UHPLC结合化学计量学分析不同采收期茶枝柑青皮中黄酮类成分.pdf

2585中南药学 2023 年 10 月 第 21 卷 第 10 期Central South Pharmacy.October 2023,Vol.21 No.10 UHPLC 结合化学计量学分析不同采收期 茶枝柑青皮中黄酮类成分张戴英1，2，何小芳3，黄健晶1，2，张英3，吴孟华3，曹晖3，马志国3*（1.广东大翔中药制药有限公司，广州510385；2.张戴英女职工创新工作室，广州510385；3.暨南大学岭南传统中药研究中心，广州511400）摘要：目的比较不同采收期茶枝柑青皮中黄酮类成分的差异，为青皮的质量评价提供依据。方法采用 UHPLC法建立指纹图谱，对不同采收期的青皮进行相似度评价，同时测定并比较不同采收期样品中芸香柚皮苷、橙皮苷、香蜂草苷、甜橙黄酮、川陈皮素、3，4，3，5，6，7，8-七甲氧基黄酮、5-去甲川陈皮素和桔皮素的含量。结果建立了青皮的 UHPLC 指纹图谱，共指认了 8 个特征峰，7 9 月采收的青皮相似度大于 0.97，5 月份与其他月份的相似度均小于 0.8。8 个黄酮类成分的总量随着生长期的增长而减少，5 月采收的个青皮中芸香柚皮苷、橙皮苷、香蜂草苷含量明显高于其他月份，而 3，4，3，5，6，7，8-七甲氧基黄酮含量明显低于其他月份；甜橙黄酮、川陈皮素、5-去甲川陈皮素、桔皮素的含量在不同采收期变化不明显。聚类分析与主成分分析均可将 5 月采收的样品与 7 9 月采收的样品分开。结论不同采收期的茶枝柑青皮中黄酮类成分的含量差异较大，本文可为青皮药材的质量控制提供依据。关键词：茶枝柑；不同采收期；黄酮类成分；特征图谱；含量测定中图分类号：R284.1，R283文献标识码：A文章编号：1672-2981(2023)10-2585-07doi:10.7539/j.issn.1672-2981.2023.10.006UHPLC combined with chemometrics for the analysis of flavonoids in Citrus reticulata Blanco at different harvesting periodsZHANG Dai-ying1,2,HE Xiao-fang3,HUANG Jian-jing1,2,ZHANG Ying3,WU Meng-hua3,CAO Hui3,MA Zhi-guo3*(1.Guangdong Daxiang Chinese Medicine Pharmaceutical Co.,Ltd.,Guangzhou 510385;2.Zhang Daiying Female Employee Innovation Studio,Guangzhou 510385;3.Research Center for TCM of Lingnan(Southern China),Jinan University,Guangzhou 511400)Abstract:Objective To compare the difference in flavonoid components in Canarh Fructus(Citrus reticulata Blanco)at different harvesting periods,and to provide a basis for the quality evaluation of Canarh Fructus.Methods Fingerprint was established by UHPLC method to evaluate the similarity of different harvesting periods of Canarh Fructus.The content of narirutin,hesperidin,didymin,hesperetin,sinensetin,nobiletin,3,4,3,5,6,7,8-heptamethoxyflavone,5-demethylnobiletin and tangeretin in samples from different harvesting periods was determined and compared.Results UHPLC fingerprints were established and 8 characteristic peaks were identified.The similarity of Canarh Fructus collected from July to September was greater than 0.97,and the similarity between May and other months was less than 0.8.The total amount of the 8 flavonoids decreased with the growth period.The content of