霍乱疫情应急处置关键技术专项方案.doc

湖南省澧县霍乱疫情应急处置技术方案
1．前言
霍乱是由O1血清群或O139血清群霍乱弧菌引起急性肠道传染病，是以发病急、传播快、波及范畴广、能引起大流行为特性严重危害人体健康甲类传染病，也是国际检疫传染病之一。霍乱潜伏期最短3—6小时，最长为数天，普通为12～72小时。重要临床体现为激烈腹泻(水样、黄水样、米泔水样或血水样便)，伴有呕吐，迅速浮现严重脱水，循环衰竭和肌肉痉挛(特别是腓肠肌)。
为及时发现我县霍乱疫情，迅速采用有效控制方略和办法，保障人民群众身体健康与生命安全，维护社会稳定，增进经济发展，依照《中华人民共和国传染病防治法》、《突发公共卫生事件应急条例》、《鹿泉市突发公共卫生事件应急预案》等关于规定，结合我市实际，制定本技术方案。
2．有关定义及诊断根据
2.1术语和定义
(1) 腹泻(0iarrhea)：是指1天排便3次或以上且具备粪便性状变化一种临床症状。
(2) 霍乱(Cholera)：是指因感染O1群或O139群霍乱弧菌并由此引起腹泻等症状一种急性肠道传染病。
(3) 暴发疫情：霍乱暴发是指一定地市一定人群中，在短时间内(普通指霍乱最长潜伏期)突然浮现较多霍乱病例，其发病率超过普通流行年平均发病水平。浮现1例。
2.2诊断原则
2.2.1带菌者：无霍乱临床体现，粪便、呕吐物或肛拭子细菌培养分离到0，群或／和O139群霍乱弧菌。
2.2.2疑似病例：具备下列三项之一者。
(1)凡有典型临床症状，如激烈腹泻，水样便(黄水样、清水样、米泔水样或血水样)，伴有呕吐，迅速浮现脱水或严重脱水，循环衰竭及肌肉痉挛(特别是腓肠肌)病例。
(2) 霍乱流行期间，与霍乱病人或带菌者有密切接触史，并发生泻吐症状者。
(3) 浮现无痛性腹泻或伴有呕吐，且粪便或呕吐物中霍乱弧菌迅速辅助诊断检测实验阳性病例。
2.2.3临床诊断病例：具备下列三项之一者均可视为临床诊断病例。
(1)疑似病例寻常生活用品或家居环境中检出O1群或/和O139群霍乱弧菌者；
(2)疑似病例粪便、呕吐物或肛拭子标本霍乱弧菌毒素基因PCR检测阳性者；
(3)在一起确认霍乱暴发疫情中，具备直接暴露史且在同一潜伏期内浮现无痛性腹泻或伴呕吐症状者。
2．2．4实验室确诊病例
(1)凡有腹泻症状，粪便、呕吐物或肛拭子标本培养O1群或／和O139群霍乱弧菌阳性者。
(2)在疫源检索中，粪便或肛拭子标本检出O1或／和O139群霍乱弧菌先后各5天内有腹泻症状者。
3．应急准备
3.1制定应急技术方案和关于操作规程
依照霍乱防制总体规定，结合本地历史上疫情发生状况和规律，科学分析年度疫情发生趋势；制定应急处置技术方案和关于操作规程。
3.2专业培训与应急演习
在高发季节之前以及流行期内，对卫生行政领导和管理人员、防疫人员、检查人员和临床医扩人员等进行专项培训，强化霍乱病例早发现、早报告和早隔离意识，开展流行病学、临床学、病原学、实验室诊断技术培训，推广有效控制疫情新办法和新技术。贯彻各项疫情控制技术准备工作，并依照状况组织应急演习。
3.3物资准备
依照疫情预测和防制工作实际需要，购买足量调查物资、消杀药物，配备必要急救治疗药械，涉及饮水消毒药物、污物排泄物消毒药物、迅速灭蝇灭蛆药物、必要急救治疗药物、器械和病床等。
(1)调查和资料分析用品：霍乱个案调查表以及其他有关表格、记录本。
(2)标本采集和现场检测用品：标本采集登记表、标本采集刚拭子(注意用于PCR检测标本采集拭子，应使用灭菌人造纤维拭子和塑料棒)、吸管、带盖可密闭塑料管、自封式塑料袋、标签纸、油墨耐水记录笔、装有运送培养基密闭试管、空培养皿和装好选取性(涉及强性和弱性)培养基培养皿、增菌培养基和装有增菌液培养瓶等。
(3)现场消杀用药物与器械：①惯用消毒杀虫剂：涉及漂白粉、漂精片、次。次氯酸钠、过氧乙酸、碘伏、戊二醛、环氧乙烷等；②配备器械：涉及喷雾器、刻度量杯装药物消毒箱等。
(4)现场防护用品：现场工作(流行病学调查、样品采集和消毒杀虫)防护用品，涉及—次性手套、长筒橡皮手套、长筒靴、工作服等。
