压：550 0 V；温度50 0；碰撞气（N2）压力55.2kPa；喷雾气（N2)压力517.1kPa；气帘气体(N2)压力：2 0 6.8 kPa；人口电势（EP）：10 V；正离子方式检测；用于定量分析的离子反应分别为m/z431.1一323.1(布地奈德）m/z439.3323.2(布地奈德-ds)。1.4.3血浆样品处理取待测样品30 0 L加人50 L50%乙腈水溶液（含内标2.0 0 ngmL-1布地奈德-ds）涡旋混匀2 min；加人40 0 L的0.1%甲酸水溶液，涡旋混匀约3min，以30 0 0 rmin-l离心约1min;采用1.0 mL甲醇活化SPE固相萃取柱。添加1.0 mL的0.1%甲酸水溶液至每个固相萃取柱，采用10 0 0 L的0.1%甲酸水溶液进行洗脱。采用10 0 0 L的水-乙腈溶液(9 0:10,V/V)进行洗脱。添加2 0 0 L的水-乙腈溶液(6 0:40,V/V)将提取物洗脱至干净的9 6 孔板，静置约5min后，可适当增加转速至约10 0 0 rmin-进行洗脱，然后将样品涡旋混匀约3min,以3000rminl离心约1min。取上清液进行分析，每次进样15 L。1.5方法学考察与评价1.5.1专属性取6 份不同的空白人血浆，分别进行不加待测物、不加内标的空白样品测定和加人待测物标准溶液和内标溶液的测定，结果显示，布地奈德及内标峰形良好,其保留时间一致。空白血浆样品内源性物质不干扰待测物和内标的测定，该方法专属性良好，见图1。药学与临床研究药学Pharmaceutical and Clinical Research研究1.5.2标准曲线及定量下限用空白人血浆新鲜制备8 个质量浓度水平的标准曲线样本，每个质量浓度水平重复2 次，布地奈德血浆标准曲线的质量浓度分别为5.0 0、10.0、50.0、2 0 0、10 0 0、2 0 0 0、2 7 0 0、3000pg?mL-。进样经分析得到回归方程为Y=4.0510-X+4.710-3(r=0.9975),结果显示，布地奈德血药浓度在5.0 0 30 0 0 pgmL-1有良好的线性关系,定量下限为5.0 0 pgmL-l。1.5.3精密度与收率配制下限、低、低中、中、高5个质量浓度的质控样品（布地奈德质量浓度分别为5.0 0、15.0、40 0、12 0 0 和2 40 0 pgmL-），每个质量浓度质控样本6 个重复，评估批内精密度和准确度，通过3个连续独立的验证分析批，进行批间精密度和准确度的评估。需满足的要求：相对标准偏差（RSD%）15.0%(L L 0 Q Q C浓度下,RSD%20.0%），平均偏差（RE%)在15.0%范围内(LL0QQC浓度下，RE%在2 0.0%范围内）。该方法的精密度和准确度符合现行生物分析方法的要求，布地奈德的提取回收率结果，见表1。1.5.4稳定性考察了待测物储备液、工作液的短期和长期存放稳定性，反复冻/融5个循环稳定性（-2 0/-7 0），样品前处理稳定性（室温或湿冰，27h）,制备后样品稳定性(2 8,12 1h）,生物基质中待测物的长期稳定性(-2 0/-7 0,116 d),结果表明，布地奈德在上述条件下具有良好的稳定性。C(pgmL-)测量值(pgmL-)5.004.50 0.23515.014.80.555400398 12.612001180 54.3240023201091.6统计学处理用PhoenixWinnonlin8.3.1软件（美国Phar-sight公司)非房室模型分析方法对血浆中布地奈德的药代动力学(pharmacokinetic,PK)参数进行分析，PK参数包括AUCooAUCoCmxvtmaxt1/2入z、CL/F、VaAUCoExtapo安全性统计分析采用9.4版统计分析软件(SAS)。用MedDRA24.0版本对不良事件进行划分，观察期内报告的所有不良事件被纳人分析中，对于每个不良事件,按系统器官分类（system organclass,SOC)和首选术语(preferred term,PT)汇总不良事件。每个SOC及每个PT下，每例试验参与者将A180160(sdo)Kasuaul140120100-80-60-40200-00.40.81.21.62.02.42.8t/minB1.86450400(sda)Karsuau3503002502001501005000 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 2.4 2.8C50004000-(sdo)arsuau3000-20001000000.4 0.8 1.2 1.6 2.0 2.4 2.81图1布地奈德(I)和布地奈德-d(I)典型色谱图(A)不含待测物和内标的人空白样品;(B)添加待测物标准溶液和内标溶液的最低定量限分析样品;(C)给药5min后试验参与者的血浆样品。表1批内、批间精密度、准确度及提取回收率（xs）日内精密度（n=6)RSD(%)准确度(%）RE(%)测量值(pgmL-)5.290.03.898.73.299.54.698.34.796.72.061.481.611.901.312.181.171.051.491.681.302.062.142.741.101.132.882.48t/min1.77t/min日间精密度（n=18）RSD(%)准确度（%）RE(%)(%）-10.04.74 0.352-1.314.6 0.787-1.5402 12.9-1.71200 48.7-3.32420102至多被计算1次。对死亡及因不良事件而退出研究或者经历了重度或严重不良事件（serious adverseevent,SAE)的试验参与者，提供详细信息。2结果2.1药代动力学结果本研究共筛选9 9 例试验参与者，入组40 例，人组的40 例试验参与者均完成试验。表2 中总结了在室温条件下雾化吸入布地奈德2 mL:0.5mg（受试制剂或参比制剂)后的主要药代动力学参数。