narirutin,hesperidin,and didymin in Canarh Fructus collected in May was significantly higher than that in other months,while the content of 3,4,3,5,6,7,8-heptamethoxyflavone was significantly lower than that in other samples.The contents of hesperetin,sinensetin,nobiletin,5-demethylnobiletin and tangeretin did not change obviously in different harvesting periods.Both cluster analysis and principal component analysis can separate the samples 基金项目：2020 年广东省重点领域研发计划（第五批）（No.2020B1111110005）；全国名老中医药专家传承工作室建设项目（国中医药人教函 202275 号）。作者简介：张戴英，女，主管中药师，主要从事中药饮片炮制工艺及质量标准研究，email：*通信作者：马志国，男，教授，博士研究生导师，主要从事中药饮片质量评价研究，email：2586Central South Pharmacy.October 2023,Vol.21 No.10 中南药学 2023 年 10 月 第 21 卷 第 10 期青皮为芸香科植物橘 Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的干燥幼果或未成熟果实的果皮，具有疏肝破气、消积化滞的功效1。青皮中含有挥发油、黄酮类化合物、氨基酸、胺类、生物碱、有机酸等成分，其中以橙皮苷为代表的黄酮类成分是青皮的主要活性成分2-3，多采用 HPLC法进行分析4-7。文献报道，采收期不同的个青皮与四花青皮中黄酮类成分、挥发油含量及组成均存在较大差异8-12。茶枝柑（Citrus reticulata Chachi）是橘的众多栽培品种之一，主产于广东新会，为广东道地药材广陈皮的基原植物，5月落果晒干为个青皮，俗称“柑胎仔”；7 9 月份采收未成熟的果实后将果皮纵向剖成 4 瓣，去除果籽果肉，晒干后即得四花青皮13，俗称“柑青皮”，文献报道橙皮苷在“柑胎仔”中的含量明显高于“柑青皮”14，而其他成分与采收时间的相关性未见报道。本研究采用 UHPLC-DAD 指纹图谱结合多指标定量方法，对不同采收期茶枝柑青皮的指纹图谱和8个黄酮类成分含量进行对比，为不同采收期茶枝柑青皮中黄酮类成分变化趋势和质量控制提供科学依据。1材料1.1仪器Agilent 1290 Infinity超高效液相色谱仪（DAD检测器）；XSR105/A十万分之一天平（瑞士梅特勒-托利多），FA 2204B 万分之一电子天平（上海佑科仪器仪表有限公司）；KQ-300DB 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；DK-98-单列两孔恒温水浴锅（TAISITE 仪器有限公司）；YF-高速中药粉碎机（瑞安市永历制药机械有限公司）；DHG-9140A 型电热恒温鼓风干燥箱（上海精其仪器有限公司）。1.2试药芸香柚皮苷（批号：Y-071-190329）、橙皮苷（批号：C-006-191012）、香蜂草苷（批号：X-034-181216）、甜橙黄酮（批号：T-046-190328）、川陈皮素（批号：C-015-180306）、3，4，3，5，6，7，8-七甲氧基黄酮（批号：Q-113-191016）、桔皮素（批号：J-022-180730）（成都瑞芬思生物科技有限公司，纯度均大于 98.0%）；5-去甲川陈皮素（批号：wkq19021312，四川维客奇生物科技有限公司，纯度大于 98.0%）。乙腈（上海麦克林生化科技有限公司）、甲酸（天津科密欧化学试剂有限公司）、甲醇（上海晶纯实业有限公司）均为色谱纯，水为纯净水 华润怡宝饮料（中国）有限公司，其余试剂均为分析纯。本研究收集了 5 月产的茶枝柑干燥幼果 11 批，晒干，为个青皮；7 9 月采摘茶枝柑未成熟鲜果38批，加工为干燥的果皮，为四花青皮。详见表1。