支气管哮喘急性期患儿血清VAMP2水平表达及其临床意义.pdf

175现代检验医学杂志第 38 卷第 5 期2023 年 9 月J Mod Lab Med,Vol.38,No.5,Sept.2023支气管哮喘急性期患儿血清 VAMP2 水平表达及其临床意义任婷婷，杨艳娥，马歆花，王彦华（西安医学院第二附属医院儿科，西安 710038）摘要：目的探讨支气管哮喘急性期患儿血清中囊泡相关膜蛋白 2（vesicle-associated membrane protein 2，VAMP2）表达水平及其临床意义。方法选取 2017 年 6 月 2020 年 6 月在西安医学院第二附属医院儿科就诊的 94 例支气管哮喘急性期患儿（研究组），以及同期入院复查的 30 例支气管哮喘缓解期患儿（对照组）进行研究。比较两组的一般临床资料，并检查两组患儿的呼气峰流量（peak expiratory flow，PEF）、第 1 秒用力呼气量（forced expiratory volume in 1 second，FEV1）和用力肺活量（forced vital capacity，FVC）。采用酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清 VAMP2 水平，并根据支气管哮喘急性期患儿的严重程度分为轻度组（n=36）、中度组（n=31）和重度组（n=27），比较三组血清 VAMP2 水平；支气管哮喘急性期患儿血清 VAMP2 水平与 PEF，FEV1，FVC 的关系采用 Pearson 法分析；受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线分析血清 VAMP2 水平对支气管哮喘急性期患儿发作的诊断价值。结果研究组的血清 VAMP2 水平（8.012.12 ng/L）高于对照组（5.231.21 ng/L），差异具有统计学意义（t=6.824，P0.05）。研究组中的 PEF（73.45%7.12%），FEV1（65.34%8.34%）和 FVC（69.34%9.14%）均低于对照组（87.34%7.23%，82.45%10.31%，89.89%10.03%），差异具有统计学意义（t=9.269，9.222，10.471，均 P0.05）。重度组、中度组和轻度组血清 VAMP2 水平依次为 9.503.04ng/L，8.011.21 ng/L 和6.851.01 ng/L，差异具有统计学意义（F=15.412，P0.05）；重度组 VAMP2 水平高于中度组、轻度组（t=4.269，7.851，均 P0.05），中度组血清 VAMP2 水平高于轻度组，差异具有统计学意义（t=3.571，P0.05）。支气管哮喘急性期患儿血清 VAMP2 水平与 PEF，FEV1 和 FVC 呈负相关（r=-0.506，-0.487，-0.399，均 P0.05）。血清 VAMP2 水平诊断支气管哮喘急性期患儿发作的曲线下面积为 0.909，截断值为 6.802 ng/L，敏感度和特异度分别为 77.7%，93.3%。结论支气管哮喘急性期患儿血清 VAMP2 水平升高，可以作为辅助诊断支气管哮喘急性发作的有效指标。关键词：支气管哮喘；囊泡相关膜蛋白 2；肺功能中图分类号：R562.25；R392.11文献标识码：A文章编号：1671-7414（2023）05-175-05doi:10.3969/j.issn.1671-7414.2023.05.033Expression and Clinical Significance of Serum VAMP2 in Children with Bronchial Asthma at Acute StageREN Tingting,YANG Yane,MA Xinhua,WANG Yanhua（Department of Pediatrics,the Second Affiliated Hospital of Xian Medical College,Xian 710038,China）Abstract:ObjectiveTo analyze the expression level of vesicle-associated membrane protein 2(VAMP2)in serum of children with bronchial asthma at acute stage,and explore its clinical significance.MethodsA total of 94 children with bronchial asthma at acute stage(study group)and 30 children with bronchial asthma in remission stage(control group)who were hospitalized in the Second Affiliated Hospital of Xian Medical College from June 2017 to June 2020 were selected for the study.The general