LncRNA GATA2-AS1在肾癌组织中的表达及其对肾癌细胞ACHN恶性生物学行为的影响.pdf

现代肿瘤医学2 0 2 3年10 月第31卷第19 期12 DU M,CHEN L,CHENG Y,et al.Tumor budding and other riskfactors of lymph node metastasis in submucosal early gastric carci-noma J.The American Journal of Surgical Pathology,2019,43(8):1074 1082.13GOTO A,NISHIKAWA J,HIDEURA E,et al.Lymph node metas-tasis can be determined by just tumor depth and lymphovascularinvasion in early gastric cancer patients after endoscopic submuco-sal dissection J.European Journal of Gastroenterology&Hepa-tology,2017,29(12):1346-1350.14PARK JW,AHN S,LEE H,et al.Predictive factors for lymph node me-tastasis in early gastric cancer with lymphatic invasion after endo-scopic resection J.Surgical Endoscopy,2017,31(11):4419-4424.15ARIGAMI T,NATSUGOE S,UENOSONO Y,et al.Lymphatic in-vasion using D2-40 monoclonal antibody and its relationship tolymph node micrometastasis in pNo gastric cancer J.BritishJournal of Cancer,2005,93(6):688-693.16 RONNOW C,ARTHURSSON V,TOTH E,et al.Lymphovascularinfiltration,not depth of invasion,is the critical risk factor of me-tastases in early colorectal cancerJ.Annals of Surgery,2022,75(1):e148-e154.17 WADA H,SHIOZAWA M,SUGANO N,et al.Lymphatic invasionidentified with D2-40 immunostaining as a risk factor of nodalmetastasis in T,colorectal cancer J.International Journal ofClinical Oncology,2013,18(6):1025-1031.18 AKAGI Y,ADACHI Y,OHCHI T,et al.Prognostic impact of lym-phatic invasion of colorectal cancer:a single-center analysis ofMODERN ONCOLOGY,Oct.2023,VOL.31,No.1919MOON Y,PARK JK,LEE KY,et al.Lymphatic invasion is a moresignificant prognostic factor than visceral pleural invasion in non-small cell lung cancer with tumours of 3 cm or less J.Respirolo-gy,2017,22(6):1179 1184.20林志强.非小细胞肺癌纵隔淋巴结转移风险模型的构建及预测效能的初步验证J.现代肿瘤医学,2 0 2 1,2 9（18）：132 8-1331.LIN ZQ.The establishment of a risk model for mediastinal lymphnode metastasis in non-small cell lung cancer and preliminaryvalidation of its predictive efficacy J.Modern Oncology,2021,29(18):1328-1331.21NIEMIEC JA,ADAMCZYK A,AMBICKA A,et al.Prognostic roleof lymphatic vessel density and lymphovascular invasion in chemo-therapy-naive and