2.2血药浓度-时间曲线40例试验参与者给药后血浆中原型药物布地129800700-600(sdo)500-400-3002.50200-1000-00.4 0.8 1.2 1.6 2.0 2.4 2.8x1042.42.0-1.6-1.20.80.400 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 2.4 2.8x1042.01.61.20.80.4000.4 0.8 1.2 1.6 2.0 2.4 2.8回收率7.494.85.497.33.2100.54.1100.04.2100.81.791.461.571.972.151.031.1292.22832.882.52t/min1.83t/min1.75t/min-5.2-2.70.50.00.877.383.983.62024Apr;32(2)雾化吸入布地奈德混悬液在中国健康成年试验参与者的生物等效性研究表2 雾化吸入布地奈德2 mL:0.5mg（受试制剂或参比制剂）后的主要药代动力学参数（xs，n=40）参数受试制剂（T)tm(h)0.08(0.08,0.75)Cm(pg*mL-1)1210693AUCo-(pg:hmL-1)1660 546AUCo(pghmL-1)1710554入(Lh1)0.214 0.0601ti2(h)3.57 1.26AUCaEamp(%)3.19 1.37CL/F(Lh-)323 106Va/F(L)1570504*:Median(minimum,maximum)。奈德(R或T)平均血药浓度-时间曲线与对数转换后平均血药浓度-时间曲线,见图2。Linear ScaleA(1-Tu.3d)15001000500-0-04812162024t/h图2 零雾化吸入布地奈德2 mL:0.5mg(A)平均血药浓度-时间曲线和(B)平均血药浓度对数-时间曲线2.3生物等效性评价试验参与者雾化吸入T和R的CmxAUCot及AUCo的几何均值比9 0%置信区间分别为104.75%121.07%、10 4.9 3%111.38%和10 4.8 9%111.22%,均在8 0.0 0%12 5.0 0%范围内。说明空腹状态下两种制剂具有生物等效性（见表3）。表3雾化吸入布地奈德2 mL:0.5mg的生物等效性评价（xs,n=40)修正后几何均值及个体内差异参数比率TR(T/R)%1010897112.6231.1620.02(pgmL-1)121.07)AUCo-(104.93,15701460108.1112.2411.93(pg:hmL-1)111.38)AUCo(104.89,16301510108.01(pghmL-)2.4安全性评价本试验不良事件发生率为5.0%（2/40），发生例次为2 例次,其中各类检查(尿白细胞酯酶阳性)1例次(2.5%），与研究药物的相关性为可能无关；神经系统疾病(头痛)1 例次(2.5%）,与研究药物的相关性为可能有关。所有不良事件严重程度均为轻度，无严重不良事件发生，所有不良事件均随访至130治愈，未采取任何干预措施，受试制剂和参比制剂吸入用布地奈德混悬剂，安全性均良好。参比制剂（R）0.08(0.08,0.50)1020 4941530 4771580 4860.224 0.05373.31 0.983.28 1.303481101630 670Semi-Logarithmic Scale100001B(1-Tur.3d)10001001010.1048122162024t/h90%CITR(104.75,12.1911.56111.22)3 讨 论肺部给药是一种无创、快速和有效的药物递送方法，可提供局部和全身的药物治疗,吸人性药物通常用于局部治疗气道疾病，如哮喘、支气管炎、囊性纤维化和慢性阻塞性肺疾病;另一方面,因为肺有巨大的表面积和丰富的血管，使得肺部吸人给药为全身给药提供了很大的可能性8;此外，与肝脏和胃肠道相比，肺中的药物代谢酶的数量少，这些特性为全身药物递送提供了潜在通道。通过本试验可以发现，雾化吸入布地奈德混悬剂后，通过呼吸道被迅速吸收入血，在给药后2 min即可检出血浆中布地奈德（2 6 32 15)pgmL-1,5min左右即达到最大血药浓度(12 10 6 9 3)pgmL-l,起效非常迅速。T吸入性药物的沉积是一个复杂的过程，它依赖于肺的解剖学和生理学特性、药物的理化性质、制剂的性质和特点，以及给药装置的类型等9，本试验采用雾化吸人给药的方式，为了保证给药的准确性和一致性，试验参与者选择非常重要，需选择无呼吸道疾病者，排除各种影响因素（不限于吸烟、口腔溃疡、咽喉炎等），且需要接受多次生理盐水雾化吸人模拟给药培训，给药者对试验参与者吸药行为进行充分的评估，内容包括理解力、领悟力、依从性以及操作行为的一致性等,并在正式给药前给与充分的培训,加强试验参与者配合度和依从性，确保相对一致的吸气频率、深度和持续时间，尽可能降低个体内差异。为了减少试验参与者吸人过程中互相污染的风险，给药全过程需要在符合要求的负压室进行，着规范的隔离服，严格控制吸药全过程和采集样本环境等因素，避免试验参与者之间的交叉污染；吸人用布地奈德混悬液为细微颗粒的混悬液，静置后细微颗粒沉淀，给药前需要充分振摇，避免给药剂量不准确。本试验建立了LC-MS/MS方法测定血浆中布地奈德的浓度,该方法在专属性、精密度和准确度等方面均符合吸入用布地奈德混悬剂的生物等效性要求，受试制剂和参比制剂的主要PK参数CmvAUCot及AUCo差异均无统计学意义，符合生物等效性的判定标准,表明受试制剂和参比制剂在空腹条件下雾化吸人给药时具有生物等效性。本研究安全性评估结果表明仅1例试验参与者发生了与布地奈德混悬剂相关的不良事件（头痛），程度为轻度，安全性良好，证明了吸入用布地药学与临床研究药学Pharmaceutical and Clinical Research研究奈德混悬剂在支气管哮喘的治疗和预防中的应用的安全性。参考文献1 GULLIVER T,MORTON R,EID N.Inhaled corticos-teroids in children with asthma:pharmacologic determi-nants of safety and efficacy and other clinical consid-erationsJ.Paediatr Drugs,2007,9(3):185-94.2 BRUSSELLE GG,KO WS.Prevalence and burden ofasthma in China:time to act J.Lancet,2019,394(10196):364-6.3杨伟丽，邓毅，杨娟娟，等。雾化吸入布地奈德混悬液治疗新生儿肺炎的进展分析 J中国现代药物应用，2023,10(10):170-2.4王丽，薛涛，王惠琴，孟鲁司特钠联合布地奈德、特布他林治疗哮喘-慢阻肺重叠综合征患者的临床效果.