DB4403T405-2023食源性致病菌快速检测产品性能评价通用要求.pdf

ICS 67.050CCS X 01DB4403DB4403深圳市地方标准DB4403/T 4052023食源性致病菌快速检测产品性能评价通用要求General requirements for performance evaluation of rapid determinationproducts of foodborne pathogens2023-12-15 发布2024-01-01 实施深圳市市场监督管理局发 布DB4403/T 4052023I前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由深圳市市场监督管理局提出并归口。本文件起草单位：深圳市计量质量检测研究院。本文件主要起草人：王韦达、杨睿、蔡琳、卢灿鑫、林长虹、陈晶、林振华、李乐诗、郑彦婕、蓝勇波。DB4403/T 40520231食源性致病菌快速检测产品性能评价通用要求1范围本文件规定了食源性致病菌快速检测定性产品（下简称“快检产品”）评价的送评要求、评价要求及评价流程等内容。本文件适用于食品中快检产品性能的技术评价，包括干片法、胶体金免疫层析法等原理的快速定性产品。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 4789.452023食品安全国家标准微生物检验方法验证通则GB 19489实验室生物安全通用要求GB/T 27405实验室质量控制规范食品微生物检测GB/T 422332022快速检测术语与定义3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1参考方法reference method得到公认或广泛接受的微生物传统培养法。来源：GB 4789.452023，2.43.2最低检出水平minimum detection level快检产品预期所能检出微生物的最低含量水平。注：对于有前增菌步骤的快检产品，指增菌后预期所能检出微生物的最低含量水平。3.3排他性exclusivity study快检产品对非目标微生物的抗干扰能力。来源：GB 4789.452023，2.7，有修改3.4精密度precision在规定条件下多次重复测试同一待测样品时各测试结果彼此相符合的程度。来源：GB/T 422332022，4.7，有修改3.5DB4403/T 40520232再现性reproducibility由不同的操作者使用同一快检产品，按相同的测试方法，对同一被测对象互相独立进行测试的条件下，多次重复测试获得的测试结果的精密度（3.4）。来源：GB/T 422332022，4.12，有修改3.6盲样blind sample在评价过程中，使用的制备人已知详细信息的，但其详细信息对检测人员保密的样品。来源：GB/T 422332022，5.13，有修改4送评要求4.1产品信息要求4.1.1产品包装快检产品包装应完整，内容物（产品组成）齐全，包含产品合格证和中文使用说明书。4.1.2中文标签中文标签清晰、规范，包括产品名称、批号、规格、有效期、保存条件、注意事项、生产者、地址、联系方式等。4.1.3使用说明书厂家提供的使用说明书内容应表述清晰、完整，包括简介、适用范围、检测时间、检测原理、产品组成、需配套使用的试剂设备、注意事项、储存条件、样品处理、有无会引起交叉反应的非目标菌、检测操作步骤、结果判读、安全性说明。此外，厂家应提供或在说明书上备注产品的最低检出水平。4.1.4产品安全性说明对于快检产品，应在说明书的醒目位置清晰地标示出实验废弃物的处理方式，并且指出其在使用过程中的注意事项。生物类废弃物根据病原分类选择合适的处理方式。4.2批次要求4.2.1首次参加评价的快检产品，对于同一品种和规格的快检产品，应至少提供2个不同生产批号的产品，每批号不少于150个。