H9N2亚型禽流感病毒感染鸡红细胞引起白细胞介素的免疫应答.pdf

山西农业科学 2023，51（11）：1323-1330Journal of Shanxi Agricultural SciencesH9N2亚型禽流感病毒感染鸡红细胞引起白细胞介素的免疫应答刘智民 1，任鹏飞 1，韩心语 1，乔梦丽 1，牛胜 1，王颖 1，任建乐 1，赵宇军 1，张鼎 1，范瑞文 1，毕玉海 1，2，田文霞 1（1.山西农业大学 动物医学学院，山西 太谷 030801；2.中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点实验室/中国科学院 流感监测与预警中心，北京 100101）摘要：为研究 H9N2亚型禽流感病毒（H9N2 AIV）感染鸡红细胞后白细胞介素（ILs）参与的免疫应答反应，进一步揭示鸡红细胞在感染 H9N2亚型禽流感病毒中所发挥的免疫调节作用，应用实时荧光定量 PCR 技术分别对体外感染 H9N2 AIV后 0、2、6、10 h和体内攻毒 3、7、14 d后 8种白细胞介素相关基因（IL-6、IL-7、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-18、IL-34）的表达水平进行检测。结果表明，8 种 ILs相关基因均在鸡红细胞中表达，其表达水平在体外感染 H9N2 AIV 后和体内攻毒后呈现动态变化；与对照组相比，体外感染 H9N2 AIV 后不同时间点 IL-6和 IL-18的相对表达量呈现逐渐升高的趋势，而 IL-7、IL-12、IL-15的相对表达量呈现逐渐下降的趋势；IL-13在感染 H9N2 AIV 后的 0、6 h显著下降，而 IL-16仅在感染 H9N2 AIV 后的 2 h显著下降。体内攻毒后的不同时间点，IL-12、IL-13、IL-15、IL-16的相对表达水平均逐渐升高，而 IL-6、IL-18、IL-34的表达水平先升高后降低，仅IL-7表达水平先降低后升高。综上，鸡感染 H9N2 AIV 后红细胞发生了相应的免疫应答反应，并通过促炎因子以及抗炎因子的表达来调节鸡感染 H9N2后的免疫应答。关键词：H9N2亚型禽流感病毒；鸡红细胞；SPF鸡；白细胞介素中图分类号：S852.65 文献标识码：A 文章编号：10022481（2023）11132308Immune Responses of Interleukin Induced by H9N2 Subtype Avian Influenza Virus Infection in Chicken ErythrocytesLIU Zhimin1，REN Pengfei1，HAN Xinyu1，QIAO Mengli1，NIU Sheng1，WANG Ying1，REN Jianle1，ZHAO Yujun1，ZHANG Ding1，FAN Ruiwen1，BI Yuhai1，2，TIAN Wenxia1（1.College of Veterinary Medicine，Shanxi Agricultural University，Taigu 030801，China；2.CAS Key Laboratory of Pathogen Microbiology and Immunology/Institute of Microbiology，Chinese Academy of Sciences，Beijing 100101，China）Abstract：To explore the immune responses of interleukin(ILs)during the infection in chicken erythrocytes induced by H9N2 subtype avian influenza virus(H9N2 AIV)and further reveal immunomodulatory role of chicken erythrocytes in H9N2 subtype avian influenza virus infection in chickens,in this study,real-time quantitative PCR was used to detect the expression