红细胞血型检测.pptx

,关爱生命 呵护健康,第二章 红细胞血型检测,黄冈市中心医院 肖 华,红细胞血型检测专家讲座,第1页,目录,第一节 输血前免疫学检验,第二节 盐水介质试验技术,第三节 酶处理试验技术,第四节 抗球蛋白试验技术,第五节 聚凝胺介质试验技术,第六节 微柱凝集试验技术,第七节 吸收放散技术,第八节 凝集试验技术,第九节 红细胞血型分子生物学检测技术,红细胞血型检测专家讲座,第2页,学习要求,1.,输血前检验主要包含哪些内容？,2.,受血者标本接收时注意事项有哪些？,3.ABO,血型和,RhD,血型判定时注意事项有哪些？,4.抗体筛选目标和意义是什么？,5,.,交叉配血试验影响原因有哪些？,6,.,抗球蛋白试验临床应用有哪些方面？,7.微柱凝聚试验技术原理是什么？,8.常见吸收放散试验方法有哪些？,9,.,红细胞血型分子生物学检测技术主要有哪些？,红细胞血型检测专家讲座,第3页,输血是临床上作为治疗或辅助治疗伎俩，但不适当血液制品输注将造成不良后果，严重者可危急生命。所以在输血前，严格按摄影关程序对受血者和供血者血液进行准确输血前血型血清学检验才能确保受血者安全。,第一节 输血前免疫学检验,红细胞血型检测专家讲座,第4页,目标：,输入血液成份在受血者体内发挥其有效作用,.,在正常情况下，输入红细胞在受血者体内不溶血，输入血浆成份不破坏受血者红细胞，即输入血液与受血者血液在免疫血液学方面“相容”，才能使受血者获益。,红细胞血型检测专家讲座,第5页,主要程序：,1、受血者血液标本处理；,2、,ABO,血型和,RhD,血型定型；,3、红细胞同种抗体筛查和判定；,4、交叉配血试验；,5、血小板输注前抗体检验和配合试验；,6、不规则抗体筛选和判定；,7、交叉配血结果汇报和发血等。,红细胞血型检测专家讲座,第6页,一、受血者标本处理,（一）标本采集,输血除了需要到达预期治疗效果外，必须确保输血安全。血样由临床护士完成，应严格恪守一次只能为一位受血抽取标本，标本不得从输液管或输液侧静脉中抽取。,（二）标本接收,输血科技师接收血样标本时，应认真查对受血者相关信息，尽可能了解受血者有没有输血史、药品史、妊娠史等情况。假如有输血史，这有必要深入了解最终一次输血日期，若,3,个月内输过血，那么供血者红细胞没有完全代谢消失，可能依然存在于血液循环中，造成血型定型试验中出现混合凝集结果。,红细胞血型检测专家讲座,第7页,（三）标本要求,1.,对输血前检验血液标本应严格要求能代表受血者当前免疫学情况，标本还需经判定和标识，确保其准确无误地来自受血者和供血者，应和血液申请单上内容一致。,2.,预防受血者血液标本稀释和（或）溶血，若采集过程中发生溶血则不能使用。,3.,受血者配血试验正确血液标本必须是输血前,3,天采集,4.,若受血者使用右旋糖酐、聚乙酰吡咯烷酮等治疗，应注意洗涤被检红细胞。,5.,每次输血后，受血者和供血者标本必须保留于,28,最少,7,天。,红细胞血型检测专家讲座,第8页,二、受血者和供血者,ABO,和,Rh,定型,红细胞血型检测专家讲座,第9页,红细胞血型检测专家讲座,第10页,上述两种试验能够相互验证，假如两个结果不符，应经过深入试验确认血型。,新生儿和出生后6个月之内婴儿因为血液中无ABO抗体或抗体很弱，该人群可只做正定型。新生儿血浆中可能存在来自母体抗体，应注意判别。,ABO定型有时会出现异常结果，其主要原因有技术和操作失误，还有受血者方面原因。,红细胞血型检测专家讲座,第11页,1.ABO,定型,最适反应温度为,4,，但在室温反应良好，所以常规,ABO,定型试验仅在室温进行。,(1),定型方法：正、反定型试管离心方法当前仍被认为是最可信赖,ABO,定型方法。