chemotherapy-treated patients with invasivebreast cancer J.American Journal of Translational Research,2017,9(3):1435 1447.22 MOHAMMED RAA,MENON S,MARTIN SG,et al.Prognostic signif-icance of lymphatic invasion in lymph node-positive breast carci-noma:findings from a large case series with long-term follow-up using immunohistochemical endothelial marker J.ModernPathology,2014,27(12):1568-1577.23 LITJENS G,SANCHEZ CI,TIMOFEEVA N,et al.Deep learningas a tool for increased accuracy and efficiency of histopathologicaldiagnosisJ.Scientific Reports,2016,6:26286.3577 1,616 patients over 24 years J.Anticancer Res,2013,33(7):29652970.(编校：李祥婷）LncRNA GATA2A S1 在肾癌组织中的表达及其对肾癌细胞 ACHN 恶性生物学行为的影响卫书飞,潘振辉,齐盼,张晓宇,董稚明,张爱莉河北医科大学第四医院泌尿外科，河北石家庄0 50 0 11【摘要】目的：检测长链非编码RNAs(IncRNAs)GATA2-AS1在肾细胞癌（RCC)组织及肾癌细胞株中的表达,并探讨其表达与患者临床病理资料之间的相关性。研究过表达 GATA2-AS1对肾癌 ACHN生物学行为及上皮间质转化(EMT)进程的影响。方法：应用实时荧光定量多聚核苷酸酶链式反应（RT-qPCR)检测GATA2-AS1在7 1例肾细胞癌组织和与其相对应癌旁正常组织以及肾癌细胞株（7 8 6-O、A CH N）中的表达。通过建立过表达载体pcDNA3.1-GATA2-AS1并转染ACHN细胞,应用RT-qPCR法检测转染效率。应用细胞增殖实验（MTS）、克隆形成实验检测GATA2A S1过表达对ACHN细胞体外增殖能力的影响。应用划痕实验、Transwell小室侵袭实验分别检测GATA2-AS1过表达对ACHN细胞体外迁移能力及侵袭能力的影响。应用RT-qPCR法检测GATA2-AS1过表达对EMT进程中相关标志物（E-cadherin、N-cadherin及Vimentin）表达水平的影响。结果：GATA2A S1在两株肾癌细胞系中相对表达量均明显下调(P0.01）,其中ACHN细胞的GATA2-AS1表达水平最低。GATA2-AS1在RCC组织中的相对表达量显著低于癌旁组织（P0.01）,G A T A 2-A S1在RCC组织中的表达水平与TNM分期及淋巴结转移相关【收稿日期】2023 05 19【修回日期】2023 06 07【作者简介】卫书飞（19 8 7 一），男，河北石家庄人，主治医师，硕士，主要从事泌尿系肿瘤相关工作。E-mail：l e n g x u e f e i h u 12 6.c o m【通信作者】张爱莉（19 6 6 一），男，河北承德人，主任医师，博士，博士生导师，主要从事泌尿系肿瘤相关工作。Em a i l：z a l 139 30 40 9 8 9 9 16 3578（P 0.0 5或P0.01）。成功构建过表达载体pcDNA3.1-GATA2-AS1并转染肾癌细胞ACHN,GATA2-AS1过表达组的相对表达量显著高于对照组（P0.01）。G A T A 2-A S1过表达后可显著抑制ACHN 细胞的在体外的增殖、迁移及侵袭能力(P0.05或P0.01）。同时E-cadherin表达水平上调,间充质标志物 N-cadherin、Vi me n t i n 表达水平降低（P0.05或P0.01）。结论:GATA2-AS1在RCC组织及肾癌细胞株中低表达情况,与患者TNM分期及淋巴转移有关。GATA2-AS1过表达可以显著抑制肾癌细胞的体外增殖、迁移、侵袭能力及EMT的进程。