levels of eight IL-related genes(IL-6,IL-7,IL-12,IL-13,IL-15,IL-16,IL-18,IL-34)in chicken erythrocytes infected by H9N2 AVI at 0,2,6,and 10 h,as well as their expression levels in erythrocytes of H9N2-infected chicken were detected at 3,7 d and 14 d of poison attack in vivo.The results showed that expression of eight IL-related genes in chicken erythrocytes was identified and their expression levels showed dynamic changes after infection and challenge.Compared with the control group,the relative expression levels of IL-6 and IL-18 showed a increasing trend,while the relative expression levels of IL-7,IL-12,and IL-15 showed a declining trend in vitro.In addition,the expression level of IL-13 significantly declined at 0 h and 6 h after infection,while the expression level of IL-16 only significantly declined at 2 h.At different time of in vivo,the relative expression levels of IL-12,IL-13,IL-15 and IL-16 increased gradually,while the expression levels of IL-6,IL-18 and IL-34 increased at first and then declined,only the expression level of IL-7 declined at first and then increased.The results above doidoi:10.3969/j.issn.1002-2481.2023.11.12收稿日期：2022-10-19基金项目：山西省重点研发项目（202102130501001）；中美新发和再发传染病合作项目（E090090201-3，E2900901-02）；山西省现代农业产业技术体系建设专项（2021-07，2022-07）；山西省1331工程项目（20211331-13）；山西省科技创新青年人才团队（202204051001022）作者简介：刘智民（1996-），男，山西运城人，在读硕士，研究方向：动物疫病发生与免疫。刘智民、任鹏飞为同等贡献作者。通信作者：田文霞（1967-），女，山西闻喜人，教授，博士，主要从事动物疫病发生与免疫机制研究工作。1323山西农业科学 2023 年第 51 卷第 11 期indicated that chicken erythrocytes participated in the immune responses after infection of H9N2 AVI,and the immune responses of chickens infected with H9N2 was regulated by expression of pro-inflammatory factors and anti-inflammatory factors.Key words：H9N2 subtype avian influenza virus;chicken erythrocyte;SPF chicken;interleukinH9N2 亚型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）可引起鸡的免疫抑制性疾病，给家禽业带来巨大的经济损失。