过敏性鼻炎和哮喘患者外周血及致敏小鼠血液或肺组织B细胞中TLR9的表达研究.pdf

第 卷第期年月西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)J o u r n a l o fX ia nJ i a o t o ngU n i v e r s i ty(M e d i c a l S c i e n c e s)V o l N o M a r 本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版基础研究过敏性鼻炎和哮喘患者外周血及致敏小鼠血液或肺组织B细胞中T L R 的表达研究田慧梅,何韶衡,张慧云(锦州医科大学基础医学院免疫教研室,辽宁锦州 ;锦州医科大学附属第一医院变态反应与临床免疫中心,辽宁锦州 )摘要:目的探究过敏性鼻炎(a l l e r g yr h i n i t i s,A R)、过敏性哮喘(a l l e r g ya s t h m a,AA)、A R合并AA(A Rc o m b i n e dw i t hAA,A R A)患者外周血和致敏小鼠血液或肺组织B淋巴细胞(B细胞)中T o l l样受体(T o l l l i k er e c e p t o r,T L R)的表达及过敏原对其表达的影响.方法招募来自锦州医科大学附属第一医院门诊和发作急性期住院的 例志愿者,包括点刺实验阴性的 例健康对照(h e a l t hc o n t r o l,HC)志愿者、点刺实验阳性的 例A R患者、例AA患者、例A R A患者.流式分析仪检测经屋尘螨过敏原提取物(h o m ed u s tm i t ea l l e r g e ne x t r a c t,HDME)、大籽蒿过敏原提取物(A r t e m i s i as i e v e r s i a n aw i l da l l e r g e ne x t r a c t,A S WE)、梧桐过敏原提取物(P l a t a n u sp o l l e na l l e r g e ne x t r a c t,P P E)刺激前后患者外周血B细胞中T L R 的表达;并采用野生(WT)小鼠和F c R I基因敲除(F c R I KO)小鼠建立A R和AA致敏模型,检测过敏原以及F c R I对B细胞中T L R 表达的影响.结果A R、AA、A R A患者外周血B细胞中T L R 的表达和平均荧光强度(m e a nf l u o r e s c e n c e i n t e n s i t y,MF I)均较HC组有所增高;过敏原激发后,A R、AA患者血液B细胞中T L R 的表达和MF I升高(P).WT小鼠和F c R I KO小鼠与N S对照组相比,过敏原激发后,A R、AA小鼠外周血B细胞T L R 高表达,但差异无统计学意义,而几乎每组MF I均升高;与N S对照组相比,过敏原激发后F c R I基因敲除的AA小鼠肺组织中T L R B细胞表达差异无统计学意义,但其MF I升高.F c R I KO小鼠与WT小鼠相比,过敏原激发后B细胞中T L R MF I较低.结论B细胞中T L R 可能参与A R、AA的发生,检测B细胞中T L R 的表达可能成为诊断A R、AA的新方向.关键词:T o l l样受体(T L R);B淋巴细胞(B细胞);过敏性鼻炎(A R);过敏性哮喘(AA)中图分类号:R 文献标志码:AD O I:/j d y x b 收稿日期:修回日期:基金项目:国家自然科学基金面上项目(N o )S u p p o r t e db yt h eN a t i o n a lN a t u r a lS c i e n c eF o u n d a t i o no fC h i n a(N o )通信作者:何韶衡,“长江学者”特聘教授 E m a i l:s h o a h e n g h e c o m网络出版地址:h t t p s:/l i n k c n k i n e t/u r l i d/R ()E x p r e s s i o no fT L R o fBc e l l s i nt h ep e r i p h e r a l b l o o do r l u n g t i s s u e so fp a t i e n t sw i t ha l l e r g i c r h i n i t i sa n da l l e r g i ca s t h m ao r s e n s i t i z e dm i c eT I AN H u i m e i,HES h a o h e n g,Z HANG H u i y u n(D e p a r t m e n to f I mm u n o l o g y,S c h o o l o fB a s i cM e d i c a lS c i e n c e s,J i n z h o uM e d i c a lU n i v e