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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本幻灯片资料仅供参考，不能作为科学依据，如有不当之处，请参考专业资料。,人体生物利用度及生物等效性(BA/BE),中国药科大学药代中心,杨劲,第1页,outline,生物利用度定义,生物利用度研究意义,生物利用度历史,生物利用度定义和前提,生物利用度研究过程,分析方法,试验设计：药品、受试者、采样时间,血浆、全血、血清,药动学参数,等效性检验,第2页,生物利用度(Bioavailability BA),指药品活性成份从制剂中释放吸收进入体循环相对速度(普通以T,max,、C,max,表示)和程度(以AUC表示),相对程度,以静脉给药为标准：绝对生物利用度,以其它给药路径为标准：相对生物利用度,第3页,药品吸收程度,第4页,F,abs,药品释放，跨膜吸收，肠道菌群代谢等,F,G,PGP和3A4酶，各种转运蛋白,F,H,肝脏首过效应，肝脏内转运蛋白,第5页,药品吸收速度普通表示,第6页,为何不用Ka值呢？求ka=吸收解析,因为药品吸收步骤众多，并不存在单一指数方程来作为吸收函数理论值,不可能仅仅经过本身口服后数据来区分吸收指数项和消除指数项，从而来进行吸收解析。(Excel课件),所以吸收解析时候最好要同时进行静脉给药试验原因能够确切地知道药品消除相情况。,当药品静脉给药和口服给药消除情况不一致时候，哪怕进行静脉注射也无法进行口服药品吸收解析，比如口服给药存在肠肝循环，首过效应强等等情况下。,第7页,生物利用度研究目标,不一样制剂有不一样药时曲线，利用程度和利用速度可能都不一样。本图速度靠近，程度差异很大,最小中毒浓度,最小有效浓度,第8页,生物利用度研究目标,不一样处方同一个类药品生物利用度不一样，变异不一样,Ranitidine雷尼替丁,山梨醇糖浆剂,蔗糖糖浆剂,第9页,第10页,第11页,量-效曲线,药品浓度效应表示效率(形状参数),Repuesta Clinica/PD,Log Dosis,第12页,第13页,Development,Market,Research,Safety,PK,In vivo,In vitro,NDA,Clinical Trial,IND,Processing,Toxicology,Idea,Pharmaceutical R&D,第14页,Preclinical studies,Clinical studies,CHEMISTRY/,PHARMA-COLOGY,IND*,PHASE I,PHASE II,PHASE III,NDA*,PHASE IV,Search for active substances,Toxicology,efficacy studies on various types of animals,Regulatory review,Efficacy studies on healthy volunteers,Clinical studies on a limited scale,Comparative studies on a large number of patients,Regulatory review,Continued comparative studies,*Investigational New Drug,Application for permission to administer a new drug to humans,50150persons,100200patients,5005,000patients,Registration,market introduction,*New Drug Application,Application for permission to market a new drug,KNOWLEDGELEVEL,KNOWLEDGELEVEL,24 yrs.,26 mos.,36 yrs.,13 yrs.,Approximately 10 years from idea to marketable drug,TIME SPAN,Discovery,Development,生物利用度在新药研发中位置,生物利用度,第15页,生物利用度在仿制药品开发中位置,Generic,#1,Generic,#K,原创药,Innovator product,Generic,#2,Generic,#3,Generic,#4,Generic,#5,?,第16页,相关法规发展,1985年新药审批方法,1999年新药审批方法,仿制药品审批方法,年药品注册管理方法,年5月1日 药品注册管理方法,年10月1日 药品注册管理方法,第17页,相关法规发展,1985年新药审批方法：,改变剂型但不改变给药路径新药，如属国家标准，可仅进行人体生物利用度研究，免做临床验证。