,1),定型试剂：有些,ABO,血型诊疗试剂是以人血清汇聚而制成，但必须具备以下条件：第一，高效价,(1,：,128),IgM,抗,A,或抗,B,。第二，具很好亲和性并不含冷凝集素。第三，必需含有检测,A2,，,A2B,血型能力。第四，血清必须经过,HIV,，,HCV,，,HBV,等检验或经病毒灭活。另外一些,ABO,定型试剂是由来自培养细胞株单克隆抗体所制成。,红细胞血型检测专家讲座,第12页,正反定型不符分析基本程序,1、出现正反定型不符时，首先重复试验；,2、重新采集血液标本；,3、查询受血者既往病史及输血史和用药史等；,4、屡次洗涤标本红细胞或试剂红细胞，应换用新开启确实定为无细菌污染生理盐水洗涤红细胞；,5、应用抗-AB、抗-A1或抗-H检测红细胞；,6、分析O型筛选细胞检测结果，确定是否是同种异型或冷本身抗体干扰正反定型结果。,红细胞血型检测专家讲座,第13页,ABO正反定型临床应用,1、实施输血治疗首要步骤；,2、组织器官移植；,3、母、子ABO系统血型不合造成新生儿溶血病筛查。,红细胞血型检测专家讲座,第14页,ABO血型正反定型意义,：,1、反定型能够复检正定型血型结果准确性，纠正漏检、误报；,2、发觉正定型时难以发觉含有弱抗原亚型；,3、能够纠正一些患者因疾病原因造成红细胞抗原减弱而造成血型错误；,4、能够排除取得性抗原（如类B抗原）和冷凝集现象对红细胞定型干扰；,5、发觉一些亚型中不规则抗体。,红细胞血型检测专家讲座,第15页,2)ABO,亚型判定：,1、常见亚型,A亚型有：A,2、,A,3、,A,X、,A,M、,A,Y,B亚型有：B,2、,B,3、,B,X、,B,M,AB亚型有：A,2,B、A,3,B、A,X,B、AB,2、,AB,3、CIS,AB,2、,ABO,亚型判定通常使用以下试剂,抗,A,、抗,B,、抗,A,1,、抗,H,、抗,A,B、,A,1,红细胞、,A,2,红细胞、,B,型红细胞和,O,型红细胞。,有些工作者在定型试验中，常规地选择应用抗,AB,抗血清，以防止错误地把弱反应性,A,或,B,型红细胞分类为,O,型。普通抗,AB,试剂对,Ax,型红细胞可增加凝集反应强度。,红细胞血型检测专家讲座,第16页,(,一,)ABO,定型试验中常见问题：造成这种正反定型不一致原因主要有：,1),技术和管理错误：这是,ABO,定型中产生异常结果主要原因，包含：标本或试剂搞错；器材不洁；试剂污染或失效；离心过分或不足；阳性反应产生溶血现象未能识别；漏加试剂；结果统计或判断错误；细胞与血清间百分比不适当。,2),血清异常：血清蛋白引发缗钱状形成，影响反定型结果,3),红细胞致敏：受免疫球蛋白致敏红细胞，在含高蛋白介质试剂中，可发生凝集。,4),异常基因型：,ABO,亚型检验中，,A,、,B,抗原可能为弱抗原，难以检出。,红细胞血型检测专家讲座,第17页,5),近期输血：试验前曾输入过其它,ABO,血型不一致血液，使血液标本成为混合血型红细胞悬液，定型时显示“混合外观凝集”现象。,6),嵌合体血型：这种血型者体内有两类血型红细胞群体，定型时能够出现“混合外观凝集”现象。,7),疾病原因造成抗原减弱：一些白血病患者和难治性贫血患者中，,ABO,血型系统抗原性可受到抑制，检出困难。,8),红细胞多凝集现象：红细胞因遗传或取得性表面异常，发生多凝集现象。,9),取得性,B,：因为革兰阴性杆菌作用，红细胞可取得“类,B”,活性。,红细胞血型检测专家讲座,第18页,10),血型特异性物质过高：一些卵巢囊肿病例，血型物质浓度很高，可中和抗,A,和抗,B,定型试剂，要得到正确正定型结果，必须洗涤红细胞屡次。,11),近期内进行大量血浆置换治疗：因为使用大量非同型血浆作置换治疗，标本血清中含有所输供体提供抗,A,或抗,B,抗体，造成反定型错误。