临床输血和检验专家讲座.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,临床输血与检验,临床输血与检验,试验指导,临床输血和检验,第1页,一、RBCABO血型判定,二、RBCRh血型判定,主 要 内 容,试验一、RBC血型判定（一）,ABO血型判定（一）,临床输血和检验,第2页,一、ABO血型判定（一）,（一）待检血浆和待检5%RBC 悬液配制,两人一组,1.待检血浆制备（,反定型用,）,（1）放血：选择,血多未溶血贮血管，剪两端，将血,于,小试管中，编号。,（2）离心：rpm 3min。,（3）吸收血浆：塑料滴管、滴管保留。,2.5%RBC NS悬液制备（,正型用,）,（1）洗涤RBC：在上（3）RBC试管中加等V NS，混匀。,（2）离心：rpm 3min。,（3）配制5%RBC悬液：滴,1,滴RBC于洁净小试管底部,（,悬空,），加NS,14,滴（,滴管放在试管中,），混匀。,临床输血和检验,第3页,（二）RBO ABO判定（,试管法：正定型,）,【试剂】标准抗A、抗B标准血清（商品）、NS,【操作】,1.标识,2.加已知抗血清,各管加1滴对应抗A、抗B抗体,3.加待检5%RBC,各管分别加1滴待检5%RBC,4.离心,混匀，1000rpm 1min。,5.观察结果,显微镜,6.判断结果,7.汇报结果,ABO血型定型（试管法：反定型）：,【注意】器材、试剂、标本、操作、生物安全,临床输血和检验,第4页,（三）RBC ABO判定（,试管法：反定型,）,试剂：,5%A型和B型RBC,标本：,待测血清或血浆,操作：,标识；加血清；加RBC；混匀；离心；观,察结果、判断结果,临床输血和检验,第5页,试验二、红细胞血型判定（二）,一、RBCABO血型判定（玻片法：正定型）,1.5%RBC 待检RBC悬液制备,加NS 10 滴；采血；挤1滴血；将1滴血放进,装有NS试管中，用NS洗净试管壁上血液,混匀。,2.血型判定,标识；加抗血清；加RBC；混匀；1-5min看结,果,3.注意 防干；显微镜观察结果。,临床输血和检验,第6页,二、RhD抗原判定,1.试剂,单克隆抗D（IgG+IgM）试剂,2.标本,5%待检RBC（,自己,）,3.,方法,盐水介质（试管法）,4.操作程序,取小试管1支；标识；加抗D试剂1滴；加5%RBC,混匀；离心；观察结果；,汇报结果：,Rh血型判定（盐水介质法）D抗原,性。,5.注意,临床输血和检验,第7页,试验汇报,试验一 血型判定（一）,RBC ABO血型判定（一）,一、盐水介质试管法,（正定型）,1、操作程序,标本制备、标识、加抗血清、加待测RBC、混,匀、离心、观察结果、判断结果、汇报结果。,2、结果汇报,RBCABO血型判定（试管法：正定型）：,3、注意事项,临床输血和检验,第8页,二、盐水介质试管法,（反定型）,1、操作程序,标本制备、标识、加抗血清、加待测RBC、混,匀、离心、观察结果、判断结果、汇报结果。,2、结果汇报,RBC ABO血型判定（试管法：反定型）：,3、注意事项,临床输血和检验,第9页,试验二、RBC血型判定（二）,综合,一、RBCABO血型判定（二）玻片法,1、操作程序,2、结果汇报,3、注意事项,二、RBC RhD 抗原判定,1、操作程序,2、结果汇报,3、注意事项,临床输血和检验,第10页,主 要 内 容,一、ABO血型判定,二、Rh血型判定,试验十六 交叉配血,临床输血和检验,第11页,血涂片及WBC分类镜检血涂片移动次序,临床输血和检验,第12页,1.试剂 Wright染色,（1）瑞氏染液：,亚甲蓝+伊红+甲醇,（2）,姬,氏染液,：,2.