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LC-MS/MS 法测定食品接触材料中 12 种 N-亚硝胺迁移量的不确定度分析周雷1，魏小春2，陈海园1（1.温州方圆检验认证有限公司，浙江温州325007；2.温州市质量技术检测科学研究院，浙江温州325007）摘要：采用高效液相色谱-串联质谱法测定食品接触材料中 12 种 N-亚硝胺的含量，建立各个参数的数学模型，并对其不确定度的来源进行分析和评定。经分析评定后，不确定度的主要来源是工作曲线的拟合、标准曲线的配制，影响最小的是因称量产生的不确定度。关键词：食品接触材料；N-亚硝胺；不确定度；色谱-质谱法中图分类号：O657.63文献标识码：A文章编号：1004-7050（2023）09-0059-030引言我国食品接触材料新国标将食品接触材料分为9 大类1。其中食品接触用橡胶材料因耐腐蚀、高弹性、对流体渗透性低等优点，常被应用于婴儿用牙胶，碗勺和奶嘴等，但由于使用加工助剂等原因，会使有毒有害的物质从橡胶材料中迁移到食品中，如亚硝胺等2。N-亚硝胺是含有-N-N=O 官能团的物质，引发多种类动物不同器官的肿瘤2。对于其测定的检测手段有薄层层析法、紫外光谱法、热能分析法、质谱法等3-5，其中 LC-MS/MS 法是以液相色谱-串联质谱仪为检测仪器，该方法前处理简便、可行性高、回收率好，避免了 N-亚硝胺因有机溶剂洗脱及浓缩造成的损失，也避免了出现假阳性的结果。因此，对该方法的测定量不确定度进行评定来验证检测结果的可信度，是非常有必要的。1材料与方法材料为橡胶奶嘴。前处理采用人工模拟唾液6，将 N-亚硝胺迁移到含亚硝酸盐的人工唾液盐溶液中，测试溶液中的N-亚硝胺含量。主要仪器采用液相色谱-质谱联用仪；试剂为甲醇、甲酸、超纯水；标准品为 12 种 N-亚硝胺混标，以甲醇作溶剂配制工作曲线。前处理方法及仪器条件依据文献7中的规定。2结果与分析测定奶嘴中中亚硝胺含量的模型公式见式（1）：A=C1 000mV.（1）式中：A 为亚硝胺含量，mg/kg；C 为由标准工作曲线所得的试样溶液中亚硝胺的质量浓度，g/L；V 为定容体积，mL；m 为样品质量，g。分析试验过程和数学模型，不确定度来源如下8：称重；标准溶液纯度；配制标准储备溶液；配制标准工作曲线；试液定容体积；样品重复测定；拟合工作曲线。本试验中，称取样品质量为 5.0 g。实验室使用的赛多利斯 BSA224S 电子天平，依据电子天平检定规程9，则称量导致的样品质量标准不确定度 u1=2姨0.0005g3姨=0.0004g，相对标准不确定度 urel(1)=0.000 4 g5.0 g=0.000 08。实验使用的 N-亚硝胺各物质浓度为 100 mg/L。根据标准溶液检测证书，其不确定度 urel(2)见表 1。标准溶液稀释得到标准储备溶液。以 1 mL 移液器10移取 1.000 mL 标准溶液至 10 mL 单标容量瓶11中，以甲醇定容，得到 10.0 mg/L 的标准储备溶液 1。从标准储备液 1 中，以 100 L 移液器移取 100 L至 10 mL 单标容量瓶中，再以甲醇定容至 10 mL，得到 100 ng/mL 标准储备溶液 2。则配制过程中产生的相对标准不确定度分量 滋rel(3)为：urel(3)=0.023姨10晌尚上上上上上上上上裳捎梢梢梢梢梢梢梢梢2+0.013姨蓸蔀2+0.023姨蓸蔀2姨=0.012 96.收稿日期：2022-11-09基金项目：浙江省市场监督管理局科研计划项目（20210141）作者简介：周雷，男，1989 年出生，毕业于丽水学院，本科，中级工程师，现从事食品包装中有毒有害物质的检测工作。总第 214 期2023 年第 9 期山西化工Shanxi Chemical IndustryTotal 214No.9，2023DOI:10.16525/14-1109/tq.2023.09.023分析与测试山西化工第 43 卷将标准储备液 2 进行稀释，配置成标准工作溶液曲线，使用时将混标工作溶液用甲醇稀释，制作质量浓度为 1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 g/L 的标准工作曲线。按照移液器检定规程，按照均匀分布处理配制过程中产生的相对标准不确定度为：urel(4.1)=0.017 40；urel(4.2)=0.015 63；urel(4.3)=0.014 23；urel(4.4)=0.014 23；urel(4.5)=0.015 36。建立曲线的标准工作溶液产生的相对标准不确定度分量 urel(4)=u2rel(4.1)+u2rel(4.2)+u2rel(4.3)+u2rel(4.4)+u2rel(4.5)姨=0.034 47。以 100 mL 量筒移取 50 mL 的模拟唾液，试液定容过程中引入的标准不确定度 urel(5)=0.53姨50=0.005 78。由于样品中未检出 N-亚硝胺的迁移量，故对样品进行加标后重复性测试 7 次。采用贝塞尔（Bessel）公式，见式（2）：u（xi）=s（xi）=ni=1移（x1-x軃）2n-1姨=v12+v22+vn2n-1姨.（2）对测试结果取 7 次平均值进行不确定度和相对标准不确定度的计算时，则 u（x軃）=s（xi）n姨；自由度：v=n-1。具体结果见表 1。配制浓度为 1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 g/mL 的标准工作溶液 15，进行上机测试。由校准曲线拟合产生的标准不确定度可由式（3）表示：u7（c）=sb1p+1n+（c-c軃）2ni=1移（c-c軃）2姨.