成人急性淋巴细胞白血病乳腺癌易感基因1表达状况与移植预后相关性分析.pdf

短篇论著861Clin J Med Offic,No.8,Aug,2023VO2023年8 月第51卷第8 期临床军医杂志成人急性淋巴细胞白血病乳腺癌易感基因1表达状况与移植预后相关性分析于艺冰，肖霞，熊霞，张琳，王、晶，陈晨，张晨阳，汤秀英”，李峰敏!秦皇岛市第一医院1.血液内科;2.心内科，河北秦皇岛0 6 6 0 0 0；3.天津一中心医院血液内科，天津30 0 190;4.解放军陆军医疗中心血液内科，重庆40 0 0 2 0摘要目的探讨成人急性淋巴细胞白血病（ALL）的乳腺癌易感基因1（BRCA1）表达状况与移植预后的相关性。方法选取自2 0 17 年1月至2 0 2 0 年12 月于秦皇岛市第一医院和天津一中心医院行异基因造血干细胞移植(allo-HSC)术的92例ALL患者为研究对象,并设为A组；另随机选取92 例同期行骨穿检查的非血液系统肿瘤疾病患者为B组。比较两组患者的骨髓单个核细胞中BRCA1相对表达水平。分析A组（ALL）患者术前骨髓BRCA1表达水平与临床病理特征、移植预后的相关性。结果A组移植术前的骨髓BRCA1的平均表达水平为（0.590.16）,显著低于B组的（1.0 0 0.2 5）,差异有统计学意义（P 40 岁、B淋巴细胞ALL、危险度分层为低危、无髓外浸润史、移植前完全缓解患者，差异均有统计学意义（P0.05）。全部92 例患者均顺利完成allo-HSC术，术后共出现30 例（32.6%）急性移植物抗宿主病（aGVHD）、6 例（6.5%）多器官aGVHD、11例（12.0%）慢性移植物抗宿主病（cGVHD），移植后3年内有30例(32.6%）患者复发、2 5例(2 7.2%）死亡。移植后3年内复发、死亡患者的术前骨髓BRCA1相对表达水平分别低于未复发、未死亡者,差异均有统计学意义（P0.05）。多因素Cox比例风险回归模型分析结果表明，非亲缘相关移植、移植前未完全缓解、术前骨髓BRCA1相对表达水平是患者allo-HSC术远期预后的独立影响因素（P0.05），具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准。所有研究对象均签署知情同意书。1.2研究方法1.2.1骨骨髓BRCA1表达水平的检测采用PrimerPremier软件设计BRCA1的PCR引物，然后交由上海生工生物公司合成。通过采用淋巴细胞分离液分离全部患者的骨髓单个862Clin J Med Offic,Aug,2023VO临床军医杂志2023年8 月第51卷第8 期核细胞，条件为2 0 0 0 r/min、2 0 m i n，生理盐水洗涤3次后通过TRIzol法提取细胞中的总RNA，采用DU800紫外分光光度计测定RNA的浓度与纯度。采用ThermoScientific公司的试剂盒逆转录合成cDNA第一链，以GAPDH为内参进行实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitativereal-timepolymerase chain reaction,qRT-PCR）,根据2-ACt 法计算并比较两组骨髓单个核细胞中BRCA1的相对表达水平。1.2.2资料收集与随访收集全部患者的性别、年龄、ALL类型、危险度分层、有无髓系表达、巨细胞病毒感染、从诊断到移植的时间、HLA配型结果、移植前疾病状态、是否亲缘相关移植、移植方式，以及移植后有无出现急性移植物抗宿主病（acute graft-versushost disease,aGVHD）、慢性移植物抗宿主病（chronic graft-versushost disease,cGVHD）、死亡等并发症。全部患者在allo-HSC术后均进行定期随访，截止时间为2 0 2 3年3月31日，以患者死亡为主要随访终点，复发或远处转移为次要随访终点，计算全部患者的总生存时间（overallsurvival,OS)和无进展生存期(progress free survival,PFS)。1.3统计学方法采用SPSS26.0统计学软件对数据进行统计分析。符合正态分布的计量资料以均数标准差（x s）表示，两组比较采用t检验，多组比较先采用方差分析，然后通过q检验进行两两比较。计数资料用例（百分率）表示，两组比较采用检验。采用Kaplan-Meier法进行生存分析,采用多因素Cox回归分析患者移植预后的独立影响因素。以P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1A组与B组骨髓BRCA1的相对表达水平比较交A组移植术前的骨髓BRCA1的相对表达范围是0.10 6.39,平均值为（0.590.16），显著低于B组的（1.0 0 0.2 5）,差异有统计学意义(t=17.931,P 40 岁、B淋巴细胞ALL、危险度分层为低危、无髓外浸润史、移植前完全缓解患者,差异均有统计学意义（P0.05）。见表1。2.3ALL患者allo-HSC术的近远期预后分析全部92 例患者均顺利完成allo-HSC术，术后共出现30 例（32.6%）aGVHD,包括I度11例、I度8 例、度7 例、IV度4例；其中,6 例（6.5%）患者出现多个器官的aGVHD，有3例（3.3%）患者在移植1个月内因严重aGVHD死亡。随访过程中也发现有11例（12.0%）患者出现cGVHD，截至2 0 2 3年3月31日，移植后3年内有30 例（32.6%）复发，2 5例(27.2%）死亡。