,12),异常血浆蛋白：受检者血浆中异常白蛋白、球蛋白百分比和高浓度纤维蛋白原等造成缗钱状形成，造成假凝集现象。,13),不规则抗体存在：受检者血浆中，含有,ABO,血型抗体以外不规则抗体，与试剂红细胞上其它血型抗原系统抗原起反应。,红细胞血型检测专家讲座,第19页,14),低丙种球蛋白血症：低丙种球蛋白血症,(,丙种球蛋白量减低,),病例，可能会因免疫球蛋白水平下降而使血清定型时不凝集或弱凝集反应。,15),药品等原因：药品、右旋糖醉及静脉注射一些造影剂可引发红细胞凝集或类似凝集。,16),年纪原因：免疫系统还未健全婴儿、由母亲被动取得抗体婴儿，或抗体水平下降老人，试验时可出现异常结果。,17),防腐剂原因：患者体内可能含有对防腐剂中成份或对混悬介质抗体，造成,ABO,定型差错,。,红细胞血型检测专家讲座,第20页,（二）,Rh(D),定型和定型试验中应注意问题：,Rh,定型主要判定,D,抗原（,IgG,抗,D,和,IgM,抗,D,）。,Rh,系统是最为复杂得多一个系统，抗原达50各种，包括临床主要有,D,、,C,、,c,、,E,、,e,五个抗原，其中,D,抗原免疫原性最强，仅次于,A,或,B,抗原。DEcCe,1、,Rh,定型,血型判定方法有：玻片法、试管法、微量板法、微柱凝胶法等。当前大部分医院都使用微柱凝胶卡式血型判定，方法简便快捷，准确度较高。,红细胞血型检测专家讲座,第21页,红细胞血型检测专家讲座,第22页,(1),造成,Rh,血型判定可能出现假阳性原因：,1),受检细胞已被免疫球蛋白致敏，或标本血清中含有引发红细胞凝集因子。,2),受检细胞与抗血清孵育时间过长，含高蛋白定型试剂会引发缗钱状形成。,3),标本抗凝不妥，受检过程中出现凝血或小纤维蛋白凝块，误判为阳性。,4),定型血清中含有事先未被检测其它特异性抗体，造成假阳性定型结果。,5),多凝集细胞造成定型假阳性。,6),判定用器材或抗血清被污染，造成假阳性。,红细胞血型检测专家讲座,第23页,(2),可能出现假阴性原因,1),受检细胞悬液浓度太高，与抗血清百分比失调。,2),漏加或错加定型血清。,3),定型血清使用方法错误，没有按说明书进行。,4),离心后重悬细胞扣时，摇动用力过分，摇散微弱凝集。,5),抗血清保留不妥，造成失效。,红细胞血型检测专家讲座,第24页,(,三,),弱,D,型,(Du,型,),血型及其判定：,Du,型抗原是,RhO(D),弱抗原，这种抗原通常与大部分盐水抗,D,试剂不产生直接凝集反应，而与部分,IgG,抗,D,血型用间接抗球蛋白试验反应阳性。所以当我们首次得到,Rh,阴性结果时，必须进行作,Rh,阴性确认试验，即用三种不一样批号,IgG,抗,D,定型，假如全部阴性方可认为该被检者为,Rh,阴性，不然，只要有一批为阳性，则可认为是,Du,型。,弱,D,人群作为献血者按照,RhD,阳性对待，其血液只能给,Rh,阳性受血者输注；作为受血者按照,RhD,阴性对待，只能接收,RhD,阴性血液。,红细胞血型检测专家讲座,第25页,三、不规则抗体筛选和判定,一、,概念：,1、不规则抗体：,是指血清中抗,-A,、抗,-B,以外其它血型抗体，也称意外抗体。不规则抗体包含同种抗体和本身抗体。,2、本身抗体：,受血者体内产生抗体，针对自己本身红细胞抗原这类抗体不但仅与本身红细胞凝集，通常也与多数红细胞发生凝集反应。,3、同种抗体：,不是针对本身抗原，而是与同种异基因红细胞发生反应，即与一些献血者红细胞出现凝集反应。,红细胞血型检测专家讲座,第26页,二、,不规则抗体筛查方法,抗体筛选试验标准是让受检血清与已知血型试剂红,细胞即筛选红细胞起反应，以发觉在,37,中有反应抗体,1.,盐水介质法：主要用于,IgM,类抗体筛查。