clinical data of the two groups were compared,and the peak expiratory flow(PEF),forced expiratory volume in the first second(FEV1),forced vital capacity(FVC)of the two groups were examined.Serum VAMP2 levels were determined by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA),and the children with bronchial acute stage asthma were divided into mild group(n=36),moderate group(n=31)and severe group(n=27)according to the severity of acute stage.Pearson method was used to analyze the relationship between serum VAMP2 level,PEF,FEV1 and FVC in children with acute bronchial asthma.The diagnostic value of serum VAMP2 level in children with bronchial asthma at acute stage was analyzed by receiver operating characteristic(ROC)curve asthma.The diagnostic value of serum VAMP2 level in children with bronchial asthma at acute stage was analyzed by ROC curve.ResultsThe serum VAMP2 level in the study group(8.012.12 ng/L)was higher than that in the control group(5.231.21 ng/L),and the difference was statistically significant(t=6.824,P0.05).PEF(73.45%7.12%),FEV1(65.34%8.34%)and FVC(69.34%9.14%)in the study group were lower than those in the control group(87.34%7.23%,82.45%10.31%,89.89%10.03%),and the differences were statistically significant(t=9.269,9.222,10.471,all P0.05).作者简介：任婷婷（1986-），女，硕士研究生，主治医师，研究方向：哮喘，E-mail：。通讯作者：王彦华（1989-），女，硕士研究生，主治医师，研究方向：哮喘，E-mail：。176现代检验医学杂志第 38 卷第 5 期2023 年 9 月J Mod Lab Med,Vol.38,No.5,Spet.2023Serum VAMP2 levels in severe group,moderate group and mild group were 9.503.04ng/L,8.011.21 ng/L and 6.851.01 ng/L,respectively,and the difference was statistically significant(F=15.412，P0.05),the VAMP2 level in the severe group was higher than that in the moderate group and the mild group(t=4.269,7.851,all P0.05),the serum VAMP2 level in the moderate group was higher than that in the mild group,the difference was statistically significant(t=3.571,P0.05).Serum VAMP2 level was negatively correlated with PEF,FEV1 and FVC in children with bronchial asthma at acute stage(r=-0.506,-0.487,-0.399,all P0.05).The area under the curve of serum VAMP2 level in the diagnosis of children bronchial acute stage asthma was 0.909,the cut-off value was 6.802 ng/L,and the sensitivity and specificity were 77.7%and 93.3%,respectively.ConclusionThe elevated serum VAMP2 level in children with the acute stage of bronchial asthma can be used as an effective indicator to help diagnose acute attack of bronchial asthma.Keywords:bronchial asthma；vesicle-associated membrane protein 2；lung function支气管哮喘属于常见的慢性非感染性疾病，常常影响儿童的健康1。