,1999年新药审批方法：,四类新药应进行生物等效性试验生物利用度比较试验、随机对照临床研究,1998年仿制药品审批方法,：生物利用度/生物等效性,年药品注册管理方法：,注册分类五：口服固体制剂生物等效性试验,注册分类六：,口服固体制剂生物等效性试验,第18页,生物等效性试验要求(药品注册管理办,法,.12.1),口服固体制剂应该进行生物等效性试验，普通为18至24例；,难以进行生物等效性试验口服固体制剂及其它非口服固体制剂，应该进行临床试验；,速释、缓释、控释制剂应该进行单次和屡次给药人体药代动力学对比研究和临床试验；,对于注册分类6中口服固体制剂，可仅进行生物等效性试验，普通为18至24例；难以进行生物等效性试验，可仅进行溶出度、释放度比较试验。,分类6：已经有国家药品标准原料药或者制剂：仿制药品,法律高度：管理方法指导标准,第19页,药品注册管理办,法,.5.1,申请已经有国家标准药品注册，普通不需要进行临床试验；需要进行临床试验，化学药品普通进行生物等效性试验；,普通不需要进行临床试验，但口服固体制剂应该进行生物等效性试验。,已经有国家药品标准非处方药生产或者进口；,经国家食品药品监督管理局确定非处方药改变剂型，但不改变适应症或者功效主治、给药剂量以及给药路径药品,第20页,28号令,药品注册管理方法,年10月1日执行,药品临床试验（包含生物等效性试验），必须经过国家食品药品监督管理局同意，且必须执行药品临床试验质量管理规范,生物等效性试验，是指用生物利用度研究方法，以药代动力学参数为指标，比较同一个药品相同或者不一样剂型制剂，在相同试验条件下，其活性成份吸收程度和速度有没有统计学差异人体试验。,药品临床试验受试例数应该符合临床试验目标和相关统计学要求，而且不得少于本方法附件要求最低临床试验病例数。罕见病、特殊病种等情况，要求降低临床试验病例数或者免做临床试验，应该在申请临床试验时提出，并经国家食品药品监督管理局审查同意。,第21页,指导标准和法规关系,法律指导标准,第22页,生物等效性研究(BioEquivalence BE),等效性研究方法学,临床治疗效果：直接证实两药差异可接收性,血药浓度测定：经过两药释放、吸收差异可接收性，推测临床治疗效果差异可接收性,生物等效性研究：指,药学等效,制剂或可替换药品在相同试验条件下，服用相同剂量，其活性成份,吸收程度,和,速度,差异无统计学意义(推测临床治疗效果差异可接收性),测定血药浓度方法学（生物利用度）,替换指标应用应用条件？,第23页,BA和BE关系,BE：求证,两产品,生物等效性(比如受试者只选男性),规格、剂型、批次,BA：不一样产品可各不相同,剂型筛选,处方、工艺评价,新剂型（新给药路径）给药剂量预计,性别差异(受试者选择男女各半),第24页,作用,新药研究阶段:,比较改变新药处方、工艺后制剂是否能到达预期生物利用度；确定处方和工艺合理性，,改变剂型，与原剂型比较来确定新剂型给药剂量，也可经过BE 研究来证实新剂型与原剂型是否等效,临床试验阶段：,寻找药品无效或者中毒原因。比如验证同一药品不一样时期产品一致性，包含早期和晚期临床试验用药品，临床试验用药品（尤其是用于确定剂量试验药）和拟上市药品等。,仿制药品，可经过BE 研究来证实仿制产品与原创药是否生物等效，是否可与原创药替换使用。,第25页,上市后阶段：,处方、工艺评价和生产控制：处方组成成份、百分比以及工艺等出现一定程度变更时，进行BE 研究，以考查是否生物等效。以提升生物利用度为目标研发新制剂，需要进行BA 研究，了解变更前后生物利用度改变。,第26页,三个等效关系,Pharmaceutical equivalence(含量，给药路径等),Bioequivalence,Therapeutic equivalence,Noninferiorite（非劣效性研究）,生物等效性是为了替换临床试验。后者花费大，时间长，组织繁琐,从统计学上讲，半定量临床数据统计效率无法和药代定量数据相比。