【关键词】肾细胞癌；长链非编码RNA；增殖；迁移；侵袭；上皮间质转化【中图分类号】R737.11【文章编号】16 7 2-49 9 2-（2 0 2 3)19-357 7-0 6The expression of IncRNA GATA2-AS1 in renal cell carcinoma tissues and its effect onmalignant biological behaviors of renal cancer cells ACHNWEI Shufei,PAN Zhenhui,QI Pan,ZHANG Xiaoyu,DONG Zhiming,ZHANG AiliDepartment of Urology,Fourth Hospital of Hebei Medical University,Hebei Shjiazhuang 050011,China.Abstract】O b j e c t i v e:T o d e t e c t t h e e x p r e s s i o n o f l o n g n o n -c o d i n g R NA s G A T A 2 -A S1 i n r e n a l c e l l c a r c i n o ma(RCC)tissues and cell lines,and discuss the relationship between its expression and clinicopathological parametersof patients,as well as to study the effect of overexpression of GATA2-AS1 on the biological behavior and epithelial-mesenchymal transition(EMT)of renal cell carcinoma ACHN.Methods:Real-time quantitative polymerase chainreaction(RT-qPCR)was applied to detect the expression of GATA2-AS1 gene in 71 cases of renal cell carcinomatissues and their corresponding adjacent normal tissues and renal cell carcinoma cell lines(786-O,ACHN).Theoverexpression vector pcDNA3.1-GATA2-AS1 was established and transfected into ACHN cells,and the transfec-tion efficiency was detected by RT-qPCR.Cell proliferation assay(MTS)and cloning formation experiment were ap-plied to detect the effect of GATA2-AS1 gene overexpression on the proliferation ability of ACHN cells in vitro.Theeffects of GATA2-AS1 overexpression on the migration and invasion ability of ACHN cells in vitro were detected byscratch experiment and Transwell chamber invasion experiment.The RT-qPCR method was applied to detect theeffect of GATA2-AS1 overexpression levels of relevant markers(E-cadherin,N-cadherin and vimentin)in theEMT process.Results:The relative expression of GATA2-AS1 was significantly down-regulated in both renal canc-er cell lines(P0.01),and the expression level of GATA2-AS1 in ACHN cells was the lowest.The relative expres-sion level of GATA2-AS1 in RCC tissue was significantly lower than that in adjacent tissues(P 0.01).The expres-sion level of GATA2-AS1 in RCC tissue was correlated with TNM stage and lymph node metastasis(P0.05 or P0.01).The overexpression vector pcDNA3.1-GATA2-AS1 was successfully established and transfected into renalcell carcinoma cell line ACHN.The relative expression of GATA2-AS1 in the overexpression group was significantlyhigher than that in the control group(P0.01).After