AIV 是 20世纪 90年代初首次在我国鸡群中发现和分离的一种病毒，在发现后的几十年中逐渐发展成大部分地区家禽养殖的地方病1。H9N2 AIV 属于低致病性禽流感病毒，但因其变异能力强、流行范围广而成为最难防控的禽流感亚型之一。目前，虽然疫苗防控研究已取得一定进展，但没有从根本上阻断其流行和传播。红细胞不仅能够运输氧气，还参与机体的免疫调节反应。1981年，“红细胞免疫系统”的概念首次由 SIEGEL 等2提出，他们的研究鉴定了红细胞的多种免疫功能，并发现红细胞是通过免疫黏附作用发挥其免疫功能。人红细胞是红细胞免疫领域研究的重点，动物中有关核红细胞免疫功能方面的研究侧重于鱼类和爬行类，但关于鸡红细胞参与机体免疫反应的研究较少。模式识别受体的识别是机体抵抗病原感染的第一步，也是机体诱导天然免疫反应的关键一步。Toll样受体（TLRs）是发挥模式识别功能最重要的受体之一，当外界病原入侵机体，TLRs能立刻识别病原相关配体，激活下游相应细胞因子，启动天然免疫应答反应3。白细胞介素（Interleukin，IL）是一种细胞因子，现已发现 39种4，它们在免疫细胞的成熟、活化、调节中发挥重要作用，可参与炎症反应和免疫反应。最新研究发现，这些 ILs 的 mRNA 表达量随着病毒入侵机体而发生变化。JAHEJO 等5研究发现，IL-7 在感染马立克氏病毒（Marek s disease virus，MDV）的鸡红细胞中的表达量与对照组相比显著上升，而 IL-12和IL-13 的表达量显著降低。董建国等6研究发现，PK15（猪肾细胞）感染型塞内卡病毒（SVA）后，IL-6 表达水平显著上升。BOULASSEL 等7和胡宽修等8研究均发现，感染 HIV-1 的患者体内 IL-15 和 IL-16 的表达量明显上升。鸡感染禽白血病病毒（ALV-J）后，单核细胞中 IL-18 mRNA 的表达水平升高9。感染流感 A 病毒（Influenza a virus，IAV）后期，患者血清和外周血单核细胞（PBMC）中 IL-34 表达量升高10。因此，鉴定 H9N2 感染鸡后红细胞中 ILs表达水平的变化有助于更深入研究H9N2的致病和免疫机理。目前，关于 H9N2 感染鸡红细胞后 ILs 的表达水平变化仍未见报道。本研究通过实时荧光定量PCR 鉴定 H9N2 感染鸡红细胞后不同白细胞介素（IL-6、IL-7、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-18、IL-34）的表达水平，旨在为研究鸡红细胞在感染H9N2后 ILs相关基因参与免疫调节功能以及防治H9N2提供理论依据。1 材料和方法1.1试验材料1.1.1毒株禽流感病毒 H9N2 亚型山西毒株 A/chicken/Shanxi/1.23 TGRL003-O/2019 由山西农业大学生物制品实验室保存；SPF鸡胚购自山东济南赛福实验动物养殖有限公司；SPF 鸡和 H9N2免疫鸡血清购自山西太谷隆科尔公司。1.1.2试剂RNAiso plus 2000、荧光定量 PCR 试剂盒(AK6003）、反转录试剂盒（AK3020）、淋巴细胞 分 离 液 均 购 自 大 连 Takara 宝 生 物 工 程 公 司。DMEM 培养基购自美国 HyClone公司。1.2试验方法1.2.1 H9N2 体 外 感 染 鸡 红 细 胞 翅 静 脉 采 集SPF鸡新鲜血液，参考 NIU 等11的方法分离红细胞（大约 5.0109个）用于后续试验。试验组根据红细胞与 H9N2 共孵育的时间分为 4 组：0 h 组、2 h组、6 h 组和 10 h 组，每组 4 个重复。每个离心管中先加入 50 L 红细胞，然后加入 100 L 的 H9N2 AIV 尿囊液（病毒滴度 72）和 900 L 的细胞维持液 DMEM。在对照组的 4 个离心管中直接加入50 L 红细胞和 1 000 L 的细胞维持液 DMEM。将 4 组红细胞与 H9N2 混合后在 37 培养箱分别孵育 0、2、6、10 h 后，2 000 r/min 离心 20 min，重新分离红细胞，然后用 PBS洗涤 3次，用于后续试验。1.2.2H9N2感染雏鸡选择1日龄SPF雏鸡48羽，随机分为攻毒组和对照组（每组各 24羽）。