r s i t y,J i n z h o u ;R e s e a r c hC e n t e r f o rA l l e r g ya n dC l i n i c a l I mm u n i t y,T h eF i r s tA f f i l i a t e dH o s p i t a l o f J i n z h o uM e d i c a lU n i v e r s i t y,J i n z h o u ,C h i n a)A B S T R A C T:O b j e c t i v e T o i n v e s t iga t e t h ee xpr e s s i o no fT o l l l i k e r e c ept o r(T L R)i nBc e l l s i nt h epe r iph e r a lb l o o do fpa t i e n t sw i t ha l l e rgi c r h i n i t i s(AR),a l l e rgi ca s t h m a(AA),ARc o m b i n e dw i t hAA(ARA)a n d t h eb l o o do rl u ngt i s s u eo fs e n s i t i z e d m i c e,a sw e l la st h ee f f e c to fa l l e rge n so ni t se xpr e s s i o nM e t h o d sAt o t a lo f v o l u n t e e r s f r o mT h eF i r s tA f f i l i a t e dH o spi t a lo f J i n z h o uM e d i c a lU n i v e r s i tyw e r er e c r u i t e df o ro u tpa t i e n ta n da c u t ei npa t i e n ta t t a c k s,c o n s i s t i ngo f h e a l t hype opl e(H C)w i t hn ega t i v epr i c kt e s tr e s u l t,ARpa t i e n t s,AApa t i e n t s,a n d ARApa t i e n t sw i t hpo s i t i v epr i c kt e s t r e s u l t T h ee xpr e s s i o no fT L R i nt h epe r iph e r a l b l o o dBc e l l so f t h epa t i e n t sb e f o r ea n da f t e r s t i m u l a t i o nbyh o u s ed u s tm i t ea l l e rge ne x t r a c t(HDME),A r t e m i s i a s i e v e r s i a n aw i l da l l e rge ne x t r a c t(A S WE),a n dP l a t a n u spo l l e na l l e rge ne x t r a c t(P P E)w a sd e t e c t e dbyf l o wcyt o m e t ry ARa n dAAs e n s i t i z a t i o nm o d e l sw e r ee s t a b l i s h e d i nWTm i c ea n dF c R I KOm i c e t od e t e c t t h ee f f e c t so fa l l e rge n s a n dF c R Io n期田慧梅,何韶衡,张慧云过敏性鼻炎和哮喘患者外周血及致敏小鼠血液或肺组织B细胞中T L R 的表达研究本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版t h ee xpr e s s i o no fT L R i nBc e l l s R e s u l t sT h ee xpr e s s i o na n dm e a nf l u o r e s c e n c ei n t e n s i ty(MF I)o fT L R i npe r iph e r a l b l o o dBc e l l so fu n s t i m u l a t e dAR,AAa n dARApa t i e n t sw e r eh igh e rt h a nt h o s eo fHC A f t e ra l l e rge ns t i m u l a t i o n,t h ee xpr e s s i o no fT L R a n di t sMF I i nb l o o dBc e l l so fARa n