Box-Behnken设计优化桃红四物丸的醇提工艺.pdf

2 0 2 3年1 0月第3 9卷第5期皖西学院学报J o u r n a l o f W e s t A n h u i U n i v e r s i t yO c t.,2 0 2 3V o l.3 9 N o.5B o x-B e h n k e n设计优化桃红四物丸的醇提工艺汪盈盈1,2,冯学花3,马然然1,2(1.安徽中医药科学院亳州中医药研究所,安徽 亳州 2 3 6 8 0 0;2.亳州职业技术学院,安徽 亳州 2 3 6 8 0 0;3.安徽新华学院,安徽 合肥 2 3 0 0 3 1)摘 要:采用单因素响应面法优化桃红四物丸的醇提工艺,醇提后的干膏得率,H P L C法测定药液中没食子酸、羟基红花黄色素A以及阿魏酸的有效成分含量,将二者综合评分作评价指标。以液料比、提取时间、乙醇浓度进行单因素实验,根据综合评分确定因素水平,用响应面法优选醇工艺。采用紫外分光光度法测定桃红四物丸对羟自由基的清除率。结果显示:液料比6 1,提取时间2小时,提取溶剂(乙醇)浓度为5 0%为最优醇提工艺,主要成分总含量1 1.1 8%,干膏得率4 1.6 2%,综合评分为9 7.9 8%。可作为中药复方桃红四物丸的前期提取方案,为后续工业生产提供参考。关键词:桃红四物丸;响应面法;醇提工艺;高效液相色谱法中图分类号:R 2 8 3 文献标识码:A 文章编号:1 0 0 9-9 7 3 5(2 0 2 3)0 5-0 0 7 9-0 8*收稿日期:2 0 2 3-0 5-1 5基金项目:安徽省教育厅高校科研项目(K J 2 0 2 0 A 1 0 1 7);亳州职业技术学院科研项目(B Y K 2 0 0 9)。作者简介:汪盈盈(1 9 8 5-),女,安徽亳州人,硕士,讲师,副主任药师,研究方向:中药制剂。桃红四物汤是古代活血化瘀的经典名方,最早在 医宗金鉴 记载1(P 4 1 3),2。本方药由桃仁、红花、熟地、当归、芍药、川芎组成,主养血、活血、调经止痛,用于血虚有淤之证,临床应用多见于妇科。现代临床研究表明,桃红四物汤不仅用于治疗妇科疾病,此方中的有效成分没食子酸具有抗炎、抗菌,抗病毒等作用,另外还能抗肿瘤,抑制肥大细胞瘤的转移;羟基红花黄素A是红花里最高效的水溶性成分,它具有抑制血小板凝聚,抗心肌缺血,抗炎,抗肿瘤活性等药理活性;阿魏酸对血小板凝聚、血小板解聚、抗血栓形成有一定的抑制作用3-7。1 实验材料1.1 仪器U 3 0 0 0 H P L C(赛默飞世尔科技有限公司)、R E-5 2 A A 旋转蒸发仪(上海雅荣生物技术有限公司)、HH-S 2数显恒温水浴锅(常州普天仪器制造有限公司)、Z X F D-B 5 0 4 0恒温鼓风干燥箱(上海智城仪器制造有限公司)、S H Z-D(I I I)循环水多用真空泵(巩义市英峪高科仪器厂)、S Q P(1/1 0万)分析天平(赛多利斯科技(北京)有限公司)、电子秤(上海友声衡器有限公司)、K Q-5 0 0 E型超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司)、8 0 0 Y多功能粉碎机(永康市铂欧五金制品有限公司)。1.2 药材实验所用中药材均从安徽新兴中药材饮片有限公司购入,经亳州职业技术学院陈娜副教授鉴定地黄为玄参科植物地黄的干燥块根(批号:2 1 0 8 2 2 0 2)。当归为伞形科植物当归的根及根茎(批号:2 1 1 0 1 5 0 1)。川芎为伞形科植物川芎的干燥根(批号:2 1 0 7 1 5 0 2)。芍药为毛茛科植物白芍的干燥根(批号:2 1 1 0 2 7 0 2)。桃仁为蔷薇科植物桃或山桃的干燥成熟种仁(批号:2 1 0 9 2 5 0 1)。红花为菊科红花属植物红花的干燥管状花(批号:2 1 1 1 2 0 0 2)8。1.3 试剂无水乙醇(分析纯,天津基准化学试剂有限公司)、甲醇(色谱纯,天津市大茂化学试剂厂)、乙腈(色谱纯,天津一方科技有限公司)、磷酸、超纯水。