标本,血涂片,3.染色,（1）放置血片：平放,（2）,加,瑞氏染液：,覆盖血膜染色（量）,（3）固定：,1min。,（4）加姬氏染液：,等量（防干、时间）。,（5）混匀、染色：,5-10min,（6）洗片：,流水冲洗染料,三、血涂片 染色,临床输血和检验,第13页,主 要 内 容,一、血细胞计数板使用（,显微镜,）,二、皮肤采血,三、WBC形态识别（有时间）,试验二,血细胞计数基本技能训练（二）,临床输血和检验,第14页,改良牛鲍血计数板,厚质玻璃板：,分上、下2个计数室，两侧各,有1条支柱，比计数室高0.1mm，盖上盖玻片，,(,24mm20mm0.6mm,)形成0.1mm缝隙。,一、血C计数板使用,临床输血和检验,第15页,计数室结构：,各边长为3 mm，,分为9个大方格，,其中四角大方格,分为16个中方格,（单线）,中央大方格：,用双线分为25个中方格,每个中方格：,又用单线分为16个小方格,临床输血和检验,第16页,血细胞计数板计数标准,临床输血和检验,第17页,血细胞计数板计数标准,一,个,大,方,格,临床输血和检验,第18页,3.操作,（1）采血、取血：,20ul,（2）WBC稀释液稀释：,0.38+20ul,（3）计数板准备：,洁净，放置（板和盖）,（4）充池：,量、气泡、连续充池。,（5）显微镜计数,1）对光、调光：,2）移板,3）,Lp观察：观察计数板结构；找到四角四个大方格中左,上角大方格；WBC形态识别、计数；,Hp观察,（,光线控制：弱！聚光器、光栅、反光镜,）,临床输血和检验,第19页,1.器材,（1）采血器材：,采血针、酒精棉球、干棉球。,（2）WBC计数：,加样器，小试管；Hb吸管；计数板,，显微镜。,（3）WBC分类：,载玻片、盖玻片；显微镜,2.试剂,（1）WBC稀释液,（2）染液,二、,皮肤采血,临床输血和检验,第20页,3.操作,（1）准备：,WBC稀释液（0.38ml）;Hb吸管,载玻片、推玻片；计数板及盖片；显微镜,（2）采血：,1）选择部位：,2）消毒、待干：,3）刺针：,4）檫去第一滴血,5）取血、稀释：,20ul,6）推片、伤口处理：,7）染色：,临床输血和检验,第21页,一、Hb微量吸管使用,为了确保取血准确性，应该注意哪些步骤或问题,二、血涂片制备,（一）操作程序,（二）思索题：,1.影响血涂片制备原因有哪些，是怎样影响？,2.评价一张血涂片制备质量标准有哪些？,三、,血涂片,染色,（一）操作程序,（二）瑞,氏,染色原理是什么？注意问题？,试验一,血细胞计数基本技能训练（一）,实 验 报 告,临床输血和检验,第22页,一、皮肤采血,操作程序（采血、稀释、涂片）：,二、血细胞计数板使用及WBC形态识别,WBC计数充池、WBC识别体会？,试验二,血细胞计数基本技能训练（二）,临床输血和检验,第23页,临床输血和检验,第24页,1.器材,采血器材；WBC计数。,2.试剂,WBC稀释液,3.操作程序,（1）准备、标识：,0.38ml,（2）采血：,选择部位、消毒、刺针、檫血,（3）取血：,20ul,（4）稀释、混匀：,（5）推片：,2-3张；干燥、编号,（6）显微镜计数：,四角4个大方格,计数,（,光线、微调：结构、识别,）,计数完后马上洗板,！,（7）计算,（8）汇报,WBC 计数=7.5,10,9,/L,一、操作程序及结果汇报？二、WBC 计数主要步骤注意事项,试验三 WBC计数,临床输血和检验,第25页,1.器材,采血器材；WBC分类器材。,2.试剂,瑞氏染液、姬氏染液,3.