(5)防止性服用药物：环丙沙星、氟哌酸等。
3.4霍乱监测
监测是防止和控制霍乱流行一项重要办法，在卫生行政部门领导下，由疾病防止控制中心负责组织实行，各关于医疗卫生单位承担详细任务。霍乱监测应采用点、面结合方式进行。
监测内容涉及：
(1)腹泻病人：腹泻病门诊按监测任务对腹泻病人采便培养，对疑似病人及时解决和上报。
(2)重点人群：依照防治工作需要，可在一定范畴内采检病人密切接触者、与病人有传播关系普通接触者及也许与流行关于重点职业人群，如外地民工、饮食及旅游服务行业人员、经常外出人员等。亦可采检有追溯传染来源意义往年病人、带菌者、旧疫点人群及来自疫区人群。
(3)外环境：每年疾病防止控制中心对外环境采样不少于10份，重要涉及：
①水体：指疫点周边及有直接关联水体，涉及河、湖、井、塘、沟水等，可在沟河盲端、市镇下水道排放处及医院污水排放处等地抽样检查。
在霍乱重复流行，水体容易检出阳性地区可设长期监测点。阳性水体定期复查直至转阴。此外，对河塘泥、水生动植物等也可视需要进行采检。
②其她：对公共厕所、粪坑、苍蝇和也许被病人污染其她物品、环境等，亦可恰当采样检查。
(4)食品：依照需要检查市售食物。重点检查市售熟肉、乳制品、食用生品半成品等。
3.5健康知识宣传
在肠道疾病流行季节，定期或不定期通过媒体、宣传画等各种方式向群众宣传肠道病防治办法等。
4．应急调查处置
4.1组织领导
依照疫情应急解决工作实际需要和事件级别，卫计局向县人民政府提出成立相应应急指挥组织机构建议。应急指挥机构迅速组织现场调查工作组到达现场。现场调查组普通涉及流行病学、实验室和临床医学、食品卫生、环境卫生等专业人员，现场调查组设立负责人，组织协调节个现场调查工作，调查构成员明确各自职责。
4.2疫情报告
按照《中华人民共和国传染病防治法》和《突发公共卫生事件与传染病疫情监测信息报告家管理办法》，各类医疗机构医务人员发现带菌者；疑似、临床诊断或确诊霍乱病例后，2小时内以最快方式向县疾控中心报告并进行网络直报；不具备网络直报条件应在诊断后2小时内以最快通讯方式向相应单位送(寄)出“中华人民共和国传染病报告卡”。确诊病例必要由疾病防止控制中心进行确认和报告，当发现霍乱确诊病例l例及以上时，要按关于疫情报告和《国家突发公共卫生事件有关信息报告管理工作规范(试行)》规定进行报告。
疾病防止控制中心在接到辖区内霍乱病例报告后，在以最快方式向县卫计局和上级疾病防止控制中心报告同步，及时组织关于人员进行调查、核算和解决，病例确诊后于2小时内填写墓本信息(见附表1—1霍乱个案基本信息表)，以传真形式及时上报关于部门。同步依照实验室检测成果、流行病学调查成果、疫情动态等状况变化，及时填报、更新和订正霍乱监测信息报告管理系统。所确·病例流行病学个案调查表(见附表1—2霍乱个案调查表)，于疫情结束后5日内上报关于部门。
4.3现场调查
4.3.1核算诊断
通过查看病例、访问病人和可以提供较详细病人发病与发病前生活信息人、查看病人检查信息甚至专家会诊等方式，收集病人基本状况涉及年龄、性别、地址、职业以及发病日期等，同步还要收集病人症状、体征和实验室检测资料以及发病危险因素如可疑水、食物及患同类病人接触史等。分析临床采样精确性，必要时重复采样进行检测。依照病例临床体现、实验室检查与流行病学资料进行综合分析，做出判断。
4.3.2流行病学调查
开展个案调查(见附表1—l《霍乱个案基本信息表》及附表1-2 《霍乱个案流行病学调查表》)，及时、完整、精确地填写调查表，以理解患者发病因素及疫源地现况，积累资料，作为本地流行病学分析基本。对疫点开展病原检索工作。在发生病例整个单位及与之有关单位开展暴发调查，拟定暴发规模，查明因素。迅速摸清发病时间分布、人群分布，拟定也许传染源与传播途径。在既有临床与流行病学资料难以拟定感染来源和途径时，需要提出假设，开展专项调查；通过病例—对照研究、实验室检测等综合办法，验证假设，拟定感染来源、途径与流行因素。
4.3.3样本采集、运送和实验室检测
(1)标本采集