GATA2-AS1 was overexpressed,it can significantly inhibitthe proliferation,migration and invasion ability of ACHN cells in vitro.Meanwhile,the expression level of E-cadherinincreased and the expression level of mesenchymal markers N-cadherin and Vimentin decreased.Conclusion:Thelow expression of GATA2-AS1 in RCC tissues and renal cancer cell lines was related to TNM staging and lymphaticmetastasis in patients.Overexpression of GATA2-AS1 can significantly inhibit the proliferation,migration,invasion ability and EMT process of renal cell carcinoma cells in vitro.Key words renal cell carcinoma,long chain non-coding RNA,proliferation,migration,invasion,epithelial-mes-enchymal transition(EMT)Modern Oncology 2023,31(19):3577-3582肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)是泌尿系统常见的编码能力的RNA分子3-4。研究发现 IncRNA与恶性肿瘤恶性肿瘤,发病率仅次于膀胱癌。据最新的统计数据显示，的侵袭、转移、术后复发存在密切关系5-8 。长链非编码2020年全球新发病例大约43.1万，死亡17.9 万。其中中国RNAGATA2A S1基因位于人类基因组3号染色体上,是新发病例7.3万，死亡4.3万，同时其发病率及死亡率逐年GATA2基因反义链上的非编码RNA,其在肾细胞癌中尚无增高-2 。RCC早期临床症状不明显，当患者出现 血尿、腹研究。本研究通过检测GATA2-AS1在肾癌细胞株及RCC部包块、腰痛”典型三联征时，疾病多数已进人晚期或者出现组织中的表达,阐述其表达与临床病理资料间的关系,并探远处转移,治疗较为棘手,预后相对较差,所以RCC的早期究 GATA2-AS1过表达对肾癌细胞体外增殖、迁移、侵袭能诊断显得尤为重要。长链非编码RNA（In c R NA）是指长度大力及EMT进程的影响。希望为肾癌的早期诊断和治疗以及于2 0 0 个核苷酸且具有转录调控作用但缺乏明确的蛋白质判断预后提供一定的理论依据。卫书飞,等LncRNA GATA2-AS1在肾癌组织中的表达及其对肾癌细胞ACHN恶性生物学行为的影响【文献标识码】AD0I:10.3969/j.issn.1672-4992.2023.19.008现代肿瘤医学2 0 2 3年10 月第31卷第19 期1材料与方法1.1一般资料人肾癌细胞株7 8 6-O、A C H N均由河北省肿瘤研究所病理研究室保留并传代。7 1例手术标本均来自2 0 17 年至2020年在河北医科大学第四医院泌尿外科行肾根治的住院病人,所有病人在术前均未接受放化疗、靶向及免疫治疗等，术后病理均为透明细胞癌。其中男性48 例,女性2 3例。肿瘤最大直径约11cm,最小直径约2.5cm，平均直径约4.8 9cm。按美国癌症联合委员会（AJCC)进行临床分期：I期：48例；I期：8 例；期：6 例；IV期：9 例。一部分标本放置福尔马林内固定、脱水及石蜡包埋，剩余部分标本使用RNA保护液浸泡，放置-8 0 冰箱保存，以备后续提取RNA。7 1例正常肾组织均距离肿瘤边缘2 cm以上。所有标本取材及用途均与患者家属签署知情同意书，并通过医院伦理委员会批准同意(NO.2021KY310)。1.2实验方法1.2.1总RNA提取以及应用RT-qPCR检测GATA2-AS1及EMT相关基因的表达水平根据Trizol试剂说明书提取总RNA然后将提取的总RNA反转录成cDNA,再以cDNA为模板进行RT-qPCR扩增,用于检测GATA2-AS1 的表达。以 GAPDH作为内参,引物序列见表1,反应条件为：9 5预变性10 min后,9 5变性15s、6 0 退火30 s、7 2 延伸30 s、40 个循环后,7 2 延伸7 min，每个样本设3个复孔。根据每孔荧光信号达到阈值时经历的循环数作为CT值，采用相对定量法，ACT=CT W-CTAM，A CT =A CT m-A CT A M m,以 2-ACT表示目的基因的相对表达量。