临床检验医学知识专题讲座专家讲座.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,绪 论,一、临床检验基础现实状况和特点,古代:感官检验（如：尿液中世纪）,17世纪:荷兰Leeuwenhoek创造显微镜,临床检验医学知识专题讲座,第1页,20世纪末以来:自然科学基础学科与医学基础学科结合电脑化、自动化、微量化,临床检验医学知识专题讲座,第2页,21世纪：当代信息网络技术（远程诊疗）与系统生物工程（包含分子生物学）、临床医学结合。,临床检验医学知识专题讲座,第3页,最惯用临床检验，借助先进检测技术，对来自离体,血液、尿液、粪便,以及,分泌物和排泄物,等标本进行理学、化学、病原学和显微镜形态学检验，以简便、快速检测结果，基本满足临床医学检验,筛检,疾病需求。,临床检验医学知识专题讲座,第4页,临床检验当代特征：,1从手工 自动化、电脑化检测,临床检验医学知识专题讲座,第5页,2床边检测（point of care test，POCT）,临床检验医学知识专题讲座,第6页,3试剂批量、配套、专业和多样化,临床检验医学知识专题讲座,第7页,4.检验方法标准化,如：1966年，成立,国际血液学标准化委员会,（ICSH，源自1963年欧洲血液学协会标准化委员会）,5全方面质量确保 人员和物质,检验分析前：,标本,采集、储存,和,转运,过程尤为主要。现认为，管理好这两个步骤，可降低70%检验差错率。,临床检验医学知识专题讲座,第8页,(1),标本采集标准,保持离体标本,质,和,量,完整性,临床检验医学知识专题讲座,第9页,（2）防止非疾病原因干扰,生理变异：,第一类：不能控制,生理变异,年纪和性别对检验影响为长久效应,第二类：相对能控制,生理变异,，如,食物、药品、情绪、状态、体位和标本采集时间,等，对检验影响多为短期效应。,1）饮食原因：刚进食、禁食、饮酒、吸烟,2）药品原因：方式、浓度,临床检验医学知识专题讲座,第10页,二、临床检验基础应用目标,1为疾病,诊疗和判别诊疗,提供试验室检测客观依据,2.为疾病,疗效监测和预后判断,提供动态改变依据,3.为,预防疾病,提供检测依据,4.为,科学研究,提供医学检验基本数据、基本检验方法和操作技能。,临床检验医学知识专题讲座,第11页,三、学好临床基础检验基本要求,1,掌握检验基础理论,2掌握检验试验技能,3熟悉检验方法学评价,4了解检验项目参考值,红细胞计数(RBC)参考值,男性：(4.05.5)10,12,/L,女性：(3.55.0)10,12,/L,临床检验医学知识专题讲座,第12页,5熟悉检验项目临床意义,尿蛋白定性临床意义 阳性有生理性，也有病理性。糖尿病患者尿中连续出现尿蛋白阳性，需除外泌尿系感染、原发性肾病外，应考虑糖尿病肾病诊疗,临床检验医学知识专题讲座,第13页,血液标本采集和血涂片制备,血液标本采集和抗凝剂选择,全血,：临床血液学检验：血细胞计数、分类,血浆,：临床生化检验（内分泌激素测定等）；血栓与止血检验,血清,：除纤维蛋白原等凝血,因子外，其它成份与血浆,基本相同，多数临床化学和,临床免疫学检验。,临床检验医学知识专题讲座,第14页,一、采血方法,静脉采血法(venipuncture for blood collection),皮肤采血法(skin puncture for blood collection),真空采血法(vacuum tube for blood collection，负压采血法)。,定量、安全、转运方便,.,封闭式采血,无需容器转移，降低溶血。,真空定量贮存试管适于不一样检验项目,临床检验医学知识专题讲座,第15页,真空采血容器色泽及应用范围,颜 色,抗 凝 剂,应 用 范 围,灰,草酸盐、氟化钠,全血、血浆，血葡萄糖,黄,血培养,绿,肝素,全血、血浆：血气,红,血清：生化、免疫,蓝,枸橼酸盐,全血、血浆：凝血检验,紫,乙二胺四乙酸盐,全血、血浆，钾盐用于血细胞、血小板和血液学检验,临床检验医学知识专题讲座,第16页,【方法学评价】,皮肤采血：易溶血、凝血和可能混入组织液，重复性差。