（3）其中，s 计算公式见（4）：s=ni=1移Ai-（a+bci）2n-2姨=ni=1移（Ai-Af）2n-2姨.（4）由校准曲线拟合产生的相对标准不确定度可由式（5）表示：urel(7)=u(7)C軍.（5）12 种亚硝胺物质相对标准不确定度 urel(7)见表 1。12 种亚硝胺物质合成相对标准不确定度按照式（6）进行计算：urel=u2rel(1)+u2rel(2)+u2rel(3)+u2rel(4)+u2rel(5)+u2rel(6)+u2rel(7)姨.（6）样品中亚硝胺物质含量 A 的计算公式见式（7）：A=A1mV.（7）式中：A1为试样溶液中亚硝胺的质量浓度，g/L。合成标准不确定度计算公式见式（8）：u（A）=urelA.（8）当置信度为 95%，置信因子 k=2，扩展不确定度计算为式（9）：u（k）=u（A）k.（9）具体结果见表 2。3结语合成标准不确定度的来源依次为：工作曲线的拟合、标准曲线的配制、样品重复性测量以及标准溶液的纯度、标准溶液的配制、移液和定容以及因称量产生的不确定度，其中工作曲线的拟合、标准曲线的配制、样品重复性测量以及标准物质的纯度是不确定度的主要来源，影响最小的是因称量产生的不确定度，可以忽略不计。参考文献1吴宗旭，刘思洁，崔勇.食品接触材料安全性的探讨J.质量安全与检验检测，2021，36（6）：40-43.2杨慧敏，封棣，栗珍珍，等.食品接触橡胶材料中化学物质及迁移研究进展J.包装工程，2015，36（1）：12-18.3封棣.乳胶制品中亚硝胺的分析及生物安全性评价D.北京：北京协和医学院，2009.4Fine D H，Lieb D，Rufeh F.Principle of opertation of the thermal ener-表 1各分量相对标准不确定度名称urel(2)urel(6)urel(7)NMOR0.017 270.016 760.062 837NPYR0.019 860.018 280.099 982NPIP0.017 930.019 050.045 561NMPhA0.019 900.008 480.062 297NDPA0.017 250.018 090.087 623NEPhA0.007 730.012 940.059 324NDEA0.019 900.019 000.096 814NDBA0.017 200.016 620.097 528NDPhA0.007 670.014 300.074 603NDBzA0.007 750.031 530.068 175NMEA0.017 890.021 320.072 773NDMA0.017 900.017 740.059 611表 212 种亚硝胺不确定度计算结果名称urel平均含量/（mg/kg）u（k）/（mg/kg）计算结果/（mg/kg）NMOR0.076 90.048 290.0070.048+0.007NPYR0.110 10.047 340.0100.047+0.010NPIP0.064 40.047 150.0060.047+0.006NMPhA0.075 70.048 220.0070.048+0.007NDPA0.098 40.046 130.0090.046+0.009NEPhA0.071 70.046 980.0070.047+0.007NDEA0.107 30.046 010.0100.046+0.010NDBA0.107 10.046 290.0100.046+0.010NDPhA0.085 00.047 160.0080.047+0.008NDBzA0.084 20.047 820.0080.048+0.008NMEA0.086 40.046 810.0080.047+0.008NDMA0.074 70.048 040.0070.048+0.00760窑窑2023 年第 9 期夏的病毒病危害情况越来越严重，因此，使半夏种质逐年衰退，甚至造成了种质退化的现象，从而严重影响了半夏的产量及品质的提高。4应对措施由于病毒在植株内主要通过维管束传导，所以病毒在感病植株内的分布不一致。因此可以利用组织培养技术对其不含病毒或病毒含量少的部位进行分离培养，以期获得脱毒植株；或利用一步成苗法对息半夏不同组织部位进行脱毒处理，以获得优质无毒植株；或在一步成苗技术方面进行探索，寻找最佳外源激素浓度组合，并初步探究最佳的种植基质组合，为其大规模生产提供技术支持，提高大田栽培产量。5结语本文从半夏的化学成分、药理作用等多角度出发，对半夏的研究进展进行了归纳总结，以期为进一步研究其药理作用和临床用药安全打下基础，为充分发挥其药用价值及开发利用提供理论依据。参考文献1胡一丹，俞立.半夏生物碱类化学成分研究J.中国处方药，2022，20（1）：32-34.2彭加兵，严安定，陈昆鹏，等.不同方法提取颍半夏挥发油化学成分的气相色谱-质谱联用法分析J.中国药业，2019，28（9）：25-27.3王依明，王秋红.半夏的化学成分、药理作用及毒性研究进展J.中国药房，2020，31（21）：2676-2682.4国家药典委员会.中国药典M.北京：中国医药科技出版社，2020.5左军，牟景光，胡晓阳.半夏化学成分及现代药理作用研究进展J.辽宁中医药大学学报，2019，21（9）：26-29.6张明发，沈雅琴.半夏提取物抗菌抗炎及其抗肿瘤药理作用研究进展J.抗感染药学，2017，14（6）：1089-1094.7张明发，沈雅琴.半夏及其炮制品对神经和循环系统的药理作用研究进展J.抗感染药学，2017，14（9）：1643-1648.8郭泽乐，储开博，何丽清，等.