BMG免疫反应试剂.doc

执行标准号: YZB/JAP 013-2005
产品注册号:

1006571001-044C ※※2004年4月修订
体外诊断试剂 ※2003年3月修订
2001年8月制成
许可号（02E）第0071号
ST

E-test（TOSOH）Ⅱ（BMG）免疫反应试剂
EIA法检测血清、肝素血浆及尿液中β2-微球蛋白（BMG）浓度所需的检测试剂
β2-微球蛋白（BMG）是由100个氨基酸组成的、分子量约为11，800的低分子蛋白质，是不含糖分的单链多肽。1968年，Berggard和Bearn初次从患有伴随尿蛋白的慢性尿毒症患者尿液中分离纯化了β2-微球蛋白。β2-微球蛋白（BMG）是由淋巴球等有核细胞产生的，与人白血球抗原（HLA，IgG或组织适应性抗原）的不变成分有相似的结构。
自从有报道指出，在各种肾疾病患者血液及尿液中，β2-微球蛋白（BMG）值与肾小体或尿管有关以来，其临床意义被受重视。通常，β2-微球蛋白很容易通过肾小体基底膜，在尿管处被重吸收。因此，如果患有再吸收障碍，大部分的β2-微球蛋白就被排泄到尿液中。另一方面，如果肾小体滤过值（GFR）降低，血液中的β2-微球蛋白浓度会上升，因此，β2-微球蛋白指标可以作为上述两种疾病的鉴别指标。
Fanconi症候群和Wilson病等疾病的主要表现是尿液中β2-微球蛋白浓度会上升，另一方面，慢性肾炎、恶性肿瘤和自身免疫性疾病等的主要表现是血清中的β2-微球蛋白浓度上升，因此检测β2-微球蛋白浓度可以用于上述疾病的诊断、治疗效果的评价。也有报道指出，AIDS患者血清中的β2-微球蛋白浓度也有所上升，因此在其临床治疗观察中可以将β2-微球蛋白作为监视指标。
[特征]
1、 应用AIA全自动免疫分析装置（AIA-1200系列以及AIA-600除外），短时间内能够实现自动检测。（抗原抗体反应时间约为10分钟）。
2、 检测中使用的是高亲合性抗β2-微球蛋白抗体，并采用一步EIA夹心法。
3、 抗β2-微球蛋白的鼠单克隆抗体和酶标记的抗β2-微球蛋白兔多克隆抗体均以冻结干燥状态密封贮存于试剂Cup中，使用时不需要配制。
4、 从抗原抗体反应到荧光检测均在专用的试剂Cup中进行，污染的可能性很小。
5、 不使用放射性同位素，因此不需要特殊的设备。
[成分]
E-test（TOSOH）Ⅱ（BMG）免疫反应试剂
每20个试剂杯排放于一个试剂板上，并保存在铝制的防湿袋中。每次检测所用试剂主要包括以下几种：
抗β2-微球蛋白鼠单克隆抗体固定化微球 12个
抗β2-微球蛋白兔多克隆抗体
碱性磷酸酶联标记结合物 100ul
※ ※[作用]
血清、血浆及尿液中β2-微球蛋白（BMG）浓度的检测
[检测原理]
该方法是使用两种特异性抗体的一步EIA夹心法。固定在磁性微球上的抗β2-微球蛋白抗体和碱性磷酸酶联标记的抗β2-微球蛋白兔多克隆抗体都是以冰冻干燥状态密封在试剂Cup中的。在该试剂Cup添加缓冲液和样品后，冰冻干燥的试剂开始溶解，抗原抗体反应随即发生。
在一定温度下孵育一段时间后，用洗脱液将游离的酶联标记抗体和样品成分除去（B·F分离）。之后，为了检测结合在磁性微球上的酶活性，添加酶底物磷酸-4-甲基伞形酮；通过检测酶反应产物荧光物质的生成速度确定血清或肝素血浆中的β2-微球蛋白的浓度。
[使用方法]
在使用本品检测血清、肝素血浆及尿液中β2-微球蛋白浓度时，请与下列试剂组合使用。另外，除本使用说明书外请参照其它相关说明。
E-test（TOSOH）Ⅱ（BMG）标准品试剂盒
E-test（TOSOH）Ⅱ（BMG）样品稀释浓缩液
E-test（TOSOH）Ⅱ基质试剂盒
（标签上有粉红色“SUBII”标志）
E-test（TOSOH）Ⅱ洗脱液
E-test（TOSOH）Ⅱ缓冲液
在使用AIA全自动酶联免疫分析装置的时候请参考装置的使用说明书。
1、 试剂的配制方法及配制后的贮存方法、使用期限
1） 免疫反应试剂