1.4 对照品没食子酸(批号:1 1 0 8 3 1-2 0 1 9 0 6,含量:9 1.5%)、羟基红花黄色素A(批号:1 1 1 6 3 7-2 0 1 2 0 7,含量:9 2.5%)、阿 魏 酸(批 号:1 1 0 7 7 3-2 0 1 9 1 5,含 量:9 9.4%)。均来源于中国药品生物制品检定所。2 方法2.1 桃红四物汤中有效成分的含量测定2.1.1 色谱条件 色谱柱(4.6 2 5 0毫米,5微米);流动相使用乙腈(A通道)和0.0 5%磷酸水溶液(B通道);采用梯度洗脱,梯度洗脱系统如表1;流速设置为1.0 m L/m i n;检测波长:保留时间0 1 1分钟时为2 9 0 n m,1 1 2 7分钟为3 2 0 n m,2 7 4 5分钟为2 3 0 n m,4 5 8 0分钟为2 9 0 n m;柱温设置为4 0;进样量:混合对照品2 0 l,供试品2 0 l9。表1 梯度洗脱系统时间/m i n乙腈/%0.0 5%磷酸水溶液/%0 759 57 2 05 1 39 5 8 72 0 2 81 3 1 58 7 8 52 8 4 51 5 1 78 5 8 34 5 6 01 7 3 38 3 6 76 0 7 03 3 9 56 7 57 0 8 09 5 55 9 52.1.2 供试品溶液的制备精密称取川芎6克、红花6克、桃仁9克、当归9克,置圆底烧瓶中,加6倍量5 0%乙醇,旋转蒸发仪加热回流提取(1次)2小时后,过滤,得提取药液。精密量取5 m L提取液放入已恒重蒸发皿中,水浴蒸干得流浸膏,置烘箱中得干膏,取适量,用5 0%甲醇溶解,转移至1 0 m L容量瓶中,5 0%甲醇定容,摇匀,超声,过滤后为样品溶液。2.1.3 混合对照品溶液的制备精密称取适量的阿魏酸、羟基红花黄色素 A、没食子酸对照品粉末分别置1 0 m L容量瓶中,5 0%甲醇溶解定容至刻度,制备成对照品溶液。将上述几种对照品溶液分别精密量取,按比例混合、滤过,即得混合对照品溶液。2.1.4 标准曲线精密量取混合对照品溶液0.5 m L,1.0 m L,A图:混合对照品溶液H P L C图谱 B图:混合样品溶液H P L C图谱图1 H P L C色谱图2.0 m L,3.0 m L,4.0 m L,5.0 m L,分别置1 0 m L容量瓶中,5 0%的甲醇定容,摇匀,过滤,按2.1.1项下色谱条件进样,以溶液的浓度为X轴,有效成分的峰面积为Y轴,建立回归方程,没食子酸的回归方程为:Y=0.1 4 3 9 X+0.9 0 0 3(r=0.9 9 9 7),羟基红花黄色素A的回归方程为:Y=0.1 2 2 4 7 8 X+0.0 2 5 5(r=0.9 9 9 8),阿魏酸的 回 归 方 程 为:Y=0.2 1 4 9 X+0.0 5 8 9(r=0.9 9 9 9)。没食子酸在0.0 2 4 50.2 4 5 m g/m L、羟基红花黄色素A在0.0 2 20.2 2 m g/m L、阿魏酸在0.0 2 4 5 0.2 4 5 m g/m L范围内,线性关系良好1 0-1 1。2.1.5 精密度试验精密量取混合对照品溶液,依照2.1.1色谱条件连续平行进样。测得没食子酸、羟基红花黄色素A、阿魏酸的峰面积,三种成分的R S D(相对标准偏差)值分别为0.8 3%、0.9 4%、0.6 7%,结果表明三个成分峰面积的R S D值均小于2.0%,说明该仪器的精密度较好。结果见表2。2.1.6 稳定性试验精密量取混合供试品溶液,按2.1.1色谱条件,室温条件下在0、2、4、8、1 2、2 4小时的分别进样,测定没食子酸,羟基红花黄色素A,阿魏酸的峰面积,R S D值分别为0.6 5%,0.9 3%,0.5 3%,对结果进行分析,三者R S D值相差不大且在2%以下,表明该样品在2 4小时内具有较好的稳定性。结果见表3。2.1.7 重复性试验精密量取混合供试品溶液,按2.1.1色谱条件进行样品测定。