,优点是：方法简单、操作简单、成本低廉。,缺点是：灵敏度低,2.,聚凝胺法：优点：与水盐介质法比灵敏度有所提升。,3.,抗球蛋白试验：缺点：操作繁琐、工作量大、耗时等,4.,酶法：能暴露隐蔽抗原，增强一些稀有抗原检测。但可能 会破坏有些抗原，影响检测。当前临床是已不用,5.,微柱凝胶卡式检测法,红细胞血型检测专家讲座,第27页,三、不规则抗体判定,抗体筛选试验用试剂筛选红细胞，通常是2或3个人份,O型红细胞成为一套试剂，每套试剂筛选红细胞中最少有,以下常见抗原：D、C、E、c、e、M、N，条件不足实,验室不一定具备Lua、V、Cw、Kpa、Jsa 类抗原。,一旦抗体被检出，应作抗体判定试验，以确定其特异性。,抗体判定试验包含以下主要内容：,(1)本身细胞检验：观察患者(受者)血清与患者(受者),本身细胞反应情况，确定血清内是否有本身抗体或本身,抗体和同种抗体二者同时存在。,(2),谱,红细胞：使用试剂细胞中谱细胞，应用各种抗体,检验技术，检测患者血清，确定其抗体特异性。,红细胞血型检测专家讲座,第28页,抗体判定试验结果解释及处理：,1.与谱细胞反应显著，确定为单一抗体或无法确定为单一抗体，应加以判别。,2.与谱细胞呈弱反应，结果不明确,（1）分析结果：,是否符合剂量效应,是否有一些个体差异抗原抗体,谱细胞是否新鲜,（2）改变试验方法,:,使用高灵敏度方法重复试验 添加试剂后重复试验带抗体增强后重复试验,适当增加血清与红细胞百分比，适当增加孵育时间,红细胞血型检测专家讲座,第29页,3.与全部谱细胞反应，本身细胞阴性,（1）强度不一致：可能存在混合抗体,（2）强度一致：,抗体可能为专于O细胞反应抗体（如：抗-I、抗-H、抗-HI）,可能针对高频抗原抗体,可能针对谱细胞抗体,4.,与全部谱细胞反应，本身细胞阳性,（1）存在本身抗体,（2）同种和本身抗体同时存在,（3）冷凝集：在冷凝集素作用下存在凝集红细胞,红细胞血型检测专家讲座,第30页,（4）假凝剂：在干扰因子作用下一可造成红细胞假凝集,（5）酶引发多凝集,（6）补体影响,5,.与谱细胞不反应，本身细胞阳性,可能是本身抗体或C,阳性,红细胞血型检测专家讲座,第31页,四、抗体筛查和判定影响原因,1.,抗体筛查和判定细胞质量,筛查细胞不包含低频率抗原，不能检出低频率抗原。,谱细胞：用于抗体判定试剂红细胞。,在选择不规则抗体筛查或判定细胞时，应符合当地域不规则抗体分布特点。,2.,试验方法,IgM,抗体在,4,，凝集强度显著大于室温，,37,会有减弱,3.,抗体特异性,抗体筛查试验为阴性，并不意味着被检血清中一定没有抗体,筛查细胞漏检,ABO,亚型抗体（如抗,-A,）,红细胞血型检测专家讲座,第32页,五 不规则抗体判定时遇见问题,1,.不规则抗体筛查阴性，输血后发觉溶血,（1）交叉配血假阴性,（2）抗球蛋白试验不规则抗体筛查假阴性,试剂保留不妥洗涤不充分试验操作,红细胞浓度过高造成凝集减弱或红细胞浓度过低造成凝集不易被观察到,2.不规则抗体筛查阳性，抗体特异性难以判定,（1）抗体筛查假阳性：,离心不妥试管污染硅胶管引发凝集,（2）谱细胞单一：应采取3个以上不一样供给商谱细胞系，排查抗体特异性。,红细胞血型检测专家讲座,第33页,四、交叉配血试验,（一）要求和内容,交叉配血要求：,主侧配血要求：,绝对不能够有凝集或溶血现象。,次测配血要求：,供血者血清加受血者红细胞在允许范围内，能够有凝集现象，但不能够有溶血,。,凝集,不凝集,红细胞血型检测专家讲座,第34页,交叉配血试验内容,患者,献血者,主侧,次侧,主侧配血,用患者血清与供,者红细胞进行试验,次测配血,供血者血清与患,者红细胞进行试验,红细胞血型检测专家讲座,第35页,交叉配血目标,交叉配血试验是输血前必要步骤，主要是检验受血者血清中有没有能破坏供血者红细胞抗体。