预饲期7 d，预饲期结束后，试验组滴鼻接种 H9N2 亚型禽流感尿囊液（病毒滴度 72）0.2 mL/只，对照组滴鼻接种相同体积的 PBS 缓冲液。攻毒后第3、7、14 天从 2 组中各随机选取 5 只进行心脏采血（2 mL/只），抗凝处理后用于后续试验。1.2.3红细胞的分离心脏采集 4 mL新鲜血液保1324刘智民等：H9N2亚型禽流感病毒感染鸡红细胞引起白细胞介素的免疫应答存于抗凝管中，采用淋巴细胞分离液分离红细胞。按淋巴细胞分离液血液无菌 PBS 比例为 2 1 1使用，首先将抗凝血与等体积无菌 PBS 混匀，随后缓慢倾斜加入到等体积的淋巴细胞分离液中，避免发生混合，2 000 r/min 离心 20 min，弃去最上层的血清和中间层的淋巴细胞，分离得到红细胞，再用无菌 PBS 洗涤红细胞，2 000 r/min 离心 12 min，重复 3次。1.2.4RNA 提取与 cDNA 合成按照 1.2.3 方法从血液样品中分离得到红细胞，收集 25 L 红细胞，采用 Trizol 法提取总 RNA。总 RNA 的浓度和纯度通过 1.5%琼脂凝胶电泳和核酸测定仪检测。评估核糖核酸质量的标准是凝胶中可以看到 28 S和18 S条带且RNA的A260/A280值为1.92.1。根据反转录试剂盒（南京诺唯赞生物科技有限公司）的操 作 步 骤，将 总 RNA 反 转 录 为 cDNA，保 存 至-20，用于后续的荧光定量 PCR检测 cDNA。1.2.5荧光定量 PCR根据 NCBI 数据库中 8 种白细胞介素的 CDS 序列信息，使用 Primer 5.0软件设计引物，引物序列如表 1所示。荧光定量 PCR 采用 10.0 L 反应体系，其中 SYBRPremix Ex TaqII（2）5.0 L，ROX Reference Dye II（50）0.1 L，上下游引物各 0.25 L（100 mol/L），cDNA 模板1.0 L，ddH2O 3.4 L。反应条件为：95 3 min；95 30 s，55 30 s，共 42 个循环，每个样品设置4 个重复。1.3数据分析以 18S rRNA 作为标准内参基因，使用 2-ct方法计算目的基因在不同时间段试验组的表达差异。使用 GraphPad Prism 5.0进行上述基因表达量数据的统计分析，结果以平均值标准误表示，P0.05代表具有显著性差异。2 结果与分析2.1体外感染 H9N2 AIV 后鸡红细胞中 ILs相关基因的 mRNA表达变化荧光定量 PCR 结果如图 1 所示，H9N2 体外感染鸡红细胞后，与对照组相比，IL-6 的表达水平在感染后期（6、10 h）显著上升（P0.05）；IL-7 在 0、6 h 显 著 上 升（P0.05），在 2 h 显 著 下 降（P0.05）；IL-12 的表达量在 0、6 h 都显著升高（P0.05），0 h 的表达量高于 6 h；IL-13 的表达水平在感染病毒后 0、6 h 显著下降（P0.05）；IL-15 在感染早期（0 h）显著上调（P0.05），而在感染的中间点（2、6 h）显著下调（P0.05）；IL-16 仅在感染后2 h显著下调（P0.05），在其余感染时间点无显著变化；IL-18在感染第 2、6 h显著上调（P0.05），并且在 6 h 上调程度更高；IL-34 在感染后的 0、2、6、表 1 定量 PCR引物信息Tab.1 Primers of real-time qPCR基因GenesIL-6IL-7IL-12IL-13IL-15IL-16IL-18IL-3418S rRNA引物序列（5 3）Primer seqences（5-3）F：CGGCTTCGACGAGGAGAAATR：TGCTGTAGCACAGAGACTCGF：CTTGTTCTGTCGCCAGTGAAR：CTTCGATGTCATGGCTGAGTF：CTGGAAAAAGGGAACAGAACR：CTTAGCAGACAGGCAGGTGTAF：CTGGCGATGAACTTGTCCAAR：CCACTCTGGTGTCATTGCAAF：CCATAGGTTTCCGAGGCTTGTR：TCCGGCAGAGTTTTGTGTTGF：AAAGGACAAGGGAAGGGTTTGR：GCTCCACCAGGAAAGATGGTTF：GTGAGAAAGAGCATGGGAAAATR：CGAACTTAAAAGCCTTGGAGCF：GGACAAGCTGCGGTATGAGAR：TCCGACACCTTCCCATCACF：TTCCGATAACGAACGACACR：GACATCYAAGGGCATCAG退火温度/Tm555555555555555555登录号Accession