DB 6505∕T 095-2020 驴人工授精技术操作规程(哈密市).pdf

ICS 65.020.30 CCS B 41 6505 哈密市地方标准 DB 6505/T 0952020 驴人工授精技术操作规程 Technical operating procedures for artificial insemination of donkeys 2020-11-30 发布 2020-12-30 实施 哈密市市场监督管理局 发 布 DB 6505/T 0952020 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由哈密市畜牧工作站提出。本文件由哈密市农业农村局归口。本文件起草单位：哈密市畜牧工作站。本文件主要起草人：罗生金、黄浩、张磊、克热木司马义。DB 6505/T 0952020 1 驴人工授精技术操作规程 1 范围 本文件规定了驴人工授精的术语和定义、器材准备、采精、精液品质检査、精液稀释、母驴发情期鉴定、输精、妊娠鉴定、繁殖评价的要求。本文件适用于驴鲜精人工授精技术应用。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 18596 畜禽养殖业污染物排放标准 NY/T 388 畜禽场环境质量标准 DB65/T 3649-2014 马人工授精技术操作规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。人工授精 artificial insemination 用器械采集公驴精液，经检查处理后再用器械把精液注入到发情母驴子宫腔内，以代替自然交配，使其受孕的一种方法。台驴 donkey 选取发情母驴保定好用来引诱公驴爬跨后人工采集精液的驴。精子活率 sperm motility 在 36 38 环境下，镜检呈直线前进运动的精子数占精子总数的百分比。精子密度 sperm density 每毫升精液中所含的精子数。精子畸形率 sperm deformity rate 精液中畸形精子数占总精子数的百分比。精液稀释 semen dilution 在精液中加入一定量按特定配方配制稀释液、适宜于精子存活并保持精子活力。DB 6505/T 0952020 2 发情鉴定 estrus identification 通过外部观察、直肠检查、试情或B超等方法对母驴发情情况进行判定。B 超 ultrasound 利用B超技术对驴的发情和妊娠进行鉴定。卵泡 follicle 卵巢皮质内由一个卵母细胞和其周围许多小型卵泡细胞所组成。排卵 ovulation 指成熟卵泡发育成熟后，卵泡破裂，卵细胞从卵巢排卵窝排出的过程。声像图 sonogram 指利用B型超声仪器，将回波信号转换成高频率电信号，通过显示系统以波形、声音或光点阴暗的形式显示被检部位二维断层图像或切面图像。保定 bind 以人为器械或化学药物控制动物行动。4 器材准备 器材准备见附录 A 器材消毒 4.2.1 假阴道消毒。依次用苏打液、温开水、氯化钠液冲洗，再用干净纱布擦净后，用 75%酒精棉球消毒。4.2.2 用苏打液、温开水洗净镊子、输精器和各种玻璃器材消毒，再用高压消毒 30 min 后，放入电热鼓风干燥箱里进行烘干处理。4.2.3 盖玻片、载玻片应一次性使用。4.2.4 凡士林罐置于水中煮沸消毒 30 min，氯化钠液现配现用，连同盛装容器一同置于水中煮沸消毒15 min。