支气管哮喘可以发生于各年龄组，其发病率逐年上升2。支气管哮喘的气道慢性炎症与气道高反应性相关，其急性发作期起病急、进展快，容易出现气道狭窄，难以根治，且易反复发作，不利于病情恢复3。因此，寻找与支气管哮喘急性发作有关的标志物对于指导临床治疗具有重要意义。囊泡相关膜蛋白 2(vesicle-associated membrane protein 2，VAMP2)是 可 溶 性N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体(soluble N-ethtlmaleimide-sensitive fusion factor attachment protein receptors，SNAREs)的成员，是膜融合所必需的4。VAMP2 最初是在大鼠大脑中被发现的，它在突触囊泡的融合中起着关键作用，可能有助于离子通道蛋白的转运。有研究表明 circ_CSNK1E/miRNA-34a-5p/VAMP2 轴在哮喘中起重要调节作 用5。基于此，推测 VAMP2 可能参与支气管哮喘的发病，因此，本研究探讨血清 VAMP2 在支气管哮喘急性期患儿中的表达及临床意义，为临床治疗提供帮助。1材料与方法1.1研究对象选取 2017 年 6 月 2020 年 6 月在西安医学院第二附属医院儿科就诊的 94 例支气管哮喘急性期患儿（研究组），根据支气管哮喘防治指南6对 94 例急性期患儿病情严重程度进行分级，其中，急性期轻度哮喘患儿 36 例（轻度组），中度哮喘患儿 31 例（中度组）和重度哮喘患儿 27例（重度组）。研究组中，男性 50 例，女性 44 例，年龄 313（6.343.31）岁，平均体重指数（body mass index，BMI）15.433.22kg/m2，膳食钙摄入量 376.3210.34mg/天，家族过敏史 35.11%，家族哮喘史 32.98%。纳入标准：所有患儿均符合中华医学会对支气管哮喘的诊断标准6；均处于急性发作期。排除标准：先天性心脏疾病患者；肝肾等重要脏器功能不全者；并发自身免疫系统疾病者；有家族哮喘遗传病史、过敏史者，在近一个月内出现呼吸道感染者。另外选取同期在本院入院复查的支气管哮喘缓解期患儿 30 例作为对照组，其中，男性18例，女性12例，年龄313（6.45 3.48）岁，BMI 15.213.28 kg/m2，膳食钙摄入量377.1211.21 mg/天，家族过敏史 30.00%，家族哮喘史 36.67%。两组性别、年龄、BMI，膳食钙摄入量、家族过敏史、家族哮喘史比较差异均无统计学意义（2/t=0.426，0.157，0.324，0.362，0.265，0.138，均 P 0.05），具有可比性。本研究获得本院伦理委员会批准，所有受试者及家属均签署知情同意书。1.2 仪 器 与 试 剂 酶 标 仪 型 号：SpectraMax i3x，美谷分子仪器（上海）有限公司，肺功能检查仪（型号：MicroLab，上海涵飞医疗器械有限公司），人VAMP2酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒（批号：FY-EH11229，武汉菲越生物科技有限公司）。1.3方法1.3.1样本收集：抽取所有受试者入院第二日清晨空腹肘静脉血 5ml，血液室温下自然凝固 15min，以3 000r/min离心15min，收集上清血液，放置-80冰箱中保存待测。1.3.2ELISA 法检测血清 VAMP2 水平：严格按照人 VAMP2 ELISA 试剂盒说明书配制一系列浓度的标准品溶液，采用酶标仪测定不同浓度标准品在450 nm 处的吸光度值，绘制 VAMP2 标准品回归曲线。于-80冰箱中取适量血清样本，解冻，测定各样本在 450 nm 处的吸光度值，依据标准回归曲线计算血清 VAMP2 水平。1.3.3肺功能指标的测定：呼气峰流量（peak expira-tory flow，PEF），第 1 秒用力呼气量（forced expi-ratory volume in 1 second，FEV1），用力肺活量（forced vital capacity，FVC）肺功能相关指标用肺功能检查仪进行测定。1.4统计学分析数据分析采用 SPSS 20.0 统计软件进行分析，计量资料经正态性检验，符合正态分布，以均数 标准差（xs）表示，两组数据组间比较行独立样本 t 检验，三组数据组间比较进行 F 检验，进一步两两比较行 LSD-t 检验；计数资 177现代检验医学杂志第 38 卷第 5 期2023 年 9 月J Mod Lab Med,Vol.38,No.5,Sept.2023料用“n”描述，组间比较采用卡方检验。