肺动脉平滑肌细胞外泌体上调miR-106b-5p增强肺动脉内皮细胞Warburg效应促进动脉型肺动脉高压的分子机制.pdf

实用医学杂志 2023年第39卷第17期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.17肺动脉平滑肌细胞外泌体上调miR-106b-5p增强肺动脉内皮细胞Warburg效应促进动脉型肺动脉高压的分子机制艾丽菲热 买买提1 高静2 于子翔1 马依彤11新疆医科大学第一附属医院冠心病一科（乌鲁木齐 830054）；2新疆医科大学第五附属医院内分泌科（乌鲁木齐 830000）【摘要】目的探讨肺动脉平滑肌细胞与内皮细胞的胞间通讯在促进动脉型肺动脉高压（PAH）疾病进展中的作用机制。方法采集并分离健康个体（HC）和PAH患者外周血浆中的外泌体，并对其内的miRNAs进行微阵列测定和差异表达分析。体外缺氧诱导处理原代人肺动脉平滑肌细胞（hPASMCs）和原代肺动脉内皮细胞（hPAECs），分为常氧组和缺氧诱导组。生物信息学分析miR-106b-5p和USP32的序列互作位点。腺病毒转染过表达/敲低hPASMCs内miR-106b-5p，过表达/敲低hPAECs内PKM2。双荧光素酶报告基因分析确证二者的负作用方式。Western blot法测定胞内USP32、PKM2、GLUT1、HK2、LDHA蛋白质的表达水平。结果微阵列测定和差异表达分析结果显示，与HC组相比，PAH组外周血浆中外泌体内miR-106b-5p的水平明显上调。在体外，与常氧组相比，miR-106b-5p的水平在缺氧诱导组hPASMCs上清液外泌体内明显上调，而在hPAECs 细胞上清液外泌体中则无此变化。miR-106b-5p负调控USP32的表达。与 miR-NC 组/Inhibitor-NC 组相比，在 hPASMCs 中 miR-106b-5p mimic/miR-106b-5p inhibitor 处理后，胞内PKM2、GLUT1、HK2 和 LDHA 蛋白质表达明显增强/抑制。与 shRNA-NT 组/vector 组相比，在 hPAECs 中PKM2 shRNA/PKM2-OE 处理后，胞内 PKM2、GLUT1、HK2 和 LDHA 蛋白质表达明显抑制/增强（P 0.05）。结论hPASMCs通过外泌体上调miR-106b-5p增强hPAECs胞内Warburg效应，在动脉型肺动脉高压中具有潜在的促进疾病进展的作用。【关键词】动脉型肺动脉高压；肺动脉平滑肌细胞；肺动脉内皮细胞；外泌体；miR-106b-5p；Warburg效应【中图分类号】R544.1Upregulated miR106b5p in exosomes derived from pulmonary artery smooth muscle cells enhances Warburg effect of pulmonary artery endothelial cells and promotes arterial pulmonary hypertension MAIMAITI Ailifeire*，GAO Jing，YU Zixiang，MA Yitong.*Department of Coronary Heart Disease，the First Affiliated Hospital，Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，ChinaCorresponding author：MA Yitong Email：【Abstract】Objective To explore the mechanisms of inter-cellular communication between pulmonary artery smooth muscle cells and pulmonary artery endothelial cells in promoting the progression of arterial pulmonary hypertension（PAH）.Methods Exosomes in peripheral blood of healthy individuals（HC）and PAH patients were collected and isolated，and miRNAs in the exosomes were determined by microarray and differential expression analysis.Primary human pulmonary artery smooth muscle cells（hPASMCs）and primary human pulmonary artery endothelial cells（hPAECs）were treated with normoxia or hypoxia in vitro.Bioinformatics analysis was performed to detect sequence interaction sites between miR-106b-5p and USP32.Adenovirus was transinfectedinto the hPASMCs of over-expressed/knocked-down