dAApa t i e n t s i n c r e a s e d(P)I nWTm i c ea n dF c R I KO m i c e,c o mpa r e dw i t hN Sc o n t r o lm i c e,MF Iw a s i n c r e a s e d i na l m o s t e a c hgr o up C o mpa r e dw i t ht h eN Sc o n t r o lgr o up,t h e r ew a sn os ign i f i c a n td i f f e r e n c ei nt h ee xpr e s s i o no fT L R i nBc e l l si nt h el u ngt i s s u e so fAA m i c ew i t hF c R I KOa f t e ra l l e rge nc h a l l e nge,b u tt h e i r MF Ii n c r e a s e d F c R I KO m i c eh a dl o w e rT L R MF I i nBc e l l sa f t e ra l l e rge nc h a l l e ngec o mpa r e dw i t h WT m i c e C o n c l u s i o nT L R i nBc e l l sm ayb ei n v o l v e d i nt h eo c c u r r e n c eo fARa n dAA,a n dd e t e c t i ngt h ee xpr e s s i o no fT L R i nBc e l l sm ayb ean e wd i r e c t i o nf o r t h ed i agn o s i so fARa n dAAK E Y WO R D S:T o l l l i k er e c ept o r(T L R);Bc e l l;a l l e rgi cr h i n i t i s(AR);a l l e rgi ca s t h m a(AA)近年来,气道过敏性疾病的患病率逐年增加 ,尤其过敏性鼻炎(a l l e r g i c r h i n i t i s,A R)、过敏性哮喘(a l l e r g i ca s t h m a,AA)、A R合并AA(A Rc o m b i n e dw i t hAA,A R A)最为典型 .作为体内唯一产生免疫球蛋白的B淋巴细胞(B细胞),在机体体液免疫功能方面发挥不可或缺的作用.在过敏性疾病中,B细胞通过产生特异性I g E发挥作用,且过敏性疾病患者B细胞数量显著增多.T o l l样受体(T o l l l i k e r e c e p t o r,T L R)是T L R s的一种,存在于A R患者鼻黏膜、骨髓、外周血的不同白细胞亚群中.研究发现,与健康人相比,A R患者鼻窦上皮细胞的T L R 表达显著降低,外周血嗜碱性粒细胞的T L R 表达增高,AA患者外周血单个核细胞T L R 表达升高,但目前却仍不清楚外周血B细胞中T L R 的表达情况.因此,本研究通过检测健康对照(h e a l t h yc o n t r o l,HC)和A R、AA、A R A患者外周血B细胞中T L R 的表达及平均荧光强度(m e a nf l u o r e s c e n c ei n t e n s i t y,MF I),检测经不同过敏原激发前后患者外周血B细胞中T L R 的表达变化;并通过构建A R、AA致敏小鼠模型,检测过敏原致敏前后野生(w i l dt y p e,WT)小鼠和F c 受体I基因敲除(F c R I KO)小鼠血液B细胞中和肺组织B细胞中T L R 的表达变化,探讨B细胞T L R 的表达在气道过敏疾病发病机制中的作用.材料与方法主要设备及试剂美国B i o l e g e n d公司的A P C/C y 抗人C D 抗体、A P C 抗鼠T L R 抗体、A P C 鼠I g G a同型抗体、B V 抗 鼠C D 抗 体、F I T C 抗 人C D (T L R)抗体、F I T C 鼠I g G b同型抗体、F c X(F c受体阻断剂)、红细胞裂解液()、Z o m b i eA q u aF i x a b l eV i a b i l i t yK i t死细胞去除染料;中国S o l a r b i o公司的型胶原酶、P B S()、透明质酸酶、青链霉素混合液;美国B D公司的C y t o f i x/C y t o p e r m(胞内固定液)、P e r m/W a s h(透膜液)、F A C S V e r s e流式细胞仪;美国G i b c oB R L公司的DMEM、F B S、培养基;中国新华联药业有限公司的大籽蒿过敏原提取物(A r t e m i s i a s i e v e r s i a n aw i l d a l l e r g e n e x t r a c t,A SWE)、屋 尘 螨 过 敏 原 提 取 物(H o m ed u s t m i t ea l l e r g e ne x t r a c t,HDME)、梧桐过敏原提取物(P l a t a n u sp o l l e na l l e r g e ne x t r a c t,P P E);美 国T h e r m oS c i e n t i f i c公司的低温高速离心机;日本O l y m p u s公司的C X R F S 显微镜.