,开放式采血,：操作步骤多、不规范，易污染。,封闭式采血,：操作规范，安全性、重复性好。,临床检验医学知识专题讲座,第17页,【质量控制】,血标本采集是分析前质量控制主要步骤。,1患者,2采血,静脉采血：止血带压迫时间宜,小于1min,临床检验医学知识专题讲座,第18页,3溶血,4血标本处理标准,及时运输检测,保留：温度和有效时间,5试验结果分析,采样时,：年纪、性别、饮食、药品、时间,临床检验医学知识专题讲座,第19页,二、抗凝剂选择,1.乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid,EDTA,）盐,Na,2,C,10,H,14,O,8,N,2,+Ca,2+,aC,10,H,12,O,8,N,2,+2Na,+,+2H,+,特点：,对血细胞形态、血小板计数影响很小（但影响血小板聚集）。,依据,国际血液学标准化委员会,(International Committee for Standardization of hematology,ICSH,)1993年文件提议，,血细胞计数用EDTA-K,2,作抗凝剂（,EDTA-K,2,-2H,2,O 1.52.2mg/ml血液,）。,临床检验医学知识专题讲座,第20页,2草酸盐（sodium oxalate）：对凝血V因子保护功效差，影响凝血酶原时间测定；草酸盐与凝血酶钙结合后形成沉淀物，影响自动凝血仪使用；高浓度钾或钠离子易使血细胞脱水皱缩，草酸铵使血细胞膨胀。,临床检验医学知识专题讲座,第21页,3肝素(,heparin,)加强抗凝血酶III（antithrombin III,AT-III）灭活丝氨酸蛋白酶作用，从而,阻止凝血酶,形成，阻止血小板聚集等作用，抗凝力强。用量,（152.5）U/ml血液,。但常可,引发白细胞聚集,，并使血涂片在罗氏染色（Romanowskys staining）时产生蓝色背景。,临床检验医学知识专题讲座,第22页,4枸橼酸盐 枸橼酸钠(,trisodium citrate,)，能与血液中钙离子结合形成螯合物，从而阻止血液凝固。,2Na,3,C,6,H,5,O,7,+2Ca,2+,2CaC,6,H,5,0,7,-,+6Na,+,抗凝力较弱。,抗凝百分比19,。多用于临床血液学检验、血液保养（毒性小）。,临床检验医学知识专题讲座,第23页,第二节 血液涂片制备和细胞染色,一、血液涂片制备,厚薄适宜（与血量多少、推片速度相关），头体尾显著：细胞分布要均匀,血膜边缘整齐（留一定空隙）,临床检验医学知识专题讲座,第24页,血涂片分布不均主要原因：,推片边缘不齐、用力不均匀、载片不清洁,临床检验医学知识专题讲座,第25页,二、血液细胞染色,（一）瑞氏染色法,(Wright,s stain),1瑞氏染料,酸性染料伊红（eosin,E,-,）,碱性染料亚甲蓝（methylene blue,M,+,；又名美蓝）组成复合染料。,甲醇：溶解美蓝和伊红ME；固定细胞形态；提升对染料吸附作用。,临床检验医学知识专题讲座,第26页,2染色原理,物理吸附、化学亲和,3pH值影响,细胞各种成份多属蛋白质，因为,蛋白质系两性电解质,，所带电荷随溶液pH而定。,在,偏酸时正电荷（H,）增多,，易与伊红结合，染色偏红。,在,偏碱时负电荷增多,，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。,染料,贮存时间愈久，染色效果愈好,。,染液贮存，必须加塞，以预防甲醇挥发和被氧化成甲酸。,加入甘油,预防甲醇挥发，染色清楚,。