miR-106b-5p，or into the hPAECs of the over-expressed/knocked-down of PKM2.Dual luciferase reporter assay was used for confirming the sequence interaction of miR-106b-5p and USP32.The levels of USP32，PKM2，GLUT1，HK2 and LDHA were determined by Western blot.ResultsBy microarray assay and differential expression analysis，the level of miR-106b-5p in the peripheral blood-derived 基 础 研 究doi：10.3969/j.issn.1006-5725.2023.17.007基金项目：省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室开放课题项目（编号：SKL-HIDCA-2020-WF2）通信作者：马依彤 E-mail：myt-2190实用医学杂志 2023年第39卷第17期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.17exosomes was significantly up-regulated in the PAH group as compared with HC group.Compared with normoxia group cells，the level of miR-106b-5p was significantly up-regulated in the hypoxia-induced hPASMCs cells supernatant exomsomes，but not in the exosomes of hPAECs cells supernatant.MiR-106b-5p negatively regulated the expression of USP32.Compared with the miR-NC group/inhibitor-NC group，the expressions of PKM2，GLUT1，HK2 and LDHA were significantly enhanced/inhibited after miR-106b-5p mimic/miR-106b-5p inhibitor was treated with hPASMCs.Compared with shRNA-NT/vector group，PKM2 shRNA/PKM2-OE treatment in hPAECs significantly inhibited/enhanced intracellular expressions of PKM2，GLUT1，HK2，and LDHA（P0.05）.ConclusionHPASMCs enhances intracellular Warburg effect of hPAECs through up-regulating miR-106b-5p in exosomes，which has a potential role in promoting disease progression in arterial pulmonary hypertension.【Key words】arterial pulmonary hypertension；pulmonary smooth muscle cells；pulmonary endothelial cells；exosomes；miR-106b-5p；Warburg effect肺动脉高压（pulmonary hypertension，PH）的定义为个体在静息状态下平均肺动脉压为25 mmHg或以上。临床上，PH分为五大类，其中第一大类为动 脉 型 肺 动 脉 高 压（pulmonary arterial hypertension，PAH），指的是因肺血管疾病所致的 PH，是一种预后较差的慢性疾病1。PAH 是一种以心肺为单元的疾病，其特征是肺动脉高压下阻塞性肺血管重塑增加右心室后负荷，导致右心室肥厚和衰竭2-3。全球范围内成人 PAH 的发病率为 2.0 7.6 例/100 万人年，患病率为 11 26 例/100万人年4。我国PAH患者普遍面临着诊断延误、治疗不规范，医疗经济负担和心理负担重的问题5。迫切需要开发新的有效筛选和治疗PAH的医疗策略。目前临床上治疗PAH的药物主要是利尿剂和肺血管扩张剂，以及使用靶向药物。虽然可以改善患者的肺功能和血流动力学，但它们仅可改善症状，却无法治愈疾病和降低死亡率。PAH的5年死亡率仍约为50%6。肺动脉高压的病变过程涉及肺动脉内皮细胞（pulmonary artery endothelial cells，PAECs）、肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cells，PASMCs）等发生癌样增殖、抗凋亡、类癌表型（包括上皮-间质转化和纤维化等）转化等7。