请将E-test（TOSOH）Ⅱ（BMG）免疫反应试剂从密封的防湿袋中取出，开封后在15-25℃下放置可以保存一天，在2-8℃下放置可保存七天。
2） 样品稀释液
用蒸馏水将E-test（TOSOH）Ⅱ（BMG）样品稀释液稀释10倍后使用。开封后密封放置在2-8℃下可以保存七天。
※ ※3）标准液
E-test（TOSOH）Ⅱ（BMG）标准品（1）是液体，开封后请吸取适当量添加到样本Cup中。E-test（TOSOH）Ⅱ（BMG）标准品（2）-（6）都是冰冻干燥品，使用前各自用1.0毫升蒸馏水溶解。配制后如果密封保存于2-8℃下可以保存1天。
E-test（TOSOH）Ⅱ（BMG）标准品的浓度以TOSOH公司内标准品为标准。
4） 基质液
每瓶E-test（TOSOH）Ⅱ基质液用100毫升E-test（TOSOH）Ⅱ基质溶解液配制。配制后避光放置在15-25℃下放置可以保存三天，在2-8℃下放置可保存七天。注意避免日光及紫外线直射。
5） 洗脱液
每瓶E-test（TOSOH）Ⅱ洗脱液用适量的蒸馏水稀释到2.5升，充分混匀以免产生浓度差。配制后请放置在15-25℃下可以保存30天。
6） 缓冲液
每瓶E-test（TOSOH）Ⅱ缓冲液用适量的蒸馏水稀释到5升，充分混匀以免产生浓度差。配制后请放置在15-25℃下可以保存30天。
2、检测操作方法
1） 从铝片保护层中取出E-test（TOSOH）Ⅱ（BMG）免疫反应试剂Cup。
2） 在试剂Cup中加入135微升缓冲液和15微升标准品或稀释后的样品溶液，在磁石磁珠振动器搅拌，在37℃下使抗原抗体反应进行10分钟。
一般来说，血清和血浆样本要稀释51倍，而尿样要稀释5倍。
3） 用洗脱液冲洗试剂Cup，除去其中游离的酶联标记抗体和样品成分（B·F分离）。
4） 加入基质液后，在磁石磁珠振动器上搅拌同时用荧光检测器检测荧光物质的荧光强度，激发波长363nm，荧光吸收波长447nm，并计算出荧光物质的生成速度。
5） 根据标准液检测绘制的荧光物质生成速度标准曲线，计算出样品中β2-微球蛋白的浓度。
6） 如果检测结果超过检测上限0.400mg/L时，要用样品稀释液提高稀释倍数重新稀释，并按照（1-5）步骤检测。
检测上限的0.400mg/L换算成稀释前的样本浓度，稀释51倍的血清样本是20mg/L，稀释5倍的尿样是2mg/L。
[操作上的注意事项]
※※1、样品必须使用新鲜的血清或肝素血浆，且请不要使用除肝素血浆以外的血浆。取血清及肝素血浆样品时请注意操作以免发生溶血。样品要避光保存在2-8℃，或在-20℃冰冻保存。
2、 当样品中含有EDTA或柠檬酸存在时检测结果会偏低。
3、 尿样采集后，如果不马上检测请将其PH值调到中性，或者用β2-微球蛋白样本稀释液将其稀释5倍，并保存在-20℃。注意，采集尿样时不要使用防腐剂。
4、 避免多次进行冰冻样品冰冻溶解操作。
5、 在使用E-test（TOSOH）Ⅱ（BMG）样品稀释液稀释样品时请充分混匀。
[检测结果的判定方法]
应用E-test（TOSOH）Ⅱ（BMG）标准品试剂盒绘制标准曲线，从曲线中计算出样品中β2-微球蛋白的浓度。其中，计算β2-微球蛋白浓度时必须对样本的稀释倍数进行修正。
对于检测结果的判定，其标准值由各单位各自设定。在进行临床诊断时，要考虑到其他检测结果及临床症状并给予一个综合的判断。
为了提高检测结果的精确度，在检测样品时请同时测定市售管理血清的Control。使用全自动酶联免疫分析装置AIA-21检测所得的标准曲线如下(见原版说明书)所示。
[性能及相关性]
1、灵敏度
1）E-test（TOSOH）Ⅱ（BMG）标准品（1）的荧光单位（FU，Rate）在8nmol/（L.s）以下。
2）测定E-test（TOSOH）Ⅱ（BMG）标准品（1）和E-test（TOSOH）Ⅱ（BMG）标准品（6）的FU，并计算BMG浓度，FU差值与BMG浓度之比是200-2000nmol/（L.s）/mg/L。