所以，临床最少需要120对受试者，而等效性试验只需要20例受试者,第27页,药学等效,生物等效,临床等效,经济性,可靠性,第28页,药学等效,性药品,作用部位,吸收,分布,生物利用度,疗效,生物等效性,体循环,？,BioequivalenceTherapeutic equivalence关系,疗效等效性,非劣效性,第29页,试验假设,生物利用度等效临床等效疗效不良反应,其实有例外：,盐酸小檗碱口服后抑制肠道菌群转化二糖成单糖功效，造成血糖降低,胃肠道粘膜保护剂:枸橼酸铋钾(例外例外)生物利用度不能变大,此时生物利用度不是为了疗效，而是为了控制铋吸收后不良反应,局部用药，只在局部发生作用，发挥疗效不经过血液循环系统,健康人等效=病人等效？单剂量等效=多剂量等效？,第30页,幽门螺旋杆菌,第31页,第32页,第33页,治疗有体外很好效果，HP对于阿莫西林和克拉霉素敏感，不过临床试验表明并没有被完全彻底毁灭，其中主要原因是药品在胃中停留时间相当短，在胃粘液层和表层细胞处没有到达有效浓度！,阿莫西林属于时间依赖性抗生素。,第34页,时间依赖型抗生素,时间依赖型，药品浓度超出MIC45倍以上杀菌活性不再增加，比如-内酰胺类、大环内酯类、克林霉素和万古霉素等,第35页,采取生物黏附剂技术后阿莫西林微丸能有效在胃粘膜上黏附，1mg/kg时幽门螺旋杆菌消除率相当于10mg/kg普通制剂消除率，而血药浓度和生物利用度前者远低于后者！,第36页,BA/BE,originally indicated the rate and amount of administered drug that reached the blood intact(available at site of action),now expanded to include active metabolites,Regulatory agencies have,not,established a,single set,of BE regulations(design,conduct,interpretation)that are universally acceptable,第37页,试验目标,Determination of intra/intersubject variability,Bioequivalence of dosage form proposed for marketing,Dosage form proportionality study,Food effect study,Effect of changes in formulation or manufacturing process,Bioequivalence study required for the purpose of filing an ANDA,第38页,生物利用度试验流程,第39页,试验方案,伦理委员会,临床批件,建立体内,分析方法,给药,取样测定,浓度时间,数据,数据处理,BAPP,统计结论,生物利用度试验流程,受试者体检,知情同意书,第40页,知情同意书关键点,全方面通知,充分了解,自主选择,第41页,BA和BE研究关键点,确定试验目标,建立生物样本分析方法,设计试验方案,有效管理试验过程,分析试验数据,明确试验结论,第42页,试验过程管理GLP GCP,过程管理,人员管理,环境管理,医疗保障,第43页,方法学建立与确证,方法学质控,标准曲线,质控样品,SOP、GCP,方法可靠性,数据可靠性,结论可靠性,第44页,建立一个准确测定体内药品或代谢产物分析方法,。生物样本与化学分析不一样，这里包括体内内源性化合物和药品体内代谢物干扰，故分析方法考证是提供准确生物利用度数据基础。,第45页,2.体内样品特点,(1)血浆药品物浓度低,如血浆中药品浓度很低，通常是,g级,ng级,pg级,fg级，而每次取血量又有限，所以常规化学分析方法是不适合。,(2)干扰原因多,蛋白质，内源性化合物，代谢产物，无机盐。,(3)个体差异大,同一受试者服同一剂量药品，两次服药后测出血药浓度可能不一样，这主要是因为个体生理原因影响药品吸收,。检测线性范围大,(4)样本量大,几百上千个样本。,第46页,为何是血浆,血浆、全血、血清、尿液等,反应药效是首要考虑原因,环孢素A，K,+,等检测就不一样,微生物法检测是血清,第47页,一个轻易忽略问题,检测是血浆中总药量,游离型药品药品效应,药品-血浆蛋白结合,弱酸：白蛋白,弱碱：,酸性糖蛋白,药品血浆蛋白结合率-个体差异,原因：不明确,后果：药效,，,，ADRs,第48页,3.