其中相关细胞所发生的代谢重编程类似于在肿瘤细胞中被广泛研究的 Warburg效应8。然而是什么导致了这些细胞在缺氧和炎症状态下，能量代谢途径发生转换，尚未知晓。这是阻遏PAH血管相关细胞癌样病变的关键和靶向药物开发的重点。在癌症相关领域的研究表明microRNAs（miRNAs）是调控癌细胞 Warburg 效应的重要参与者之一9。且在PAH的肺血管重塑过程中，肺血管细胞间可通过外泌体（exosomes）相互沟通，加速疾病进展10。因此在该研究中，拟对健康对照组和PAH患者外周血浆中的外泌体进行分离纯化，并对其内的miRNAs进行微阵列测定和差异表达分析，以期发现PAH相关的核心miRNAs分子，并探讨在 PASMCs 与 PAECs 的胞间通讯的外泌体中此miRNAs分子的关键作用。1材料与方法1.1 实 验 材 料 原 代 人 肺 动 脉 平 滑 肌 细 胞（hPASMCs）和原代人肺动脉内皮细胞（hPAECs）购自上海名劲生物（中国）。总外泌体分离试剂盒（4484450），外泌体-人 CD63 分离试剂盒（内含超顺磁性 Dynabeads）（10606D），mirVana miRNA 分离试剂盒（不含苯酚）（AM1561），GeneChip miRNA 4.0 Array（902446），兔抗人CD63单抗（PA5-96217），兔抗人-tubulin 多抗（PA1-16947），兔抗人 USP32多抗（PA5-60690），兔抗人PKM2多抗（PA5-28700），兔抗人GLUT1多抗（PA1-46152），兔抗人HK2多抗（PA5-29326），兔抗人 LDHA 多抗（PA5-27406），兔抗人 GAPDH 多抗（PA1-988），miR-106b-5p mimic 和其对照组 miR-NC（4464066），miR-106b-5p inhibitor 和 其 对 照 组 Inhibitor-NC（AM10067）购 自Thermo Fisher（美国）。PKM2 ORF 上、下游引物，shRNA-NT，PKM2 shRNA 委托上海生工生物科技有限公司（中国）代为合成。1.2方法1.2.1PAH 患者血浆样本的采集招募 2022 年3-5 月期间被我院诊断为 PAH 并住院治疗的患者（n=10，男4例，女6例）参加本项目的研究。同时招募未接受任何药物治疗的健康个体（n=9，男5例，女4例）作为健康对照（healthy controls，HC）纳入本次研究，并与PAH患者在同一时间采集外周静脉血样本。本次研究得到了我院伦理委员会的批准（审批号：20220113-08），并根据 赫尔辛基宣言 的伦理原则进行。采用（3.8%）柠檬酸抗凝管采集 PAH 患者和 HC 个体外周静脉血 5 mL。分离上层血浆，约 2 mL/样本，冻存于-80 冰箱备用。1.2.2外泌体囊泡的分离与鉴定取 1 mL 血浆样本，使用总外泌体分离试剂盒分离血浆中的总2191实用医学杂志 2023年第39卷第17期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.17外泌体。具体分离方法参见试剂盒说明书进行即可。分离获得外泌体颗粒悬液后，使用外泌体-人CD63分离试剂盒（内含超顺磁性 Dynabeads）进一步富集CD63+外泌体。1.2.3外泌体 miRNAs 的纯化取 100 L CD63+外泌体样品，使用 mirVana miRNA 分离试剂盒（不含苯酚）分离其中的miRNAs，具体操作按照试剂盒的说明书进行。1.2.4外泌体miRNAs的微阵列测定和差异表达分析（MicroArray analysis）外泌体 miRNAs 的微阵列测定和差异表达分析，委托北京诺禾致源科技有限公司（中国）代为进行。微阵列芯片使用GeneChip miRNA 4.0 Array（902446）。使用R语言中的46ip miRNA 4.软件包，采用实验性贝叶斯法调节后的t-检验（an empirical Bayes moderated t-test）进行分析，使用“进行分atmap（v1.0.12）”软件包生成热图。1.2.5生物信息学分析miR106b5p与USP32的序列互作通过TargetScanHuman（v7.2）（网页版）（https：/www.targetscan.org/vert_72/）进行miR-106b-5p与USP32的序列互作分析。1.2.6细胞培养hPASMCs 和 hPAECs 细胞培养于含 10%胎牛血清的 RPMI-1640 完全培养液中。细胞置于 37 恒温湿润的 CO2孵育箱中维持培养。腺病毒转染hPASMCs 48 h后，收集并测定细胞上清液外泌体中 miR-106b-5p 的表达水平，确认转染成功后，建立 hPASMCs 和 hPAECs 的共培养体系。hPASMCs 培养于 24-孔板下层细胞培养皿中，hPAECs 培养于上层细胞小室，细胞培养液连通两种细胞培养物。共培养细胞置于 37 恒温湿润的 CO2孵育箱中，再培养 48 h 后测定下游指标。1.2.7体外细胞缺氧诱导hPASMCs 和 hPAECs细胞在常氧条件下（21%O2，5%CO2，74%N2）或缺氧（4%O2，5%CO2，91%N2）条件下维持培养 4 d，结束后收集细胞上清液，分离和纯化其中外泌体并进行下游指标测定11。1.2.8双荧光素酶报告基因分析使用双荧光素酶报告基因检测试剂盒进行测定。