表 1样品信息表 Tab 1Sample information序号样品编号序号样品编号1QP-050125QP-08012QP-050226QP-08023QP-050327QP-08034QP-050428QP-08045QP-050529QP-08056QP-050630QP-08067QP-050731QP-08078QP-050832QP-08089QP-050933QP-080910QP-051034QP-081011QP-051135QP-081112QP-070136QP-081213QP-070237QP-081314QP-070338QP-090115QP-070439QP-090216QP-070540QP-090317QP-070641QP-090418QP-070742QP-090519QP-070843QP-090620QP-070944QP-090721QP-071045QP-090822QP-071146QP-090923QP-071247QP-091024QP-071348QP-091149QP-09122方法与结果2.1供试品溶液的制备取青皮样品粉末 0.2 g（过 5 号筛），精密称定，置 150 mL具塞锥形瓶中，加甲醇 50 mL，密塞，摇匀，称定重量，超声处理（700 W，40 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，过 0.22 m 微孔滤膜，即得。collected in May from that collected from July to September.Conclusion There is difference in the content of flavonoids Canarh Fructus(Citrus reticulata Blanco)from different harvesting periods.This article can provide a basis for the quality control of Canarh Fructus.Key words:Citrus reticulata Blanco;different harvesting period;flavonoid;characteristic chromatogram;content determination2587中南药学 2023 年 10 月 第 21 卷 第 10 期Central South Pharmacy.October 2023,Vol.21 No.10 2.2混合对照品溶液的制备精密称取芸香柚皮苷、橙皮苷、香蜂草苷、甜橙黄酮、川陈皮素、3，4，3，5，6，7，8-七甲氧基黄酮、桔皮素和 5-去甲川陈皮素对照品粉末适量，加入甲醇配成质量浓度分别为 149、334、61.6、15.4、62、16、60.8、15.7 gmL 1的混合对照品溶液。2.3色谱条件色谱柱为 Waters Acquity UPLC HSS T3（100 mm2.1 mm，1.8 m），流动相为乙腈（B）-0.1%甲酸水（A），梯度洗脱（0 8 min：15%45%B，8 12 min：45%65%B，12 15 min：65%15%B），检测波长为 283 nm或 330 nm，流速为 0.3 mLmin 1，柱温为 35，进样量为 2 L。2.4UHPLC 指纹图谱的建立2.4.1精密度试验取同一批样品（QP-0501）粉末（过 5 号筛），按“2.1”项下方法制备供试品溶液，连续进样 6 次，以 2 号峰为参照峰，计算各特征峰的相对保留时间的 RSD均小于0.10%，相对峰面积的 RSD均小于 0.20%，表明仪器精密度良好。2.4.2稳定性试验取同一批样品（QP-0501）粉末（过 5 号筛），按“2.1”项下方法制备供试品溶液，分别于 0、1、2、4、8、12 h 进样测定，以2 号峰为参照峰，计算各特征峰的相对保留时间的 RSD 均小于 0.10%，相对峰面积 RSD 均小于0.70%，表明供试品溶液在 12 h 内稳定性良好。2.4.3重复性试验分别取同一批样品（QP-0501）粉末（过 5 号筛）各 6 份，精密称定，按“2.1”项下方法分别制备，进样测定，以 2 号峰为参照峰，计算各特征峰的相对保留时间的 RSD均小于 0.20%，相对峰面积 RSD 均小于 2.3%，表明该方法重复性良好。2.4.4指纹图谱的建立取所有批次的样品，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。利用 Agilent Chem Station 软件将色谱数据导出为“AIA”格式，并将 5、7、8、9 月份的青皮样品所得的数据分别导入 中药指纹图谱相似度评价系统（2012）相似度软件，生成各自的指纹图谱及共有模式图谱（见图 1、2）。图 1不同采收期青皮药材的指纹图谱Fig 1UHPLC chromatograms of Canarh Fructus at different harvesting periods2.4.5共有峰的指认取混合对照品溶液，按“2.3”项下色谱条件进样测定。通过保留时间结合紫外光谱图对指纹图谱中的8个共有峰进行了指认，分别为芸香柚皮苷（1 号峰）、橙皮苷（2 号峰）、香蜂草苷（3 号峰）、甜橙黄酮（4 号峰）、川陈皮素（5号峰）、3，4，3，5，6，7，8-七甲氧基黄酮（6 号峰）、桔皮素（7 号峰）、5-去甲川陈皮素（8 号峰）。从图 1、2 可以看出，5 月采收的青皮图谱与另外3个月采收的青皮图谱有明显差异，而79月间的青皮图谱变化不明显；随着生长期的增加，2 号峰（橙皮苷）的相对峰高明显降低，A 区域的共有峰随着月份的增加变化不明显，需进一步通过含量测定进行分析比较。