主要目标是为了预防输血后产生溶血性反应。,尽可能确保对人和一个病人来说，输了供血者血不会引发有害反应，而且使红细胞在输注后能保持最长存活时间。,红细胞血型检测专家讲座,第36页,（二）结果解释及处理,1.,抗体筛查阴性，交叉配血相容：,绝大部分标本抗体筛查阴性，交叉配血也是相容。,2.,抗体筛查阴性，主侧交叉配合试验阳性,（,1,）复查血型,（,2,）主侧凝集类,B,抗原,（,3,）血清中可能含有一个,ABO,抗体，必要时能够做,ABO,亚型判定,（4）受血者血清中含有同种抗体,红细胞血型检测专家讲座,第37页,3.,抗体筛查试验阳性，主侧交叉配合试验阳性,（,1,）本身对照试验阴性：受血者体内有同种不规则抗体。,（,2,）本身对照试验阳性：受血者血清内可能有本身抗体或同时存在不规则抗体。,（三）影响原因,离子干扰,温度,操作不规范,离心不妥,红细胞血型检测专家讲座,第38页,第二节 盐水介质试验技术,盐水介质试验技术惯用于血型判定、血清中,IgM,类抗体筛查和判定、盐水介质交叉配血等。,基本方法,1.,平板法 用于,ABO,血型和,RhD,抗原定型,特点：简单、快速，但易污染环境。,2.,试管法 为定型试验方法，也可于半定量试验。,是输血前检验最惯用试验方法。,特点：简单、快速、易学，结果准确、可靠。,3.,微孔板法 为定性试验方法。,红细胞血型检测专家讲座,第39页,盐水介质配血方法,患者,献血者,主侧,次侧,离心,看结果,阳性,阴性,红细胞血型检测专家讲座,第40页,第三节 酶处理试验技术,原理：在酶作用下切断带有负电荷羧基基团唾液酸，降低,Zeta,电位，缩短红细胞之间距离。增强,IgG,抗体对红细胞凝集。,惯用正确酶：菠萝酶，无花果酶，木瓜酶,红细胞血型检测专家讲座,第41页,酶介质配血方法,患者,献血者,主侧,次侧,主次侧,均加酶,酶,上海市血液中心血,红细胞血型检测专家讲座,第42页,37,水浴30分钟,37,离心,看结果,阳性,阴性,红细胞血型检测专家讲座,第43页,结果判断,（,1,）阳性对照管凝集，阴性对照管凝集，被检管凝集为阳性，不出现凝集判定为阴性。,（,2,）阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管凝集，试验失败分析原因，重新试验。,红细胞血型检测专家讲座,第44页,第四节抗球蛋白试验技术,一、基本原理,抗球蛋白试验（,Coombs,试验）,主要用于检测血清中不完全抗体如：IgG、IgA和（或）补体如：C3、C4。,在盐水介质中，不完全抗体只能致敏红细胞，而不能使红细胞出现可见凝集反应，加入抗球蛋白试剂后，抗球蛋白分子,Fab,片段与红细胞表面受体结合，而产生红细胞凝集，所以采取此方法能够检测出血清中是否存在不完全抗体。,红细胞血型检测专家讲座,第45页,抗球蛋白试验原理图,红细胞血型检测专家讲座,第46页,二、分类及应用,抗球蛋白试验,直接,间接,致敏红细胞不完全抗体、补体,血清中不完全抗体,应用,HDN,诊疗、,AIHADE,诊疗、药品诱发型溶血病诊疗,交叉配血及血型判定、器官移植、等,红细胞血型检测专家讲座,第47页,抗球蛋白配血方法,患者,献血者,主侧,次侧,37,37,水浴30分钟,三洗,红细胞血型检测专家讲座,第48页,抗球蛋白配血方法,加抗球蛋白,抗球蛋白试剂,上海市血液中心血,离心,看结果,阳性,阴性,红细胞血型检测专家讲座,第49页,三、结果判断,直接抗球蛋白试验：,（,1,）阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管凝集，判定为阳性。