基本要求及其考证,灵敏度(Sensitivity)检测限(LOD)定量限(LOQ),精密度(Precision),准确度(Accuracy),特异性(Specificity)选择性,样品稳定性，冻融试验，QC样品,标准曲线线性范围,重现性,耐用性稳定性,第49页,灵敏度：检测限和定量限,用定量限(Low Limit of Quantitation，LLOQ)表示。,LLOQ是标准曲线上最低浓度，它是经过准确度，精密度和变异性求出，普通用ng/ml或,g/ml表示。,要求,a.LLOQ能检出Cmax1/101/20浓度,b.能测出35个生物半衰期药品浓度,第50页,定量限确实定,要求,预期,精度检测和定量限,制备空白加样样品，,进样5次，,计算每个浓度%RSD,精度对浓度作图,在预期精度浓度=定量限,20%,第51页,检测限LOD,Limit of Determination,S/N3,第52页,精密度(Precision)(重复性和重现性),精密度用批间、批内变异系数（RSD）来表示，RSDS/X100%,选在标准曲线范围内高、中、低三个浓度进行试验，其中一个为LOQ或靠近LOQ，一个为中间浓度，另一个为标准曲线上限附近。,每一浓度最少重复5次以上，连续3天,要求：RSD15，在LOQ附近可放宽到20。,第53页,高中低浓度,低浓度 also selective,第57页,色谱,分辨率,峰形,不一样柱,不一样条件(temp.,mobile phase),不一样检测器,光谱方法(offline,on-line)如:HPLC/CE中DAD,第58页,介质效应,因为样品中存在干扰物质，对影响造成直接和间接影响,质谱检测，重点考查介质效应，预防离子淬灭效应,第59页,准确度(Accuracy),测试结果和真值一致程度,在真实浓度80120%范围内，RSD20,可用回收率表示。为确保方法学准确性，要求在标准曲线范围内最少选高、中、低三个浓度，重复5次，回收率要大于70，达不到要求应说明原因。普通RSD15%在低浓度时RSD20。,第60页,标准曲线,a.应覆盖整个待测样本浓度范围，不得外推；,b.应由58个浓度水平组成；,c.不一定是直线，能够是二项式回归；尽可能简单,c.直线回归截矩不应显著偏离原点,d.相关系数要求：色谱法大于0.99，生物法大于0.98；,第61页,标准曲线权重,宽范围直线回归，要权重回归，要么没有做试验，要么更改了数据(低浓度准确性要求)！,第62页,第63页,稳定性（stability）,样品稳定性试验,常温放置试验,冰箱冷冻放置试验,样品重复冻融试验,贮备液稳定性试验,样品提取后流动相稳定性试验！,稳定程度和标准依据试验要求而定,第64页,重现性,分析方法相同情况下，间隔一段短时间后测定结果分散程度,不一样试验室间测定结果分散程度,第65页,耐用性（durability）(SFDA没有要求),尽管有些分析方法在文件中已经有阐述，但因仪器试剂以及操作条件不一样，经常不能重复文件方法，故任一新试验均应在自己工作试验室内重新论证一下方法可靠性。,这要求药代动力学试验室除需有训练有素科研人员外，还应有较完善分析方法质量控制标准，而且试验室管理应符合GLP要求。,第66页,影响耐用性原因,不一样室温和湿度,不一样经验操作者,不一样性能仪器,试剂不一样供给商,不一样批号柱子,第67页,标准方法能够改变多少-HPLC,pH of mobile phase:0.2units,Concentration of salts in buffer:10%,Ratio of components in mobile phase:for min or component 30%rel or 2%absolute whatever is larger,but max10%,Wave length of UV is detector:3nm,Column length:70%,Column inner diameter:50%,Particle size:can be reduce dup to 50%,Flow rate:50%,Column temperature:20DegC,第68页,标准样品,在生物介质中加入已知量分析物配制样品，用于建立标准曲线，计算质控样品和未知样品中分析浓度,质控样品,即QC样品，在生物介质中加入已知量分析物配制样品，用于监测生物分析方法重现性和评价每一分析批中未知样品分析结果完整性和正确性,标准样品和质控样品必须分两次配制！