2.4.6相似度分析将以上得到的数据导入 中药指纹图谱相似度评价系统（2012）相似度软件，计算各自的相似度，结果见表 2。2588Central South Pharmacy.October 2023,Vol.21 No.10 中南药学 2023 年 10 月 第 21 卷 第 10 期由表 5 可知，不同采收期的青皮样品中各测定成分有不同程度的差异，采用单因素方差分析，对不同月份的 8 种成分含量进行差异比较。结果表明，芸香柚皮苷、橙皮苷、香蜂草苷和 5-去甲川陈皮素的 5 月份的含量显著高于 7 9 月份（P 0.001）。甜橙黄酮 5 月份的含量明显低于7 9 月份（P 0.001）。川陈皮素 5 月份的含量明显低于 7 月份和 8 月份（P 0.001），而 9 月份的川陈皮素含量低于8月份（P0.05）。3，4，3，5，6，7，8-七甲氧基黄酮 5 月份的含量明显低于7 9 月份（P 0.001），而且 7 月份的 3，4，3，5，6，7，8-七甲氧基黄酮含量显著低于 8 月份（P 0.01）。桔皮素在 5 月、7 月、8 月和 9 月的含量没有显著差异。2.5.2聚类分析为比较不同采收时间青皮之间成分的差异，以各样品中黄酮类成分含量测定结果为变量，将数据导入 ImageGP 进行热图聚类分析（见图 3）。由聚类分析结果可得，5 月份采收的青皮可聚为一类，7、8、9 月份的青皮聚为另一类，从热图可以看出 5 月份采收的个青皮中芸香柚皮苷、橙皮苷、香蜂草苷含量均高于其他月份采收的四花青皮，提示随着采收时间的后推，黄酮苷类成分有降低的趋势。2.5.3主成分分析采用 SIMCA 14.1 软件，以表 2不同采收期青皮样品相似度评价 Tab 2Similarity evaluation of Canarh Fructus at different harvesting periods5 月7 月8 月9 月批号相似度批号相似度批号相似度批号相似度QP-05010.997QP-07010.997QP-08010.995QP-09010.998QP-05020.998QP-07020.986QP-08020.998QP-09020.997QP-05030.999QP-07030.995QP-08030.999QP-09031.000QP-05040.996QP-07040.999QP-08040.985QP-09040.998QP-05050.999QP-07050.998QP-08050.999QP-09051.000QP-05060.999QP-07061.000QP-08061.000QP-09061.000QP-05071.000QP-07070.994QP-08070.999QP-09070.997QP-05080.997QP-07080.998QP-08080.995QP-09080.987QP-05090.999QP-07090.994QP-08090.987QP-09090.975QP-05100.998QP-07100.989QP-08100.994QP-09100.999QP-05110.999QP-07110.996QP-08110.990QP-09110.993QP-07120.972QP-08120.996QP-09120.984QP-07130.999QP-08130.999表 3共有模式的相似度比较 Tab 3Similarity of shared patterns 采收时间5 月7 月8 月9 月5 月1.0000.7760.7200.7377 月0.7761.0000.9960.9988 月0.7200.9961.0001.0009 月0.7370.9981.0001.000 从 表 2 可 知，49 批 4 个 不 同 采 收 期（5、7、8、9 月份）青皮的指纹图谱相似度分别是0.996 1.000、0.972 1.000、0.985 1.000、0.9841.000。相同采收期的青皮相似度均0.97，说明相同月份采摘的青皮之间质量稳定性较好。通过对比 4 个不同采摘月份的青皮的共有模式图的相似度（见表 3），发现 7 9 月采收的四花青皮相似度极高，而 5 月份采收的个青皮与四花青皮相似度 0.78，相似度较低，表明不同成熟度的青皮质量存在一定的差异。2.5青皮中 8 种黄酮类成分的含量测定参考本课题组已建立的 UHPLC 法15，对不同采收期茶枝柑青皮的样品中的 8 个黄酮类成分进行定量分析。2.5.1含量测定分别精密吸取“2.1”及“2.2”项下供试品溶液和对照品溶液 2 L，按“2.3”项下方法测定，用外标法计算含量，结果见表4、5。图 2不同采收期青皮的共有模式图Fig 2Specific chromatograms of Canarh Fructus at different harvesting periods1.芸香柚皮苷（narirutin）；2.橙皮苷（hesperidin）；3.香蜂草苷（did-ymin）；4.