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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,第二讲微生物培养与应用,第1页,营养物质,生长繁殖,无机盐,碳,氮,液体培养基,判别,称量,灭菌,倒平板,第2页,消毒和灭菌,酒精,灼烧,高压蒸汽,无菌,50,第3页,连续划线,菌落,抑制或阻止,第4页,菌落数,尿素,酚红,刚果红,透明圈,第5页,纤维素,纤维二糖和葡萄糖,富含纤维素,增加纤维素菌浓度，以确保能够从样品中分离到所,需要微生物,产生透明圈,第6页,方法,先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应,在倒平板时就加入刚果红,过程,培养基长出菌落覆盖CR溶液(质量浓度为1 mg/mL),倒去CR溶液加入NaCl溶液(物质量浓度为,1 mol/L)倒掉NaCl溶液产生透明圈,配制CR溶液(质量浓度为10 mg/mL)灭菌按照1 mL CR溶液/200 mL培养基百分比混匀倒平板培养透明圈,优点,显示出颜色反应基本上是纤维素分解菌作用,操作简便，不存在菌落混杂问题,第7页,考点一,微生物培养基及其应用,考点一,考点二,考点三,营养要素,起源,功效,碳源,无机,碳源,有机,碳源,CO,2,、,NaHCO,3,、,CaCO,3,等含碳无机物,糖类、脂质、蛋白质、有,机酸、石油、花生粉饼等,组成细胞中物质和一些代谢产物,有些既是碳源又是能源,第8页,考点一,考点一,考点二,考点三,营养要素,起源,功效,氮源,无机,氮源,有机,氮源,NH,3,、铵盐、硝酸盐、,N,2,等,将无机氮合成含氮,代谢产物,生长因子,牛肉膏、蛋白胨、核酸、,尿素、氨基酸,合成蛋白质、核酸及含,氮代谢产物,维生素、氨基酸、碱基,酶和核酸组成成份,参加代谢过程中酶促反应,第9页,考点一,考点一,考点二,考点三,划分,标准,培养基种类,特点,应用,物理,性质,液体培养基,不加凝固剂,工业生产,半固体培养基,固体培养基,加凝固剂,(,如琼脂,),观察微生物运动、,分类判定,微生物分离、判定、,活菌计数、菌种保藏,第10页,考点一,考点一,考点二,考点三,划分,标准,培养基,种类,特点,应用,用途,选择培,养基,判别培,养基,培养基中加入某种,化学物质，以抑制,不需要微生物,生长，促进所需,微生物生长,培养、分离出特定微生物,(,如,培养酵母菌和霉菌，可在培,养基中加入青霉素；以尿素,为唯一氮源培养基用于分,离分解尿素细菌,),依据微生物代谢,特点，在培养基中,加入某种指示剂或,化学药品,判别不一样种类微生物,(,如,可用伊红,美蓝培养基判别,饮用水或乳制品中是否有大,肠杆菌,),第11页,考点一,考点一,考点二,考点三,划分标准,化学成份,培养基种类,特点,应用,天然培养基,合成培养基,含化学成份不明确天,然物质,培养基成份明确,(,用化,学成份已知化学物,质配成,),工业生产,分类、判别,第12页,考点一,考点一,考点二,考点三,第13页,考点一,考点一,考点二,考点三,解析,试题,答案,第14页,考点一,考点一,考点二,考点三,解析,试题,答案,第15页,考点一,考点一,考点二,考点三,牛肉膏,蛋白胨,NaCl,琼脂,蒸馏水,5.0 g,10.0 g,5.0 g,20.0 g,定容至,1 000 mL,解析,试题,答案,第16页,考点一,考点一,考点二,考点三,解析,试题,答案,第17页,考点二,微生物培养,考点一,考点二,考点三,第18页,考点二,考点一,考点二,考点三,方法,平板划线法,稀释涂布平板法,操作,过程,平板划线法中细胞分,离和稀释过程发生在接,种环在固体平板表面上,划线和移动过程中。,在线开始部分，微生,物往往连在一起生长，,伴随线延伸，菌体数,逐步降低，最终可能形,成纯种单个菌落,将分别盛有,9 mL,水,6,支试管灭菌，并按,10,1,10,6,次序编号；,用移液管吸收,1 mL,培养菌液，注入,10,1,倍稀释试管中。用手指轻压移液管上橡皮头，吹吸,3,次，使菌液与水充分混匀；,从,10,1,倍稀释试管中吸收,1 mL,稀释液，注入,10,2,倍稀释试管中，重复步混匀操作。