DB13∕T 5584-2022 兔须癣毛癣菌诊断与防治技术规程(河北省).pdf

ICS 11.220 CCS B 41 13 河北省地方标准 DB 13/T 55842022 兔须癣毛癣菌诊断与防治技术规程 BDB 13/T 55842022 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。 本文件由河北省农业农村厅提出。 本文件起草单位：河北工程大学。 本标准主要起草人：柳焕章、刘建钗、于国杰、刘利强、刘会洽、杜鹃、刘彦威、刘娜、崔国林、刘艳莉、吴志勇、崔玉革、李晶晶、娄路平、李夫宏、刘孟啸、赵梓筱。 DB 13/T 55842022 兔须癣毛癣菌诊断与防治技术规程 1 范围 本文件规定了兔须癣毛癣菌病的临床诊断、实验室诊断和综合判定。 本文件适用于兔类、 牛、 羊、 犬、 猫等须癣毛癣菌病的诊断及其须癣毛癣菌病原的检测和防治。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 DB51/T 1419-2012 大熊猫须癣毛癣菌病检验技术规范 3 术语和定义 须癣毛癣菌 Trichophyton mentagrophytes 为人畜共患的皮肤真菌。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 PDA：马铃薯葡萄糖琼脂培养基； TSA：胰蛋白胨大豆琼脂培养基； 5.2DB 13/T 55842022 6.1.3 病料显微镜检查（改良的 KOH 法） 取少量病料（皮屑、被毛等），放在清洗干净的载波片上，滴加改良复方KOH溶液（KOH 15 g加入30 mL蒸馏水中溶解后，依次加入DMSO 40 mL，甘油20 mL，摇匀后加入蒸馏水至1000 mL混匀）12滴，加盖玻片，用滤纸吸净周边溢液，在显微镜下镜检。 结果判断：将同种病料连续重复两次检查，以病料中查到特征性菌丝和孢子为阳性结果，以检查不到菌丝和孢子为阴性。 定量 PCR 检测 6.2.1 样品采集 从发病的兔场选择有典型皮肤真菌病的家兔，在病变与健康皮肤组织交界处，用无菌手术刀片刮取皮屑，放入灭菌的平皿中冷藏保存。 6.2.2 基因组 DNA 提取 使用真菌DNA提取试剂盒提取。 6.2.3 引物合成 参照GenBank中兔须癣毛癣菌benAfum基因转录间隔区序列（KP099602），使用Primer Express 6.0软件设计特异性引物（预期扩增片段大小140bp）： 上游引物F：（5-GCAAAGAAGCCTGGAAGAAG-3） 下游引物R：(5-GGAGACCATCTGTGAGAGTT-3) 6.2.4 定量 PCR 反应体系和反应程序 采用25 L的反应体系：SYBR Premix Ex Taq（2 ）12.5 L，上、下游引物各0.5 L，DNA模板1.0 L，用双蒸水补足至25 L。反应程序为：94 预变性60 S94 10 S60 30 S72 306.28.2DB 13/T 55842022 3 A A 附录A （资料性） 须癣毛癣菌形态学判断 A.1 须癣毛癣菌形态学判断 须癣毛癣菌菌落形态特征为：在PDA培养基上，菌落为白色，中央致密稍凸起，周围较松散，背面为黄褐色。符合须癣毛癣菌菌丝和孢子的显微形态特征为：在显微镜下可见典型的螺旋菌丝，小分生孢子较多，呈葡萄状；大分生孢子较少，呈棒状，有分隔。由菌落形态及菌体镜检结果可初步判断其为须癣毛癣菌。