Pearson法分析支气管哮喘急性期患儿血清 VAMP2 与肺功能指标的相关性；采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲 线 分 析 血 清VAMP2 水平对支气管哮喘急性期患儿发作的诊断价值。P0.05 为差异有统计学意义。2结果2.1对照组与研究组血清 VAMP2 表达水平及肺功能指标比较见表 1。两组间单因素分析显示，研究组血清 VAMP2 水平高于对照组，PEF，FEV1和 FVC 低于对照组，差异具有统计学意义（均 P 0.001）。表 1 对照组与研究组血清 VAMP2 表达水平及 肺功能指标比较（xs）项目对照组（n=30）研究组（n=94）tPVAMP2（ng/L）5.231.218.012.126.8240.000PEF（%）87.347.2373.457.129.2690.000FEV1（%）82.4510.3165.348.349.2220.000FVC（%）89.8910.0369.349.1410.4710.0002.2研究组中不同病情程度患儿血清 VAMP2 表达水平比较多组间单因素分析显示，重度组、中度组和轻度组患儿血清 VAMP2 水平依次为 9.50 3.04ng/L,8.011.21ng/L 和 6.851.01ng/L，差 异有统计学意义（F=15.412，P0.05）。重度组血清VAMP2水平高于中度组和轻度组（t=4.269,7.851），中度组血清 VAMP2 水平高于轻度组（t=4.269），差异具有统计学意义（均 P0.05）。2.3血清 VAMP2 表达水平与肺功能指标的相关性分析Pearson 相关分析显示，血清 VAMP2 水平与支气管哮喘急性期患儿 PEF，FEV1 和 FVC 均呈负相关（r=-0.506，-0.487，-0.399，均 P0.05）。2.4血清 VAMP2 对支气管急性期哮喘患儿发作的诊断价值分析见图 1。血清 VAMP2 诊断支气管哮喘急性期患儿发作的曲线下面积为 0.909（95%CI：0.857 0.960），截断值为 6.802 ng/L，敏感度和特异度分别为 77.7%，93.3%，提示血清VAMP2 可以作为辅助诊断支气管哮喘急性发作的有效指标。3讨论支气管哮喘被认为是一种非传染性的慢性气道炎症性疾病，以气道重塑和气道高反应性为特征7。哮喘被世界卫生组织列为疾病中的四大难治性疾病之一，也是十大死亡原因之一。临床研究表明，支气管哮喘多在清晨或夜间发作或加剧。可受遗传、气候转变、空气污染、精神状况等多种因素的影响。支气管哮喘在儿童中是一种发病率比较高的疾病，患儿在发病后若不及时治疗，其肺部功能将遭到严重破坏，甚至可能会恶化发展为肺源性心脏病，从而危及生命8，给人类社会带来沉重的医疗和经济负担。因此，积极寻找与支气管哮喘有关的生物标志物至关重要。图 1血清 VAMP2 水平诊断支气管哮喘急性期 患儿发作的 ROC 曲线患儿支气管哮喘的发生、发展与多种细胞因子参与的气道炎性反应有关9。VAMP2 是 SNAREs蛋白家族成员之一，在多种组织中表达，其主要分布在囊泡膜上，在囊泡融合、神经递质释放和囊泡内吞作用中发挥重要作用，已证明 VAMP2 可调节Ca2+水平在神经递质释放中发挥重要的作用10-11。也有研究显示，VAMP2可在肿瘤组织中异常表达，例如在膀胱癌中的表达升高，导致膀胱癌细胞的异常进展和侵袭，进而导致膀胱癌细胞转化为高级别肿瘤12。VAMP2 可以在心脏、神经纤维和骨骼肌中表达，参与躯体性和非躯体性骨骼肌的发 育13。值得注意的是，XU 等14研究显示肺泡型细胞中 VAMP2 蛋白表达的升高会导致肺表面活性剂分泌的减少，而肺表面活性物质对哮喘急性发作具有一定的治疗作用15。先前也有研究证实SNAREs 蛋白及亚型在肺部炎症的嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T 淋巴细胞中有表达16，且与这些细胞的炎性释放有关17-18。本研究发现支气管哮喘急性期患儿血清 VAMP2 水平高于支气管哮喘缓解期患儿，并且随着支气管哮喘急性期患儿病情严重程度的增加，血清 VAMP2 水平呈逐渐升高趋势，提示VAMP2 在支气管哮喘的急性发作过程中发挥一定作用，且能够在一定程度上反映患儿病情严重程度。支气管哮喘发作时病情进展快，若不能及时干预可能会出现心律失常、呼吸衰竭等严重并发症，危及患儿生命，而肺功能指标 PEF，FEV1，FVC与患儿病程密切相关，检测肺功能有利于帮助支气178现代检验医学杂志第 38 卷第 5 期2023 年 9 月J Mod Lab Med,Vol.38,No.5,Spet.2023管哮喘急性期治疗方案的制定与实施19。李颖等20 研究结果显示，支气管哮喘患者 PEF，FEV1 和FVC 均低于健康组；另外，李晓刚等21研究报道，急性发作期支气管哮喘患儿 PEF，FEV1 和 FVC 均较健康儿童低。