得到没食子酸、羟基红花黄色素A、阿魏酸的峰面积,其R S D值分别为1.0 6%,1.1 0%,0.6 6%,结果表明本方法有较好的准确性。结果见表4。08皖西学院学报第3 9卷表2 精密度试验序列123456平均蜂面积R S D(%)没食子酸6 9.2 6 86 9.2 4 16 8.1 4 66 8.3 1 26 7.9 1 06 8.7 0 06 8.5 9 80.8 3羟基红花黄色素A5 6.3 3 15 4.9 4 25 6.0 4 95 5.6 2 85 6.1 9 65 5.4 6 35 5.7 6 80.9 4阿魏酸1 0 5.0 7 91 0 4.1 9 01 0 3.4 7 11 0 5.2 7 61 0 4.7 4 31 0 5.1 3 81 0 4.6 5 00.6 7表3 稳定性试验序列123456平均蜂面积R S D(%)没食子酸1 8 7.2 5 11 8 8.3 2 71 8 7.1 3 61 8 6.4 6 81 8 4.9 9 21 8 5.5 3 41 8 6.6 1 80.6 5羟基红花黄色素A1 7 4.5 7 61 7 3.7 4 31 7 5.9 4 61 7 2.3 1 51 7 3.0 9 41 7 1.4 2 91 7 3.5 1 70.9 3阿魏酸3 4 1.2 3 43 3 9.4 9 33 4 1.4 9 63 4 0.3 8 23 3 8.5 4 73 4 3.7 3 63 4 0.8 1 50.5 3表4 重复性试验序列123456平均蜂面积R S D(%)没食子酸1 8 8.6 4 61 8 9.9 2 21 8 7.8 9 91 8 6.7 1 11 8 4.2 9 41 8 6.4 3 91 8 7.3 0 01.0 6羟基红花黄色素A1 7 5.2 2 71 7 1.3 6 81 7 4.1 0 81 7 0.9 7 91 7 2.2 5 11 7 0.4 2 91 7 2.3 9 41.1 0阿魏酸3 4 1.0 6 73 4 2.6 0 43 4 3.5 7 03 4 0.7 1 43 3 8.2 4 73 3 8.0 2 13 4 0.7 0 40.6 62.1.8 加样回收率考察取适量没食子酸、羟基红花黄色素A、阿魏酸对照品分别加入已知含量的6份样品溶液中,再按照2.1.1色谱条件进样,计算平均回收率及其R S D,结果表明:没食子酸平均回收率为9 8.6 9%,R S D=1.1 9%;羟基红花黄色素A平均回收率为9 9.1 5%,R S D=1.3 2%;阿魏酸平均回收率为9 8.0 1%,R S D=1.5 3%,说明本品的加样回收率符合要求。注:样品的加样回收率=(加对照品后测得含量-已知样品的含量)/加入对照品的量 1 0 0%。结果见表5。表5 加样回收率考察待测成分取样量/g样品含量/m g加入量/m g测得量/m g回收率/%平均回收率/%R S D(%)没食子酸0.6 3 1 51.3 3 4 51.9 5 6 03.2 4 4 19 7.6 30.6 4 3 01.3 4 4 01.9 0 6 33.2 5 6 21 0 0.3 10.6 8 7 21.3 2 9 22.2 5 8 23.5 6 1 99 8.8 70.6 3 6 91.3 2 0 82.1 3 5 93.4 5 3 39 9.8 40.6 4 1 21.3 0 3 71.8 6 9 53.1 3 0 89 7.7 30.6 4 9 51.3 1 8 91.9 2 6 33.2 0 1 99 7.7 59 8.6 91.1 9羟基红花黄色素A0.6 3 1 51.3 5 9 21.9 8 8 33.3 1 6 79 8.4 50.6 4 3 01.3 5 6 81.9 6 3 23.3 1 7 89 9.8 90.6 8 7 21.3 5 7 72.3 8 1 33.7 2 4 09 9.3 70.6 3 6 91.3 6 2 61.9 5 8 83.2 7 8 59 7.8 10.6 4 1 21.3 6 8 21.9 7 5 63.3 6 9 11 0 1.2 