表1RT-qPCR引物序列及引物大小Tab.1 Primer sequences and primer size of RT-qPCRGeneGATA2-AS1GAPDHE-cadherinN-cadherinVimentinNote:F:Forward primer,R:Reverse primer.1.2.2细胞培养及转染细胞系常规培养于含10%FBS的RPMI1640培养基。转染前一天选择生长状态良好的细胞均匀铺于6 孔板内，利用Lipofectamine2000转染试剂盒说明进行重组质粒转染，培养2 4h后，提取各组细胞总RNA,进行后续检测。GATA2-AS1过表达载体由上海生工合成pcDNA3.1-GATA2-AS1质粒，抗性Ampicillin，p c D NA 3.1质粒作为对照。1.2.3MTS实验及克隆形成实验检测GATA2-AS1表达对细胞增殖的影响用胰酶消化培养2 4h后转染细胞,并使其悬浮于胎牛血MODERN ONCOLOGY,Oct.2023,VOL.31,No.19清的培养基中,调整细胞浓度（10 0 0 个细胞/孔），然后接种于9 6 孔板,每组设置6 个复孔。于细胞贴壁后0 h、2 4h、48h、7 2 h、9 6 h 在每个孔板中加人MTS试剂2 0 L（50 0 g/mL）。培养箱中培养4h后，使用酶标仪测量49 2 nm处的光密度值，本实验重复3次以上。用胰酶消化培养2 4h后转染细胞，使其悬浮于培养基中,调整细胞的浓度（30 0 0 个细胞/孔），然后接种于6 孔板上放人培养箱中培养7 天。用PBS溶液冲洗后，再用4%的多聚甲醛固定2 0 min，重复冲洗3次，室温晾干。然后结晶紫染色2 0 min,PBS溶液冲洗3次，室温晾干。在显微镜下进行观察计数，以大于50 个细胞作为一个克隆的标准，计算克隆形成率。实验需重复3次以上。1.2.4划痕实验检测GATA2-AS1表达对细胞迁移的影响实验开始前使用直尺进行比对，在6 孔板背面用Marker笔均匀划横线。转染细胞培养2 4h以后，使其悬浮于培养基中,调整细胞浓度（510/孔），然后接种于6 孔板。待转染细胞生长至与孔板完全融合时，使用2 0 0 L加样枪头沿直尺做垂直于孔板背面横线划痕。使用PBS液冲洗划落的细胞,每孔加人2 mL的无血清的培养基,然后放入恒温箱中继续培养。于划痕0 h、12 h、2 4h 后在倒置显微镜下观察划痕的间距,并计算迁移的距离及百分率。以上实验需要重复3次。1.2.5Transwell 小室侵袭实验检测 GATA2-AS1表达对细胞侵袭的影响将无血清培养基和Matrigel胶以7:1的稀释后于4冰箱保存。将小室放入2 4孔板，之后将稀释好的2 0 LMatri-gel胶加入上层，使基质胶均匀平铺于小室上,37 放置过夜。将转染细胞培养2 4h后，再用无血清培养基饥饿培养24h,将110 5个细胞加人上室中，上室液体用无血清培养Product基加至2 0 0 L,用完全培养基将下室加至6 0 0 L。将小室Primer sequencelength(bp)F:5-GCTGGGATGATGGTGGAGAC-3*193R:5*-TGATTAAGGAATCGGGGGAG-3F:5-AGGTGAAGGTCGGAGTCAACG-3*R:5*-AGGGGTCATTGATGGCAACA-3F:5-CGAGAGCTACACGTTCACGG-3R:5-GGCCTTTTGACTGTAATCACACC-3F:5-CAACTTGCCAGAAAACTCCAGG-3R:5*-ATGAAACCGGGCTATCTGCTC-3F:5-CGCCTGCAGGATGAGATTCAG-3*R:5-TCAGGGAGGAAAAGTTTGGAAA-33579.在培养箱培养2 4h后取出，轻轻擦掉Matrigel胶及胶上细胞,PBS溶液重复冲洗3次。然后将小室放入4%多聚甲醛中固定2 0 min，再次用PBS溶液重复冲洗3次，室温晾干。104用结晶紫染色2 0 min后再用PBS溶液在重复冲洗3次，室温晾干。最后将小室上的聚碳酸酯膜剪下,放于载玻片上，中162性树脂封片，在显微镜下计数5个随机视野内的细胞数，对205比实验组和对照组之间的差异。以上实验需重复3次。1.3统计学分析175使用SPSS21.0统计软件进行数据的分析，GATA2一AS1在RCC组织及其相应癌旁正常组织中的表达以及与临床病理资料间的关系应用非参数检验，单组样本与总体均数比较采用t检验，以P0.05表示差异具有统计学意义。2结果2.1GATA2-AS1在肾癌细胞系中的表达与人正常肾细胞（2 9 3T）相比，RT-qPCR结果显示,GATA2-AS1在肾癌细胞株中表达均下调,其相对表达量分别为7 8 6-0(0.2 59 0.0 6 0）、ACHN（0.12 9 0.0 11)，且在ACHN细胞中的表达量最低（图1)。2.2GATA2-AS1在RCC组织及其对应癌旁正常组织中的表达GATA2-AS1在RCC组织中的相对表达量低于对应的癌旁正常组织（0.30 9 0.2 6 7）vs（1.0 40 0.48 0）,P:35800.01（图2）。