最好不一样人配制,第69页,4、分析惯用方法,(1)色谱法：HPLC，GC，HPTLC，GC-MS，LC-MS联用，,特点：分离和定量同时进行，特异性好，灵敏度高。,第70页,“没有必要科研仪器与设备，就根本谈不上科学发展。”,中科院自然科学史研究所研究员阎康年科学文化评论上,第71页,色谱/质谱联用技术相对适用范围,第72页,方法建立,1、借判他人方法,查阅文件,J Chromatography B 荷兰,Rapid Communications in Mass Spectrometry 加拿大,J Pharmaceutical and biomedical Analysis 美国,Biomedical chrogaography（？）,药学学报 药品分析杂志 中国临床药理学杂志 中国药科大学学报 中国临床药理学与治疗学杂志,第73页,2 依据药品化学结构,分子极性，酸碱性，稳定性,优先考虑色谱,检测器,质谱 紫外 荧光 电化学,第74页,样品稳定性,-20大部分药品,-80 阿莫西林，阿司匹（pH）等,加稳定剂：卡托普利等,马上测试：维生素C等(2个月能够做空白血浆，所以人体需要天天补充),第75页,样品预处理,液液提取,液固提取,沉淀蛋白,在线提取,第76页,色谱条件选择,色谱柱,流动相组成,pH值和缓冲盐,流速,第77页,内标选择,色谱行为靠近,检测器响应相近,提取回收率相近,第78页,质谱条件,准分子离子,碱性化合物(-NH,2,),(M+H),+,酸性化合物(-CO,2,H,-OH),(M-H),-,第79页,各种条件和参数深入优化,选择性、灵敏度、线性关系、重现性,实际样品预试验,第80页,其它原因,血浆蛋白结合,生物样品测试安全防护(艾滋病毒，乙肝病毒-手套),挥干有机溶剂：苯禁用,第81页,(2)光谱法，同位素法，免疫学方法,同位素法即使灵敏度高，但因为特异性较差，不作首选。采取该法应考虑：,a.放射化学及化学纯度；,b.标识物稳定性；,c.代谢产物干扰。,可结合HPLC和TLC法联合应用。,免疫学方法如放免和酶免法，均可能存在药品代谢产物交叉干扰，且试剂盒较难制备，所以不作首选。,环孢素A检测采取TDX(偏振荧光免疫方法)：HPLC和TDX差好几倍,第82页,(3)微生物学方法(抗生素),原形,有活性,无活性,有活性,无活性,代谢物,第83页,分析方法质量确保体系,标准曲线和QC分别配置，QC不低于未知浓度5%，且均匀分布在未知浓度检测全过程，最多允许1/3不一样浓度质控样品超限。,独立质量确保人员,未知浓度样品考评，普通同一受试者地样品在同一批内完成,建立普通性和,特殊性,标准操作规程,包含测试原始图和数据，包含QC样品,质量检验汇报(内部文件，即使方法不完美，但不影响方法经过),第84页,试验药品选择,受试样品,(1)体外释放度，稳定性和含量合格；,(2)安全性符合要求；,(3)必须有主管部门批文；,(4)受试制剂应为中试放大产品，经稳定性检验合格，报送生产同批制剂。,第85页,临床批件样稿,国家药品食品监督管理局下属药品注册司颁发原始编号，受理号，批件号两年内试验必须开始，不然批件失效,第86页,参比制剂,进行相对生物利用度研究时，首先应考虑选择国内已,上市,相同剂型市场,主导,制剂或被仿制制剂作为标准参比制剂。只有在国内外没有对应制剂时，才考虑选取其它类型不改变给药路径制剂为参比制剂。(好处方特征),第87页,FDA参比制剂目录:orange book,FDA提议使用该汇报中药品进行等效评定,www.fda.gov/cder/orange/default.htm,第88页,日本“薬品品質再評価”工程,1998年起对已经上市药品进行评价，出版再评价药品目录（主要是难溶性药品，约860个）,主要伎俩是提升体外溶出标准，后期进行生物利用度试验比较,医療用医薬品品質情報集：只有上榜药品才有资格作为参比制剂,日本厚生省医薬安全局審査管理課,第89页,受试者条件,（1）性别：男性。,（2）年纪:普通1840 周岁，同一批受试者年纪不宜相差10 岁以上。,（3）体重：正常受试者体重普通不应低于50kg。按体质指数(Body Mass Index,BMI)体重（kg）身高2（m2）计算，普通应在标准体重范围内。