操作程序,（1）制片：,采血、推片、干燥、标识,（2）固定：,（3）染色：,（4）冲洗：,（5）待干：,（6）显微镜检验：,Lp 油镜检验（,光线,次序、,形态,）,（7）汇报,试验四 WBC分类计数,临床输血和检验,第26页,细胞形态显微镜检验重点（,背景细胞,）,胞体：,大小，形态。,C 核：,大小、形态、染色质粗细、染色。,胞浆：,多少、染色,胞浆颗粒：,种类、多少、大小、染色,血涂片及WBC分类镜检血涂片移动次序,临床输血和检验,第27页,分类：,Nsg:3%,Nst:59%,Lym:30%,Mon:4%,Eos:3%,Bas:1%,试验汇报,一、WBC分类操作程序及结果汇报,二、,血涂片检验内容和检验程序？,分类器使用！采血、推片、充池示教！,临床输血和检验,第28页,染色正常时染色效果,临床输血和检验,第29页,LYM：,6-15,um,，圆或卵圆；核圆卵圆，,染色质致密,或深紫色积聚成块,；胞质透明淡蓝，可见核,周围淡染。,小LYM：,胞质少，无颗粒,大LYM：,胞质多，含少许粗大天嗜青颗粒,临床输血和检验,第30页,Mon：,1220um，圆、椭圆或不规则；核多形性、肾形、马,蹄形，常偏位，,常有扭曲、折叠感，,染色质,呈疏松网,状，,着色较浅，轻度聚集；胞质较多，因含大量细小,嗜天青颗粒而染成,细小、尘土样,灰蓝色或,紫红色,可含,少许空泡,。,临床输血和检验,第31页,临床输血和检验,第32页,分类器使用！（,左手,）,Bas Eos,Nsg（中指）Lym（指食）,Nst Mon,采血示教！,临床输血和检验,第33页,血涂片显微镜检验,1.检验内容,（1）血涂片制备及染色情况：全片，Lp,（2）寄生虫检验：,（3）WBC数量预计、形态观察及DC：,（4）RBC数量预计及形态：,（5）PLT数量预计及形态观察,2.检验程序,（1）肉眼观察：血涂片制备情况,（2）显微镜准备,（3）放片：血片体尾交界部位放在视野中央,（4）LP检验：,血涂片制备及染色；寄生虫等,（5）油镜检验：WBC、RBC、PLT；其它,临床输血和检验,第34页,外周血中正常WBC形态,P33,临床输血和检验,第35页,Mon形态,临床输血和检验,第36页,临床输血和检验,第37页,一、RBC计数,1.方法及原理,2.器材,显微镜、计数板、微量吸管等,3.试剂及标本,NS,4.操作程序,（1）采血、取血、稀释、充池：,深,20ul+0.38ml稀释液；,10,l+2mlNS,推片,（,2）计数：,中央大方格内5个中方格（HP）,（3）计算：,RBC/L=N/5251020010,6,/L,=N/10010,12,/L,（4）汇报：,RBC=X.X,10,12,/L,试验五 RBC计数和PLT计数,临床输血和检验,第38页,5.注意事项,（1）稀释液：,等渗、稀释、过滤,（2）混匀：,充分（,方法,）,（3）充池：,均匀，2次RBC数量5%（RV内）,（4）WBC过多,（10010,9,/L）：校正,临床输血和检验,第39页,二、PLT计数,1.方法 2.原理 3.器材 4.试剂及标本,N,4.操作程序,（1）采血：,RBC时一起取血,（2）取血、稀释：,20 ul+0.38ml,（3）混匀、静置：,混匀,1min,，放置待RBC基本破坏,（4）充池：,混匀，充池、静置,10-15min，,（2）计数：,中央大方格内5个中方格（HP）,（,3）计算：,（4）汇报：PLT,=XXX,10,9,/L,临床输血和检验,第40页,5.注意事项,体积小 易黏附 聚集 破坏,（1）器材、试剂洁净：,稀释液需过滤，,器材洁净，,防,止微粒和细菌污染。,（2）采血：,进行末梢采血时，针刺3mm，血流通畅。第,一滴血弃去，,首先采血作PLT计数,。