,临床检验医学知识专题讲座,第27页,（二）,姬姆萨染色法,姬姆萨染液：由,天青、伊红,组成。,临床检验医学知识专题讲座,第28页,【方法学评价】,1.血涂片制备,手工推片法:血量少、操作简单、重复差。,临床检验医学知识专题讲座,第29页,2.血液细胞染色,瑞氏染色法：最经典、最惯用,瑞氏-姬姆萨复合染液：取长补短,临床检验医学知识专题讲座,第30页,第二章 血液普通检验,第一节 红细胞检验,红细胞（red blood cell；erythrocyte）起源于骨髓造血干细胞（colony forming unit-spleen，CFU-S）,红细胞主要生理功效：经过胞内血红蛋白来实现。,临床检验医学知识专题讲座,第31页,一、红细胞计数(red blood cell count，RBC),【检测原理】,1手工显微镜法,2血液分析仪法,利用电阻抗和（或）光散射原理,临床检验医学知识专题讲座,第32页,红细胞计数,2ml稀释液 充分混匀,10ul血液 充池、静止 镜下计数,计算：RBC/L=N51010,6,200,临床检验医学知识专题讲座,第33页,Neubauer计数盘,临床检验医学知识专题讲座,第34页,3mm,WBC WBC,WBC WBC,1mm,临床检验医学知识专题讲座,第35页,【方法学评价】,1手工显微镜法,2血液分析仪法,为当前主要临床检验细胞计数方法,变异系数（coefficient of variation,CV）小。,临床检验医学知识专题讲座,第36页,【质量控制】,1手工法 误差起源包含：标本、操作、器材、固有误差（计数域误差）,2仪器法,严格按操作规程；定时作室内和室间质控。,临床检验医学知识专题讲座,第37页,【参考值】,成年：男性(45.5)10,12,/L,女性(3.55.0)10,12,/L,新生儿(6.07.0)10,12,/L。,临床检验医学知识专题讲座,第38页,【临床意义】,1生理性改变,(1)年纪与性别差异,(2)精神原因,(3)猛烈体力运动和劳动,(4)气压降低,(5)妊娠中、后期,临床检验医学知识专题讲座,第39页,2病理性改变,（1）红细胞和血红蛋白量降低：在临床最常见于,各种原因贫血,。,1）急性、慢性红细胞丢失过多：如各种原因出血。,2）红细胞寿命缩短：如各种原因溶血,3）造血原料不足,4）骨髓造血功效减退,临床检验医学知识专题讲座,第40页,（2）红细胞增多,1）,原发性,红细胞增多：见于真性红细胞增多症、良性家族性红细胞增多症等。,2）继发性红细胞增多：常见于能够引发,低氧血症,疾病：心血管病、肺疾病、异常血红蛋白病。,肾上腺皮质功效亢进（库欣病），可能与皮质激素刺激骨髓使红细胞生成偏高相关,药品,肾上腺素、糖皮质激素、,雄激素,等。,(3）相对性红细胞增多,临床检验医学知识专题讲座,第41页,二、血红蛋白(hemoglobin,Hb或HGB)测定,（一）血红蛋白分子结构及成份,色素：亚铁血红素,蛋白质：珠蛋白,血红素：,原卟啉和铁原子,组成一个结合物，合成受-氨基-酮戊酸合成酶（-aminolevulinic acid synthetase）、血红素本身和Fe,2+,调整。,临床检验医学知识专题讲座,第42页,在正常状态，机体有99%Hb铁原子呈Fe,2+,状态，称为还原Hb,1%Fe,3+,为高铁血红蛋白，只有亚铁状态Hb才能与氧结合，此时称,氧合血红蛋白,。,临床检验医学知识专题讲座,第43页,血红蛋白结构,construction of hemoglobin,卟啉 卟啉,Fe,卟啉 卟啉,珠蛋白,临床检验医学知识专题讲座,第44页,血红蛋白结构,临床检验医学知识专题讲座,第45页,(二)血红蛋白合成,血红蛋白合成受激素调整。,红细胞生成素,：促-氨基-酮戊酸（-aminolevulinic acid，ALA）生成与铁利用，促血红素和Hb合成；,雄激素,：,在人体不一样生长时期。