霉菌的观察.doc

实验七、霉菌的形态观察
09级生科一班
安明玉（200900140001）
同组者：陈汶灿、陈肖然、程彬、高琳璐、秦瑶

一、实验原理
1.学习并掌握霉菌形态观察法；
2.了解四类霉菌的基本形态。

二、实验原理
霉菌可产生复杂分枝的菌丝体，分基生菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段后分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。
霉菌菌丝比较粗大（菌丝和孢子的直径达到3~10μm），通常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因而可用低倍、高倍镜观察。霉菌菌丝细胞容易收缩变形，孢子容易飞扬，在制备霉菌标本时，常用乳酸石炭酸溶液作为介质，具有不使细胞变形，可杀菌防腐，不易干燥，能保持较长时间等优点。若加入棉蓝，又具有一定的染色效果。
霉菌的有些结构在制片过程中易被破坏，影响观察，可采用载片培养法。此法便于直接在显微镜下观察，尤其适用于根霉的假根、曲霉的足细胞及分生孢子链等结构的着生和生长情况的观察。并且还可以在同一标本上观察到微生物发育的不同阶段的形态。
霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）其孢子的形态特征是分类的重要依据。例如：青霉的繁殖菌丝无顶囊，经多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，小梗上着生成串的青色分生孢子，的孢子囊形如“扫帚”。而曲霉的分生孢子梗顶端膨大成顶囊，成球形。
　　可以直接挑取生长在平板中的霉菌菌体制成水封片观察。

三、实验材料

1.菌种
根霉（Rhizopus）的斜面培养物，
毛霉（Mucor）的斜面培养物，
曲霉（Aspergillus）的斜面培养物，
青霉（Penicillium）的斜面培养物；

2.实验试剂
马铃薯培养基（PDA）（200mL），甘油，二甲苯，香柏油，95%乙醇，蒸馏水；

3.实验器材
烧杯，玻璃棒，电磁炉，电子天平，称量纸，接种针，三角瓶，U型管，滴管（1mL），解剖刀，滤纸，培养皿，盖玻片，镊子，酒精灯，显微镜，擦镜纸，双层瓶，载玻片。

四、实验操作

小室培养法

1.灭菌
a）如附录所示配制PDA培养基及甘油溶液；
b）将培养基、甘油溶液及所需实验器材高温灭菌约30min。

2.琼脂薄片制作
a）将U形管置于培养皿中，再将载玻片置于U形管上；
b）用记号笔在培养皿底部外侧画线将其划分为若干1cm×1cm小格；
c）点燃酒精灯，往培养皿中倒入少量培养基，培养基厚度要尽量薄；
d）待培养基凝固后，用解剖刀沿培养皿底部画线将培养基切成小块；
e）将切好的培养基小块置于培养皿中的载玻片上，每片上放两小块。

3.接种
a）点燃酒精灯，在酒精灯火焰上烧接种针杀菌，冷却后，从斜面上蘸取少量霉菌涂在培养基小块边缘，盖上盖玻片，在培养皿侧面贴标签标注菌种，每个菌种接种四个培养基小块；
b）滴加2～3滴甘油于培养皿中的滤纸上以保持培养皿中环境的湿润。

4.恒温培养
将接种好的培养皿置于28℃的恒温箱中恒温7天。

5.镜检
在显微镜下观察四类霉菌的形态特征。

五、实验结果
1．霉菌形态观察

图1 根霉的形态观察（10×40）

图2 毛霉的形态观察（a，10×40）

图2 毛霉的形态观察（b，10×40）

图3 曲霉的形态观察（a，10×40）

图3 曲霉的形态观察（b，10×40）

图4 青霉的形态观察（10×40）

2．霉菌形态特征列表
菌种
菌丝有无隔
菌丝特点
有无假根
孢子囊、孢囊孢子的
形态特征
根霉（Rhizopus）
无
从孢子梗基部发出匍匐菌丝
有
假根处向上丛生直立、不分枝的孢囊梗，顶端膨大形成圆形的孢子囊
毛霉
（Mucor）
无
从孢子梗基部发出匍匐菌丝
有
菌丝体上直接生出孢囊梗，各分枝顶端着生球形孢子囊
曲霉（Aspergillus）
有
菌丝体产生大量的分生孢子梗
无
孢囊梗基部有足细胞。分生孢囊梗顶端膨大成，孢囊球形，其表面长满一层或两层辐射状小梗
青霉（Penicillium）
有
营养菌丝无色或淡色
无
分生孢子梗亦有横隔，基部无足细胞。孢子梗顶端不形成膨大的顶囊，而是产生帚状体

六、思考
主要根据那些形态特征来区分上述四种霉菌？
答：根霉有匍匐菌丝和假根；
毛霉菌丝体上直接生出单生、总状分枝或假轴状分枝的孢囊梗，各分枝顶端着生球形孢子囊；
曲霉分生孢子梗生长在足细胞上，并通过足细胞与营养菌丝相连；
青霉的分枝成帚状的分生孢子从菌丝体伸向空中，各顶端的小梗产生链状的分生孢子。

七、实验小结
本次实验中了解并掌握了一种新的实验方法，即小室培养法。通过本方法可以更清晰完整地观察到霉菌各部分的形态特征，但实验操作中培养基注入培养皿的量不容易掌握，且接种的稠密程度也会影响霉菌的观察。

附录
马铃薯培养基（PDA）的配制：
马铃薯 40g
蔗糖 4g
琼脂 4g
水 200ml
PH 自然
马铃薯去皮，切成块煮沸半小时，然后用纱布过滤，再加糖和琼脂，溶化后补足至200ml，121℃灭菌20min。

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