实验室检测与流行病学调查密切结合，在个案调查开展同步即对病人、疑似病人、密切接触者进行采样。采集标本涉及粪便、呕吐物、肛拭子、血液等。在工作能力可及状况下，要对每个病例收集标本分离霍乱弧菌。病原分离标本采集最佳在使用抗生素之前；必要时，也可对使用抗生素后病人、疑似病人及密切接触者采集标本进行检测。
对病人接触可疑食品、水体等，应规范采集标本进行病原分离。因会餐引起暴发，除采集可疑食品标本外，对食品清洗水源也需采样检测。怀疑或经病原分离确证感染来源为市售食品或原料时，应对市场有关食品进行采样检测。标本采集办法见附录1(各种标本采集办法)。
采集标本时详细填写标本送检单。病人或疑似病人标本送检单涉及标本编号、姓名、地址、发病时间、临床诊断、标本种类、采样地点(住院时填写医院和病房名称)、采样时间等内容：健康人标本送检单涉及标本编号、姓名、地址、与否为病人密切接触者(如果“是”，则同步记录病人姓名、发病日期、医院名称)、与否有共同餐饮史、标本种类、采样地点、采样时间等内容；食品或环境标本送检单涉及标本编号、标本名称、采样地点、采样时间等内容。标本管(盒)外表作明确标记，且所作标记应能防水、不易擦除。
(2)标本运送
采集标本宜及时解决和接种培养基进行增菌和／或培养。不能及时检测标本，需置于保存培养基(碱性蛋白胨水、文—腊氏保存液、Cary-Blair半固体保存培养基等)中保存。所有标本按照也许有霍乱弧菌对待，注意相应生物安全规定，置于结实、防水、密闭、耐压转运箱中，专人送往实验室。
(3)标本检测
实验室收到标本及时进行检测。所有标本一方面进行增菌，对食品和环境标本等，考虑二次增菌需要：典型病人水样腹泻标本可同步接种选取性培养基。标本最佳同步接种强选取培养基(如对霍乱弧菌具强选取性庆大霉素琼脂、对重要致病性弧菌选取性强TCBS琼脂、4号琼脂等)和弱选取培养基(碱性琼脂、碱性胆盐琼脂等)。对生长菌落鉴定参照卫生部疾控司《霍乱防治手册》(第五版)执行。
现场使用迅速检测办法，需要注意其检出敏捷度和应用范畴。原则上规定高敏捷度。可以使用检出限与病人标本中菌浓度相符合简易办法，但注意对成果解释和对整个腹泻人群参照价值。
对于分离到霍乱弧菌菌株、特别是分离来自首例和暴发疫情菌株，及时送常德市疾病控制中心实验室进行复核。对菌株重要进行如下实验分析：①通过原则诊断血清凝集实验(玻片凝集)进行鉴定和血清分群分型、O1群菌株生物分型实验；②运用必要生化实验进行鉴定和鉴别；⑧药物敏感性实验；④噬菌体生物分型；⑤霍乱毒素和毒素基因检测(如GMl-ELISA和PCR检测)。
疾病防止控制中心实验室依照实际工作能力完毕以上基本分析，及时上报常德市疾病控制中心。
4.4控制办法
在发生疫情后，迅速组织核算诊断，拟定疫情严重限度，以便及时采用针对性控制办法，防止疫情续发、蔓延，并尽快扑灭疫情。
4.4.1疫点、疫区划定及解决
对从首例病人检出埃尔托型霍乱弧菌应及时做噬菌体毕生物分型。如为流行株要及时划定疫点、疫区，并按下列规定解决。如为非流行株，按普通腹泻病菌解决。
4.4.1．1疫点、疫区划定
(1)疫点：指发生病人、疑似病人或发现带菌者地方，以及也许引起新感染地方。要依照流行：病学资料来划定疫点。重要涉及病人在发病前3天至隔离时活动范畴、与周边人群接触状况和其排泄物对外环境污染状况，以及本地基本卫生设施和卫生状况。普通以同门户出入住户，或与病人、疑似病人、带菌者生活上密切关于若干户为疫点范畴。依照传染源污染状况，一种传染源可有一种以上疫点。
(2)疫区：为了防止由疫点向外传播导致继发感染，依照疫点地理位置、水系分布、交通状况、自然村落等特点宋划定疫区。普通在农村以一种村或几种村、一种乡或毗邻乡，在都市以一种或几种居委会或一种街道为范畴划为疫区。可依照流行病学调查成果，适时调节疫区范畴。若为水源性暴发，可以饮水供应范畴划定疫区；若为食源性暴发，则可以进餐者活动范畴划定疫区。
划定疫点后应及时设岗封锁。除医务人员外，严格限制其她人员出入。进入人员必要穿隔离衣，戴手套、口罩，换鞋：出．疫点时在封锁圈边沿设立消毒站脱去手套、防护服、帽子、鞋，并进行手消毒清洗。