研究对象对来自锦州医科大学附属第一医院门诊的健康人和A R、AA、A R A发作急性期住院患者,进行皮肤点刺实验,点刺实验阳性的A R、AA、A R A患者和点刺实验阴性的健康人为研究对象(后文称为志愿者),即A R组、AA组、A R A组、HC组.收集其一般临床资料.经锦州医科大学附属第一医院伦理委员会批准(批件编号:KY ),共招募 例HC受试者、例A R、例AA和 例A R A志愿者.年中国过敏性鼻炎诊断和治疗指南 及 年第一版中国过敏性哮喘诊治指南 作为此次招募志愿者的纳入标准.志愿者近个月未服用任何药物且至少对两种过敏原过敏,并对本研究的目的、涉及的利益和潜 在风险知情 并 签 署 了 知 情 同意书.此研究使用的小鼠选购于中国辽宁长生生物技术股份公司的C 型WT鼠和中国江苏集萃药康生物科技股份有限公司C 型F c R I KO鼠.购买后均在锦州医科大学S P F级动物实验中心,在相对湿度 、()条件下,给予充足饮水和食料饲养,适应d后,选取周龄、体质量 g小鼠为实验所用.此研究小鼠实验由锦州医 科 大 学 动 物 伦 理 委 员 会 批 准(批 件 编 号:).流式细胞术检测外周血B细胞的T L R 表达每位志愿者均采集m L外周血于E D T A抗凝管.全血加入A S W E、H D M E、P P E(质量浓度为g/m L).水浴孵育h,r/m i n离心后弃上清;加P B S西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)第 卷本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版混匀后再次离心.每管加死细胞去除染料和F c受体阻断 剂,避 光 孵 育 m i n.加 入A P C/C y 抗 人C D 抗体吹匀后室温孵育 m i n.加红细胞裂解液吹匀,室温避光孵育 m i n(时间不可过长),r/m i n离心后弃红色上层,加P B S吹匀,再次离心弃上清液.加胞内固定液孵育 m i n,经透膜液洗后,r/m i n离心后弃上清液.加入F I T C 抗人C D (T L R)抗体混匀,孵育 m i n,再次清洗后,r/m i n离心,弃上清液,加 LP B S后进行流式细胞分析仪检测.小鼠动物造模及实验检测实验分组将项中符合要求的WT小鼠和F c R I KO小鼠分别随机分成组,每组只,分别为 实 验 组(过 敏 原 致 敏过 敏 原 激 发:HDME HDME,A SWE A SWE),实验对照组(过敏原致敏盐水激发:HDME N S,A SWE N S),空白对照组(盐水致敏盐水激发:N S N S).A R小鼠造模HDME致敏步骤如下:致敏:第、天腹腔注射m L致敏液 生理盐水 gHDMEm gA l(OH)佐剂;激发:第、天HDME HDME组小鼠用 L激发液(生理盐水 gHDME)滴鼻,HDME N S组用 L生理盐水滴鼻,每个鼻孔各 L.第 天滴鼻结束后,观察小鼠 m i n和 m i n的打喷嚏和挠鼻现象.A SWE致敏步骤如下:致敏:第天腹腔注射m L致敏液 生理盐水 gA SWE m gA l(OH)佐剂;第天腹腔注射m L致敏液(生理盐水 gA SWE);激发:第、天A SWE A SWE组 小 鼠 用 L激 发 液(gA SWE生理盐水)进行滴鼻,A SWE N S组用 L生理盐水滴鼻;N S N S组在致敏阶段和激发阶段皆用生理盐水代替致敏液和激发液.第 天滴鼻结束后,观察并记录各组小鼠 m i n和 m i n的打喷嚏和挠鼻现象.AA小鼠造模HDME致敏步骤如下:致敏:第、天腹腔注射m L致敏液 生理盐水 gHDMEm gA l(OH)佐剂;激发:HDME HDME组第 天每天 m i nHDME(g/m L)雾化,HDME N S组用生理盐水雾化.第 天雾化结束后,观察并记录小鼠 m i n和 m i n的打喷嚏和挠鼻现象.A SWE致敏步骤如下:致敏:第、天腹腔注射m L致敏液 生理盐水 gA SWEm gA l(OH)佐剂;激发:A SWE A SWE组第 天 每 天 m i n A SWE(g/m L)雾 化,A SWE N S组用生理盐水雾化.N S N S组在致敏阶段和激发阶段用生理盐水代替致敏液和激发液.第 天雾化结束后,观察并记录小鼠 m i n和 m i n的打喷嚏和挠鼻现象.各组小鼠血液及肺组织的取材及流式检测将分别用A SWE和HDME致敏后再激发制作的对A SWE过敏的A R和AA小鼠致敏模型和对HDME过敏的A R和AA小鼠致敏模型,分别模拟患者致敏状态.