将 USP32 3-UTR-WT（USP32 WT）或 USP32 3-UTR-MUT（USP32 MUT）克隆并连接入试剂盒自带的 pGM-CMV Luciferase Reporter Plasmid 报告载体中。将1 105 HEK 293T 细胞接种在 24-孔板中，过夜培养待细胞贴壁。然后按照实验要求，使用 Lipofectamine 3000进行共转染。转染48 h后，按照试剂盒说明书的操作方法，上机酶标仪检测荧火虫荧光素酶活力和海肾荧光素酶活力。1.2.9qPCR使用 TRIzol 裂解液裂解细胞培养物。使用 EasyPure RNA Kit 提取细胞总 RNA，使用 EasyPure miRNA Kit 提取细胞总 miRNA。使用EasyScript One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix反转录合成cDNA。使用TransStart Green qPCR SuperMix进行qPCR反应。1.2.10Western blot使用 RIPA 裂解液裂解细胞培养物，收集总蛋白。BCA 法测定蛋白浓度，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离目标蛋白，湿转法转印目的蛋白至PVDF膜上，5%脱脂奶粉室温封闭2 h，一抗于4过夜孵育，次日孵育二抗1 h，随后ECL显影呈像。1.2.11转染采用腺病毒转染的方式敲低/过表达hPASMCs 的 miR-106b-5p，或敲低/过表达 hPAECs的PKM2。腺病毒过表达载体为pADV-mCMV-MCS-3xFLAG。腺病毒 shRNA 沉默载体为 pADV-U6-shRNA-CMV-EGFP。PKM2 ORF上游引物：5-GGA-TCCAGGGCGTCTGGGATG-3，PKM2 ORF 下游引物：5-UGACAUACAGGUAGGCUCUA-3。shRNA-NT：5-CTGTCTCACGATAGATGGATA-3，PKM2 sh-RNA：5-GCTGACACATTCCTGGAGCAC-3。委托上海和元生物进行腺病毒颗粒包装。腺病毒转染hPASMCs 或 hPAECs 时的滴度为 1010 PFU/mL。转染24 h后进行下游指标的测定。1.3统计学方法计量数据均以均数标准差的方式表示。使用GraphPad Prism v8软件对数据结果进行统计学分析。组间比较，两组间采用 t 检验，多组间采用单因素方差分析。当P 0.05时认为差异有统计学意义。2结果2.1PAH患者血浆外泌体中miR106b5p水平上调对来自HC和PAH个体外周血浆分离的外泌体表面标志物 CD63 的表达情况的鉴定结果，显示两种来源外泌体均为 CD63+（图 1）。微阵列法测定上述两种来源外泌体中前5位显著上调/下调的miRNAs，其中miR-106b-5p为显著上调的第3位（表 1）。qPCR 法测定常氧组和缺氧组 hPASMCs或hPAECs来源外泌体中miR-106b-5p的相对表达水平，与常氧组相比，缺氧组 hPASMCs 来源的外泌体中miR-106b-5p的相对表达水平显著上调；而hPAECs 来源的外泌体中，常氧组和缺氧组 miR-106b-5p的相对表达水平无明显差异（表2）。2.2miR106b5p通过负调控USP32上调PKM2通过TargetScan（v7.2）（网页版）对miR-106b-5p与USP32 的序列互作位点分析（图 2）。双荧光素酶报告基因分析结果显示，与 USP32 WT 共转染的2192实用医学杂志 2023年第39卷第17期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.17miR-NC组相比，与USP32 WT共转染的miR-106b-5p mimic组荧光素酶报告基因相对表达水平明显降低；而在与 USP32 MUT 共转染的 miR-NC 组和miR-106b-5p mimic 组之间，荧光素酶报告基因相对表达水平无明显差别（表3）。对hPASMCs进行miR-106b-5p过表达处理，然后测定与其共培养的上层hPAECs胞内USP32和PKM2蛋白质的表达情况，发现与 miR-NC 组相比，miR-106b-5p mimic 组USP32 的相对表达水平明显降低；miR-NC 组和miR-106b-5p mimic 组胞内 PKM2 的相对表达水平明显上调（表4）。2.3hPASMCs 中过表达/敲低miR106b5p改变hPAECs的Warburg效应对hPASMCs进行过表达/敲低 miR-106b-5p 处理后，与 hPAECs 共培养，随后通过 Western blot 法测定上述 hPAECs 胞内Warburg-相关蛋白因子的表达情况，发现与 miR-NC 组 相 比，miR-106b-5p mimic 组 hPAECs 胞 内PKM2、GLUT1、HK2 和 LDHA 的相对表达水平均明显升高；而与 Inhibitor-NC 组相比，miR-106b-5p inhibitor 组 hPAECs 胞 内 PKM2、GLUT1、HK2 和LDHA的相对表达水平均明显降低（表5）。