同一批受试者体重（kg）不宜悬殊过大。,（4）受试者应经过全方面体检，身体健康，无心、肝、肾、消化道、神经系统、精神异常及代谢异常等病史；体格检验示血压、心率、心电图、呼吸情况、肝、肾功效和血象无异常，防止药品体内过程受到疾病干扰。,（5）为防止其它药品干扰，试验前两周内及试验期间禁服任何其它药品。,（6）试验期间禁烟、酒及含咖啡因饮料，或一些可能影响代谢果汁等，以免干扰药品体内代谢。,（7）受试者应无烟、酒癖好。,（8）精神状态：良好。,（9）对本试验研究药品无过敏史者。,（10）知情同意，志愿受试。取得知情同意书过程符合GCP要求。,第90页,比较药品制剂在人体内吸收速度和程度，受试者选择应该尽可能使个体间和体体内差异减到最小，降低试验偶然变异，有利于突出制剂间差异。,第91页,生理原因对药动学参数影响,体重、年纪、肾功效对一级药动学参数影响,第92页,体重对分布容积影响公式,其中P为分配系数（脂溶性）；,p,为蛋白结合率；BW为体重(以g计算),第93页,性别差异,治疗周期性偏头痛药品,佐米曲普坦,在男性与女性之间服用2.5mg或5mg佐米曲普坦药动力学参数有显著差异。女性平均Cmax和AUC值比男性高。在,10mg,较高剂量时差异更显著：6个健康女性得数值（25.2ug/L和,173.8,ug/L.h）几乎是6位健康男性（16ug/L和,88.9,ug/L.h）2倍。,第94页,H,1,受体拮抗剂地洛他定，普萘洛尔，苯二氮卓类药品，维拉帕米，阿斯匹林，对乙酰氨基酚，利多卡因，氨茶碱，利福平等都有性别差异报道。,报道结果均为和男性相比，女性达峰浓度增加，AUC增加。,可能是女性对药品消除能力低于男性。,第95页,遗传原因代谢酶多态性,口服酒石酸美多心安200mg,弱异喹胍代谢者(PM)浓度显著高于强异喹胍代谢者(EM),代谢酶CYP2D6酶缺点造成PM,第96页,CYP2C9(代表药品：美芬妥因，苯二氮卓类，奥美拉唑),CYP2D6(最多，代表药品：异喹胍，普萘洛尔，奋乃静、阿米替林、阿米夫胺，右美沙芬等),CYP2E1(毒理方面主要酶系，底物大多为致癌前体物和毒物前体物，药品包含氯唑沙宗，乙醇，对乙酰氨基酚),CYP3A4(阿普唑仑，西立伐他丁，环孢霉素，红霉素，三唑仑，硝苯地平),第97页,病理原因对药动学参数影响,疾病往往是引发药品不一样效应主要原因。对许多药品来说，造成药品效应差异主要原因是药动学参数差异,第98页,第99页,肝脏疾病对药动学参数影响,1、肝硬化病人病情严重程度和氧化代谢酶和一些结合性酶活性下降存在一定相关关系，去除率下降。,2、肝硬化，白蛋白合成降低，使药品白蛋白结合率下降，造成,分布容积,增加，造成低去除率药品消除增加。,3、高抽提比药品(肝脏代谢该药品能力强)，肝硬化能造成生物利用度升高。,4、阻塞型黄疸药品消除减慢，尤其以胆道排泄为主要消除路径药品。,第100页,肾功效不全对药动学参数影响,肾功效减退病人药品尿排泄通常会下降，下降程度取决于肾功效减退程度。,去除率降低,尤其是人工肾病人,第101页,比较药品制剂在人体内吸收速度和程度，受试者选择应该尽可能使个体间差异减到最小，降低试验偶然变异，有利于突出制剂间差异。,伦理学要求和试验要求发生矛盾怎么办？,第102页,赫尔辛基宣言,DECLARATION OF HELSINKI,52nd WMA General Assembly,Edinburgh,Scotland,October,Note of Clarification on Paragraph 29 added by the WMA General Assembly,Washington,Note of Clarification on Paragraph 30 added by the WMA General Assembly,Tokyo,第103页,年赫尔辛基宣言相关关键点,每一项包括人体生物医学研究，必须仔细评定对受试者可能预见到,危险,性，并与可能预见受试者和其它人,受益,比较,后方可进行。,关注受试者利益,，必须总是超出科学与社会利益。,对包括人体试验，学术上或社会利益,绝不应该优先于受试者健康,抚慰剂使用(抗生素不得使用抚慰剂),第104页,伦理要求和试验要求,基于伦理考虑，雌激素类药品应选择健康女性受试者。,如待测药品存在已知不良反应，比如抗肿瘤药品中烷化剂，可能带来安全性担忧，也可考虑选择患者作为受试者。,有强烈首剂效应药品也应选择病人。首剂效应系指首剂药品引发强烈效应现象。