树突状细胞的体外培养及其诱导的抗肿瘤免疫作用.doc

树突状细胞的体外培养及其诱导的抗肿瘤免
疫作用

作者：张建芳，于文彬，徐修礼，苏明权，马越云，刘家云，丁

振若

【关键词】 树突状细胞

关键词: 树突状细胞;LAK 细胞;免疫治疗

摘 要:目的 建立体外培养扩增树突状细胞（DC）的方法，并

观察其诱导的抗肿瘤免疫作用. 方法 分离外周血单个核细胞，应用

GM-CSF 及 IL-4 诱导 DC 产生，用 TNF-a和 PGE2 促进其成熟，并用肺

癌细胞系 GLC-82 可溶性抗原致敏.将成熟 DC 与自体 LAK 细胞混合培养

（DC-LAK） ，用 MTT 法检测 DC-LAK 细胞及 LAK 细胞对多种肿瘤细胞系

的杀伤作用. 结果 经 GM-CSF，IL-4，TNF-a，PGE2 作用后，细胞表

达 CD1 a 阳性率为 71.0%，CD83 50.0%，CD14 阳性率低于 10.0%，高

表达 HLA-Ⅰ，HLA-Ⅱ和 CD45 ，为典型的 DC 表型特征.DC-LAK 和 LAK

细胞对 4 种肿瘤细胞（GLC-82，A549，moser 和 MCF-7）的杀伤率，前

者为 84.7%，66.9%，49.3%和 56.0%，后者为 43.5%，31.3%，45.0%和

32.4%. 结论 成功的诱导出具有典型形态特征及增强 LAK 细胞杀伤活

性的 DC.

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In vitro generation of human blood dendritic cells for

active tumor immunotherapy

Abstract:AIM To establish a method to culture dendritic

cells（DC）in vitro and to observe the anti-tumor effect in-duced

by DC.METHODS Dendritic cells were derived from PBMC stimulated

with GM-CSF and IL-4and DC were pulsed with tumor soluble antigen

abstracted from lung can-cer cell line GLC-82.TNF-aand PGE2

were used to enhance antigen presenting ability of DC.Phenotype

of DC were ana-lyzed through FACS.Mature DC were cocultured with

LAK cells and the mixed cells were named DC-LAK.Cytotoxicity of

DC-LAK and LAK were measured by MTT assay.RESULTS The cultured

DC expressed HLA-Ⅰ，HLA-Ⅱand CD45 and positive rates of CD1

a ， CD83 and CD14 were71.0% ， 50.0%and less

than10.0%respectively.Killing rates of DC-LAK and LAK to the

four cell lines（GLC-82，A549，moser and MCF-7）were84.7%，66.9%，

49.3%， 56.0%and43.5%， 31.3%， 45.0%， 32.4%respectively.CONCLUSION

DC that have typical phenotype and could be enhance cytotoxity

of LAK could be induced from PBMC suc-cessfully.

0 引言

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近年来树突状细胞（DC）可有效地递呈可溶性肿瘤抗原，增

强机体对肿瘤的特异性免疫应答，并在临床取得了成绩［1，2］ .我

们将外周血中贴壁的单个核细胞作为 DC 的前体细胞， 联合应用一组细

胞因子诱导获得了纯度较高的人树突状细胞， 并将之与 LAK 细胞结合，

体外诱导产生了相对高效而特异的抗肿瘤免疫作用.

1 材料和方法

1.1 材料

基因重组人 IL-4，TNF-a和 GM-CSF 为 Promega 公司产品，

PGE2 购自 Sigma 公司，淋巴细胞分离液购自上海医学试剂厂，IL-2

为本校基因研究所产品，抗 CD1 a-FITC 和抗 CD83 -FITC 购自晶美公

司，HLA-Ⅰ，HLA-Ⅱ抗体及羊抗鼠-FITC 购自北京邦定公司，酶联免

疫检测仪为 Labsystem 产品;CD14 /CD45 双色荧光标记抗体由西京医

院免疫科提供.肺癌 A549 为本校基础部免疫学教研室提供;乳腺癌

MCF-7 细胞引自军事医学科学院;大肠癌 moser 细胞、肺癌 GLC-82 细

胞为本室保留株 .各细胞系均用含 50mL・L-1 小牛血清的

RPMI1640 培养液，于 37℃，50mL・L-1 CO2 条件下常规培养.

1.2 方法

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