DB37∕T 4051—2020 中兽药散剂中添加喹乙醇、乙酰甲喹的测定 超高效液相色谱-串联质谱法(山东省).pdf

TCS 11.220 B 41 DB37 山东省山巳ET且，万标准DB37/T 4051-2020 中兽药散剂中添加睦乙醇、乙酷甲H奎的测定超高效液相色谱-串联质谱法Determination addition of olaquindox and mequindox in traditional chinese veterinary drug-high performance liqud chromatography-tandem mass spectrometry 2020-07-09发布2020-08-09实施山东省市场监督管理局发布DB37/T 4051-2020 目次前言.11 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 原理.1 4 试剂或材料.5 仪器设备.2 6 测定步骤.2 6.1 提取.2 6.2 标准由线的制备.2 6.3 仪器参考条件.2 6.4 测定.3 7 数据处理.3 8 检测方法的精密度.4 附录A(资料性附录)哇乙醇、乙酌甲唾特征离于质量色谱图.5 I 目IJ1=1 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准白山东省畜牧兽医局提出并组织实施。本标准白山东省畜牧业专业标准化技术委员会归口。本标准起草单位:山东省兽药质量检验所。DB37/T 4051-2020 本标准主要起草人:章安源、牛华星、张传津、李有志、陈玲、刘需飞、陆庆泉、陈志强、魏秀丽、张志民、杨修镇。II DB37/T 4051-2020 中兽药散剂中添加睡乙醇、乙田先甲睡的测定超高效液相色谱一串联质谱法1 范围本标准规定了中兽药散剂中唾乙醇、乙国先甲喳的超高液相色谱串联质谱测定方法。本标准适用于中兽药散剂中唾乙醇、乙田先甲H奎的测定。本方法唾乙醇、乙酷甲唾检出限均为50mg/kg，定量限均为100mg/kgo 2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不住日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。3 原理中兽药散剂中的唾乙醇、乙田先甲口奎用乙睛溶液提取，经超高效液相色谱仪分离后，串联质谱检测，保留时间和高于丰度比对照定性，夕|、标法定量。4 试剂或材料除非另有规定，所用试剂均为色谱纯04.1 水:符合GB/T6682一级水的规定。4.2 乙睛(CH):色谱纯。4.3 甲酸(HCOOH):色i普纯。4.4 甲醇(CH，OH)色谱纯。4.5 流动相(0.1%甲酸水溶液):量取甲酸(4.3)1 mL，溶于水，移入1000 mL容量瓶中，稀释至刻度，过O.22m微孔滤膜备用。4.6 初始流动相(.5%乙腊梅液):量取乙睛(4.2)10 mL与水(4.1)190mL,昆匀后备用O4.7 60%乙睛溶液:量取乙睛(4.2)60 mL与O.1%甲酸水溶液(4.5)40 mL，混匀后备用。4.8 标准物质:喳乙醇，纯度注99.5%，乙酌甲哇，纯度二三99.6%。4.9 标准储备液:准确称取喳乙醇、乙酌甲唾标准物质(4.8)各10mg(准确至0.00001 g)，加甲醇溶液分别转移置10mL棕色容量瓶中，加甲醇(4.4)溶解井稀释至刻度，摇匀，得标准物质储备液。4.10 10g/mL的混合标准溶液:准确吸取哇乙醇、乙酷甲唾标准储备液(4.9)各1.0 mL，置100mL 棕色容量瓶中，加甲醇(4.4)溶解并稀释至刻度，摇匀O得10g/mL的混合标准溶液。现配现用。4.11 离，中管。4.12 有机微孔滤膜O.22m。5 仪器设备5.1 超高效液相色谱串联质谱仪:电喷雾离子源(ESI+)。5.2 分析天平:感量0.00001 g，感量0.0001 g，感量0.01g。5.3 超声波清洗器。6 测定步骤6.1 提取DB37/T 4051-2020 准确称取持测样品o.2 g(精确到0.001g)于250mL三角烧瓶中，加入50mL 60%乙睛溶液(4.7)超声提取15min，转移置100mL容量瓶中，加流动相(4.5)稀释至刻度。用1纸过滤，收集续滤液。准确吸取续滤液1.0 mL，置10mL容量瓶中，用流动相(4.5)稀释至刻度，摇匀，滤膜过滤，过滤液持测。同时按上述步骤故样品空白试验。6.2 标准曲线的制备准确吸取10g/mL的标准溶液(4.10)5.0 mL，置100mL容量瓶中，用空白试样溶液稀释至刻度，摇匀，得500日g/mL的标准溶液。分别吸取500日g/mL的标准溶液适量，用空白试样溶液音比稀释，得5日g/mL、10ng/mL、25日g/mL、50ng/mL、100ng/mL、125ng/mL、250ng/mL的标准物质系列工作液。6.3 仪器参考条件6.3.1 高效液相色谱参考条件色谱柱Cj，100 mmX 2.1 mm，粒径1.7m，或性能相当者。流动相A:乙睛。流动相B:o.1%甲酸水溶液。