婴幼儿奶粉中双氰胺的检测方法HPLC法.doc

婴幼儿奶粉中双氰胺检测方法（HPLC-UV法）

北京时间1月25日凌晨消息, 新西兰牛奶中发觉了有害物质——双氰胺。双氰胺又名二氰二胺, 缩写DICY或DCD。即使国际标准未对食品中双氰胺限量, 但高剂量双氰胺对人体是有毒。
针对婴幼儿奶粉中基质复杂特点, 本方法加大了净化材料用量, 以取得了愈加好净化效果。采取天津博纳艾杰尔科技新一代Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管（500mg/15mL, 货号: MS-SQA02）和Venusil® HILIC液相色谱柱, 建立了奶粉中双氰胺MAS-QuEChERS快速前处理方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。

1 试验部分
1.1 仪器、 试剂与材料
高效液相色谱仪, 涡旋振荡器, 超声波清洗机, 氮吹仪。
双氰胺标准品（CAS: 461-58-5; FW=84.08）, 新一代Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管, Venusil® HILIC液相色谱柱, 微孔滤膜, 乙酸铵、 乙酸、 乙腈为色谱纯, 试验用水为超纯水。

表1 双氰胺信息
名称
结构式
分子量
CAS
双氰胺

84.08
461-58-5

1.2 试验步骤
称取1g试样于50mL具塞离心管中, 加2mL水, 涡旋30s, 加2ml乙腈涡旋30s。再往现有提取液中加2mL乙腈, 反复上述提取步骤。再将该提取步骤反复2次, 得到累计约10mL提取液。以4000r/min离心5min, 将全部上清液加入新一代Cleanert® MAS-QuChERS管中（500mg/15mL）, 将MAS管上下晃动30s, 然后涡旋30s后, 8000r/min离心5min, 取全部上清液（约10ml）于玻璃试管中, 50℃下氮气吹干, 加入1ml乙腈复溶, 过0.22μm微孔滤膜, 待测。
注: 1.做基质加标试验时标准溶液提议选择以水为溶剂, 预防加标瞬间发生蛋白沉淀;
2.乙腈提取分4次, 为预防乙腈体积过多时沉淀蛋白速度过快, 影响提取效果。

1.3　试验条件
1.3.1高效液相色谱法（HPLC法）:
色谱柱: Venusil® HILIC（5μm, 100Å, 4.6*250mm）;
流动相: 10mmol/L乙酸铵（pH=4.0）: 乙腈=15: 85;
波长: 220nm; 进样量: 10µl; 柱温: 30℃; 流速: 0.8mL/min。
2 结果与讨论
2.1 高效液相色谱法:
2.1.1双氰胺液相色谱图

图1 双氰胺1µg/ml标准溶液液相色谱图
2.1.2实际样品基质加标线性关系和检出限
正确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中, 加水溶解并稀释至刻度, 作为标准贮备液;
分别称取1g奶粉试样, 添加一定量标准溶液, 配制成含双氰胺为0.5µg/g, 1µg/g, 2µg/g, 5.0µg/mL和10µg/g添加样品, 根据上述提取、 净化方法操作, 所得净化液根据上述色谱条件, 依次进样检测。以双氰胺含量为横坐标, 峰面积为纵坐标, 拟合线性方程, 结果见表4:
表4 双氰胺线性方程和定量限（HPLC法）
名称
保留时间
线性方程
相关系数
最低定量限（S/N=10）
双氰胺
5.57min
Y=108.16X+27.827
0.9971
0.5µg/g

2.1.3正确度和精密度
选择市售某品牌婴幼儿奶粉试样, 进行添加回收试验, 结果见表5
表5 0.5µg/g添加回收试验结果（HPLC法）
平行1
平行2
平行3
平均值
RSD
82.3%
85.5%
89.1%
85.63%
3.97%

图2 婴幼儿奶粉空白液相色谱图 图3 婴幼儿奶粉0.5µg/g添加双氰胺液相色谱图
3 产品订货信息

产品名称
规格型号
货号
新一代
MAS-QuChERS-双氰胺净化管（填料量加大, 更适合婴幼儿奶粉等复杂样品）
500mg/15mL, 50支/包
MS-SQA02
MAS-QuChERS-双氰胺净化管
100mg/2mL, 50支/包
MS-SQA01
Venusil HILIC液相色谱柱
4.6*250mm, 5μm, 100Å
VH952505-0
2.1*150mm, 5μm, 100Å
VH951502-0
微孔滤膜
0.22μm, 直径13mm, 200/Pk
AM021320
双氰胺对照品
500mg /瓶, 含量≥99.0%
DCD-0001
1g /瓶, 含量≥99.0%
DCD-0002
离心管
50mL, 带螺纹盖, 25个/包
LXG0050
一次性注射器
5mL,100/pk
 ZSQ-5ML

另有HPLC-MS/MS检测方法, 请登录查看