4.2.2非首次参加评价的快检产品，对于同一品种和规格的快检产品，应至少提供 1 个生产批号的产品，每批号不少于 150 个。4.3其他要求4.3.1快检产品由生产商提供，送至评价机构参加评价。送评样品应为同一品种和规格的快检产品，且有效期不少于三个月。产品如有储藏、运输要求的应按要求执行。4.3.2对于采用仪器法检测的快检产品，仪器由送评方提供，且具有有效的校准或检定证明。对于需采用确认反应片或配套试剂的快检产品，配套试剂和耗材应由送评方提供。5评价要求DB4403/T 405202335.1评价样品要求5.1.1阴性样品阴性样品应经参考方法确认无目标菌。5.1.2质控样品质控样品应为已知微生物浓度水平的样品，具有较好的稳定性，且经过认证检验符合实验的质量标准。5.1.3自然污染样品天然原因造成污染的实物样品，使用前应经参考方法确认。能够获得自然污染样品时，优先选用自然污染样品。5.1.4人工污染样品根据快检产品使用说明书的实验要求，称取适量的阴性样品，接种一定浓度的目标菌菌液混合而成。制备后的人工污染样品应小心处理、保存，使样品在评价前保持稳定，并尽快进行测试。5.2评价指标要求5.2.1最低检出水平5.2.1.1测试样品采用质控样品或人工污染样品，有前增菌步骤的快检产品，去除前增菌步骤。5.2.1.2评价快检产品时应根据使用说明书规定的适用范围，选择食品基质的种类和子类。若其适用于多种食品基质，则至少选择2个种类的食品，其中每类食品至少选择1种子类的食品；若只适用于某一特定种类的食品，则应在该类食品中选择至少2种不同子类的食品。代表性食品基质的选择参见GB 4789.452023附录A。5.2.1.3每种食品基质至少需要在中、低、极低3个不同接种水平和无接种情况下完成测试，每个评价人在每个水平下重复测试2次。其中中水平：接种量为预期最低检出水平的10倍；低水平：将中水平接种物稀释10倍得到最低检出水平，此时接种水平即为理论LOD50；极低水平：将低水平接种物稀释10倍得到极低水平接种物；无接种物为阴性样品。注：理论LOD50指定性方法检出概率为50%时，样品中目标微生物的浓度。5.2.1.4阴性样品不应获得阳性结果，如果获得阳性结果，则对所有水平进行重复实验，若重复实验仍获得阳性结果，则评价不通过。中水平只能获得阳性结果，如果获得阴性结果，则对该水平进行重复实验，若重复实验仍获得阴性结果，则评价不通过。低水平应至少获得25%的阳性结果，若未获得阳性结果，则对该水平进行重复实验，测试结果仍未获得阳性结果，则评价不通过。极低水平阳性结果数不应超过低水平接种的阳性结果数。5.2.2排他性5.2.2.1使用纯化后的非目标菌进行测试，在测试过程中不需要添加样品基质。测试菌株的纯培养应是最佳生长条件下，非选择性培养基上培养并处于稳定期的细胞群体。有前增菌步骤的快检产品，去除前增菌步骤。5.2.2.2若厂家在说明书中已注明的交叉反应非目标菌在本标准排他性评价交叉反应非目标菌选择指引中（见附录A），则不对该菌进行排他性评价。DB4403/T 405202345.2.2.3排他性评价，评价内容应包括附录A中微生物的纯培养物。规定排他性实验中，应选择附录A中4种及以上的非目标菌，优先测试应验证的非目标菌，接种水平为快检产品最低检出水平的10倍100倍，每个评价人重复测试2次。5.2.2.4若最终评价结果大于2种非目标菌产生交叉反应，则评价不通过。5.2.3再现性5.2.3.1再现性测试采用自然污染样品或人工污染样品。有前增菌步骤的快检产品，去除前增菌步骤。5.2.3.2制备的测试盲样，优先使用自然污染样品。如没有自然污染样品，可以使用人工污染的样品。评价快检产品时应根据使用说明书规定的适用范围，选择基质的种类和子类，具体要求见5.2.1.2。5.2.3.3每种基质至少需要在高、低和阴性3个不同水平完成测试，每个评价人在每个水平下重复测试5次。理想情况下，高水平恰好为最低检出水平的50倍100倍，低水平为最低检出水平的5倍10倍。5.2.3.4快检产品的假阳性率应不大于15%，假阴性率应不大于5%，精密度应不小于91%。