80.6 4 9 51.3 5 2 12.5 6 3 73.8 6 6 89 8.0 99 9.1 51.3 2阿魏酸0.6 3 1 51.5 8 7 32.5 9 0 44.1 3 5 29 8.3 60.6 4 3 01.5 8 1 91.9 8 1 83.5 0 8 49 7.2 10.6 8 7 21.5 7 9 21.9 8 7 23.5 5 6 99 9.5 20.6 3 6 91.5 8 6 52.4 0 5 13.9 1 1 89 6.6 80.6 4 1 21.5 7 3 21.8 9 5 53.4 6 7 89 9.9 50.6 4 9 51.5 8 1 21.9 3 6 43.4 4 7 19 6.3 69 8.0 11.5 318第5期汪盈盈,等:B o x-B e h n k e n设计优化桃红四物丸的醇提工艺2.2 醇提工艺单因素试验在其他工艺参数不变的条件下,分别讨论不同液料比(4、6、8和1 0倍)、提取时间(1、1.5、2和2.5 h)、提取溶剂的浓度(3 0、5 0、7 0和9 0%)对桃红四物汤综合评分的影响,见表6单因素变化条件,为响应面实验因素水平的选择提供依据。注:综合评分=(有效成分总含量/最大总含量)7 0%+(干膏得率/最大干膏得率)3 0%。干膏得率的计算:记处方的药材重量为m s,经过恒重的蒸发皿重量为m 1,干燥后的浸出物和蒸发皿重量之和为m 2,精密加入的乙醇量为V 1,精密量取的上清液体积为V 2,按照公式醇溶性浸出物(%)=(m 2-m 1)/m s V 2/V 1 1 0 0%,计算可得。2.2.1 液料比对综合评分的影响根据表6的单因素变化情况进行实验,以综合评分为依据,桃红四物汤提取液的综合评分随着液料比的不同呈不规则曲线变化,见图2单因素试验结果,在液料比为6倍时,综合评分达到最高,8倍时较高,虽然4倍和1 0倍时综合评分相近,但考虑到液料比过大会给后续的提取液蒸发增加难度,故确定因素水平为4、6和8倍。2.2.2 提取时间对综合评分的影响根据表6的单因素变化情况进行实验,以综合评分为依据,见图2单因素试验结果,可知提取时间为1.5 h、2 h和2.5 h时综合评分较高,且在2 h时达到图2 单因素试验结果最高,故确定因素水平为1.5 h、2 h和2.5 h。2.2.3 提取溶剂(乙醇)的浓度对综合评分的影响根据表6的单因素变化情况进行实验,以综合评分为依据,见图2单因素试验结果,可知乙醇浓度为3 0%、5 0%和7 0%时综合评分最高,且在5 0%时达到最高啊,故确定因素水平为3 0%、5 0%和7 0%。表6 单因素变化条件因素单因素变化条件其他固定条件液料比/(倍)4 1 6 1 8 1 1 0 1提取1 h,7 0%乙醇提取时间/(h)1 1.5 2 2.5液料比1 0 1,7 0%乙醇乙醇浓度/(%)3 0 5 0 7 0 9 0液料比1 0 1,提取1 h2.3 B o x-B e h n k e n设计优化醇提工艺2.3.1 B o x-B e h n k e n试验设计与结果通过单因素试验,得到了各因素的水平值,并将液料比(A)、提取时间(B)、提取溶剂浓度(C)作为自变量,1次作为总提取次数,以三种有效成分的含量和干膏得率的综合评分(R)为响应值,采用 D e s i g n E x p e r t软件1 2.0版本进行3因素3水平1 7个试验点的B o x-B e h n k e n设计,得到响应面分析模型,对其醇提工艺进行优化,确定最佳的工艺条件。因素与水平见表7,醇提工艺响应面实验设计与结果见表8。