,第105页,氯氮平含有耐受性。慢慢加大剂量，病人能够承受其治疗剂量，不过首剂即给予治疗剂量，病人会发生严重不良反应。FDA提议病人治疗，一开始采取25 mg片剂二分之一12.5 mg，一天一次或两次，然后剂量天天增加25-50 mg，假如耐受良好，2周后才能够采取治疗300 to 400 mg天天。假如病人300 and 600 mg天天依然有良好耐受性，能够连续增加剂量到600 and 900 mg天天，以取得最优疗效。最大给药剂量不得超出900 mg 天天。,第106页,在1996年指导标准中，FDA提议氯氮平采取25 mg片剂二分之一剂量，以健康受试者为试验对象进行生物等效性试验。however,the safety concerns associated with the use of clozapine in healthy subjects are significant,and it is recommended that this practice not be continued.年初FDA对以前指导标准进行了修订，要求,第107页,对包括人体试验，学术上或社会利益绝不应该优先于受试者健康。,赫尔辛基宣言，是因为在纳粹时代残忍地进行人体医学试验（如用俘虏做活体高空试验、冷冻试验和克隆人试验等）而促成诞生，长久以来一直被看作是临床研究伦理道德规范基石。最新宣言中要求：每一项包括人体生物医学研究，必须仔细评定对受试者可能预见到危险性，并与可能预见受试者和其它人受益比较后方可进行。关注受试者利益，必须总是超出科学与社会利益。,第108页,试验设计方案,双交叉试验设计(最惯用),三交叉试验设计(食物影响等),平行试验设计(长半衰期药品，特殊情况)）,重复交叉试验设计,第109页,双交叉试验设计,RANDOMIZ,A,T,I,ON,1824Subjects,Sequence 1,Sequence 2,PERIOD,Reference,Test,Test,Reference,I,II,WAS,H,OUT,randomized two-period two-sequence two-formulation,cross-over,design,平行实验设计,第110页,将受试者随机（注意体重，年纪均一性）等分成两组，一组先服用受试制剂，后服用标准参比制剂；另一组先服用标准参比制剂，后服用受试制剂。,即在同一受试者中于不一样时期服用受试制剂和标准参比制剂,(crossover design),生物利用度和生物等效性研究数据特征是个体差异大，对每位受试者都连续接收两次或更屡次处理，相当于本身对照，能够将制剂原因对药品吸收影响与其它原因区分开来，降低了不一样试验周期和个体间差异对试验结果影响。,第111页,洗脱期和后遗效应,两个周期最少要间隔药品7-10个半衰期，通常间隔离1-2周洗脱期washing period。,设定清洗期是为了消除两制剂相互干扰，防止上个周期内处理影响到随即一周期处理中:,后遗(Carryover)效应,。清洗期普通不应短于7 个消除半衰期。,第112页,后遗效应,清洗期不够长，第一轮服药在血液中残留对第二轮产生干扰。存在不等性残留效应，第二轮数据就无效了,第113页,Advantage of cross over design,Variability advantage due to correlation between observations from the same individual,个体内变异,差异无显著性意义,等效,第134页,T0.8R(p0.05)&T1.2R (p正态,体重,第137页,对数转换等效性检验,双单侧t检验,90%置信区间,第138页,Possible BE Results(90%CI),T/R(%),80%,125%,第139页,t 检验和例数关系,当两组比较t检验例数相等，变异相等：,则例数n越多，s不变，T值越大，P越小,第140页,临床观察,药品制剂人体生物利用度研究和生物等效性评价属于临床研究范围，所以人体试验必须在符合GCP要求临床医院进行。,受试者于服药后最少在观察室中停留一段时间（长短取决于药品性质）,并临床医生监护之下，随时观察和统计受试者耐受性和药品不良反应发生情况。,一旦出现严重不良反应,应采取对应抢救办法和治疗。