造模成功后将致敏的A R小鼠进行取血,AA小鼠取血和摘取肺组织.具体如下:将致敏的A R小鼠于第 天、AA小鼠于第 天摘眼球取血,分别置于含有E D T A抗凝剂的采血管中,取 L于各组圆底离心管中.取血后颈椎脱臼处死小鼠.AA小鼠摘取肺脏,DMEM洗液冲洗后,并进行组织消化.将肺组织剪碎,于DM E M中,r/m i n离心弃上清,重复次;重悬后于 震动摇床孵育h;m细 胞 滤 器 过 滤,加DMEM培 养 液 至 m L,r/m i n离心,弃上清,重复次,再加DMEM培养液摇床过夜,于 r/m i n离心弃上清,加DMEM重悬细胞,用牛鲍计数板进行白细胞计数后,将细胞稀释至 个/m L,各组分别取 L于相应圆底离心管中.所取的各组小鼠血液及肺组织样本管中,分别加入死细胞去除染料和F c受体阻断剂,室温避光孵育,加B V 抗鼠C D .各血液样本管加红细胞裂解液,室温避光孵育,r/m i n离心后弃上清液,加P B S吹匀后再次离心弃上清,加胞内固定液避光孵育 m i n;肺组织样本管中不需裂红,加胞内固定液避光孵育 m i n.各样本管 r/m i n离心,弃上清,加A P C 抗鼠T L R 抗体,避光孵育h;加透膜液,r/m i n离心.弃上清,加P B S吹匀后流式细胞分析仪检测.F l o w j o软件分析流式仪检测所得数据.统计学分析S P S S 统计学软件分析数据.多组间比较采用K r u s k a l W a l l i s秩和检验,组间差异有统计学意义时采用M a n n Wh i t n e yU检验并根据两两比较次数对检验水准进行调整;P 为差异有统计学意义.人外周血B细胞中T L R 的表达百分比及绘制MF I散点图;小鼠模型B细胞中T L R 的表达百分比及绘制MF I箱式图.结果志愿者一般资料的比较志愿者病史资料见表,组间在性别、年龄构成差异均无统计学意义.期田慧梅,何韶衡,张慧云过敏性鼻炎和哮喘患者外周血及致敏小鼠血液或肺组织B细胞中T L R 的表达研究本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版表志愿者的一般资料T a b G e n e r a l i n f o r m a t i o no f t h ev o l u n t e e r s一般资料HC(n)A R(n)AA(n)A R A(n)年龄(岁)()()()()男性/女性(n/n)/发病年龄中位数(岁)NA()()()病程中位数(年)NA()()()A S WE(S P T)(n)HDME(S P T)(n)P P E(S P T)(n)A R、A A、A R A患者外周血B细胞中T L R 的表达情况经C D B细胞T L R 设门圈图(图 A)后发现,A R、A A、A R A患者T L R B细胞比例分别高于H C组 倍、倍、倍(Z ,P ;Z ,P ;Z ,P ;图 B、C),A R、AA、A R A患 者 血 液T L R B细 胞MF I较HC组分别升高 倍、倍、倍(Z ,P ;Z ,P ;Z ,P ;图 D、E).A:B细胞的门控策略;B:C D B细胞中T L R 百分比()代表图;C:C D B细胞中T L R 百分比();D:C D B细胞中T L R 的平均荧光强度代表图;E:C D B细胞中T L R 的平均荧光强度比较.FMO:荧光扣除一;中间红色水平线代表中位数,P 表示差异有统计学意义.图人外周血C D B细胞中T L R 的表达比例和M F I结果图F i g G r a p h so fT L R p e r c e n t a g e a n dMF I i nh u m a np e r i p h e r a l b l o o dC D Bc e l l sHC组中,除P P E激发外,A SWE、HDME激发后较激发前T L R B细胞比例分别上升 倍、倍(Z ,P ;Z ,P );其MF I没有显著性差异(图 C).A R患者外周血经A S WE、H DM E、P P E激发后较激发前T L R B细胞表达分别增高 倍、倍、倍(Z ,P ;Z ,P ;Z ,P ;图 C),MF I分别增长 倍、西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)第 卷本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版 倍、倍(Z ,P ;Z ,P ;Z ,P ;图 E).AA组中,经A SWE、HDME、P P E激发后较激发前T L R B细胞比例分别增加 倍、倍、倍(Z ,P ;Z ,P ;Z ,P ;图 C),A SWE、P P E激发后T L R B细胞MF I增加 倍、倍(Z ,P ;Z ,P ;图 E),HDME刺激后T L R B细胞MF I无统计学差异.A R A组经A SWE、HDME、P P E刺激前后外周血T L R B细 胞 比 例 和MF I没 有 明 显 变 化(图 C、E).