28皖西学院学报第3 9卷表7 实验因素和水平水平A液料比/m LB提取时间/hC乙醇浓度/%-14 11.53 006 125 018 12.57 0表8 提取工艺响应面实验设计与结果编号液料比(A/倍)提取时间(B/h)乙醇浓度(C/%)没食子酸含量(%)羟基红花黄色素A含量(%)阿魏酸含量(%)总含量(%)干膏得率(%)综合评分(%)6 125 03.1 43.1 83.3 61 0.9 94 0.2 19 5.8 48 123 01.7 23.5 63.0 39.7 63 3.8 18 3.8 46 125 03.1 82.9 53.7 91 1.1 84 1.6 29 7.9 86 12.57 03.4 53.4 94.0 11 0.4 73 7.6 49 0.8 68 11.55 02.7 42.8 92.8 29.2 83 8.2 78 3.8 36 125 03.0 43.9 22.4 51 0.9 44 4.6 39 8.5 04 12.55 03.3 83.2 63.7 09.9 73 9.9 38 9.2 68 12.55 02.9 73.7 23.3 19.7 13 7.8 98 6.2 74 123 03.2 13.0 93.3 81 0.7 13 6.7 99 1.7 96 125 03.0 92.9 23.4 61 0.8 84 3.4 29 7.3 16 12.53 03.5 33.9 63.8 99.9 03 6.9 48 6.8 26 11.53 03.7 63.8 24.0 81 0.7 23 8.5 69 3.0 44 127 03.2 44.0 33.9 71 0.2 73 4.4 38 7.4 56 11.57 02.0 73.9 43.9 88.5 44 1.0 58 1.0 64 11.55 03.5 83.9 23.8 79.9 63 6.9 48 7.1 98 127 03.6 23.9 23.6 99.3 33 4.8 68 1.8 56 125 03.1 33.2 63.7 61 1.0 54 3.1 49 8.1 82.3.2 数据拟合及方差分析通过 D e s i g n E x p e r t 1 2.0软件对表8的数据进行回归分析,以三因素综合评分进行响应面分析,对各个数据进行拟合分析,得出多元二次回归方程:Y=9 7.5 6-2.4 9 A+1.0 1 B-1.7 8 C+0.0 9 2 5 A B+0.5 8 7 5 A C+4.0 0 B C-6.3 2 A 2-4.6 1 B 2-5.0 1 C 2。方差分析结果见表9。表9 方差分析结果方差来源平均和自由度均方FP显著性模型5 5 3.4 696 1.5 03 7.8 4 0.0 0 0 1显著A-液料比4 9.5 014 9.5 03 0.4 60.0 0 0 9B-提取时间8.1 818.1 85.0 30.0 5 9 8C-乙醇浓度2 5.4 512 5.4 51 5.6 60.0 0 5 5A B0.0 3 4 210.0 3 4 20.0 2 1 10.8 8 8 7A C1.3 811.3 80.8 4 9 40.3 8 7 4B C6 4.1 616 4.1 63 9.4 70.0 0 0 4A 21 6 8.1 011 6 8.1 01 0 3.4 2 0.0 0 0 1B 28 9.3 318 9.3 35 4.9 60.0 0 0 1C 21 0 5.7 311 0 5.7 36 5.0 5 0.0 0 0 1残差1 1.3 871.6 3失拟项6.9 132.3 02.0 60.2 4 7 7不显著纯误差4.4 741.1 2总误差5 6 4.8 31 66 1.5 038第5期汪盈盈,等:B o x-B e h n k e n设计优化桃红四物丸的醇提工艺 根据表9可以看出,该回归模型P0.0 0 0 1,显示了该模型的极显著性(P 0.0 1极其显著,P 0.0 5,无显著性,说明该模型的拟合度和可信度都很高,且试验误差也比较小。R 2=0.9 7 9 9,说明实验结果与预测值较吻合,该模型可以应用于乙醇提取工艺的综合评分预测,为优化乙醇提取工艺提工依据。从表9的显著性检验发现:单因素A、C均显著性(P0.0 5),交互因素B C极其显著(P=0.0 0 0 40.0 5),且二次项的A 2、B 2、C 2均有显著性(P乙醇浓度提取时间,交互因素对综合评分的影响大小顺序为:B CA CA B。