4.4.1.2疫点解决
(1)坚持“早、小、严、实”原则，即时间要早，范畴要小，办法要严，落在实处。疫点内有也许被污染物品未经消毒不得带出。
(2)隔离治疗传染源：病人、疑似病人和带菌者要及时送就近指定医院或治疗点治疗(重要采用mf0推荐0RS补液法)。不容许长距离转送病人。若确需转送病人，要随带盛放吐泻物容器。对途中污染物品、地面和运送病人之工具要随时消毒解决。
(3)疫点消毒：认真做好随时消毒和终末消毒，特别注意对病人、疑似病人和带菌者吐泻物和污染过环境、物品、饮用水等进行消毒和解决。消毒前向疫点内人群进行宣传、解释和简介消毒知识。随时消毒时向隔离健康人培训消毒剂用法并使之掌握。
①随时消毒：详细消毒办法详见《肠道传染病暴发后消毒和病媒生物控制技术方案》。
②终末消毒：在病家向病人家属解释消毒目、过程和注意事项，请病人家属配合开展工作，理解患者发病时居住和活动房间市域、触及物品以及吐泻物污染市域，将未受污染并且不能进行消毒物品进行遮掩或转移。消毒前需要穿戴好个人防护服和手套。消毒时先灭苍蝇、蟑螂，然后按由外向内顺序，喷雾或擦拭消毒门把手、地面、墙壁、家具、厕所等处：从不同房间以及最后退出时，边退边消毒通过地面。病人穿过衣物、吃过剩余食品、使用过餐具及其他生活用品、吐泻物等，按照随时消毒办法进行消毒。对于室外环境，依照流行病学调查和室外环境采集标本验检测成果，对污染市域及也许污染市域，特别水井和污水排放处等市域进行消毒。
(4)接触者管理：调查与传染源发病前5天内及病后有过饮食、生活上密切接触人，理解健康状况，特别是每口大便次数和性状，限制接触者活动范畴，对其排泄物要进行消毒，特别要注意防止污染水源。自开始解决之口起每日验大便1次，持续2次；并予以防止服药，可依照各地药敏实验状况选取药物。
(5)开展爱国卫生运动：加强饮用水消毒，劝导群众不喝生水，不吃生冷变质食物，禁止使用新粪施肥，应积极杀蛆灭蝇，改进环境卫生。
(6)如涉及跨辖区病例或密切接触者时，要及时按规定发出协查告知，紧密配合伙好调查解决工作。
(7)疫点解除：当疫点内上述办法均已贯彻，所有人员验便持续两次阴性，无续发病人或带菌者浮现时可予以解除。若有新病人和带菌者浮现，则继续做好疫点内各项工作，达到上述规定期再行解除。如无粪检条件，自疫点解决后5日内再无新病例浮现，可视为暴发流行已得到初步控制，转为常规防治和监测。
在特殊状况下，如新菌型浮现，流行初期，旅游地、人口稠密地区等，可实行疫点封锁并从严管理。
4.4.1.3疫区解决
为迅速控制疫情，除在疫点内采用严格防控办法外，还应在划定疫区范畴内开展群众性爱国卫生运动，加强疫点外围疾病控制工作，及时发现传染源，认真解决，防止传播。重要工作如下。
(1)加强卫生宣教，要点如下：
①不喝生水(未消毒)，不吃直接用生水洗过食物、不吃生冷变质食物，特别是海产品和水产品，不用生水漱口、刷牙；
②饭前便后洗手，碗筷要消毒，生熟炊具要分开，要防蝇灭蝇；
③不随处大便，不乱倒垃圾污物，不污染水源；发现吐泻病人及时报告；
④不到疫区外集镇赶集，不到病家或病村串门，不举办婚丧酒宴和节日会餐；
⑤市场购买熟食品和隔夜食品要加热煮透；
⑥饮用水消毒。
(2)及时发现病人、疑似病人和带菌者：医疗机构要加强腹泻病门诊和巡回医疗，对腹泻病人要做好登记报告、采便送检和及时治疗，发现疑似病人时要隔离留验：乡村医生要认真做好查病报病；对疫区人群，按流行病学指征进行检索，及时发现传染源，特别要及时发现首发病例同期内所有腹泻病人并及时解决。
(3)加强饮用水卫生管理：饮用河水地区，禁止在河内洗涤便柿、病人衣物、食具、食物及下河游泳；饮用塘水地区，倡导分塘用水，倡导用密闭取水办法；饮用井水地区，水井要有栏、有台、有盖、有公用水桶，要有专人负责饮用水消毒：饮用自来水地区，管网水和末梢水余氯含量要符合规定。