甜橙黄酮（sinensetin）；5.川陈皮素（nobiletin）；6.3，4，3，5，6，7，8-七甲氧基黄酮（3，4，3，5，6，7，8-heptamethoxyfla-vone）；7.桔皮素（tangeretin）；8.5-去甲川陈皮素（5-demethylnobiletin）2589中南药学 2023 年 10 月 第 21 卷 第 10 期Central South Pharmacy.October 2023,Vol.21 No.10 表 4不同采收期青皮样品 8 个成分含量测定结果(%)Tab 4Content of 8 components of Canarh Fructus at different harvesting periods(%)编号采收时间产地芸香柚皮苷橙皮苷香蜂草苷甜橙黄酮川陈皮素3，4，3，5，6，7，8-七甲氧基黄酮桔皮素5-去甲川陈皮素总量QP-05015 月新会司前镇0.747 21.6 0.338 0.0437 0.564 0.0204 0.278 0.0658 23.6 QP-05025 月新会茶坑镇0.621 18.4 0.269 0.0315 0.435 0.0178 0.267 0.0445 20.1 QP-05035 月新会三江镇0.682 25.1 0.282 0.0311 0.439 0.330 0.0572 26.9 QP-05045 月新会天马村0.806 24.5 0.278 0.0323 0.474 0.329 0.0664 26.5 QP-05055 月新会天马村0.714 17.1 0.332 0.0269 0.377 0.0162 0.268 0.0449 18.9 QP-05065 月新会三江镇1.07 21.0 0.466 0.0321 0.445 0.0177 0.318 0.0548 23.4 QP-05075 月新会茶坑镇0.984 20.6 0.414 0.0386 0.544 0.0225 0.356 0.0600 23.1 QP-05085 月新会天马村1.19 22.9 0.395 0.0234 0.374 0.283 0.0532 25.2 QP-05095 月新会司前镇1.11 22.0 0.396 0.0288 0.509 0.351 0.0673 24.5 QP-05105 月新会司前镇0.745 22.6 0.252 0.0206 0.358 0.263 0.0576 24.3 QP-05115 月新会三江镇1.18 21.3 0.427 0.0373 0.547 0.0209 0.342 0.0624 23.9 QP-07017 月新会罗坑镇0.274 6.63 0.097 0.0505 0.577 0.0403 0.385 0.0421 8.09 QP-07027 月新会罗坑镇0.260 7.01 0.0918 0.0441 0.498 0.0475 0.317 0.0327 8.30 QP-07037 月新会双水镇0.242 5.90 0.102 0.0417 0.486 0.0537 0.300 0.0351 7.16 QP-07047 月新会茶坑镇0.233 5.34 0.0716 0.0561 0.637 0.0619 0.350 0.0373 6.79 QP-07057 月新会梅江镇0.195 5.67 0.0656 0.0541 0.611 0.0593 0.355 0.0405 7.05 QP-07067 月新会三江镇0.340 6.47 0.0815 0.0543 0.622 0.0552 0.356 0.0418 8.02 QP-07077 月新会天马村0.234 7.73 0.0782 0.0560 0.648 0.0541 0.345 0.0506 9.19 QP-07087 月新会南坦镇0.213 6.61 0.0827 0.0524 0.599 0.0487 0.378 0.0367 8.02 QP-07097 月新会司前镇0.173 5.47 0.0532 0.0607 0.684 0.0719 0.304 0.0430 6.86 QP-07107 月新会双水镇0.205 4.91 0.0542 0.0667 0.724 0.0686 0.374 0.0412 6.44 QP-07117 月新会司前镇0.321 8.40 0.0849 0.0588 0.704 0.0646 0.454 0.0552 10.1 QP-07127 月新会茶坑镇0.242 4.73 0.0550 0.0809 0.898 0.0685 0.504 0.0576 6.64 QP-07137 月新会梅江镇0.161 5.32 0.0584 0.0556 0.596 0.0652 0.323 0.0332 6.61 QP-08018 月新会罗坑镇0.330 6.18 0.0719 0.0677 0.698 0.0660 0.434 0.0493 7.90 QP-08028 月新会罗坑镇0.280 4.58 0.0649 0.0501 0.524 