6评价流程6.1评价前准备工作6.1.1实验应符合 GB 19489 和 GB/T 27405 相关规定。6.1.2评价人员应先熟悉快检产品的检测原理、实验方法等相关内容，开展非目标菌的接种制备，阴性样品，自然污染样品，质控样品和目标菌接种制备人工污染样品等准备验证工作。6.1.3应制定具体作业指导书或评价方案，保障评价结果准确可靠，应包括但不限于：a)评价工作要求；b)送样要求；c)样品管理；d)盲样制备与检查；e)评价内容及依据；f)结论出具。6.2盲样6.2.1基质的选择应根据食品安全监管的需求，优先选择那些涉及食物中毒、有召回要求和具有潜在高风险危害的食品作为样品基质，具体要求见5.2.1.2。6.2.2盲样制备6.2.2.1每一生产批号的快检产品，按照快检产品使用说明书取样要求进行盲样制备，其中包含阴性样品和阳性样品。注：阳性样品包括质控样品、自然污染样品或人工污染样品。6.2.2.2盲样制备和评价应为独立环节，盲样制备人员不少于 2 名。6.3评价6.3.1检测按照快检产品使用说明书或仪器使用说明书的要求进行检测，评价人员不少于2名。DB4403/T 405202356.3.2结果判读按照快检产品使用说明书或仪器使用说明书的要求判读结果。6.3.3检测时间按照快检产品说明书要求取单个样品，检测时间从样品前处理开始计时，记录从前处理步骤至得出检测结果整个过程的时间总和。对于有前增菌步骤快检产品的检测时间，需额外说明，加上前增菌时间。6.3.4计算根据盲样测试结果，计算该快检产品的假阳性率、假阴性率及精密度，计算公式详见表1。表 1性能指标的计算样品情况检测结果b总数阳性阴性阳性N11N12N1.=N11+N12阴性aN21N22N2.=N21+N22总数N.1=N11+N21N.2=N12+N22N=N1.+N2.或者N.1+N.2假阴性率（%）N12100/N1.假阳性率（%）N21100/N2.精密度（%）（N11+N22）100/（N1.+N2.）注：N-任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。示例1：N11表示第一行，第一列，N12表示第一行，第二列。示例2：N1.表示所有的第一行；N.2表示所有的第二列。a由参考方法检验得到的结果。b由评价实验得到的结果。6.4结论快检产品的最低检出水平、排他性和再现性均满足评价要求，则评价通过。有一项不满足评价要求，则评价不通过。6.5报告对评价整体情况和结果进行汇总整理和分析，评价报告应包括但不限于以下内容：a)产品名称、厂家、型号、批号、日期；b)盲样性质、基质、接种水平；c)评价结果；d)检测时间；e)评价结论。DB4403/T 40520236附录A（资料性）排他性评价交叉反应非目标菌选择指引排他性评价中，交叉反应非目标菌的选择指引，见表 A.1。表 A.1排他性评价交叉反应非目标菌选择指引交叉反应非目标菌金黄色葡萄球菌沙门氏菌属大肠埃希氏菌O157单核细胞增生李斯特氏菌副溶血性弧菌蜡样芽胞杆菌溶血性葡萄球菌表皮葡萄球菌人葡萄球菌木糖葡萄球菌沃氏葡萄球菌山羊葡萄球菌科氏葡萄球菌粪肠球菌阴沟肠杆菌奇异变形杆菌弗氏柠檬酸杆菌大肠埃希氏菌福氏志贺氏菌普通变形杆菌克氏柠檬酸杆菌杨氏柠檬酸杆菌铜绿假单胞杆菌肺炎克雷伯杆菌斯氏李斯特氏菌伊氏李斯特氏菌英诺克李斯特氏菌格氏李斯特氏菌威氏李斯特氏菌婴儿双歧杆菌植物乳杆菌干酪乳杆菌溶藻弧菌DB4403/T 40520237表 A.1排他性评价交叉反应非目标菌选择指引（续）交叉反应非目标菌金黄色葡萄球菌沙门氏菌属大肠埃希氏菌O157单核细胞增生李斯特氏菌副溶血性弧菌蜡样芽胞杆菌创伤弧菌霍乱弧菌拟态弧菌弗氏弧菌美人鱼发光杆菌坎贝尔弧菌哈氏弧菌苏云金芽胞杆菌蕈状芽胞杆菌巨大芽胞杆菌地衣芽胞杆菌枯草芽胞杆菌环状芽胞杆菌凝固芽胞杆菌解淀粉芽胞杆菌注 1：表示排他性评价实验应验证的非目标菌。注 2：表示排他性评价实验推荐验证的非目标菌。