移植后3年内复发、死亡患者的术前骨髓BRCA1相对表达水平分别低于未复发、未死亡者,差异均有统计学意义（P0.05)。见表2。表1ALL术前骨髓BRCA1相对表达水平与临床病理特征的相关性分析（xs)骨髓BRCA1特征t/F值P值相对表达量性别1.5260.130男性(n=50)0.61 0.15女性(n=42)0.57 0.12年龄1.0590.00540 岁(n=67)0.56 0.1740 岁(n=25)0.67 0.15ALL分型3.4736 个月(n=67)0.58 0.17移植前疾病状态5.8990.001完全缓解(n=66)0.66 0.20未完全缓解（n=26)0.41 0.12表2ALL患者术前骨髓BRCA1相对表达水平与allo-HSC术近远期预后的相关性分析特征表达量t/F值P值aGVHD1.2970.279无(n=62)0.61 0.19I I度(n=19)0.56 0.15I IV度(n=11)0.52 0.12多器官aCVHD1.8520.067无(n=86)0.60 0.20有(n=6)0.45 0.11cGVHD1.5830.117无(n=81)0.60 0.17有(n=11)0.52 0.11移植3年内复发5.0500.001无(n=62)0.65 0.17有(n=30)0.47 0.15移植3年内死亡3.6070.001无(n=67)0.63 0.19有(n=25)0.48 0.12下转第8 6 7 页）863Clin J Med Offic,Aug,2023临床军医杂志2023年8 月第51卷第8 期2.4ALL患者allo-HSC术远期预后的影响因素分析斤多因素Cox比例风险回归模型分析结果表明，非亲缘相关移植、移植前未完全缓解、术前骨髓BRCA1相对表达水平是患者allo-HSC术远期预后的独立影响因素（P0.05）。见表3。表3全部患者allo-HSC术远期预后的多因素Cox比例风险回归模型分析结果因素B值SE值风险比95%可信区间Wald值P值供体来源亲缘相关移植非亲缘相关移植0.7910.3062.2051.2104.0176.6770.010移植前疾病状态完全缓解未完全缓解0.9530.3262.5931.3694.9128.5420.003术前骨髓BRCA1相对表达水平-0.5180.2030.5960.4000.8876.4990.0113讨论ALL是一类高度异质性的血液系统恶性肿瘤，起病较急，发病机制复杂，骨髓中白血病细胞大量增殖后抑制了正常的造血功能，同时浸润正常的组织器官，严重危害人类的健康,既往该病的诊断和预后评估主要基于形态标准。近年来,随着分子学检测技术的迅速发展,白血病的分子学检测逐渐成为该疾病诊断、分型及危险度评估的基础方法，也出现越来越多有价值的生物学标志物。allo-HSC术是当前ALL的主要治疗方案，明显改善了患者的生存状况，但也有可能出现GVHD排异反应,严重者可涉及多个器官,甚至导致死亡,同时，移植效果与供体的质量有关,部分患者移植后出现ALL复发,导致预后不良，因此，成人ALL患者的移植预后一直是临床关注的焦点 18-2 0 BRCA1 是遗传性乳腺癌相关的抑癌基因,能与癌基因和抑癌基因蛋白、转录调节因子、细胞周期调控蛋白、DNA损伤修复基因等多个蛋白相互作用，从而调控基因转录、DNA损伤修复、细胞生长及调亡等，通常是在细胞分裂活跃时表达升高，如正常骨髓的原始细胞的BRCA1表达水平会高于外周血的淋巴细胞、中性粒细胞等成熟细胞，有助于维持造血早期细胞维持基因组的稳定性。除了乳腺癌以外，目前已有多个恶性肿瘤的BRCA1 表达与预后有关 16,2 1-2 ,阳性表达或高表达通常预示着预后欠佳。蒋丽琳等 16 研究报道,晚期胃癌患者的BACR1表达与化疗疗效及预后有关,BRCA1蛋白阴性表达患者的化疗缓解率、1年累积存活率均明显高于阳性表达者。而在白血病方面，国内毛春霞等 2 3 较系统地进行了白血病患者BRCA1基因的表达,结果表明,无论是急性髓系白血病还是ALL,初治患者的BRCA1mRNA表达水平明显低于健康志愿者,且复发患者的表达更低，而治疗后得到完全缓解患者的表达水平升高至健康志愿者水平,提示BRCA1可能参与白血病的发生及病情变化。本研究结果显示,A组移植术前的骨髓BRCA1的相对表达水平显著低于B组(P0.05）。进一步分析发现,A组患者移植前的骨髓BRCA1相对表达水平与年龄、ALL类型、危险度分层、髓外浸润史、移植前有无完全缓解有关，年龄越大、病情越轻、T淋巴细胞ALL、移植前完全缓解的表达水平越高，即BRCA1在成人ALL上也可能发挥一定的抑癌基因作用。本研究重点关注了BRCA1与移植预后的相关性,结果表明，移植后3年内复发、死亡患者的术前骨髓BRCA1相对表达水平明显低于未复发、未死亡者（P0.05）,而BRCA1表达与排异反应的发生无明显相关性。多因素Cox比例风险回归模型分析也证实，术前骨髓BRCA1相对表达水平是患者allo-HSC术远期预后的独立影响因素（P0.05），其表达越高提示预后可能越差，表明BRCA1 表达不仅与 ALL患者的临床病理特征有关,还能作为患者移植效果的预测指标，与移植后复发、死亡均具有相关性,是潜在的生物学标志物，可能与其能与细胞周期调控、DNA修复等相关蛋白进行相互作用有关。综上所述，成人ALL患者的allo-HSC术前骨髓BRCA1呈低表达状态，与其临床病理特征有关，也是移植远期预后的独立影响因素。参考文献：1康新秧,张琼.基于 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