临床医学研究与实践，2 0 2 3，8(2 2)：7 7-8 0.5 张建元，杜林军，杨玉军。小儿肺炎使用雾化吸入布地奈德混悬液、特布他林及异丙托溴铵治疗的效果和安全性分析 J。中国实用医药，2 0 2 3,18(11):2 4-8.6SSHAH VP,MIDHA K,FINDLAY JW.Bioanalyticalmethod validation:a revisit with a decade of progressJ.Pharm Res,2000,17(12):1551-7.7COURRIER HM,BUTZ N,VANDAMME TE.Pul-monary drug delivery systems:recent developments andprospectsJ.Crit Reu Ther Drug Carrier Syst,2002,19(4-5):425-98.8BYRON PR,PATTON JS.Drug delivery via the respi-ratory tractJ.J Aerosol Med,1994,7(1):49-75.9PATTON JS,BYRON PR.Inhaling medicines:deliver-ing drugs to the body through the lungs J.Nat ReuDrug Discov,2007,6(1):67-74.Bioequivalence Study of Budesonide Nebuliser Suspension for Inhalation inHealthy Adult Chinese Trial ParticipantCHENG Feng,WU Sha,ZHANG Fucheng,XIAO Daweil*Phase-I Clinical Trial Site of Gaoxin Hospital of Nanjing,Nanjing 211899,China,2Clinical Operations De-partment of Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co.,Ltd.,Nanjing 211100,ChinaABSTRACT Objective:To evaluate the bioequivalence and safety of single-dose budesonide nebulisersuspension between test and reference formulations in healthy adult Chinese trial participants in fastingstate.Methods:A single-center,randomized,open-label,four-cycle,two-sequence,and completely repeat-ed crossover design was used.In this study,40 trial participants were randomly assigned into TRTR andRTRT groups.In each period,2 mL:0.5 mg of the test or reference formulation was nebulized and inhaledorally in fasting state.The concentrations of budesonide in plasma were determined by a validated HPLC-MS/MS method,a noncompartment model of Phoenix WinNonlin(8.3.1)software was used to analyze thepharmacokinetic(PK)parameters of budesonide in plasma and evaluate the bioequivalence of the two formu-lations.All adverse events from administration to the end of follow-up were recorded.Results:The mainpharmacokinetic parameters of budesonide in plasma after trial participants inhaled the test and referenceformulations in fasting state were respectively as follows:Cmx,(1210693)and(1020494)pgmL-;AUCo-t(1660 546)and(1530 477)h pgmL-l;AUCo-,(1710 554)and(1580486)hpgmL-l;tmx 0.08(0.08,0.75)and 0.08(0.08,0.50)h;ti2,(3.571.26)and(3.310.98)h.The 90%confidence intervals for thegeometric mean ratios of Cmx,AUCo-and AUCo-of the test formulation to the reference formulation were104.75%-121.07%,104.93%-111.38%,and 104.89%-111.22%,respectively,all within the range of80.00%-125.00%.The incidence of adverse events was 5.0%.Conclusion:In fasting state,the test andreference formulations of budesonide nebuliser suspension have bioequivalence and good safety.KEY WORDS Budesonide;Suspension;Bioequivalence;Safety;Chinese healthy trial participant131