结合不同临床病理资料发现,GATA2A S1基因在RCC组织的各级分期中,分期越高,表达量越低：I期、I期、期和IV期（0.6 7 9 0.541)vs(0.6690.632)vs(0.0700.015)vs(0.0420.020),P0.01;有淋巴转移的肾细胞癌组织中表达低于没有淋巴转移的肾细胞癌组织(0.0550.015)vs(0.5910.554),P0.05）（图3）。1.571.00.50.0图1GATA2-AS1在肾癌细胞系中的表达（*P0.01)Fig.1 The expression of GATA2-AS1 in renal carcinoma cell lines(*P0.01)2.5-2.01.51.00.50.0-Normaltissues图2 肾细胞癌组织及其相应癌旁正常组织中GATA2-AS1的表达(*P0.01)Fig.2The expression of GATA2-AS1 in renal cell carcinoma tissuesand corresponding noncancerous tissues(*P0.01)1.5-1.0-0.50.0(years)图3肾细胞癌组织中 GATA2-AS1 的表达及其与临床病理资料的关系(*P0.05,*P0.01)Fig.3The relationship between the expression of GATA2-AS1 andclinicopathologic features of renal cell carcinoma tissues(*P 0.05,*P0.01)卫书飞,等LncRNA GATA2-AS1在肾癌组织中的表达及其对肾癌细胞ACHN恶性生物学行为的影响GATA2-AS1 在2 株肾癌细胞中低表达,且在 ACHN 细胞中表达最低,所以选用 ACHN 细胞系进行 GATA2-ASI 过表达载体的建立。RT-qPCR实验结果显示,GATA2-AS1 的相对表达量在ACHN细胞过表达组（8 7 4.7 549 1.2 2 0）显著高于对照组（1.0 10 0.0 8 5）且差异具有统计学意义（P0.01)（图4）；ACHN细胞具有较高的过表达效率，提示过表达载体构建成功。1000800-600-400200-5320pcDNA3.1-NC295ACHN*Cancertissues*MaleFemaleAgeGenderLymphPatho-nodelogicalmetas-differe-tasisntiation2.3过表达 GATA2-AS1细胞株的构建与验证图4肾癌细胞株中CATA2-AS1过表达的验证（*P0.01)Fig.4Validation of GATA2-AS1 over-expression in renal carcinomacell lines(*P0.01)2.4过表达GATA2-AS1对肾癌细胞体外增殖能力的影响MTS实验结果显示,分别在0 h、2 4h、48 h、7 2 h、9 6 h 时用酶标仪测定49 2 nm处的光密度数值，然后绘制肾癌细胞的生长曲线。得出实验结果显示，与对照组相比,GATA2-ASI过表达后的ACHN细胞的OD值显著降低（P0.01)(图5)。2.5-2.0-1.51.0-0.5-0.0图5MTS检测过表达GATA2-AS1对ACHN细胞增殖能力的影响(*P0.01)Fig.5Effect of overexpression of GATA2-AS1 on the proliferation ofACHN cells detected by MTS(*P0.01)NegativePositiveACHN*pcDNA3.1-GATA2-AS1ACHN+pCDNA3.1-NC-pcDNA3.1-GATA2-AS10h24hwell-moderatelPoor*48h72h三克隆形成实验结果显示，在ACHN细胞中，过表达GATA2A S1的细胞克隆形成数（7 9.0 0 0 6.0 0 0）与对照TNMstage组（2 6 3.0 0 0 9.6 44)相比，差异具有统计学意义（P0.01)(图6)。2.5过表达GATA2-AS1对肾癌细胞体外迁移能力的影响划痕实验结果显示,与对照组的ACHN细胞相比,过表达 GATA2-AS1的细胞划痕迁移在2 4h时具有统计学意义(0.608 0.023)vs(0.427 0.023),P0.01(图 7)。96h现代肿瘤医学2 0 2 3年10 月第31卷第19 期PcDNA3.1-NCpcDNA3.1-GATA2-AS1图6 克隆形成实验检测过表达GATA2-AS1对ACHN细胞增殖能力的影响(*P0.01)Fig.6Effect of overexpression of GATA2-AS1 on the proliferation ofACHN cells detected by clone formation assay(*P0.01)MODERN ONCOLOGY,Oct.2023,VOL.31,No.19ACHN300200100-PDNA3.1-NCpCDNA3.1.GATA2-AS1oh12h3581:2.6GATA2-AS1过表达对肾癌细胞株体外侵袭能力的影响Transwell侵袭实验结果显示，在ACHN细胞中，通过人工基底膜的数量在过表达组为（2 36.0 0 0 4.58 3），与对照组（42 6.3338.7 37）相比明显减少，差异具有统计学意义（P0.01)(图 8)。