2.3.3 响应面图谱分析根据交互因素对综合评分的影响,通过响应面分析软件得到响应面3 D曲线图谱和等高线图,从响应面图谱上可以更直观地看到各因素对综合评分的影响程度及变化趋势。曲面倾斜的程度反映了交互因素对综合评分影响的大小,等高线的密度则反映了单因素对综合评分的影响。由图3响应面图谱可以看出,提取时间和乙醇浓度两因素的交互作用曲面是最陡峭的,且等高线呈近椭圆形,说明对综合评分的影响最大;而液料比和乙醇浓度对综合评分的交互影响不大,其等高线图近似于圆形;液料比和提取时间的交互影响最小,其等高线图与圆周曲线相近。然后,各个因素对综合评分的交互作用有显著的排序:B CA CA B,与表9的方差分析结果一致。再根据软件计算、综合评分、操作方便确定最优方案5。通过使用响应面软件预测得到桃红四物丸的最优醇提工艺为:液料比5.5 9倍,提取时间2.0 1小时,乙醇浓度4 6.4%,预测的综合评分为9 7.9 9%。考虑到生产过程中的实施可行性,需要将预测的最优工艺参数调整为:液料比6倍,提取时间2小时,乙醇浓度5 0%。3 验证实验分别按处方称取三份药材,在上述条件下进行三次平行试验,验证结果见表1 0。所测得的综合评分平均值为9 8.0 1%,R S D=0.6 6%,且三次平行试验的综合评分都接近于响应面法的预测值,由此证明调整后的醇提工艺是稳定的、可行的,可作为桃红四物汤的最优醇提工艺。4 讨论本文采用含量相对较高、分离度较好的川芎中的没食子酸、川芎和当归中阿魏酸、红花中羟基红花黄素 A的含量作为评价指标,H P L C中没食子酸的测定波长为2 7 1 n m,保持时间约7分钟,而对羟基红花黄素 A的测定波长为3 2 0 n m、约2 8 m i n、阿魏酸为2 3 0 n m、约4 1分钟9。试验选用0.0 5%的乙腈-0.0 5%的磷酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱,可以延长色谱峰的保留时间,提高分离度,稳定基线,检测出更加适合的峰高1 2。为了避免在配制溶液中使用的5 0%甲醇影响后续测定的出峰和保留时间,采用空白对照品进样。实验采用响应面法优化,求得实验中最佳的工艺参数。传统的正交试验方法精度低、应用范围小,而响应面法则可以通过建立回归方程、响应曲面模型、绘制等高线来实现对各个因素水平的响应,从而实现快速、方便地得到各因素水平的响应值,并且可以将最佳工艺参数确定时的随机误差考虑在内。这种方法具有试验次数少、周期短、可以对试验进行连续分析的优点,而且所获得的二次多项回归方程可以简化后续的计算1 3-1 5。本研究中确定了桃红四物丸的最优提取工艺为加6倍量5 0%乙醇,提取2小时,提取液中没食子酸、阿魏酸、红花中羟基红花黄素 A的含量较高,且实测值与预测值相符,表明B o x-B e h n k e n响应面法优选得到的提取工艺可靠,具有一定的实际应用价值,可为桃红四物丸的后续研究提供参考。表1 0 验证结果序列没食子酸含量/%羟基红花黄色素A含量/%阿魏酸含量/%总含量/%干膏得率/%综合评分/%R S D(%)13.1 63.9 64.0 91 1.2 14 1.6 49 7.9 623.0 43.8 43.9 11 0.7 94 4.6 89 8.9 533.0 63.9 53.9 81 0.9 94 2.8 39 7.3 80.6 648皖西学院学报第3 9卷图3 响应面图谱58第5期汪盈盈,等:B o x-B e h n k e n设计优化桃红四物丸的醇提工艺参考文献:1 彭怀仁.中医方剂大辞典M.北京:人民卫生出版社,1 9 9 4.2 刘立,段金廒,宿树兰,等.用于妇科血瘀证痛经的四物汤类方 桃红四物汤的研究进展J.中国中药杂志,2 0 1 5,4 0(5):8 1 4-8 2 1.3 霍学慧.四物汤及其类方的研究D.济南:山东中医药大学(硕士学位论文),2 0 0 4.4 李双双,郭春燕.桃红四物汤的化学成分及药理作用研究进展J.