基于中医传承辅助平台的和解法治疗新型冠状病毒肺炎用药规律分析J.中国处方药，2021，19（12）：11-14.9徐丰清，梁永革.半夏的炮制方法及其对药效的影响J.双足与保健，2018，27（12）：164-165.10谢其亮，耿晓桐，汪港，等.不同地区野生及栽培息半夏的品质特性分析J.中医学报，2021，36（6）：1296-1302.11徐陶，杜娟，谢丽霞，等.半夏蛋白及其基因研究进展J.时珍国医国药，2009，20（10）：2557-2559.12黄晓聪，殷维.半夏中药界里的诗人J.中南药学（用药与健康），2017（6）：7-13.Research Progress on Chemical Consituents and Pharmacological Activities of Pinellia ternateGeng Xiaotong,Liu Qi,Hua Jiaojiao,Duan Yaqi,He Dingxuan,Qiao Xinrong（Xinyang Agriculture and Forestry University，Xingyang Henan 464000,China）Abstract:In order to promote the research and utilization of Pinellia ternata and the development of its medicinal value,a review isconducted from the chemical composition,pharmacological effects,and other aspects of Pinellia ternata.Measures to address the currentdevelopment difficulties are proposed,providing a reference basis for the research of Pinellia ternata.Key words:Pinellia ternate;chemical consituents;pharmacological activities（上接第 54 页）gy analyzer for the trace analysis of volatile and non-volatile N-nitrosocompoundsJ.Journalof ChromatographyA，1975(2):351-357.5幸苑娜，王欣，陈泽勇，等.气相色谱-正化学源串联质谱法测定家用橡胶手套中 7 中 N-亚硝胺及其前提物的迁移量J.分析测试学报，2011，30（5）：503-508.6国家标准化管理委员会.婴幼儿安抚奶嘴安全要求：GB 284822012S.2012-06-29.7周雷，章宦胜，黄小凯，等.基于婴幼儿奶嘴安全性的 12 种 N-亚硝胺及其迁移量测定方法研究J.西部皮革，2022，44（3）：45-47.8国家质量技术监督局.化学分析测量不确定度的评定：JJF 11352005S.2005-09-05.9国家质量监督检验检疫总局.电子天平检定规程：JJG 10362008S.2008-02-20.10国家质量监督检验检疫总局.移液器检定规程：JJG 6462006S.2006-12-08.11国家质量监督检验检疫总局.常用玻璃量器检定规程：JJG 1962006S.2006-12-08.Uncertainty Analysis of 12 N-nitrosamines Migration in Food Contact Materials Determinedby LC-MS/MS MethodZhou Lei1,Wei Xiaochun2,Chen Haiyuan1（1.Wenzhou Fangyuan Inspection and Certification Co.,Ltd.,Wenzhou Zhejiang 325007,China;2.Wenzhou Quality and Technology Testing Science Research Institute,Wenzhou Zhejiang 325007,China）Abstract:High performance liquid chromatography tandem mass spectrometry was used to determine the content of 12 N-nitrosamines infood contact materials,establish mathematical models for each parameter,and analyze and evaluate the sources of uncertainty.Afteranalysis and evaluation,the main sources of uncertainty are the fitting of working curves and the preparation of standard curves,with theleast impact being the uncertainty generated by weighing.Key words:food contact materials;N-nitrosamine;uncertainty;chromatography-mass spectrometry周雷，等：LC-MS/MS 法测定食品接触材料中 12 种 N-亚硝胺迁移量的不确定度分析61窑窑