numberAB302327NM_001037835DQ202328AJ621250AF139097AJ508678NM_204608NM_001193295FM1654141325山西农业科学 2023 年第 51 卷第 11 期10 h表达水平有轻微的波动，变化规律不明显。2.2体内攻毒后鸡红细胞中 IL相关基因的 mRNA表达变化荧 光 定 量 PCR 结 果 如 图 2 所 示，体 内 感 染H9N2 AIV 后，与对照组相比，IL-6 的表达水平在攻毒 3 d 显著下降（P0.05），在体内攻毒 7 d 显著上升（P0.05）；IL-7 在攻毒后的 3、7、14 d 都显著上升（P0.05），并在 14 d时达最高；IL-12、IL-13、IL-15、IL-16的表达量在攻毒后的 7、14 d显著升高（P0.05），并且在攻毒 14 d的表达量高于 7 d表达量；IL-18 的表达水平在体内攻毒 3 d 没有显著变化，7 d 时显著上升（P0.05），而在 14 d 时显著下降（P0.05）；IL-34 在体内攻毒 3 d 时显著下降（P0.05），7、14 d显著上升（P0.05）。C.对照组；EXP.试验组；*.P0.05；*.P0.01；*.P0.005；NS.差异不显著。图 2同C.Control group;EXP.Experiment group;*.P0.05;*.P0.01;*.P0.005;NS.No significant difference.The same as Fig.2图 1体外 H9N2 AIV感染鸡红细胞后各 IL相关基因 mRNA表达变化Fig.1mRNA expression change of the IL-related genes in chicken erythrocytes infected by H9N2 AIV in vitro1326刘智民等：H9N2亚型禽流感病毒感染鸡红细胞引起白细胞介素的免疫应答3 结论与讨论近年来，鸡红细胞的免疫调节功能受到越来越多的关注。TLR已被确定为脊椎动物先天免疫识别的关键受体之一12-13，近期研究发现，鸡红细胞可表达多种TLRs14。IL可以通过TLR与其配体的相互作用来诱导 ILs 的表达，如 IL-1、IL-6 和 IL-815。本研究结果显示，鸡红细胞中 8 个免疫相关基因IL-6、IL-7、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-18 和IL-34 均表达，这些基因可能通过表达水平的变化参与红细胞的免疫调节作用。IL-6是一种多种功能细胞因子，既是一种促炎细胞因子，又是一种抗炎的肌氨酸，在鸡的免疫反应中起着重要的调节作用16。IL-6 被证明具有很强的生物佐剂活性，可增强机体免疫功能17。本研究结果显示，IL-6 的 mRNA 表达水平在体内攻毒后 3 d显著下降，可能是由于病毒增殖速度快，在体内拷贝数较高，抑制了 IL-6 的表达，导致其在 3 d表达量降低。IL-6的 mRNA 表达水平在感染后期（体外孵育后 6、10 h和攻毒后的 7 d）表达量显著上调。有报道称，IL-6能够有效改善感染流感病毒引起的肺损伤18，据此推测 IL-6 的 mRNA 表达水平在感染后期升高，一方面改善了病毒感染对机体的损伤；另一方面增强了机体的免疫功能，对机体免疫稳态维持起调节作用。IL-7主要由淋巴组织、胸腺和骨髓的基质细胞产生，不仅在 T 细胞分化中起作用，也在 B 细胞的分化、增殖、成熟和维持过程中发挥重要作用19-20。图 2体内攻毒后鸡红细胞中各 IL相关基因 mRNA表达变化Fig.2The mRNA expression change of the IL-related genes in chicken erythrocytes infected by H9N2 AIV in vivo1327山西农业科学 2023 年第 51 卷第 11 期IL-7是一种促炎细胞因子，其在细胞内的表达和活化可刺激炎性细胞产生大量致炎因子，致炎因子可调控炎症过程各组分之间的相互作用，维持机体免疫平衡。