5 采精 采精场地 应在宽敞安静、平坦干燥、防滑、防风洁净的场地采精。台驴的选择与保定 台母驴应处在发情旺期，体格健壮、无病而温顺的母驴。将台母驴保定在采精栏内。假阴道的准备 DB 6505/T 0952020 3 将内胎内膜套装在已消毒的假阴道上，调温、调压、涂润滑剂：先灌入 1500 mL2000 mL 的 42 温水，用温度计测试假阴道内壁的温度，保持在 39 41 之间的最佳温度，然后吹气加压，根据驴阴茎大小粗细合理调整气压，使采精筒大口内胎缩成三角形为宜，最后用玻璃棒蘸润滑剂涂抹至假阴道内壁的前 1/3 处。采精操作 5.4.1 将公驴牵至采精场，以台驴刺激其性欲。清洗公驴外生殖器，阴茎勃起后，用温热的 2%碳酸氢钠液擦洗生殖器及包皮，温开水冲净后用干净纱布擦干。5.4.2 采精时，采精员右手持假阴道把柄并靠在右臂肘处，公驴爬跨时立即站于台驴右后侧，左手辅助顺势轻托公驴阴茎，导入假阴道。假阴道以 30 35 角度固定于台驴尻侧；公驴射精后，立即将假阴道的气孔打开，慢慢放气。假阴道随之逐步竖起，使全部精液流入集精杯内。以纱布封口，送入精液处理室。6 精液品质检查 基本要求 取下集精杯，用 4 层无菌纱布或专用滤网过滤除去胶状物，在 35 38 环境下进行备査。外观检查 6.2.1 射精量 用量杯测量精液量。6.2.2 色泽 正常情况下呈淡乳白色或浅灰白色。带有淡绿色、淡红色、黄色、红褐色等异常颜色的精液应废弃。6.2.3 气味 新鲜精液略有腥味，气味异常的应废弃。显微镜检查 6.3.1 检查准备 载物台温度应保持 35 38。检查时用移液枪蘸取一小滴精液，放在载玻片上加盖玻片，在400 倍600 倍率显微镜下观察，每个滴片不得少于 3 个视野，上下调节旋钮，观察不同层次内的精子运动情况，求其活力的平均值。6.3.2 精子密度检查 平时用目测法估测精子密度为“密”、“中”、“稀”、“无”四级。“密”即精子之间几乎无空隙，精子含量每毫升 2 亿以上，“中”即精子间隙相当一个精子长度，每毫升含精子 2 亿；“稀”即精子间隙超过一个精子长度，每毫升含精子 1 亿以下；“无”即无精子，应废弃。6.3.3 精子活力评定 100%的精子做直线前进运动者为一级；80%为二级；60%为三级；40%为四级；20%以下者为五DB 6505/T 0952020 4 级。三级以上者可用于输精。6.3.4 存活时间检查 6.3.4.1 在使用保存的精子前应对保存的精液进行精子活力评定。6.3.4.2 保存在 4 8 温度条件下，精子存活时间应在 24 h48 h。常温保存精液，精子活率0.6，保存时间48 h。精液品质检查记录 精液品质检查记录表见附录B。7 精液的稀释 精液稀释液的配制 稀释液的配制，可参照 DB65/T 3649-2014，做到现配现用。稀释倍数 根据精液密度及活率确定适宜的稀释倍数，一般不超过 4 倍。精液稀释后，精子数不少于 5000 万个/mL。精液稀释操作 稀释液用前 20 min 置于 36 38 水浴锅中预热备用。将精液和稀释液作同温处理。稀释时，将稀释液沿杯（瓶）壁缓缓加入精液中，然后用无菌玻棒轻轻搅拌，使之混合均匀。稀释完毕后，必须作活力检查，如稀释前后活力一样，即可进行分装与保存。在进行高倍稀释时需分两步进行，先进行低倍稀释，数分钟后再作高倍稀释。精液的分装、保存和运输 7.4.1 分装 将稀释好的精液用塑料细管，按每次每头输精剂量进行分装。7.4.2 保存 将盛精液的塑料细管置于冰箱内，在 4 8 的低温状态下保存。