,操作快速，防,止粘附、聚集和破坏。,（3）混匀：,血液加入稀释液内充分混匀预防PLT粘附,和聚集，充池前也需充分混匀，但注意混匀力度,预防破坏血小板或产生气泡。,（4）静置：,充池后需静置,1015min,，使PLT充分下,沉,。,临床输血和检验,第41页,（4）计数：,计数光线,稍暗,，应与小RBC、细胞碎,片、杂质、灰尘及微生物区分。,（5）时间：,在,1h 内,计数完成。,（6）温度：,室温高时注意保持计数池周围湿,度，以免水分蒸发而影响计数结果。,试验汇报,一、RBC计数操作程序及结果汇报,二、PLT计数操作程序及结果汇报,三、PLP计数关键步骤注意事项,临床输血和检验,第42页,试验六 Hb测定,试验汇报,一、Hb测定操作程序（讲完课后写）,临床输血和检验,第43页,临床输血和检验,第44页,1.方法及原理,2.器材,3.试剂及标本,伊红-丙酮,4.操作程序,（1）准备:取小试管2支，0.38ml Eos 稀释液；,Ret染液 1滴,（2）取血、稀释：,20ul+0.38ml；1滴血于染色中,（3）充池计数：,充分混匀,、充池,2个计数池，,共10个大方格（Lp）。30min内计数完,（5）计算：,Eos=N,/,10102010,6,=N,/,5010,9,/L,（6）汇报：,Eos=0.XX 10,9,/L,试验七 嗜酸性粒细胞计数,临床输血和检验,第45页,5.注意事项,（1）1hr内计数（30min内），破坏，难识别。,（2）马上混匀（易聚集），但稀释后不应过分,振摇；稀释液粘稠可适当延长混匀时间。,（3）注意与残留NC区分：不着色或着色浅，颗,粒小。,实 验,七 Eos计数,1.操作程序及结果汇报,2.各步骤注意事项,临床输血和检验,第46页,1.原理 2.器材,缩小视野纸片,3.试剂,10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液,4.操作（,试管法）,1）加染液：,小试管1支，加染液1滴。,2）采血、取血：,加血1滴于试管中，混匀。,4）染色和制片：,室温下放置1520min后，制片,5）计数：,油镜最少检验1000个RBC中Ret数,凡RBC含2个以上深染颗粒即为Ret,6）计算及汇报：,7）注意事项：,试验八 Ret 计数,临床输血和检验,第47页,实 验 报 告,试验八 Ret计数,1.操作程序（试管法）,2.各步骤注意事项,临床输血和检验,第48页,实 验 九血细胞自动分析,（留一张空白）,一血细胞自动分析分组人,二血细胞手工检验训练,计数推片染色分类,计数,计数,EOS计数,实验报告,一血细胞自动分析程序,二血细胞分析质量控制,临床输血和检验,第49页,一、,传统静脉采血,1.,主要器材：,注射器、压脉带、垫枕、消毒棉签,2.,主要试剂：,30mg/L碘酊，75%乙醇，抗凝剂,3.操作,（,1）准备：,1）肝素抗凝试管：,肝素钠，烤干、标识,2）枸橼酸钠试管：,取抗凝剂.,3）采血：选择静脉（肘正中静脉）；扎压脉带、选择进针部,位、消毒；穿刺（,10-20度,）、抽血、松带、出针、止血；,放血、混匀（1.6ml+约2ml）,4.注意,试验十,静脉采血、HCT、ESR检测,临床输血和检验,第50页,临床输血和检验,第51页,二、ESR测定,魏氏法,1.操作,混匀、取血、上架、静置：1h、观察结果、汇报结果,2.注意事项,三、HCT测定,1.操作,混匀、进血、平衡、离心（300rpm 30min）、观察,结果、汇报结果,2.注意事项,临床输血和检验,第52页,温氏管和细长毛细滴管,临床输血和检验,第53页,血细胞比容结果判断,临床输血和检验,第54页,