(4)加强饮食卫生和集市贸易管理：认真执行《中华人民共和国食品安全法》，不准出售不符合卫生规定食物。凡不符合卫生规定饮食店、摊要限期达到卫生规定，在未达到卫生规定前可暂时停止营业。饮食从业人员要接受带菌检查，发现阳性者要及时隔离治疗。对集市贸易要加强卫生管理，市场管理人员应严格执行各项卫生规章制度，卫生部门要加强督促检查。
(5)做好粪便管理，改进环境卫生，进行粪便无害化解决。粪便管理以不污染环境、达到杀蛆灭蝇为原则。要拆迁污染饮用水源厕所、粪缸，解决苍蝇孳生地，采用各种办法杀蛆灭蝇，改进环境卫生。
(6)限制人群流动，防止传染源扩散：禁止大型集会，必要时暂停集市贸易。
(7)限制一切大型会餐活动。
4.4.1.4疫情解除后观测
疫情解除后，为了防止再次发生疫情，必要继续做好如下几项工作，即：卫生宣教、“三管一灭”(管水、管食品、管粪便和消灭苍蝇)、群众性查病报病以及对腹泻病人和疑似病人妥善解决，有重点地开展人群检索、水体定点采样观测等。疫情解除后观测时间长短，可依照流行病学指征而定。
4.4.2阳性水体管理
对检出流行株阳性水体，必要加强管理。树立警示牌，告诫群众暂勿使用。在阳性水体周边检出病人和带菌者时，要引起警惕，防止水型暴发。与阳性水体关于地区，要加强联防。对周边人群或重点人群进行监测；对水体周边进一步做好饮用水消毒和粪便管理，教诲群众避免接触。在水体阳性期间，禁止在该水域从事捕捞等作业。
4.4.3阳性食品和管理
对被霍乱弧菌污染食品，必要加强管理，停止生产及销售，严防发生食源性传播、流行。要尽量查清也许污染来源以及销售去向，以便采用相应防制办法。同步加强对同类品种和周边关于食品监测。
4.5疫情控制效果评价
疫情控制期间，在流行病学调查和病原学检测基本上，动态分析疫情发展趋势和防治办法实行效果。
5．应急医疗救援
5.1霍乱病人医疗救治
初步确诊病人要在医院传染科病房或严格隔离医疗点治疗。医院、诊所收治霍乱病人后，治疗过程中需严格贯彻隔离办法，对病人使用物品必要进行浸泡或高压消毒，特别应注意病人吐泻物消毒，防止病原菌随污物排出到医院外。对霍乱病人应就近治疗，避免不必要转院。若因没有救治条件需要转送病人，转送过程中应严格隔离病人，随带盛放吐泻物容器，对途中污染和也许污染物品进行随时消毒解决。对霍乱死亡病例，尸体进行体表消毒后再予以火葬，病人入院后在急救治疗同步及时采便送检；如当时已停止排便，可用肛拭采便；如有呕吐物，也可同步送检。对陪护者同步采便送检。粪便、呕吐物标本采集一定要在服用抗生素之前，或在第一次口服当时，但并不是服药后就不再采集标本，霍乱病人，特别典型病人体内水分和电解质丢失严重，治疗原则是防止脱水、治疗脱水、纠正电解质紊乱、合理使用抗菌药物。病人应依照病情轻重及时给以补液。
5.2浮现大量病人时医疗救援
当集中浮现大量病人时，需要综合组织我市医疗资源开展应急救治工作。设立暂时医疗救治站(点)是应对浮现不能及时入院治疗大批病人医疗救援方式。对于建立暂时医疗救治站(点)，需要会同传染病流行学人员、环境卫生管理人员、医院负责人员、政府关于人员共同讨论地点选取，基本原则是离暴发点近，周边没有开放水源水体如池塘、河流等，便于卫生管理，有电力供应和防雨防风、防寒建筑或设施。暂时医疗救治站(点)建立和收治病人后，作为医院传染病房或重要疫点对待，贯彻隔离、防病、消毒等办法。
6．响应终结和善后解决
在霍乱疫情涉及地区范畴内所有霍乱疫点被解除后，可终结应急响应。符合终结条件时，由卫计局组织专家进行分析论证，提出终结应急响应建议，报县人民政府或应急指挥部批准后实行。
7．附件
7.1附表
附表1—1 霍乱个案基个信息表
附表1—2 霍乱个案流行病学调查表
附表2 霍乱菌株登记表
附表3 疫点、疫区有关人群霍乱弧菌检索登记表
附表4 疫点、疫区外环境及食品霍乱弧菌检索登记表
附表5 疫点、疫区有关人群、外环境及食品霍乱弧菌检索记录汇总表
7.2附录
附录1 各种标本采集办法
附录2 疫点消毒实行办法
附录3 霍乱弧菌分离与鉴定
附录4 霍乱实验室诊断有关实验技术
附录5 霍乱弧菌鉴别诊断

附录1
各种标本采集办法