过敏原致敏小鼠模型血液B细胞中T L R 的表达情况经小鼠血液T L R C D B细胞圈门发现(图 A),A R致敏小鼠(图 B、C)、A A致敏小鼠(图 A、B)血液B细胞中T L R 均高表达,且无统计学差异.A R小鼠中,F c R I KO小鼠各过敏原激发组较WT组 小 鼠B细 胞T L R MF I分 别 下 降、(Z ,P ;Z ,P ;Z ,P ;Z ,P ;Z ,P ;图 D、E);WT小鼠中A SWE A SWE组较N S N S组B细胞T L R MF I升高 倍(Z ,P );HDME N S、HDME HDME较N S N S组B细胞T L R MF I分别升高 倍和 倍(Z ,P ;Z ,P );F c R I KO小鼠B细胞A SWE A SWE组较N S N S组升高 倍(Z ,P ),HDME N S组较N S N S组升高 倍(Z ,P ),HDME HDME组较N S N S组上升 倍(Z ,P ;图 E).A:A R小鼠B细胞门控策略;B:A R小鼠C D B细胞T L R 百分比代表图;C:A R小鼠C D B细胞T L R 百分比();D、E:A R小鼠C D B细胞中T L R MF I代表图及MF I比较.FMO:荧光减一对照;P 表示差异有统计学意义.图A R小鼠血液C D B细胞中T L R 的表达比例和M F I结果图F i g G r a p h so fT L R p e r c e n t a g ea n dMF I i nC D Bc e l l s i nA Rm o u s eb l o o d期田慧梅,何韶衡,张慧云过敏性鼻炎和哮喘患者外周血及致敏小鼠血液或肺组织B细胞中T L R 的表达研究本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版AA小鼠中,F c R I KO小鼠各激发组较WT小鼠对应组B细胞T L R MF I水平呈现下降趋势,分别为、(Z ,P ;Z ,P ;Z ,P ;Z ,P ;Z ,P );WT小鼠HDME N S和HDME HDME组B细胞T L R MF I均较N S N S组升高 倍、倍(Z ,P ;Z ,P ),F c R I KO小 鼠HDME N S和HDME H DM E组B细胞T L R M F I均较N S N S组升高 倍、倍(Z ,P ;Z ,P )(图 C、D).A:AA小鼠C D B细胞T L R 百分比代表图;B:AA小鼠血液C D B细胞T L R 百分比();C、D:AA小鼠C D B细胞中T L R MF I代表图及MF I比较.FMO:荧光扣除一;P 为差异有统计学意义.图A A小鼠血液C D B细胞中T L R 的表达比例和M F I结果图F i g G r a p h so fT L R p e r c e n t a g ea n dMF I i nC D Bc e l l s i nAA m o u s eb l o o d 过敏 原 致 敏A A小 鼠 肺 组 织B细 胞 中T L R 的表达情况AA致 敏 模 型 小 鼠 肺 组 织 中C D B细 胞T L R 流 式 检 测 的 门 控 策 略 见 图.结 果 显 示,F c R I KO小鼠肺组织各过敏原激发组B细胞T L R 的表达比 例均低于WT小 鼠;其MF I除HDME HDME组,F c R I KO小鼠其他激发组均低于WT小 鼠;F c R I KO小 鼠 中,HDME N S和HDME HDME组肺组织B细胞T L R MF I较N S N S组升高 倍、倍(Z ,P ;Z ,P ;图).图小鼠肺组织中B细胞门控策略F i g G a t i n gs t r a t e g i e so fBc e l l s i nm o u s e l u n gt i s s u e西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)第 卷本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版A:AA小鼠肺组织C D B细胞T L R 百分比代表图;B:AA小鼠肺组织C D B细胞T L R 百分比();C、D:AA小鼠肺组织C D B细胞中T L R MF I代表图及MF I比较.FMO:荧光扣除一;P 为差异有统计学意义.图A A小鼠肺组织中C D B细胞中T L R 的表达比例和M F I结果图F i g G r a p h so fT L R p e r c e n t a g ea n dMF I i nC D Bc e l l s i nAA m o u s e l u n gt i s s u e讨论有研究发现,过敏性疾病患者外周血B细胞的数量会远远大于健康者,且T L R 大量表达于A R患者 的 鼻 黏 膜 和 骨 髓 白 细 胞 中.S A C K E S E N等 的研究也指出T L R 激动剂可直接激活幼稚和记忆B细胞,细胞内T L R 会激活级联反应.