Hb种类与百分比不一样。,临床检验医学知识专题讲座,第46页,【检测原理】,血红蛋白形式：,氧合血红蛋白（oxyhemoglobin）,碳氧血红蛋白（carboxyhemoglobin）,高铁血红蛋白（hemiglobin，Hi）,其它衍生物,临床检验医学知识专题讲座,第47页,1氰化高铁血红蛋白（hemiglobincyanide,HiCN,）测定法,吸收波峰：540nm,2其它测定法：,叠氮高铁血红蛋白法（hemiglobin azide,HiN,3,）,碱羟血红蛋白测定法,沙利（Sahli，已经淘汰,）血红蛋白测定法等,临床检验医学知识专题讲座,第48页,【方法学评价】,1966年，,国际血液学标准化委员会推荐,氰化高铁血红蛋白测定法作为国际标准参考方法。,HiCN法简便、显色快而稳定。,可检测除硫化血红蛋白（sulphon hemoglobin,SHb,）外各种血红蛋白。,氰化钾（potassium cyanide，KCN）有剧毒,十二烷基硫酸钠血红蛋白（sodium dodecyl sulfate,SDS）测定法：除SHb外，血液中各种Hb均可与低浓度SDS作用，生成SDS-Hb棕红色化合物。吸收曲线波峰在538nm，波谷在500nm，肩峰在560nm。无公害。破坏白细胞，,不适于,同时用于有白细胞计数和Hb测定血细胞分析仪上使用。,临床检验医学知识专题讲座,第49页,叠氮高铁血红蛋白（HiN,3,）测定法：含有与HiCN测定法相同优点，试剂有毒性。,碱羟血红蛋白(AHD 575)测定法,沙利法为传统血红蛋白测定法，已淘汰。,临床检验医学知识专题讲座,第50页,【质量控制】,血标本、方法、器材、采血部位,【参考值】,成年：男性120160g/L,女性：110150g/L,新生儿：170200g/L,老年（70岁以上）：,男性：94.2122.2g/L,女性：86.5111.8g/L,【临床意义】与红细胞计数相同，但,对贫血程度判断准确性优于,红细胞计数。,临床检验医学知识专题讲座,第51页,三、红细胞形态检验,【方法学评价】,即使,血细胞分析仪广泛用于全血细胞计数，,但,观察血涂片可用于预计对应血细胞数量，因而,显微镜细胞数量和形态观察,现常作为对仪器分析质控,参考对照,。,注意：,假如血片制作不良和染色不佳，常使细胞判别发生困难，甚至造成错误结论。,临床检验医学知识专题讲座,第52页,【质量控制】,选择细胞分布均匀区域：,红细胞堆积棒状穿钱状：细胞过于密集。但假如在血涂片较薄区域出现，可能是红细胞外附有异型球蛋白,注意完整检验,次序,临床检验医学知识专题讲座,第53页,【临床意义】,1.红细胞大小不一,（1）,小红细胞(microcyte)：6m,（2）,大红细胞(macrocyte)：10m。常见于巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、恶性贫血等。,（3）,巨红细胞(megalocyte)：15m,临床检验医学知识专题讲座,第54页,（4）红细胞大小不均(anisocytosis)：同一患者红细胞之间直径相差一倍以上。如大达12m，小仅2.5m。常见于严重增生性贫血，巨幼细胞性贫血时尤为显著。,临床检验医学知识专题讲座,第55页,2.红细胞内血红蛋白含量改变,（1）正常色素性(normochromic)：见于急性失血、再生障碍性贫血、白血病等。,（2）低色素性(hypochromic)：见于缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、铁幼粒细胞性贫血，一些血红蛋白病。,（3）高色素性(hyperchromic)：最常见于巨幼细胞性贫血。,（4）多色性(polychromatic)：刚脱核而还未完全成熟红细胞，体积较大。正常人外周血占1%左右。尤见于溶血性或急性失血性贫血。