本研究结果显示，支气管哮喘急性期患儿的 PEF，FEV1 和 FVC 明显降低，这一结果与李颖等20-21研究结果具有相似性，说明处于哮喘急性期的患儿肺功能下降，提示支气管哮喘发作对患儿肺功能有一定的影响。分析血清 VAMP2 水平与肺功能指标相关性，结果显示血清 VAMP2 水平与肺功能指标 PEF，FEV1，FVC 呈负相关关系，推测血清 VAMP2 与支气管哮喘患儿肺功能密切相关，检测血清 VAMP2 的水平可以反映患儿肺功能的情况。此外，ROC 曲线分析显示，血清 VAMP水平对于诊断支气管哮喘急性发作期具有一定的价值，提示检测血清 VAMP 水平有利于辅助评估支气管哮喘急性发作期情况。但本研究仅初步探讨了血清 VAMP2 水平与支气管哮喘急性发作的关系，其在支气管哮喘中的作用机制，需要在今后补充实验内容进行深入分析。综 上 所 述，支 气 管 哮 喘 急 性 期 患 儿 血 清VAMP2 水平异常升高，且血清 VAMP2 水平与急性期患儿发作的严重程度、肺功能密切相关，血清VAMP 水平可以作为诊断支气管哮喘急性发作的辅助手段。本研究的不足之处在于，所研究的样本较少，可能会造成数据存在一定的偏差，因此在后期还需加大样本量进行多次重复研究。参考文献：1 张洋,侯伟.儿童支气管哮喘心理行为问题研究进展 J.中国儿童保健杂志,2019,27(5):523-526.ZHANG Yang,HOU Wei.Research progress on psychological and behavioral problems in children with bronchial asthmaJ.Chinese Journal of Child Health Care,2019,27(5):523-526.2 MAHESH S,RAMAMURTHY M B.Management of acute asthma in childrenJ.Indian Journal of Pediatrics,2022,89(4):366-372.3 郑明升,彭东红.2016-2018 年某院因支气管哮喘急性发作住院患儿危险因素分析 J.儿科药学杂志,2022,28(3):44-49.ZHENG Mingsheng,PENG Donghong.Risk factors of hospitalized children with acute attack of bronchial asthma in a hospital from 2016 to 2018J.Journal of Pediatric Pharmacy,2022,28(3):44-49.4 张颖,娄欢,田晓娜,等.环状 RNA 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在恶性黑色素瘤组织和细胞系中显著高表达，其过表达显著提高了恶性黑色素瘤细胞的增殖率和侵袭能力，可能是恶性黑色素瘤新的生物标志物。另有研究认为，circRNA_0079593 作为恶性黑色素瘤发生的关键调控因子，参与疾病的发生发展、侵袭和转移，可作为恶性黑色素瘤潜在的诊断、治疗和预测生物标志物13。综上所述，恶性黑色素瘤组织中circRNA_0020710 及 circRNA_0079593 水平明显升高，与组织分级级、肿瘤部位、低分化及淋巴结转移有关，其对恶性黑色素瘤诊断及预测淋巴结转移均具有很好的价值，可作为该病诊断及病情判断的分子标志物。但本研究病例来源较单一，样本量较少，未来仍需更多的临床研究进一步证实。参考文献：1 BROWN R V S,HILLESHEIM D,TOMASI Y T,et al.Mortality from malignant skin melanoma in elderly Brazilians:2001 to 2016J.An Bras Dermatol,2021,96(1):34-39.2 KHORSANDI K,ESFAHANI H,ABRAHAMSE H.Characteristics of circRNA and its approach as diagnostic tool in melanoma J.Expert Rev Mol Diagn,2021,21(10):1079-1094.3 MECOZZI N,VERA O,KARRETH F A.Squaring the circle:circRNAs in melanoma J.Oncogene,2021,40(37):5559-5566.4 WEI Chuanyuan,ZHU Mengxuan,LU Nanhang,et al.Circular RNA circ_0020710 drives tumor progression and immune evasion by regulating the miR-370-3p/CXCL12 axis in melanomaJ.Molecular Cancer,2020,19(1):84.5 ZHAO Feifei,JIA Zhifeng,FENG Yingfa,et al.Circular RNA circ_0079593 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