依次类推，直到完成最终,1,支试管稀释,第19页,考点二,考点一,考点二,考点三,方法,注意,事项,接种环灼烧,a.,第一次划线前：杀死接种环上微生物，防止污染培养物；,b.,每次划线前：杀死残留菌种，确保每次划线菌种来自上一次划线末端；,c.,划线结束后：杀死残留菌种，防止污染环境和感染操作者,灼烧接种环之后，要冷却后再进行操作，以免温度太高杀死菌种；,划线时最终一区域不要与第一区域相连；,划线用力要大小适当，预防用力过大将培养基划破,稀释操作时：每支试管及其中,9 mL,水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰,1,2 cm,处,涂布平板时：,a.,涂布器用体积分数为,70%,酒精消毒，取出时，让多出酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少许酒精涂布器在酒精灯火焰上引燃；,b.,不要将过热涂布器放在盛放酒精烧杯中，以免引燃其中酒精；,c.,酒精灯与培养皿距离要适当，移液管管头不要接触任何物体,平板划线法,稀释涂布平板法,第20页,考点二,考点一,考点二,考点三,方法,目标,平板划线法,稀释涂布平板法,培养,在培养基上形成由单个菌种繁殖而来子细胞群体,菌落,平板冷凝后倒置培养，使培养基表面水分更加好地挥,发，预防皿盖上水珠落入培养基造成污染,第21页,考点二,考点一,考点二,考点三,条件,结果,惯用方法,应用范围,消毒,灭菌,较为温,和物,理或化,学方法,强烈理,化原因,仅杀死物体表面,或内部部分微,生物,(,不包含芽孢,和孢子,),杀死物体内外所,有微生物,(,包含,芽孢和孢子,),煮沸消毒法,巴氏消毒法,化学药剂消毒法,日惯用具,不耐高温液体,用酒精擦拭双手，用,氯气消毒水源,接种工具,灼烧灭菌法,干热灭菌法,玻璃器皿、金属工具,培养基及相关容器,高压蒸汽灭菌法,第22页,考点二,考点一,考点二,考点三,第23页,考点二,考点一,考点二,考点三,解析,试题,答案,第24页,考点二,考点一,考点二,考点三,解析,试题,答案,第25页,考点三,微生物纯化培养技术与筛选计数,考点一,考点二,土壤,采样,选择,培养,土壤中尿素分解菌,分离试验,土壤中纤维素分解菌分离试验,采集土壤应该选择,含有尿素土壤,采集土样应选择富含纤维素环境,选择土样，将土样放,在含有尿素作为唯一,氮源培养基上进行,选择培养,取土样，在无菌条件下装入锥形,瓶，在一定条件下振荡培养,1,2 d,，直到培养液混浊。选择培养目标是增加纤维素分解菌纯度，确保分离得到所需微生物,考点三,第26页,考点三,考点一,考点二,土壤中尿素分解,菌分离试验,土壤中纤维素分,解菌分离试验,梯度稀释,选取一定稀释范围样品,液进行培养以确保菌落数,在,30,300,依次将培养液稀释,10,1,到,10,7,倍,判定方法,在以尿素为唯一氮源培养,基中加入酚红指示剂，培养,某种细菌，若指示剂变红，,则,pH,升高，说明该种菌能,分解尿素,刚果红染色法，即在含有纤维,素培养基中，加入刚果红时，,刚果红与培养基中纤维素形,成红色复合物。当纤维素被分,解后，该复合物不能形成，培,养基中出现以纤维素分解菌为,中心透明圈,考点三,第27页,考点三,考点一,考点二,考点三,第28页,考点三,考点一,考点二,考点三,第29页,考点三,考点一,考点二,考点三,第30页,考点三,考点一,考点二,考点三,对照组,作用,现象,结论,未接种培养基,有没有杂菌污染,判断,未接种培养皿中,无菌落生长,未被杂菌污染,接种牛肉膏,蛋白胨培养基,选择培养基筛,选作用确实认,牛肉膏培养基上,菌落数大于选择培,养基上数目,选择培养基具,有筛选作用,第31页,考点三,考点一,考点二,考点三,第32页,考点三,考点一,考点二,考点三,解析,试题,答案,第33页,考点三,考点一,考点二,考点三,解析,试题,答案,第34页,考点三,考点一,考点二,考点三,解析,试题,答案,第35页,考点三,考点一,考点二,考点三,解析,试题,答案,第36页,考向一,微生物试验室培养,考向一,考向二,解析,试题,答案,第37页,考向一,考向一,考向二,解析,试题,答案,第38页,考向一,考向一,考向二,解析,试题,答案,第39页,考向一,考向一,考向二,解析,试题,答案,第40页,考向一,考向一,考向二,解析,试题,答案,第41页,考向一,考向一,考向二,解析,试题,答案,第42页,考向二,微生物分离与纯化,考向一,考向二,解析,试题,答案,第43页,考向二,考向一,考向二,解析,试题,答案,第44页,考向二,考向一,考向二,解析,试题,答案,第45页,解析,试题,答案,第46页,解析,试题,答案,第47页,解析,试题,答案,第48页,解析,试题,答案,第49页,解析,试题,答案,第50页,酵母膏,无机盐,淀粉,纤维素粉,琼脂,CR,溶液,水,培养基甲,培养基乙,解析,试题,答案,第51页,解析,试题,答案,第52页,解析,试题,答案,第53页,解析,试题,答案,第54页,解析,试题,答案,第55页,解析,试题,答案,第56页,解析,试题,答案,第57页,解析,试题,答案,第58页,解析,试题,答案,第59页,解析,试题,答案,第60页,解析,试题,答案,第61页,解析,试题,答案,第62页,解析,试题,答案,第63页,解析,试题,答案,第64页,解析,试题,答案,第65页,
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