,（5）细胞着色不一（anisochromia）：双形性贫血（dimorphic anemia）,多见于铁粒幼红细胞性贫血。,临床检验医学知识专题讲座,第56页,5红细胞形状改变,（1）,球形红细胞(spherocyte)：见于,遗传性,和取得性球形细胞增多症（如本身免疫溶血性贫血或直接理化损伤如烧伤等）。,临床检验医学知识专题讲座,第57页,（2）,椭圆形红细胞(elliptocyte)：见于,遗传性,椭圆形细胞增多症、大细胞性贫血；偶见于缺铁性贫血、骨髓纤维化、巨幼细胞贫血、镰形细胞性贫血。正常人血液约占1%。,临床检验医学知识专题讲座,第58页,（3）,靶形细胞(target cell)：常见于各种低色素性贫血、尤见于,珠蛋白生成障碍性贫血,、HbC病，及阻塞性黄疸、脾切除后。,临床检验医学知识专题讲座,第59页,（4）,口形红细胞(stomatocyte)：常见于口形红细胞增多症，小儿消化系统疾患引发贫血及酒清中毒、一些溶血性贫血、肝病。,临床检验医学知识专题讲座,第60页,（5）,镰形红细胞(sickle cell)：,镰状细胞贫血（HbS-S，HbS-C），,在缺氧条件下，可有大量镰状红细胞。,临床检验医学知识专题讲座,第61页,（6）,棘红细胞(acanthocyte)：见于,遗传性,或取得性,-脂蛋白缺乏症,；于脾切除后、酒精中毒性肝脏疾病、尿毒症。,棘红细胞应与,皱缩红细胞,（也称,锯齿状红细胞,）区分（crenated cell,echinocyte）。,临床检验医学知识专题讲座,第62页,（7）,新月形红细胞（meniscocyte）：见于一些溶血性贫血（如阵发性睡眠性血红蛋白尿症），其意义不明。正常人无。,临床检验医学知识专题讲座,第63页,（8）,泪滴形红细胞（tear drop cell）：可能是细胞内含有Heinz小体或包涵体所致。见于贫血、骨髓纤维化症，偶见正常人。,临床检验医学知识专题讲座,第64页,（9）,缗钱状红细胞(rouleaux formation)：见于血浆中纤维蛋白原和免疫球蛋白增高性等疾病。,（10）裂红细胞(schistocyte)：红细胞碎片（cell fragments），有各种形态如刺形(burr)、盔形(helmet)等。见于弥漫性血管内凝血、微血管病性溶血性贫血、重型珠蛋白生成障碍性贫血、巨幼细胞性贫血、严重烧伤。正常人2%。,（11）红细胞形态不整(poikilocytosis)在一些感染或严重贫血时多见，最常见于巨幼细胞性贫血。,临床检验医学知识专题讲座,第65页,（12）双相性红细胞,临床检验医学知识专题讲座,第66页,（12)有核红细胞(nucleated erythrocyte)即幼稚红细胞。正常时，,1周之内婴幼儿,血片中可见到少许有核红细胞，,在成人为病理情况,。,1）溶血性贫血：最常见。,表明骨髓有良好调整功效。,2）造血系统,恶性,疾患或骨髓转移性肿瘤：见于各种急、慢性白血病及红白血病。,3）脾切除后,临床检验医学知识专题讲座,第67页,4红细胞内出现异常结构,（1）,嗜碱性点彩红细胞（basophilic stippling cell）：重金属损伤细胞膜使嗜碱性物质凝集。嗜碱性物质变性，血红蛋白合成过程中，原卟啉与亚铁结合受阻，以,铅,作用最为显著，常作为,铅中毒,诊疗筛选指标。,临床检验医学知识专题讲座,第68页,（1）,豪焦小体(Howell,Jollys body)：又称为,染色质小体,。见于脾切除术后、无脾症、脾萎缩、脾功效低下、红白血病和一些贫血患者；在,巨幼细胞贫血,时更易见到。,（2）,卡波环(Cabot ring)：现认为可能是,胞质脂蛋白变性,，常与豪焦小体同时存在。,临床检验医学知识专题讲座,第69页,（3）寄生虫：疟原虫、微丝蚴、杜利什曼原虫感染时可见红细胞质内对应病原体。,临床检验医学知识专题讲座,第70页,