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实验七、霉菌的形态观察
09级生科一班
安明玉(200900140001)
同组者:陈汶灿、陈肖然、程彬、高琳璐、秦瑶
一、实验原理
1.学习并掌握霉菌形态观察法;
2.了解四类霉菌的基本形态。
二、实验原理
霉菌可产生复杂分枝的菌丝体,分基生菌丝和气生菌丝,气生菌丝生长到一定阶段后分化产生繁殖菌丝,由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌菌丝比较粗大(菌丝和孢子的直径达到3~10μm),通常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍,因而可用低倍、高倍镜观察。霉菌菌丝细胞容易收缩变形,孢子容易飞扬,在制备霉菌标本时,常用乳酸石炭酸溶液作为介质,具有不使细胞变形,可杀菌防腐,不易干燥,能保持较长时间等优点。若加入棉蓝,又具有一定的染色效果。
霉菌的有些结构在制片过程中易被破坏,影响观察,可采用载片培养法。此法便于直接在显微镜下观察,尤其适用于根霉的假根、曲霉的足细胞及分生孢子链等结构的着生和生长情况的观察。并且还可以在同一标本上观察到微生物发育的不同阶段的形态。
霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)其孢子的形态特征是分类的重要依据。例如:青霉的繁殖菌丝无顶囊,经多次分枝,产生几轮对称或不对称的小梗,小梗上着生成串的青色分生孢子,的孢子囊形如“扫帚”。而曲霉的分生孢子梗顶端膨大成顶囊,成球形。
可以直接挑取生长在平板中的霉菌菌体制成水封片观察。
三、实验材料
1.菌种
根霉(Rhizopus)的斜面培养物,
毛霉(Mucor)的斜面培养物,
曲霉(Aspergillus)的斜面培养物,
青霉(Penicillium)的斜面培养物;
2.实验试剂
马铃薯培养基(PDA)(200mL),甘油,二甲苯,香柏油,95%乙醇,蒸馏水;
3.实验器材
烧杯,玻璃棒,电磁炉,电子天平,称量纸,接种针,三角瓶,U型管,滴管(1mL),解剖刀,滤纸,培养皿,盖玻片,镊子,酒精灯,显微镜,擦镜纸,双层瓶,载玻片。
四、实验操作
小室培养法
1.灭菌
a)如附录所示配制PDA培养基及甘油溶液;
b)将培养基、甘油溶液及所需实验器材高温灭菌约30min。
2.琼脂薄片制作
a)将U形管置于培养皿中,再将载玻片置于U形管上;
b)用记号笔在培养皿底部外侧画线将其划分为若干1cm×1cm小格;
c)点燃酒精灯,往培养皿中倒入少量培养基,培养基厚度要尽量薄;
d)待培养基凝固后,用解剖刀沿培养皿底部画线将培养基切成小块;
e)将切好的培养基小块置于培养皿中的载玻片上,每片上放两小块。
3.接种
a)点燃酒精灯,在酒精灯火焰上烧接种针杀菌,冷却后,从斜面上蘸取少量霉菌涂在培养基小块边缘,盖上盖玻片,在培养皿侧面贴标签标注菌种,每个菌种接种四个培养基小块;
b)滴加2~3滴甘油于培养皿中的滤纸上以保持培养皿中环境的湿润。
4.恒温培养
将接种好的培养皿置于28℃的恒温箱中恒温7天。
5.镜检
在显微镜下观察四类霉菌的形态特征。
五、实验结果
1.霉菌形态观察
图1 根霉的形态观察(10×40)
图2 毛霉的形态观察(a,10×40)
图2 毛霉的形态观察(b,10×40)
图3 曲霉的形态观察(a,10×40)
图3 曲霉的形态观察(b,10×40)
图4 青霉的形态观察(10×40)
2.霉菌形态特征列表
菌种
菌丝有无隔
菌丝特点
有无假根
孢子囊、孢囊孢子的
形态特征
根霉(Rhizopus)
无
从孢子梗基部发出匍匐菌丝
有
假根处向上丛生直立、不分枝的孢囊梗,顶端膨大形成圆形的孢子囊
毛霉
(Mucor)
无
从孢子梗基部发出匍匐菌丝
有
菌丝体上直接生出孢囊梗,各分枝顶端着生球形孢子囊
曲霉(Aspergillus)
有
菌丝体产生大量的分生孢子梗
无
孢囊梗基部有足细胞。分生孢囊梗顶端膨大成,孢囊球形,其表面长满一层或两层辐射状小梗
青霉(Penicillium)
有
营养菌丝无色或淡色
无
分生孢子梗亦有横隔,基部无足细胞。孢子梗顶端不形成膨大的顶囊,而是产生帚状体
六、思考
主要根据那些形态特征来区分上述四种霉菌?
答:根霉有匍匐菌丝和假根;
毛霉菌丝体上直接生出单生、总状分枝或假轴状分枝的孢囊梗,各分枝顶端着生球形孢子囊;
曲霉分生孢子梗生长在足细胞上,并通过足细胞与营养菌丝相连;
青霉的分枝成帚状的分生孢子从菌丝体伸向空中,各顶端的小梗产生链状的分生孢子。
七、实验小结
本次实验中了解并掌握了一种新的实验方法,即小室培养法。通过本方法可以更清晰完整地观察到霉菌各部分的形态特征,但实验操作中培养基注入培养皿的量不容易掌握,且接种的稠密程度也会影响霉菌的观察。
附录
马铃薯培养基(PDA)的配制:
马铃薯 40g
蔗糖 4g
琼脂 4g
水 200ml
PH 自然
马铃薯去皮,切成块煮沸半小时,然后用纱布过滤,再加糖和琼脂,溶化后补足至200ml,121℃灭菌20min。
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