0.0622 0.279 0.0329 5.87 QP-08038 月新会双水镇0.136 4.29 0.0524 0.0853 0.868 0.0887 0.487 0.0499 6.05 QP-08048 月新会茶坑镇0.227 5.88 0.0655 0.0633 0.693 0.0746 0.348 0.0462 7.40 QP-08058 月新会梅江镇0.242 4.99 0.0617 0.0617 0.634 0.0791 0.361 0.0385 6.47 QP-08068 月新会三江镇0.226 5.53 0.0811 0.0579 0.619 0.0674 0.359 0.0371 6.98 QP-08078 月新会天马村0.207 5.81 0.0729 0.0558 0.586 0.0661 0.321 0.0357 7.15 QP-08088 月新会南坦镇0.140 4.81 0.0541 0.0780 0.794 0.0873 0.413 0.0395 6.41 QP-08098 月新会司前镇0.136 3.96 0.0476 0.0721 0.745 0.0960 0.321 0.0420 5.42 QP-08108 月新会双水镇0.174 5.70 0.0673 0.0553 0.575 0.0622 0.307 0.0325 6.97 QP-08118 月新会司前镇0.172 5.89 0.0583 0.0463 0.538 0.0601 0.293 0.0415 7.10 QP-08128 月新会茶坑镇0.187 5.70 0.0697 0.0660 0.698 0.0733 0.466 0.0471 7.31 QP-08138 月新会梅江镇0.133 4.54 0.0408 0.0522 0.548 0.0748 0.270 0.0341 5.69 QP-09019 月新会罗坑镇0.157 5.440.0640 0.0514 0.540 0.0569 0.323 0.0365 6.67 QP-09029 月新会双水镇0.0825 4.930.0509 0.0605 0.624 0.0672 0.338 0.0328 6.18 QP-09039 月新会茶坑镇0.165 5.110.0617 0.0572 0.562 0.0691 0.363 0.0300 6.42 QP-09049 月新会梅江镇0.139 4.620.0503 0.0533 0.564 0.0764 0.313 0.0333 5.85 QP-09059 月新会三江镇0.120 4.750.0530 0.0514 0.550 0.0703 0.309 0.0351 5.94 QP-09069 月新会天马村0.0538 3.430.0375 0.0510 0.488 0.0491 0.251 0.0239 4.39 QP-09079 月新会南坦镇0.0363 3.170.0297 0.0544 0.568 0.0685 0.288 0.0307 4.25 QP-09089 月新会司前镇0.063 3.060.0370 0.0660 0.669 0.0940 0.301 0.0396 4.33 QP-09099 月新会双水镇0.133 4.930.0535 0.0521 0.548 0.0787 0.335 0.0336 6.16 QP-09109 月新会司前镇0.147 5.580.0542 0.0512 0.559 0.0578 0.322 0.0418 6.81 QP-09119 月新会茶坑镇0.296 6.640.0879 0.0569 0.596 0.0789 0.362 0.0429 8.16 QP-09129 月新会梅江镇0.165 4.980.0566 0.0376 0.409 0.0448 0.218 0.0305 5.94 注（Note）：“”未检测到（“”means no detection）。测得的 8 个黄酮类成分含量测得结果为变量，建立主成分分析模型，绘制主成分分析得分图（见图 4）。结果可知，前 2 个主成分累积贡献率为 93.5%，其中第 1 主成分贡献率为 68.8%，第 2 主成分贡献率为 24.7%。从所得的方差贡献率来看，建立的模型累积解释能力参数 R2X和预测能力参2590Central South Pharmacy.October 2023,Vol.21 No.10 中南药学 2023 年 10 月 第 21 卷 第 10 期数 Q2分别为 0.935 和 0.855，说明模型的区分度和预测程度都较好，前 2 个主成分已基本能反映出不同月份青皮样品的主要特征。5 月份采收的个青皮与7、8、9月份采收的四花青皮能显著区分开来，个青皮与四花青皮在成分含量上存在明显的差异；而 7 9 月采收的样品并不能显著分开，说明这 3个月份采收的青皮黄酮类含量差异不明显。主成分分析结果与热图聚类分析结果一致，提示青皮含有的黄酮类成分与采收时间具有一定的相关性。