1．粪便标本：对水样便以吸管吸取1～3毫升，成形便采集成人拇指大小便量，置于灭菌管内或经增菌后送检。任伺·容器均应加橡皮塞或将螺旋盖旋紧，容器外壁不可沾染粪便。采集肛拭子标本，以直肠拭子用保菌液或牛理盐水润湿后，由肛门插入直肠内3～5厘米处采集，转动取出，插入保存液或无菌试售；内送检。粪便标本应在2小时内尽快送检，否则标本应放入Cary-Blair运送培养基中。沾染粪便衣物、物品、地面，以及尸体肠内容物等也楞作为检材。所有采集拭子标本(肛拭子、食品及操作台等涂抹拭子)，当直接用于PCR检测时，不能使用棉拭子和木质拭子棒，由于此类材料中具有核酸扩增抑制剂，而要使用灭菌人造纤维拭子和塑料棒。
2．呕吐物标本：以吸管吸取l～3毫升，置司·密闭样品管及时送检。
3．食品标本：采集50～100克置于可密闭灭菌广口瓶、塑料瓶或厚自封塑料袋内，常温下迅速送实验室。
4．水产品标本：普通选用活或新鲜水生动物为采集对象，冰冻水生动物也可作为采集标本。采集水生动物鳃部和／或肠内容物等标本，置于采样瓶(管)或食品采样袋中密封，常温下送检；同步，以无菌棉签涂抹五只(条)以上某类水生动物体表和／或水生动物肛门，置于碱性蛋白胨水中送检，每管碱性蛋白胨水作一份样品看待。有条件可将水生动物整体采回实验室再进行解决。
5．水体标本：用火菌500毫升玻璃瓶采集相对静止表层水(深度30厘米以内) 500毫升，加盖密封后以牢固自封塑料袋包裹密封，常温下送实验室。取水点选取应结合流行病学调查资料而拟定；每个采样点应相距数米：同一采样点采集样本不少于2瓶，用于平行检测。采集标本水体按也许污染有霍乱弧菌刑‘待，’因而采样者应注意自身防护，同步避免水样沾染周边环境。
6，物体表面标本：以灭菌拭子蘸碱性蛋白胨水涂抹可疑物体表面，置于装有碱性蛋白胨水可密闭玻璃或塑料试管中，常温送检。

附录2
疫点消毒实行办法
1．消毒原则
1．1及时开展消毒工作：为减少传播机会，在接到疫情报告后都市应在6小时内，农村应在12小时内贯彻消毒办法。
1．2消毒范畴拟定：应以霍乱病人排出霍乱弧菌也许污染范畴为根据。
1．3消毒持续时间：应以霍乱流行状况和病原体监测成果为根据。
1．4消毒办法选取：应以消毒因子性能、消毒对象为根据。尽量避免破坏消毒对象使用价值和导致环境污染。
1．5对疑似霍乱病人疫点消毒：按确诊霍乱病人疫点进行消毒解决。
2．疫点随时消毒
2．1医疗机构防疫人员接到患者诊断与消毒告知单后，应及时到疫点指引随时消毒，必要时提供所需消毒剂和器械。
2．2在病家，随时消毒由病人陪伴或病人所在单位派人进行；在医院，随时消毒由医院安排专职人员进行。 ，
2．3交给病家使用消毒剂，应标明名称和用法。
2．4对病人应依照病情做到“三分开”与“六消毒”。
“三分开”：分住室、分饮食、分生活用品(涉及餐具、洗漱用品、便盆、痰罐等)：“六消毒”：消毒呕吐物和排泄物、消毒生活用品、消毒双手、消毒衣服、被单、消毒患者居室、消毒生活污水。
2．5病人陪伴和护理人员，除做好病人随时消毒外，应做好本人卫生防护。特别在护理病人后，应消毒双于。
2．6消毒指引人员与负责随时消毒人员，应共同填写疫点消毒工作记录，及时上报。必要时，采样进行消毒效果检测与评价。
3．疫点终末消毒
3．1消毒执行
在疾病防止控制中心监督指引下，由医院防保医生负责进行终末消毒。
3．2消毒程序
3．2．1消毒人员接到传染病消毒告知后，应在规定期间内迅速赶赴疫点开展终末消毒工作。
3．2．2在出发前，应检查所需消毒用品、消毒剂和防护用品，做好准备工作。
3．2．3消毒人员到达疫点，一方面核对门牌号和病人姓名，并向关于人员阐明来意，做好防疫知识宣传，禁止无关人员进入消毒市域内。
3．2．4脱掉外衣，放在自己带来布袋中(不要放在污染或也许受到污染地方)。更换隔离服、胶鞋，戴上口罩、帽子。如用过氧乙酸或含氯制剂时，须戴防护眼镜。
3．2．5仔细理解患者病前居住房间、活动场合，用过物品、家具，吐泻物倾倒或存储地点，以及污水排放处等，以拟定消毒范畴，并依照不同对象及其污染状况，选取适当消毒办法。