2.7过表达 GATA2-AS1对肾癌细胞EMT进程的影响RT-qPCR检测结果显示，GATA2-AS过表达后，肾癌细胞中E-cadherin的表达水平显著上调（P0.01）,N-cadherin和Vimentin表达下调（P0.05）。结果提示，过表达GATA2A S1抑制了肾癌细胞ACHN的EMT进程(图9)。24h1.2pcDNA3.1-NCpCDNA3.1-NCpcDNA3.1-GATA2-AS11.00.80.60.40.2pcDNA3.1-GATA2-AS10.0Oh12h24h图7 划痕实验检测过表达GATA2-AS1对ACHN细胞迁移能力的影响（*P0.01)Fig.7 Effect of overexpression of GATA2-AS1 on the migration ability of ACHN cells detected by wound healing assay(*P0.01)500-400-300-pcDNA3.1-NC200-100-0CDNA3.1-GATA2-AS1pCDNA3.1-NCpCDNA3.1GATA2-AS1图8 Transwell小室侵袭实验检测GATA2A S1过表达对ACHN细胞侵袭能力的影响（结晶紫染色10 0)（*P0.01）Fig.8Effect of overexpression of GATA2-AS1 on the invasion ofACHN cells detected by transwell chamber invasion assay(crys-tal violet staining 100)(*P0.01)pcDNA3.1-GATA2-AS1*1.5-1.00.50.0图9 i过表达GATA2-AS1后对ACHN细胞中上皮间充质转化相关基因表达的影响（*P0.05，*P 0.0 1）Fig.9 Effect of overexpression of GATA2-ASl on the expression of EMT-related markers in ACHN cells(*P0.05,*P0.01)3讨论*GATA蛋白家族已被确定为锌指DNA结合蛋白之一，在多种组织的上皮增殖和发育过程中发挥重要作用9 。在生物学功能方面,GATA1和GATA2在调节细胞周期或增殖中发挥关键作用10)。GATA2-AS1基因位于GATA2基因反义链上,研究发现,该基因的异常表达与多种恶性肿瘤的发生、发展相关1-14,ZHENG等1 研究发现GATA2-AS1在非小细胞肺癌中低表达，过表达 GATA2-AS1通过调节GATA2抑制非小细胞肺癌细胞增殖,GATA2A S1可能是肺癌药物的潜在靶标。2 0 2 0 年,LI等人12 通过生物信息学分析发现 GATA2A S1是结肠腺癌相关的LncRNA。随后PAN等13 研究发现GATA2-AS1和GATA2在结肠癌细胞中高表达,敲低 GATA2A S1抑制结肠癌细胞增殖、侵袭、EMT及肿瘤干性,并诱导细胞调亡,GATA2A S1通过招募pcDNA3.1-NC2.07vimentinN-cadherin了DDX3X来稳定 GATA2mRNA的表达，同时GATA2通过与GATA2-AS1启动子结合，增强GATA2A S1表达。研究发现,GATA2-AS1在食管鳞癌组织和食管癌细胞系中的表达降低，体内实验表明,过表达GATA2A S1抑制食管癌细胞的恶性进展,在机制上GATA2A S1起到内源性ceRNA的作用,通过竞争性结合miR-940,增加靶基因PTPN12的表达，进而抑制了食管鳞癌的进程14。以上结果提示GATA2-AS1可能参与多种恶性肿瘤的发生发展。为了证实 GATA2A S1在RCC中的表达水平,本研究首先检测了GATA2A S1在肾癌细胞系（7 8 6-O,ACHN）中的表达水平,以人正常肾上皮细胞（2 9 3T)作为对照。RT-qPCR结果表明,GATA2A S1在肾癌细胞株中均出现表达3582的降低,进一步检测了 GATA2-AS1在7 1 例肾细胞癌标本，以及 GATA2A S1在对应癌旁组织中的表达情况,结果显示在肾细胞癌组织标本中,GATA2A S1的表达显著低于相应癌旁正常组织,GATA2A S1低表达与淋巴结转移和TNM分期相关。结果提示,GATA2A S1在肾癌中可能作为抑癌基因发挥作用。那么GATA2A S1是如何影响RCC的发生发展呢？为了更好的了解GATA2A S1基因在RCC的作用机制,通过GATA2-AS1过表达载体的建立，随后转染ACHN细胞系，最后经过MTS以及克隆形成实验结果证实，GATA2A S1过表达后ACHN细胞的体外增殖能力降低,划痕实验结果表明GAT