,（,2,）阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，被检管不凝 集，须做阴性确认后判定结果。,（,3,）阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管凝集，结果不可信不能发出汇报，分析原因后重做试验。,红细胞血型检测专家讲座,第50页,间接抗球蛋白试验：,（,1,）阳性对照管展现凝集反应，阴性对照管不展现凝集反应，被检管展现凝集反应为阳性结果，表示被检者血清中含有抗体。,（,2,）阳性对照管不凝集和（或）阴性对照管出现凝集，试验失败，分析原因重做试验。,红细胞血型检测专家讲座,第51页,四、,注意事项,（一）直接抗球蛋白试验,1.抗球蛋白血清应按说明书使用最适稀释度，防止出现前带现象而误判为阴性。,2.结果判读时应转动拖拉，细胞扣摇散后，如肉眼未见凝集，应将反应物涂于玻片上，在在显微镜下观察确认阴性。,3.被检标本需用EDTA抗凝，防止出现假阳性；标本不宜久置，预防红细胞上已致敏抗体游离到血浆中，造成假阴性或阳性程度降低。,4.红细胞表面存在蛋白质就会与抗球蛋白结合。所以受检红细胞一定要充分洗涤，除去血清蛋白，防止假阴性产生。,5.如需深入分析体内致敏红细胞免疫球蛋白类型，能够分别以抗IgG、抗C3单价抗球蛋白血清进行试验。,红细胞血型检测专家讲座,第52页,（二）间,接抗球蛋白试验,1.,红细胞洗涤过程中不宜中途停顿，每次加生理盐水前要是红细胞完全悬浮；洗涤过程中预防交叉污染；应充分洗涤，防止残留抗体部分中和抗球蛋白试剂而产生假阴性。,2.,振摇试管不宜用力过大，防止将涣散红细胞凝块摇散，使强阳性结果误判为弱阳性结果，弱阳性结果误判为阴性，对于弱阳性结果观察细胞扣是否出现缺口来判读。,3.,离心后应马上看结果，不宜久置。,4.,致敏时间：,30-60,分钟，不超出,90,分钟,红细胞血型检测专家讲座,第53页,三、抗球蛋白试验影响原因,一、亲和力 亲和力常数越高，抗原抗体反应致敏阶段抗体水平越高,二、孵育时间和温度 37,孵育30-60分钟,三、离子强度 在单纯离子强度溶液中，可增强抗体结合作用，孵育时间将缩短到,15,30,分钟,四、抗原、抗体百分比 2滴血清对1滴25红细胞悬液,五、洗涤 应尽可能去除上清液，降低未结合免球蛋白。,六、体外补体致敏,七、红细胞本身凝集,红细胞血型检测专家讲座,第54页,第五节 聚凝胺介质试验技术,聚凝胺试验技术是一个快速、简便检测红细胞不完全抗体方法，可用来检测IgG抗体，但IgG抗体抗-K抗体除外。,一、试验原理,凝聚胺（polymatching）法首先利用低离子介质降低溶液离子强度，降低红细胞周围阳离子云，促进血清（浆）中抗体与红细胞对应抗原结合，再加入带亚电荷高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液，中和红细胞表面负电荷，缩短细胞间距，形成可逆非特异性聚集，并使IgG型抗体直接凝集红细胞。加入中和液后，仅由凝聚胺引发非特异性聚集，会因电荷中和而分散，而由抗体介导特异性凝集则不会分散。,红细胞血型检测专家讲座,第55页,聚凝胺(,Polybrene),配血方法,患者,献血者,主侧,次侧,室温放置,1 分钟,主次侧均,加聚凝胺,Polybrene,上海市血液中心血,红细胞血型检测专家讲座,第56页,聚凝胺(,Polybrene),配血方法,离心,聚凝胺引发红细胞非特异性凝集,重悬液,上海市血液中心血,主次侧均,加重悬液,看结果,阳性,阴性,红细胞血型检测专家讲座,第57页,二、应用范围,血型判定、抗体筛查及交叉配血试验,三、特点 灵敏、速度快、准确、操作要求高。,四、注意事项,1.,不能用含有枸橼酸钠和肝素抗凝标本,！