本研究发现在静息状态下,A R、AA、A R A患者中C D B细胞T L R 表达和MF I均较健康人增高,提示B细胞中T L R 表达可能在气道过敏性疾病的发生发展中起重要作用.在A R致敏小鼠中,WT小鼠和F c R I KO小鼠致敏组血液B细胞中T L R MF I均较N S N S组高,A A致敏WT小鼠、F c R I K O鼠血液H DM E N S/H DM E H DM E组和肺组织F c R I KO鼠HDME HDME组B细胞T L R MF I较N S N S组均升高,这与患者外周血实验结果一致,进一步支持了T L R 通过B细胞参与气道过敏性疾病的发生.过敏原是气道过敏性疾病发生的首要因素.据报道,我国北 方约 的A R/AA患 者 和 南 方 约 的A R/AA患者对屋尘螨过敏 ,且 以上的城市中,约 的参与者显示花粉和杂草是过敏原.有研究称,在卵清蛋白(OVA)激发的WT小鼠中,T L R 的激活伴随着气道炎症,而T L R 的缺乏减 缓 其 发 生.本 研 究 发 现,HC外 周 血 经A SWE和HDME激发后T L R 表达增加;A R患者经三种过敏原激发后B细胞T L R 表达和MF I不同程度 升 高,A R小 鼠 结 果 与 其 一 致;AA患 者 在A SWE和P P E刺激后B细胞中T L R 表达和MF I增加,HDME刺激后T L R 百分比增加,这提示过敏原可能通过诱导B细胞中T L R 的表达参与气道过敏 性 疾 病 的 发 生 发 展.T L R 属 于 核 酸 感 应T L R s,猜测是过敏原粗提取液的核酸片段刺激B细胞并激活T L R,与C D 协同驱动抗体类别转换并诱导B细胞分泌I g E参与气道过敏.通过比较A R和AA模型F c R I KO小鼠与WT小鼠,发现F c R I KO小鼠血液B细胞中T L R MF I及肺组织B细胞中T L R 表达和MF I出现大部分低于WT小鼠的结果,这提示过敏原在A R、AA小鼠中对B细期田慧梅,何韶衡,张慧云过敏性鼻炎和哮喘患者外周血及致敏小鼠血液或肺组织B细胞中T L R 的表达研究本刊网址:h t t p:/y x x b x j t u e d u c n微信公众号:西安交通大学学报医学版胞T L R 的表达上调作用与F c R I相关机制有关联.综上所述,A R和AA患者及致敏小鼠血液B细胞中T L R 表达增加,提示B细胞中T L R 可能参与气道过敏疾病的发生发展,过敏原可能通过F c R I相关机制诱导B细胞中T L R 的表达从而加剧过敏性炎症.这可能是未来诊断气道过敏性疾病的新方向.参考文献:S CHU L E RI V CF,MO N T E J OJM A l l e rgi cr h i n i t i s i nc h i l d r e na n da d o l e s c e n t sJ I mm u n o lA l l e rg yC l i n N o r t h Am,():AKAR GH I B R I LN,C A S A L ET,C U S T OV I CA,e t a l A l l e r gi ce n d o ty pe sa n dph e n o ty pe so fa s t h m aJ JA l l e rg yC l i nI m m u n o lP r a c t,():ZHU W J,L I U Y,WANG G,e ta l I n t e r a c t i o ne f f e c t so fa s t h m aa n dr h i n i t i sc o n t r o lo nw o r kpr o d u c t i v i tya n da c t i v i tyi mpa i r m e n t:ac r o s s s e c t i o n a l s t u dyJ A l l e rg yA s t h m aP r o c,():T ONG H,GAOL,D E NG Y Q,e ta l P r e v a l e n c eo fa l l e rgi cr h i n i t i sa n da s s o c i a t e dr i s kf a c t o r s i nt o ye a r ss c h o o lc h i l d r e nf r o m W u h a n i nc e n t r a lC h i n a:ac r o s s s e c t i o n a l s t u dyJAmJR h i n o lA l l e rg y,():P ANGKY,L IGD,L IM H,e ta l P r e v a l e n c ea n dr i s kf a c t o r s f o r a l l e rgi c r h i n i t i s i nC h i n a:a sys t e m a t i c r e v i e wa n dm e t