3．2．6进入疫点时，应先消毒关于通道。
3．2．7测量污染范畴内需消毒房屋及地面面积和体积，以及需消毒污水量。
3．2．8必要时，检查人员对不同消毒对象进行消毒前采样。
3．2．9消毒前应关闭门窗，将水缸盖好，将未被污染贵重衣物、饮食类食品、名贵字画及陈列物品收藏好。
3．2．10在关闭门窗前，应先于室内灭蝇，再进行其他消毒。
3．2．1l消毒室内地面、墙壁、家具和陈设物品时，应按照先上后下，先左后右，依次进行。
3．2．12病人用过餐具、饮具及污染衣物可在疫点内进行煮沸或浸泡消毒。作浸泡消毒时，必要使消毒液浸透被消毒物品。作擦拭消毒时，必要重复擦拭2～3次。对污染重、经济价值不大物品如废弃物等，征得病家批准后进行焚烧。
3．2．13室内消毒后，必要时对厕所、垃圾、下水道、自来水龙头或饮用水井等进行消毒。
3．2．14对病人密切接触者进行卫生解决。
3．2．15疫点消毒工作完毕后，先对消毒人员衣物、胶靴喷洒消毒后再脱下。衣物脱下，将污染面向内卷在一起，放在布袋中带回消毒。将所用消毒工具表面以消毒剂进行擦拭消毒。
3．2．16达规定消毒作用时间后，检查人员对不同消毒对象进行消毒后采样。
3．2．17填写疫点终末消毒工作记录。
3．2．18离开病家前，告诉病家开窗通风，擦拭打扫。
4．消毒人员注意事项
4．1消毒人员在出发前要检查应携带消毒工具与否齐备无端障，消毒剂与否齐全够用。
4.2消毒人员应积极获得病家合伙。在消毒过程中，应尽量采用物理消毒办法。在用消毒剂时应尽量选取对相应微生物杀虫灭作用良好，对物品损害轻微者。
4.3消毒人员在消毒过程中，不得吸烟、饮食，更不要随便走出消毒。同步应禁止无关人员进入消毒市域内。
4.4消毒人员工作时应认真细致，有条不紊，突出重点。凡应消毒物品，不得漏掉。严格市分已消毒和未消毒物品，勿使已消毒物品被再次污染。
4.5消毒完毕后，消毒人员携回污染工作衣物应及时分类作最后消毒。清点所消耗药物器材，加以整修、补充。填好消毒记录应及时上报。

附录3
霍乱弧菌分离与鉴定
1．标本收集
病人粪便、呕吐物、肛拭子为必取标本。水样便或呕吐物采样量普通为lml一3ml，成形便采用指甲大小粪量：肛拭子可用直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内3cm～5cm处旋转后取出，置增菌液或运送培养基送检。
2．标本送检
采得标本应及时接种于培养基。不能及时接种，应放入碱性蛋白胨水或文腊二氏保存液或插入Cary-Blair半固体保存培养基中送检。标本与保存液比例约为l：5。
3．分离培养
3．1增菌后分离培养：所有标本均应接种碱性蛋白胨水培养基置37℃增菌6h～8h后，从菌膜下表层取一接种环培养物，划线接种于强、弱选取性培养基各一种置37℃培养18h-24h。必要时进行二次增菌培养。
3．2直接分离培养：对急性期病人水样便标本在进行增菌培养同步可取一接种环或用肛拭子直接接种在选取性培养基上置37℃培养18h-24h。
3．3惯用强选取性培养基涉及庆大霉素琼脂、TCBS琼脂和四号琼脂等。弱选取性培养基普通使用碱性营养琼脂等。
3．4不同分离培养基上生长霍乱弧菌典型菌落特性不同，常用分离培养基37℃18h～24h培养物菌落特性如下：
3．4．1碱性营养琼脂：霍乱弧菌在碱性营养琼脂上生长菌落呈现为无色、圆形、透明或半透明、表面光滑、润湿、扁平或稍凸起、边沿整洁，菌落直径普通约为2毫米。
3．4．2庆大霉素琼脂和四号琼脂：菌落特性与碱性营养琼脂上生长菌落相似，但透明性略差，多呈半透明状，由于此类培养基均具有业硝酸盐成分，菌落中面呈灰色或灰黑色，并随培养时间延长而加深。
3．4．3 TCBS琼脂：菌落牛长呈黄色发亮、表面光滑、润湿、稍凸起、边沿整洁。
4．菌株鉴定
4．1菌株初筛：涉及玻片·凝集实验、氧化酶实验。
4．1．1玻片凝集实验

附录4
霍乱实验室诊断有关实验技术
1．霍乱弧菌毒素基因PCR检测