,2.,用聚凝胺试验技术交叉配血，出现不配合时，要用抗球蛋白试验重做，结果不一致时，以抗球蛋白试验为主。,3.,聚凝胺只能是正常红细胞发生凝集，对缺乏唾液酸细胞（如：,T,细胞及,B,细胞）无作用。,红细胞血型检测专家讲座,第58页,第六节 微柱凝集试验技术,一、试验原理,凝胶含有分子筛效应和亲和效应，在微柱凝胶介质中红细胞抗原与对应抗体结合，利用凝胶空间位阻经低速离心，凝集红细胞悬浮在凝胶上层，而未和抗体结合红细胞则沉于凝胶底部（管底尖部）。,红细胞血型检测专家讲座,第59页,一、微柱凝胶试验原理,将红细胞和抗血清加在凝胶上部反应，离心后观察凝集红细胞，被阻挡在小柱中凝胶上部或中央，证实发生凝集反应，判断凝集反应阳性,游离红细胞，被挤过装有过滤介质小柱，而抵达小柱底部，证实未发生凝集判断阴性,.,操作及结果判定,红细胞血型检测专家讲座,第60页,二、应用,1.,抗球蛋白试验 直接抗球蛋白试验和 间接抗球蛋白试验。,2.ABO,血型判定 可做单纯粹定型，也可同时做正反定型。,3.,其它血型系统检测 如,Rh,其它抗原（,CcEe,）定型,三、特征及优点,1.,简便,2.,准确 结果清楚明确，可重复性强。,3.,敏感,4.,结果保留时间长,5.,标本用量少,6.,标准化,7.,安全,红细胞血型检测专家讲座,第61页,四、微柱凝集试验中可能存在问题,1.抗凝剂不足或不含抗凝剂血浆标本常出现假阳性。,2.试验室温度较低时，易出现假阳性结果。,3.抗原、抗体过少、过弱；抗原、抗体百分比不妥时易出现假阴性。,4.离心力过大时，轻易使弱阳性成为阴性格局。,5.溶血反应：,反应液是低渗溶液,温度过冷或过热,红细胞或抗体被污染,其它可使红细胞破坏理化原因,红细胞血型检测专家讲座,第62页,第七节 吸收放散试验,一、概念,1.,吸收试验,:,抗原与抗体结合是特异性，所以含有抗体活性血清加入对应抗原后，抗体活性下降或消失，这种作用称为吸收试验。,2.,放散试验是抗原与抗体结合是可逆，在物理条件改变时，抗体又会从抗原抗体复合物上分离下来，将抗体由抗原抗体复合物上分离下来试验称为放散试验,红细胞血型检测专家讲座,第63页,（一）相关概念,抗体可与对应抗原在适当条件下可发生凝集或致敏，这种结合是可逆，如改变一些试验条件，抗体可从红细胞解离下来，然后检测解离下来抗体。这种试验称为吸收放散试验。,冷本身抗体,：,理论上讲凡是,37,与本身红细胞不反应，而只有在低于,37,环境下才能和本身红细胞反应抗体均可称为冷本身抗体。实际上，冷本身抗体大多数只能在很低温度下,(,比如,4),与本身细胞反应。,温本身抗体,：,温本身抗体是指在,37,条件下能和本身红细胞反应抗体。当患者血清中含有温本身抗体时，患者普通都有些贫血或溶血症状。温本身抗体可分为两类,:,大多数情况下为,lgG,类温本身抗体，极少数情况下也会存在,IgM,性质温本身抗体,。,红细胞血型检测专家讲座,第64页,（二）吸收试验,冷抗体在,4,反应最强，通惯用冷吸收技术（本身抗体用本身红细胞吸收；同种抗体用对应红细胞吸收）。,IgM,抗体通常在,4,条件下比,22,或,37,更轻易吸收，且轻易完全吸收。,IgG,抗体通常在,37,吸收效果最好，但难以完全吸收。,1.,冷抗体吸收试验,应用范围：,本身冷抗体吸收其它冷抗体吸收,2.,温抗体吸收试验,应用范围：,本身冷抗体吸收其它冷抗体吸收,红细胞血型检测专家讲座,第65页,（三）放散试验,放散试验是把结合到红细胞膜上抗体解离下来，用于其它目标。经过放散试验得到含有或不含有抗体溶液称为放散液。,放散目标：得到红细胞上致敏抗体或没有抗体吸附红细胞，前者得到是本身抗体，用于本身吸收；后者得到是红细胞，用于血型判定和交叉配血。