有研究表明，IL-7重组蛋白具有较强的免疫增强活性21。本研究结果显示，IL-7的表达水平在体外感染 H9N2 AIV 后 0、6 h以及体内攻毒后的3、7 d显著上升，这与 HIV 感染者体内 IL-7水平升高结果一致22，推测红细胞在该时间段可能通过上调 IL-7 的表达量来提高 B 细胞和 T 细胞免疫功能，控制由病毒感染引起的炎症过程，但其具体的免疫机制还有待进一步证实。IL-12是由 Th1细胞及树突细胞分泌的一种促炎性细胞因子，可以调节辅助 T 细胞的分化，诱导NK 细胞和 Th1 细胞分泌-干扰素（Interferon-，IFN-）。IFN-属于 II型干扰素，在免疫调节和抗病毒方面发挥重要作用。鸡 IL-12 的结构和功能与哺乳动物 IL-12 相似23，并且重组 IL-12 可作为生物佐剂在鸡脾细胞中诱导高水平的 IFN-表达。本研究结果显示，随着感染的时间增加，病毒的载量和活性逐渐降低，IL-12的表达量也随之降低，这与李洁萍等24的试验结果一致，其结果显示，慢性乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染患者血清蛋白 IL-12 水平和 HBV DNA 载量呈现正相关。但值得注意的是，体内 IL-12的 mRNA 表达量的变化趋势与体外表达量变化趋势相反，说明体内外免疫机制不同，具体机制还有待进一步证实。IL-13 是一种抗炎细胞因子，属于 B 细胞因子家族，主要在机体体液免疫反应中发挥作用，可通过参与机体免疫反应、造血和刺激急性期反应促进宿主防御机制25，并可显著降低细胞毒性单核细胞功能和抑制单核细胞分泌促炎性递质进而控制炎症反应。李杰等26研究健脾益气方对人类免疫缺陷患者（Human immunodeficiency virus，HIV）体内病毒载量与 IL-13 相关性时，发现 IL-13 水平在治疗前后存在明显差异，治疗后体内病毒载量降低且IL-13 水平显著升高。有文献报道，IL-13 表达量的升高影响了病毒 DNA 合成，显著降低 HIV 病毒的感染性，对病毒活性有抑制作用27。本试验结果显示，随着攻毒时间的推移，IL-13的表达水平在检测的 3 个时间点（3、7、14 d）逐渐上升，与前 2 个研究结果完全一致。IL-15 在 NK 细胞发育、成熟、增殖、活化以及向炎症部位的迁移具有调节能力，对 NK 细胞免疫应答有重要作用，因此，能够响应感染并抑制病毒复制。哺乳动物体内的 IL-15在 B细胞的增殖和分化、CD4+T 细胞的发育、自然杀伤细胞的增殖中都具有重要作用，在炎症反应中 IL-15通过多种途径发挥促炎症作用。LIM 等28研究表明，鸡 IL-15 在增强体液免疫应答过程中发挥作用。BOULASSEL等7研究发现，感染 HIV-1 患者血液中的 IL-15 的水平高于健康者，但在抗病毒治疗后 IL-15的水平又恢复了正常。此外，一些研究者还发现，感染人类免疫缺陷病毒 1 亚型（Human immunodeficiency virus type 1，HIV-1）的患者患血液病毒症的概率与IL-15 的水平密切相关，尤其是 IL-15 表达水平升高或者不稳定的患者29。IL-15 的 mRNA 表达量在感染后 0 h显著升高，之后表达量下降，这与前面2 个的研究结果一致，说明 IL-15 在抵抗禽流感H9N2 早期感染中发挥重要作用，IL-15 也可以作为体外早期感染禽流感 H9N2 AIV 的一个特征因子。体内 IL-15 的表达量在攻毒后的 7、14 d 显著升高，沈桂堂等30研究发现，重型肝炎患者的 IL-15水平在一定程度上反映了肝脏炎症严重程度，据此推测感染禽流感 H9N2 AIV 后引发了机体的炎症反应，但仍需进一步证实。IL-16 作为一种免疫调节细胞因子，主要发挥促炎症的作用。有研究表明，IL-16在 CD4+Th1细胞的募集和激活中起重要作用，它通过刺激炎性细胞因子的分泌和促进 T 淋巴细胞的活化参与炎症性疾病31。IL-16能够促进 CD4+淋巴细胞、单核巨噬细胞及嗜酸性粒细胞的应答反应。IL-16促进这些免疫细胞产生应答的主要原因是它们都能表达CD4。