霍乱弧菌包括各种毒力有关因子，其中霍乱毒素是霍乱弧菌重要致病因子，因而，在霍乱诊断上霍乱毒素基因(ctxAB)PCR检测具备重要诊断价值。该办法特异性和敏捷度均较高，需要在符合PCR实验条件实验室中进行，同步需要严格核酸提取操作。
扩增检测霍乱毒素基因ctxAB引物为：
P1：5’—CTC AGA CGG GAT TTG TTA GGC ACG—3’
P2：5’—TCT ATC TCT GTA GCC CCT ATT ACG—3’
扩增产物长302bp。扩增参数为：
预变性：94℃min；
扩增循环：94℃ 30sec，68℃ 30sec，72℃ 30sec，共30个循环；
末轮延伸：72℃ 7min。
在不同厂商和型号PCR扩增仪器上，退火温度也许略有不同。该办法直接检测与否为产毒株，需注意有时会浮现山非产毒霍乱弧菌引起病例或小范畴暴发。
2．霍乱弧菌迅速辅助检测
当前使用霍乱弧菌胶体金迅速检测法较多，该办法重要针对检测01群和0139群霍
乱弧菌抗原成分：操作简朴。日前此类办法检出限为105个菌／毫升，因而在轻型病
例及带菌者调查中存在漏检也许，需要进行增菌培养后检测，以提高检出率。

附录5
霍乱弧菌鉴别诊断
1．副溶血弧菌肠炎
多数起病急骤，有食用海(水)产品或/和不洁食物史，潜伏期2h～4d，常先吐后泻，排便前去往有肠鸣、阵发性腹部剧痛，常为水样或类似痢疾样脓血便，个别重型患者大便可有清水样或洗肉水样。初期常有发热和其她中毒症状。大便培养副溶血弧菌阳性。
2．大肠杆菌性肠炎
2．1产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)性肠炎，潜伏期4h一24h，有发热、恶心呕吐及腹部绞痛，腹泻，黄水或清水样便，无脓血便，严重腹泻者亦可产生重度脱水，婴幼患儿常因而而危及生命。
2．2肠致病性大肠杆菌(EPEC)性肠炎，重要症状为腹泻，大便为黄色或黄绿色蛋花样便，量较多，常有特殊腥臭味；重者也会有脱水及全身症状。
以上两者粪便培养均可获得相应大肠杆菌。
3．鼠伤寒沙门菌感染
侵犯各年龄组，6个月以内婴儿易罹患，新生儿病情尤为严重，多发生于5月～8月份，常有发热，可有腹泻或败血症，腹泻，大便为稀水便，亦可有脓血便，常引起不同限度脱水，大便培养可获得鼠伤寒沙门氏菌。
4．空肠弯曲菌肠炎
本菌可侵袭空肠及结肠引起病变。现已证明本菌亦可产生肠毒素而致病，潜伏期3d～5d，起病初期有发热或有乏力、头痛及肌痛等症状，继而腹痛腹泻，大便为水样、粘液状、胆汁样或呈血性。严重病例可有重度脱水及循环衰竭。个别患者还可体现为急腹症。普通典型病例刁；难与霍乱鉴别，大便培养可检出弯曲菌。
5．病毒性肠炎
常用病原为人轮状病毒，侵犯各年龄组，多见于婴幼儿，好发于秋冬季，可呈流行性，某些患者同步伴有上呼吸道感染症状及发热，中毒症：吠轻，常为自I{艮性，腹泻次数可不多，大便稀软或黄水样，多无腹痛，成人病后常有l周～2周疲倦乏力。本病临床体现与轻型霍乱相似，但在流行中见不到与霍乱相似中、重型病例，粪便培养霍乱弧菌阴性，轮状病毒检查阳性。其她如诺瓦克杆(Norwalk—like)因子、腺病毒、冠状病毒、星状病毒等亦可引起腹泻，也需鉴别。
6．急性细菌性痢疾
由志贺菌引起，潜伏期1d～3d，起病急，以发热、腹痛、腹泻、里急后重、脓血便为重要特性，有全身中度中毒症状。重症患者伴有惊厥、头痛、全身肌肉酸痛，也可引起脱水利电解质紊乱。不典型急性菌痢以婴儿多见，多无全身中毒症状、不发热或低熟，腹痛较轻，粪便呈水样或稀糊样，含少量黏液，左下腹可有压痛，应注意鉴别。急性中毒性菌痢可浮现高热，在小朋友患者初期浮现烦躁、谵妄、惊厥等，发病初期肠道症状不明显，成人患者重要体现为脓血便频繁、循环系统症状明显。从粪便或肛拭标本等中检出志贺菌可确诊。
7．金黄色葡萄球菌所致腹泻
潜伏期短，从吃进食物至发病间隔为30min一8h，普通2h一4h。有严重恶心、痉挛性腹痛、呕吐及虚脱，常伴有腹泻，病程短，常1d～2d，为常用食物中毒，可 呈暴发性。收集病人粪便、呕吐物、肛拭子、可疑食品检出金黄色葡萄球菌进行确诊。