,放散方法：热放散技术、乙醚放散技术、磷酸氯喹放散技术、冻融放散技术、柠檬酸放散技术、二甲苯放散技术等。,红细胞血型检测专家讲座,第66页,1.,热放散技术,2.,乙醚放散技术,3.,磷酸氯喹放散技术,4.,冻融放散技术,5.,柠檬酸放散技术,红细胞血型检测专家讲座,第67页,（四）吸收放散试验应用,证实存在于红细胞上若抗原,分离、判定混合液体,除去血清中不需要抗体,浓缩低效价抗体,核实抗体特异性,利用吸收放散技术判定引发新生溶血病和免疫性输血反应抗体,研究判别免疫性溶血性贫血抗体,红细胞血型检测专家讲座,第68页,第八节 凝集抑制试验,一、,概述：,抗体能与有对应抗原红细胞发生特异性凝集，体液中可溶性抗原物质能与该抗体发生特异中和，抑制了抗体凝集红细胞作用。用这种可溶性物质来抑制抗体与红细胞凝集试验，称为凝集抑制试验。惯用于,ABH,或,Lewis,分泌状态检验，帮助,ABO,亚型确实认以及特殊情况下（红细胞标本完全溶血）,ABO,血型判定。,红细胞血型检测专家讲座,第69页,二、抑制物处理及抗体标化,搜集液体,唾液标本作为抑制物，煮沸使酶失活。,标化人源抗血清,抗体需经过倍比稀释，找出可也凝集红细胞至“”最高稀释度，并按照该稀释度进行稀释。,红细胞血型检测专家讲座,第70页,三、唾液中可溶性,ABH,血型物质检测,（一）结果分析,阴性对照管凝集强度普通为，阳性对照管凝集强度应为,，盐水对照管凝集强度硬度 与对应唾液测定管。,在,3,排试管中任何一管红细胞不凝集，均表明检测出唾液中存在对应血型物质。,稀释后效价管可造成红细胞凝集，最高稀释倍数倒数即为唾液中血型物质效价。,红细胞血型检测专家讲座,第71页,四、血型物质应用,（一）,IgM,抗体中和,适用范围,尝试用于,IgG,抗,-A,和（或）抗,-B,效价测定,ABO,血型抗体辅助判定,（二）特异性抗体确实定,适用范围,用已知血型物质来检测未知抗体特异性,红细胞血型检测专家讲座,第72页,第九节 红细胞血型分子生物学检测,一、,红细胞血型分子生物学检测技术,伴随分子生物学技术发展，检测基因结构和突变方法不停涌新。尤其是,PCR,技术问世后，各种与,PCR,相结合检测技术深入推进了基因研究发展。分子生物学技术应用与红细胞血型检测，使红细胞血型分析技术飞越了一个崭新阶段。,红细胞血型分子生物学检测方法有：,PCR-SSP,技术、,PCR-SSOP,技术、,PCR-RFLP,技术、,PCR-RDB,技术、,PCR-DNA,测序、基因芯片、,PCR,指纹图等。,红细胞血型检测专家讲座,第73页,PCR-SSP,即序列特异性引物引导,PCR,反应,PCR-SSOP,即序列特异性寡核苷酸探针,PCR-SSCP,即单链构象多态性,PCR-RFLP,即限制性片段长度多态性,PCR-RBD,即反向点杂交,PCR-DNA,测序,液相芯片法 又称悬浮点阵技术、,xMAP,（即灵活多元分析平台）、多元流式荧光微球检测技术。,红细胞血型检测专家讲座,第74页,二、应用,ABO,疑难血型判定,发觉,ABO,血型新等位基因,对于,ABO,基因突变研究,新生儿溶血病（,HDN,）辅助诊疗,一些疾病病理研究,法医个体识别,红细胞血型检测专家讲座,第75页,分子生物学检测血型技术应用，使血型分析到达了更精细水平，并所以发觉了更多血型多血型多态性。分子生物学检测血型技术与传统血清学技术比较，优点是试剂由化学合成，易于取得和标准化，取材轻易，无需新鲜血样而仅需微量样品等，现已成为血清学方法取得者和竞争者。,对小量含,DNA,任何组织样品，用分子生物学分型技术对红细胞抗原,den,基因型做判定，不受血清中本身抗体、不规则抗体以及疾病和假、弱凝集影响，对确保安全输血有着主要意义。,红细胞血型检测专家讲座,第76页,