神经药理学报,2 0 1 6,6(4):4 2-4 3.5 李翊,彭代银.桃红四物汤的药理学研究进展J.安徽医药,2 0 1 1,1 5(5):5 2 9-5 3 1.6 贺晓菊.桃红四物汤对月经病血瘀证临床效果观察J.深圳中西医结合杂志,2 0 1 6,2 6(1 6):5 2-5 3.7 储霞,董怡,苗芙.桃红四物汤在临床应用中的研究进展J.当代护士,2 0 1 6(5):3-4.8 王雅丽,吴德玲,张伟,等.不同提取方法的桃红四物汤特征图谱研究J.云南中医药学院学报,2 0 1 7,4 0(3):7 3-7 7,9 3.9 周光姣,黄翔.B o x-B e h n k e n设计优选复方五花颗粒的提取工艺J.西南民族大学学报(自然科学版),2 0 1 8,4 4(6):5 6 2-5 6 3.1 0 梁芳,黄艳红,龚志强,等.单因素试验结合B o x-B e h n k e n设计-响应面法优化舒肝颗粒(广西方)的醇提工艺J.中国民族民间医药,2 0 2 1,3 0(1 3):4 0-4 1.1 1 王辰雯,彭代银.超高压液相色谱法同时测定桃红四物汤中四种主要有效成分的含量J.安徽医药,2 0 1 7,1 7(7):1 1 1 0-1 1 1 2.1 2 张丹,王昌利,卜雕雕,等.B o x-B e h n k e n响应面优化蒲公英酚酸提取工艺J.中南药学,2 0 1 9,1 7(5):6 6 7-6 7 1.1 3 张红梅,王长虹,王峥涛.正交试验法优化梳毛吴茱萸提取工艺J.中草药,2 0 1 0,4 2(1 0):2 0 0 1-2 0 0 4.1 4 赵立春,杨更亮.响应曲面法在中药有效成分提取中的应用研究J.中药与临床,2 0 1 3(6):6 2-6 4.1 5 王永菲,王成国.响应面法的理论与应用J.中央民族大学学报(自然科学报),2 0 0 5(3):2 3 6-2 4 0.B o x-B e h n k e n D e s i g n s f o r t h e O p t i m i z a t i o n o f t h e E t h a n o l E x t r a c t i o n P r o c e s s f o r T a o h o n g S i w u P i l l sWA N G Y i n g y i n g1,2,F E N G X u e h u a3,MA R a n r a n1,2(1.B o z h o u C h i n e s e M e d i c i n e I n s t i t u t e,A n h u i A c a d e m y o f C h i n e s e M e d i c i n e,B o z h o u 2 3 6 8 0 0,C h i n a;2.B o z h o u V o c a t i o n a l a n d T e c h n i c a l C o l l e g e,B o z h o u 2 3 6 8 0 0,C h i n a;3.A n h u i X i n h u a U n i v e r s i t y,H e f e i 2 3 0 0 3 1,C h i n a)A b s t r a c t:T o o p t i m i z e t h e a l c o h o l e x t r a c t i o n p r o c e s s o f T a o h o n g S i w u P i l l s b y s i n g l e f a c t o r r e s p o n s e s u r f a c e m e t h o d o l o g y.T h e c o n t e n t o f g a l l i c a c i d,h y d r o x y s a f f l o w e r y e l l o w A a n d f e r u l i c a c i d i n t h e l i q u i d m e d i