,第141页,一个生物利用度汇报例子,汇报书写内容以及数据处理,试验目标，试验设计，分析方法建立和确证，受试者资料，服药方案和采样时间安排，服药后临床观察结果，生物样品处理程序，原始测定浓度全部数据，数据统计分析，等效分析结果，结论和对应讨论。,还有摘要，参考文件，试验单位和参加试验人员姓名,第142页,多剂量给药稳态生物利用度研究,研究目标：,确定制剂屡次给药到达稳态时血药浓度波动程度(有没有超出临床要求范围),在单次给药生物利用度研究基础上深入考查生物利用度,第143页,多剂量研究应用范围,(1)单剂量给药后，原药或代谢产物浓度很低，不能用对应分析方法准确测量；,(2)内源性药品，单剂量给药，体内浓度升高和服药前体内本底浓度相比提升有限，不能简单扣除本底。,(3)缓、控释制剂。,(4)非线性药品，浓度升高和剂量不成百分比，屡次给药有蓄积倾向。,第144页,多剂量给药时间点采血方案,参比制剂为普通制剂或者缓释制剂,连续服药必须到达稳态(steady state,ss),屡次给药后体内药量有累积趋势，直至到达动态平衡-稳态水平(Css),确定到达稳态方式：最少连续测定三次以上谷浓度，谷浓度有稳定趋势,取血时间点：基本参考一次给药时采样时间点采样,第145页,其峰值(Cmax)应低于中毒浓度,谷值(Cmin)应高于有效浓度,才能产生安全可靠连续药效。,Css在设计多剂量给药方案中含有主要意义，其决定了长久用药时药效高低及毒副作用大小。,第146页,理论和公式回顾,一房室模型血管外路径屡次给药,当给药次数 n足够大时，,及,趋于零,第147页,平均坪值血药浓度,稳态水平分数,（KaK),达峰时间,第148页,稳态最大血药浓度C,ss(max),稳态最小血药浓度C,ss(min),DF=(C,max,-C,min,)/C,av,=,(C,max,-C,min,)*,/AUC,ss,=(C,max,-C,min,)*,/(F*X,0,/k/v),DF,只和给药频率相关！,第149页,单次给药药峰时间,重复给药药峰时间,理论上多剂量达稳态时间和单剂量比有所提前,第150页,第151页,达稳态时间需要4-5个半衰期，达稳态后给药量等于消除量(平衡),第152页,同一药品，tid和sid，t,1/2,=10h,天天用药量恒定时，坪浓度高低限之间波动(DF)与给药次数相关,第153页,稳态浓度特点,坪浓度(Css)高低与日用药总量成正比,峰浓度与每日用药量成正比,天天用药量恒定时，坪浓度高低限之间波动(DF)与给药次数相关,增加给药剂量不能缩短到达稳态时间,理论上多剂量达稳态时间和单剂量比有所提前,达稳态时间需要4-5个半衰期，达稳态后给药量等于消除量(平衡),第154页,一个实际例子,二甲双胍缓释片和普通片比较(t,1/2,3h),单剂量给药1000mg/次,多剂量给药：普通片500mg 一天二次,缓释片1000mg 一天一次,第155页,单剂量给药和多剂量给药比较,1000mg,1000mg,单剂量,多剂量,第156页,达稳过程监测稳态后给药间隔全程监测,最少三次谷浓度，趋于稳定，认为到达稳态,第157页,两种采血方案争论,监测两次普通制剂，监测周期内药量相等,监测一次普通制剂，,监测周期内药量不相等,第158页,缓控释制剂和多剂量给药主要药代动力学参数,指导标准要求：,谷浓度、峰浓度数据和平均血药浓度 达峰浓度时间 稳态AUC,ss,值，DF,非指导标准要求：,AUC波动百分率；血药浓度维持时间；半峰浓度维持时间；治疗维持时间；延迟商,抗菌药品特殊评价参数,时间依赖型,浓度依赖型,第159页,波动度Degree of Fluctuation DF,DF=(C,max,-C,min,)/C,av,C,av,=AUC,ss,/,缺点：C,ss，max,极难准确取得，或者当检测限高于C,ss，min,，C,ss，min,以0计算，所得DF就不能真实反应药品浓度波动情况,第160页,AUC,波动百分率,(AUC fluctuation,，,AUCF%),公式中AUC(高于C,ss，av,)和AUC(低于C,ss，av,)分别表示稳态平均浓度(C,ss，av,)以上和以下面积。,第161页,血药浓度维持时间（,Duration of drug concentration in plasma,）,血药浓度维持在治疗窗内或某一特定浓度范围内时间长短也可用来评价缓控释制剂缓控释效果。,半峰浓度维持时间(half-value duration
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