2.4敲低/过表达 PKM2 改变 hPAECs 的 Warburg效应Western blot 法测定Warburg效应相关蛋白质因子的相对表达水平，在 hPAECs 内敲低/过 表 达 PKM2 后，与 shRNA-NT 组 相 比，PKM2 shRNA 组胞内 PKM2、GLUT1、HK2 和 LDHA 的相对表达水平明显降低；与vector组相比，PKM2-OE组胞内 PKM2、GLUT1、HK2 和 LDHA 的相对表达水平明显增强（表6）。HCPAHCD63tubulin图1对HC和PAH个体外周血浆分离的外泌体标志物的测定Fig.1Identification of exosome marker for peripheral blood plasma separation in HC and PAH individuals表1PAH患者（n=10）血浆中前5位显著上调/下调的miRNAs，对照组为HC（n=9）Tab.1The top 5 significantly up-regulated/down-regulated miRNAs in the plasma of PAH patients（n=10）and HC in the control group（n=9）miRNAs显著上调hsa-miR-8075hsa-miR-6732-5phsa-miR-106b-5phsa-miR-6722Hsa-miR-486-5p显著下调hsa-miR-6089hsa-miR-3178hsa-miR-6089hsa-miR-6090hsa-miR-4466差异表达基因表达倍数取Log2.512 3462.301 7531.832 5811.597 8620.915 943-3.237 94-3.097 45-2.884 35-2.675 94-2.443 76校正后的P值0.018 2300.002 3740.008 2930.007 3950.029 7230.004 2670.006 7550.004 7560.005 6720.006 758表2细胞上清液外泌体中miR-106b-5p的表达水平Tab.2Expression level of miR-106b-5p in cell culture supernatant exosomes x s组别常氧组缺氧组t值P值hPASMCs1.0ECssi7.62Cssio34.010.001hPAECs1.0ECssi1.07Cssio2.380.072图2miR-106b-5p与USP32的序列互作分析Fig.2Sequence interaction analysis of miR-106b-5p and USP322193实用医学杂志 2023年第39卷第17期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.173讨论PAH血管重塑过程中，hPAECs和hPASMCs均表现出不同形式的类癌表型转化，包括高增殖和抗凋亡以及上皮-间质转化和纤维化等12。且二者在其各自的类癌表型转化过程中会通过外泌体进行胞间通讯和协同促进彼此的恶性进展13。为了发现在这种胞间通讯中起着核心调控作用的关键分子，本研究对 HC 组和 PAH 组外周血浆中的外泌体内含有的miRNAs 进行了微阵列测定和差异表达分析。在显著上调的miRNAs 列表里miR-106b-5p 位居第 3 位。由于 miR-106b-5p 与多种癌症的恶性表型和较差的预后密切相关14-15。且本研究对hPAECs 和hPASMCs 给予缺氧诱导处理后，miR-106b-5p 在 hPASMCs 的外泌体中上调，而在 hPAECs 的外泌体中无变化。随后对 miR-106b-5p 的下游 mRNAs 表达调控靶点进行了生物信息学分析，发现 miR-106b-5p 能够与 USP32（ubiquitin specific peptidase 32，泛素特异性肽酶32）表3荧光素酶报告基因相对表达水平Tab.3Relative expression levels of the luciferasereporter gene x s组别miR-NC组miR-106b-5p mimic组t值P值USP32 WT1.0 0.170.33 0.037.47 0.001USP32 MUT1.0 0.101.04 0.112.05 0.102表4qPCR测定USP32和PKM2 mRNA的表达Tab.4Expression of USP32 and PKM2 mRNA as determined by qPCR x s组别miR-NC组miR-106b-5p mimic组t值P值USP321.0 0.080.25 0.0416.710.001PKM21.0 0.062.23 0.1524.360.001表5hPAECs胞内Warburg-相关蛋白因子PKM2、GLUT1、HK2、LDHA的表达水平Tab.5Expression levels of Warburg-related protein factors PKM2，GLUT1，HK2，and LDHA in hPAECsx s组别miR-NC组miR-106b-5p mimic组t值P值Inhibitor-NC组miR-106b-5p inhibitor组t值P值PKM21.00 0.112.28 0.21*15.520.0011.12 0.070.22 0.04#15.230.001GLUT11.00 0.072.40 0.13*10.420.0011.05 0.080.45 