3）E-test（TOSOH）Ⅱ（BMG）标准品（1）-（6）FU值的大小关系是：(1)<(2)<(3)<(4)<(5)<(6)。
注释：FU之比由以下公式计算：
FU之比=（A-B）/C
A：标准品（6）的FU nmol/（L.s）
B：标准品（1）的FU nmol/（L.s）
C：标准品（6）的BMG浓度 mg/L
2、特异性
检测已知β2-微球蛋白浓度在0.01-0.18mg/L范围的血清样品时，其检测结果在100±20%以内。
注释：已知浓度的血清样品是以TOSOH BMG标准品做对照，用E-test（TOSOH）Ⅱ（BMG）检测，用此结果做对照值。
3、重复性
同时检测β2-微球蛋白浓度在0.01-0.18mg/L范围的两例病人的血清样品10次，其检测结果的变动系数在15%以下。
※4、检测范围：0.002-0.400mg/L
以标准品（1-6）的检测结果绘制成标准曲线，从标准曲线中推测出标准品（1）的FU平均值（Y轴截距），以该平均值+2SD（10次检测结果的标准偏差）作为检测下限，即0.002mg/L。
抗原浓度过高时会导致检测结果偏低，但当其浓度在2 mg/L以下时不会发生上述情况。
其中，检测范围0.002-0.400mg/L如果换算成稀释前的样本浓度，相当于稀释51倍的血清样本：0.1-20mg/L，稀释5倍的尿样：0.01-2mg/L。
※ ※5、干扰物质
在检体标本中如血红蛋白、游离胆红素、饱和胆红素、脂质、白蛋白、抗坏血酸以及肝素的浓度分别低于390mg/dl 、17mg/dl、17.7mg/dl、1660mg/dl、50 mg/ml、20mg/dl、100U/ml时上述物质几乎不会影响检测结果。
※ ※6、 相关性
本方法（y）与本公司EIA法（x）的相关性如下所示：
血清 y=1.000x+0.002
r=0.998
n=46
尿样 y=1.007x+0.001
r=0.999
n=44
其中，用本方法检测讨论肝素血浆（y）和血清（x）的相关性，其结果如下：
y=0.982x-0.096
r=0.986
n=67
7、参考标准范围
分析161例健康者血清及尿液中β2-微球蛋白浓度的检测结果，所得的参考标准范围是血清：0.85-1.62mg/L，尿样：0.027-0.265 mg/L。其中，参考标准值范围容易受其他各种因素影响，所以希望各单位自行设定。
[使用上的注意事项]
1. 本品是一种体外诊断用试剂，禁止以其他目的使用。
2. 试剂超过有效期限请勿使用。
3. 试验仪器的污染对检测结果的判断有一定影响，所以请洗净试验仪器后再进行检测。
※4. 因为本品中含有的作为保存试剂的叠氮化钠，因此试验中如不慎进入眼睛、口中或沾到皮肤上的时候，请采取应急措施—用流水充分冲洗；必要时请求助医生处理。另外，叠氮化钠与铅和铜可发生反应生成有爆炸性的金属叠氮化物，因此，检测结束后请将试剂用大量水稀释后废弃。
5. 已经确认该试剂盒对HBS抗原、HIV抗体及HCV抗体呈阴性，但仍请使用者注意使用以免意外。
6. 沾有标准品和样品溶液的手套等试验器具及检测结束后的试剂Cup要用高压灭菌锅在120℃下处理15分钟灭菌后废弃。
※※7. 本产品是血清、肝素血浆及尿样中BMG的检测用剂，请不要用于其它样品的检测。其中，血浆请用肝素血浆。
8. 如果样本中有HAMA（Human Anti-mouse Antibody）时，在使用鼠单克隆抗体的检测系统中不能得到正确的结果。
9. 本产品不能用于AIA全自动免疫分析装置AIA-1200系列及AIA-600。

[贮存及有效期限]
请避光保存于2-8℃。有效日期见试剂盒、防潮袋及Cup板的标签
[包装规格]
100次检测用量（20试剂Cup/板×5）。
[主要文献]
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