CD4 是 IL-16 的主要受体，二者结合后，可以产生一系列免疫反应，比如通过抑制 HIV-1的启动子抑制病毒复制。一些研究结果显示，白细胞介素 IL-16的表达量在攻毒后逐渐上升，这与丙型肝炎病毒（Hepatitis virus C，HCV）患者经抗病毒治疗后 IL-16 表达上调相似。说明在感染初始阶段，IL-16的表达量较低，免疫功能被抑制，但是随着攻毒时间的延长，机体自身的免疫力提高，病毒载量也相应降低，以致 IL-16 的表达量升高。胡宽修8研究也发现，在感染 HIV-1 的患者中，治疗组的患者 IL-16的表达水平高于对照组患者，且差异具有显著性。IL-18 在 CD4+和 CD8+T 细胞反应的发展和自然杀伤细胞的诱导中发挥重要功能，同样具有促炎症作用。IL-18在机体的先天免疫和获得性免疫方面都起到重要作用32。袁朋等33在昆虫细胞中1328刘智民等：H9N2亚型禽流感病毒感染鸡红细胞引起白细胞介素的免疫应答利用杆状病毒表达载体表达了鸡白介素 18（cIL-18），研究发现，cIL-18 蛋白可在 MDCK 细胞中抑制 H9N2 AIV 的复制。本研究结果显示，IL-18 的表达量在感染后 2、6 h和攻毒后 7 d都显著上调，说明 IL-18 可能起到了免疫作用，抑制了 H9N2 AIV的复制，维持了机体的免疫平衡。在研究 IL-18与乙肝病毒形肝炎（Hepatitis B virus，HBV）感染的相关性时，有研究发现，HBV 与 IL-18 表达密切相关34，其可作为 HBV 诊断和疗效检测的新指标，提示 IL-18也可以作为感染 H9N2 AIV的一个指标。IL-34 的功能尚不完全清楚。在哺乳动物中，IL-34的功能包括促进趋化因子以及炎症细胞等的生成和释放、刺激巨噬细胞和单核细胞的增殖与分化，从而发挥促炎作用。IL-34 与巨噬细胞集落刺激 因 子（M-CSF 或 CSF-1）共 用 一 个 受 体 CSF-1R，当配体与受体结合后可调节单核细胞和巨噬细胞的生物学功能，所以，研究集中于 IL-34 在一些炎症性疾病中的作用。慢性丙型肝炎病毒（HCV）感染患者肝脏纤维化阶段血清中 IL-34 的表达量明显升高，此外，HCV 感染和炎症因子可促进体外培养的肝脏细胞表达 IL-34。本研究结果显示，IL-34 的表达量在体外感染 H9N2 AIV 的 0、2、6、10 h没有发生差异变化，一定程度上说明 IL-34在体外发挥的作用较小。攻毒后 IL-34的表达量在 7 d和14 d 显著上升，推测机体感染 H9N2 亚型禽流感病毒后引发了强烈的炎症反应，导致机体产生了大量的炎性因子。YU 等35也报道了同样的结果，发现在感染流感 A 病毒（IAV）后期，患者血清和外周血单核细胞中（PBMC）中 IL-34 表达量升高。IL-34的表达量在攻毒的 7 d 较 14 d 相对表达量更高，可能是由于随着感染时间的增加，机体自身的免疫力增强，而鸟类本身可能在感染后期获得一些针对特定病原体或感染的免疫力，导致 14 d的攻毒水平和炎症因子水平较 7 d低。本研究结果显示，无论是鸡红细胞在培养条件下感染 H9N2 AIV，还是易感雏鸡体内攻毒 H9N2 AIV，鸡红细胞中 IL-6、IL-7、IL-12、IL13、IL-15、IL-16、IL-18 和 IL-34 共 8 种白细胞介素呈现了转录水平上的变化。表明鸡感染 H9N2 亚型禽流感病毒后红细胞可能发生了相应的免疫应答反应，起到抵抗病毒感染、调节机体免疫稳定的作用。参考文献：1 GUAN Y，SHORTRIDGE K F，KRAUSS S，et al.Molecular characterization of H9N2 influenza viruses：were they the donors of the internal genes of H5N1 viruses in Hong Kong?J.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，1999，96（16）：9363-9367.2 SIEGEL I，TIAN L L，GLEICHER N.The red-cell immune systemJ.The 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