0.03#16.690.001HK21.00 0.141.95 0.09*10.860.0010.94 0.100.51 0.04#22.250.001LDHA1.00 0.102.09 0.14*18.430.0011.11 0.060.18 0.02#33.360.001注：与miR-NC组比较，*P 0.001；与Inhibitor-NC组比较，#P 0.001表6Western blot法测定上述胞内Warburg-相关蛋白因子PKM2、GLUT1、HK2、LDHA的表达水平Tab.6Expression levels of Warburg-related protein factors PKM2，GLUT1，HK2，and LDHA as determinedby Western blot analysisx s组别shRNA-NT组PKM2 shRNA组t值P值vector组PKM2-OE组t值P值PKM21.00 0.130.27 0.03*13.790.0011.06 0.152.78 0.24#7.1070.002GLUT11.00 0.100.51 0.04*5.660.0050.97 0.112.26 0.17#6.350.003HK21.00 0.180.23 0.01*9.850.0011.08 0.091.88 0.13#16.580.001LDHA1.00 0.150.44 0.03*3.7560.021.11 0.072.47 0.16#11.880.001注：与shRNA-NT组比较，*P 0.05，与shRNA-NT组比较，*P 0.001；与vector组比较，#P 0.01，与vector组比较，#P 0.0012194实用医学杂志 2023年第39卷第17期 The Journal of Practical Medicine 2023 Vol.39 No.17的 3-UTR 区结合并充当“海绵体”并与 PKM2（Pyruvate Kinase M2，丙酮酸激酶M2）表达上调呈正相关。进一步的结果显示，在hPASMCs中过表达/敲低miR-106b-5p，将通过抑制/上调PKM2的表达，改变hPAECs的Warburg效应。泛素-蛋白酶体系统（ubiquitin-proteasome system，UPS）负责蛋白酶体降解，调节蛋白质的半衰期。先前针对其生物学功能的研究主要集中于其在促进乳腺癌和胃癌恶性进展和化疗药物耐药方面的关键作用16。在该研究中发现，hPASMCs通过外泌miR-106b-5p负调节hPAECs胞内USP32促进PKM2的稳定，并增强hPAECs的Warburg效应。丙酮酸激酶是Warburg效应的限速酶，在肿瘤细胞中，这一过程由PKM2的表达上调介导调控11。PKM2 的二聚体可转运至细胞核，与 HIF-1（hypoxia inducible factor 1 subunit alpha，缺氧诱导因子-1亚基）相互作用，调节许多Warburg效应相关酶的表达11，17。早期炎症刺激可激活血管内皮细胞代谢方向转向Warburg效应，并发出“伪缺氧”信号，稳定HIF-118-19。然后，大量稳定的HIF-1进入核内进一步正向调节其他HIF-依赖性Warburg效应相关酶基因的表达。在该研究结果中也显示，敲低/过表达PKM2能够改变hPAECs的Warburg效应。因此，在该研究结果中miR-106b-5p在hPASMCs与hPAECs的胞间通讯中通过充当USP32 的“海绵体”，调控hPAECs 的代谢重编程。这是一项重要的发现。筛选获得的标志物miR-106b-5p，可通过后续更大规模PAH患者血样分析加以验证。该研究为以miR-106b-5p为靶标，开发PAH治疗性分子靶向药物，奠定了一定的前期研究基础，积累了临床前研究资料。尽管在该研究中，未对miR-106b-5p作为PAH标志物的临床价值开展更大规模的验证研究，这是本次研究的局限。但目前基于该研究结果可知，hPASMCs 通过外泌体上调 miR-106b-5p 增强hPAECs 胞内 Warburg 效应和细胞增殖，在动脉型肺动脉高压中具有潜在的促进疾病进展的作用。【Authors contributions】MAIMAITI Ailifeire conducted all the experiments，processed statistical analysis of data and wrote the manuscript.GAO Jing participated in the experiments partially and reviewed the data independently.YU Zixiang reviewed the data and the manuscript independently.MA Yitong designed the research program，reviewed all of the data and the manuscript.All authors read and approved the final manuscript as submitted.参考文献1 THENAPPAN T，ORMISTON M L，RYAN 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