3讨论3.1不同采收期青皮的指纹图谱本研究建立了青皮药材中黄酮类成分的UHPLC-DAD指纹图谱，共标定了 8 个共有峰，分别为芸香柚皮苷（1 号峰）、橙皮苷（2 号峰）、香蜂草苷（3 号峰）、甜橙黄酮（4 号峰）、川陈皮素（5号峰）、3，4，3，5，6，7，8-七甲氧基黄酮（6号峰）、桔皮素（7 号峰）和 5-去甲川陈皮素（8 号峰）。采用 UHPLC指纹图谱法对不同采收期的青皮进行相似度分析，发现相同月份采收的青皮样品的指纹图谱相似度均 0.9，说明相同采收期的青皮样品之间均一性相对较高、质量相对较稳定。5 月份与其他月份的共有模式图相似度均 0.8，而 7 9 月采收的青皮的相似度极高。聚类分析与主成分分析均可将 5 月采收的样品与 7 9 月采收的样品分开，说明采收期是影响青皮质量的关键因素，7 9 月份采收的青皮质量较稳定。3.2不同采收期青皮的黄酮类成分含量不同采收期青皮中 8 种黄酮类成分含量测定结果表明，79月的青皮中甜橙黄酮和3，4，3，5，图 4不同月份青皮主成分分析图Fig 4Principal component analysis for different months图 3不同月份青皮聚类热图Fig 3Cluster analysis chart for different months1.芸香柚皮苷（narirutin）；2.橙皮苷（hesperidin）；3.香蜂草苷（didymin）；4.甜橙黄酮（sinensetin）；5.川陈皮素（nobiletin）；6.3，4，3，5，6，7，8-七 甲 氧 基 黄 酮（3，4，3，5，6，7，8-heptamethoxyflavone）；7.桔皮素（tangeretin）；8.5-去甲川陈皮素（5-demethylnobiletin）表 5不同采收期青皮中 8 个成分的含量平均值(%)Tab 5Average content of 8 components of Canarh Fructus at different harvesting periods(%)成分采收时间5 月7 月8 月9 月芸香柚皮苷 0.8950.238 0.2380.05231）0.1990.06081）0.1300.06911）橙皮苷 21.62.35 6.171.101）5.220.7221）4.721.051）香蜂草苷 0.350.07350.07510.01681）0.06220.01121）0.05300.01501）甜橙黄酮0.03150.00670.05630.00981）0.06240.01131）0.05360.00681）川陈皮素 0.4610.0735 0.6370.1051）0.6550.1051）0.5560.06452）3，4，3，5，6，7，8-七甲氧基黄酮0.01050.00240.05840.00951）0.07370.01131），3）0.06760.01381）桔皮素 0.3080.0363 0.3650.0582 0.3580.0711 0.3100.04245-去甲川陈皮素0.05760.00790.04210.00791）0.04050.00611）0.03420.00541）2）注：与 5 月的含量进行比较，1）P 0.001；与 9 月的含量比较，2）P 0.05；与 8 月的含量比较，3）P 0.01。Note：Compared with July，1）P 0.001；compared with September，2）P 0.05；compared with August，3）P 0.01.2591中南药学 2023 年 10 月 第 21 卷 第 10 期Central South Pharmacy.October 2023,Vol.21 No.10 6，7，8-七甲氧基黄酮的含量明显高于 5 月；川陈皮素和桔皮素的含量随着月份的增加变化不明显；随着生长期的增加，芸香柚皮苷、橙皮苷、香蜂草苷、5-去甲川陈皮素 4 种黄酮类成分显著减少，其中以未成熟幼果入药的个青皮（柑胎仔）含量最高，说明青皮中黄酮类成分的含量与生长期密切相关。参考文献1 中国药典 2020 年版.一部S.2020：205.2 陈红，刘传玉，李承晏.青皮的化学及药理作用研究进展J.中草药，2001，32（11）：1050-1052.3 刘龙婵，王星宇，李林楠，等.青皮与陈皮化学成分及分析方法研究进展J.中国中药杂志，2022，47（11）：2866-2879.4 肖小春，何小芳，张英，等.青皮的高效液相特征图谱和 5 个黄酮类成分含量测定J.中南药学，2023，21（2）：515-519.5 邓芸，叶惠煊，谢安，等.高效液相色谱特征图谱结合化学计量学评价青皮饮片的质量J.中南药学，2017，15（11）：1598-1601.6 邝敏贤，潘弟仪，陈用年，等.一测多评法同时测定青皮中 5 种成分的含量J.药品评价，2022，19（19）：1166-1171.7 何民友，叶瑞平，段志文，等.青皮及其炮制品 UPLC指纹图谱与多成分含量测定研究J.中药材，2022，45（10）：2418-2424.8 陈芳，梁月仪，童培珍，等.不同规格青皮