流速0.4mL/mi口。进样量5L。柱温35oC 0 液相色谱梯度洗脱条件见表10时间mln o.00 2.00 3.50 5.00 6 7 6.3.2 质谱参考条件表1液相色i昔梯度洗脱条件A%5 5 50 88 5 5 扫描模式:电喷雾正离子(ESI+)。B%95 95 50 12 95 95 2 离子喷雾电压5500 V。离子源温度500C。气帘气20psi。雾化气50psi。加热气50psi。检测方式:多反应监测(MRM)。喳乙醇、乙酌甲H奎的定性、定量离子对和碰撞能量见表2。表2定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量品名定量岗子对定性离子对去簇电压碰撞能量V eV 263.9143 隆乙醇263.9 143 97 41 263.9212 219143 乙毗甲H奎219 143 82 30 219185 6.4测定6.4.1 定性测定DB37/T 4051-2020 保留时间Illlll 1.09 3.35 通过样品溶液色谱图的保留时间、各色谱峰特征离子与相应标准溶液的保留时间、各色谱峰的特征离子相对照定性。样品溶液与标准溶液保留时间相对偏差应在:1:2.5%之内;样品溶液特征离子相对高于丰度与标准溶液的相对离子相对偏差不超过表3的规定，则可判断样品中存在乙酷甲日奎、唾乙醇。表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度%50 20至5010至20三三10允许的相对偏差，%士20士25士30士506.4.2 定量测定取样品溶液和标准溶液各5L注入液相色谱一串联质谱仪，在上述色谱一质谱条件下进行测定，记录特征离子质量色谱图，夕|、标法定量。标准溶液中乙酌甲H奎、H奎乙醇特征离子的质量色谱图参见附录A。7 数据处理试样中唾乙醇、乙酌甲喳的含量按式(1)计算:式中:X CfiVV3 AsmV2 J一一试样中唾乙醇、乙酌甲H莹的含量，单位为微克每千克(g/kg)C一-p奎乙醇、乙酌甲H奎标液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mUA一一试样中唾乙醇、乙酷甲哇峰面积1A，一一标准品唾乙醇、乙酌甲喳峰面积1(1)3 一一试样提取溶液总体积(00)，单位为毫升(mL);弘一一分取提取液体积(1)，单位为毫升(mL)见一一定容体积(0)，单位为毫升(mL)m一一试样的取样量，单位为克(g)。DB37/T 4051-2020 每个试样取两份进行平行测定，以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，结果保留三位有效数字。8 检测方法的精密度在重复性条件下两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。4 附录A(资料性附录)喳乙醇、乙酷甲H奎特征离子质量色谱图标准溶液中唾乙醇离子定量质量色谱图见图A.L X1Cof+MRM阳rs):263.SOJ/143四:XlD臼10:ky04frl Sarrpe 24(80)of kycy习1.8e4 1.09 1.004 1.4e4 且1.2e4.1.0e4 z 8CXX10 z 6000.0 4四JO.O2000.0 0.0 2.0 4寸口5.0 1口3.0 6 口Till程，mn图A.1 标准溶液中喳乙醇离子定量质量色谱图标准溶液中唾乙醇离子定性质量色谱图见图A.2o X1C of+MRM(7 pairs):263.9坦12.0田口a10:kyc1 frcm Sae 24(四1)of kycy对1.10 1.00e4 9000.00 8c汇10.00mh问-的FC叩3000.00 2000.00 1C仨盯00DB37/T 4051-2020 Max M国兑1.0e4cps4.0 5.0 0.00 1.0 2.0 3.0 下Ime，mn图A.2 标准溶液中喳乙醇离子定性质量色谱图6.0 5 标准溶液中乙酌甲唾离子定量质量色谱图见图A.30 X1Cof+MRM阳d阳，):219.00143)()Da 10:yxjk3 from Sample 24(80)of ky吗阻1.10e5 1.00e5 9.00e4 的且8.00e4U、7.00e46.00e4 c -5.00e4 E 4.00e4 3.00e4 2.0口e41.00e4 口口口1.0 2.0 3.0 Tirle，r刊n图A.3 标准溶液中乙t甲喳离子定量质量色谱图标准溶液中乙酌甲唾离子定性质量色谱图见图A.40 X1Cof+MRMpairs):219.000/185.000 Oa 10:yxjk1 from Sarnoie 24(80)of句句-2.9e4 2.5e4 且2.0e4U、1.5e4 Q)-z 1口e45口00.0口-口1.0 3.36 2.0 3.0 4.0 Tin悟，mn 5.0 图A.4标准溶液中乙t甲睡离子定性质量色谱图DB37/T 4051-2020 Max.1.1e5 cps 6.0 Ma义6.0 6