c i n e w a s d e t e r m i n e d b y H P L C a f t e r t h e e x t r a c t i o n o f d r y e x t r a c t w i t h a l c o h o l,a n d t h e i r c o m p r e h e n s i v e s c o r e w a s u s e d a s t h e e v a l u a t i o n i n d e x.T h e s i n g l e-f a c t o r e x p e r i m e n t w a s c a r r i e d o u t w i t h l i q u i d-t o-m a t e r i a l r a t i o,e x t r a c t i o n t i m e a n d e t h a n o l c o n c e n t r a t i o n,a n d t h e f a c t o r l e v e l w a s d e t e r m i n e d a c c o r d i n g t o t h e c o m p r e h e n s i v e s c o r e,a n d t h e a l c o h o l p r o c e s s w a s o p t i m i z e d b y r e s p o n s e s u r f a c e m e t h o d o l o g y.T h e s c a v e n g i n g r a t e o f T a o h o n g S i w u P i l l o n h y d r o x y l f r e e r a d i c a l s w a s d e t e r m i n e d b y u l t r a v i o l e t s p e c t r o p h o t o m e t r y.T h e r a t i o o f l i q u i d t o m a t e r i a l w a s 6 1,t h e e x t r a c t i o n t i m e w a s 2 h o u r s,t h e c o n c e n t r a t i o n o f e x t r a c t i o n s o l v e n t(e t h a n o l)w a s 5 0%,t h e t o t a l c o n t e n t o f m a i n c o m p o n e n t s w a s 1 1.1 8%,t h e y i e l d o f d r y e x t r a c t w a s 4 1.6 2%,a n d t h e c o m p r e h e n s i v e s c o r e w a s 9 7.9 8%.I t c a n b e u s e d a s a p r e l i m i n a r y e x t r a c t i o n p l a n f o r t h e t r a d i t i o n a l C h i n e s e m e d i c i n e c o m p o u n d T a o h o n g S i w u W a n.P r o v i d e r e f e r e n c e f o r s u b s e q u e n t i n d u s t r i a l p r o d u c t i o n.K e y w o r d s:T a o h o n g S i w u P i l l;r e s p o n s e s u r f a c e m e t h o d;a l c o h o l e x t r a c t i o n p r o c e s s68皖西学院学报第3 9卷