7.4.3 运输 在运输途中，要继续维持低温，避光、防震和碰撞。储精器应附标识卡，注明公驴号、采精日期、精液剂量、稀释倍数、精子活力、密度和输精量数等。8 母驴发情期鉴定 外部观察法 发情母驴常表现四肢撑开直立，耳向后背，头颈伸直，上下颌开合发出“吧嗒吧嗒”声。接受爬跨或用手压母驴背部时，出现“拌嘴”，同时有口涎流出。主动接近公驴，塌腰叉腿，阴门红肿，阴核闪动，DB 6505/T 0952020 5 频频排尿，并将臀部转向公驴，阴道不断流出黏稠液体，为最佳配种期。直肠检查 直肠触摸卵巢，卵泡发育侧增大并下沉,卵泡直径 35 mm50 mm。卵巢壁薄，触诊弹性强、波动明显，有一触即破之感；排卵窝浅。触摸卵巢，部分母驴有疼痛感，有不安或回头看腹的表现。B 超检查法 母驴发情后，运用 B 超适时监测卵巢的卵泡发育情况，一般早晚检查。当卵泡直径 20 mm30 mm时，间隔 24 h 检查一次；直径30 mm 时，间隔时间 10 h12 h，检查 1 次；卵泡直径达到 35 mm 开始输精直至排卵，见附录 D。9 输精 输精前的准备 9.1.1 器材的消毒 输精前所有的器材要消毒灭菌，对于输精器蒸煮或在高温干燥箱内消毒。输精器以每只母驴准备 1支为宜，当输精器不足时，可在每次用后先用蒸馏水棉球擦净外壁，再以酒精棉球擦洗，待酒精挥发后再用生理盐水冲洗 3 次5 次，方可使用。9.1.2 操作人员的消毒 输精人员穿工作服，手指甲剪短磨光，手洗净擦干，用 75%酒精消毒，再用生理盐水冲洗。9.1.3 母驴保定 把待输精母驴保定在输精架，若没有输精架，可采用六柱栏保定。9.1.4 确定输精量和输精次数 鲜精和冷藏精液输精剂量为 15 mL20 mL/每头，输入有效精子数5 亿，每日或隔日 1 次。输精操作 9.2.1 处于适配期的母驴保定好，对其外阴部进行消毒，再用沸后温水冲洗，并用消毒纱布擦干。9.2.2 输精员手臂用消毒液消毒，再用沸后温水冲洗，用消毒纱布擦干，穿戴一次性长臂手套。9.2.3 输精 输精员站在母驴后方偏左侧，右手提输精枪，五指形成锥形，缓慢插入母驴阴道内，将输精枪顶端插入子宫颈口内 5 cm6 cm 处，左手握注射器并抬高，缓缓将精液推入排卵侧母驴子宫内。左手慢慢拔出输精枪，右手缓慢从母驴阴道内抽出，持续轻揉子宫外阴。填写记录 做好母驴配种记录，配种记录表见附录 C。记录内容包括母驴号、毛色特征、膘情、产驹时间、卵泡超声检查、输精时间、公驴及精液信息、输精操作人员等。废弃物处理 DB 6505/T 0952020 6 输储精后的废弃物处理执行 GB 18596 的规定。10 妊娠检查 直肠检查 将母驴保定，用 0.1%新洁尔灭清洗外阴，并用沸后温水冲洗。检查人员剪短并磨光指甲，洗净手臂，戴一次性手套，五指并拢成锥形，轻轻插入直肠内，掏出蓄粪。通过直肠触摸到卵巢，沿着输卵管及阔韧带下移就可以摸到子宫角和子宫体，触摸时感到子宫体内壁组织增厚，两角变粗短，质地硬而圆滑，可判断为早期妊娠。随着妊娠期延长可触摸到胎胞。B 超检查 10.2.1 B 超操作 技术员右手戴长臂手套并涂抹润滑剂，按直肠检查的方式清除直肠内粪便。清除粪便后，五指握紧探头以圆锥形缓慢旋转由肛门进入直肠，而后轻柔的左右移动探头寻找膀胱，在 B 超仪显示器上看到膀胱后顺膀胱方向前进寻找子宫壁并观察整个子宫壁的状况。当深入至直肠狭窄部肠管处（即子宫角分叉处）时，将探头贴紧肠壁缓慢向左上方向旋转，观察子宫角横切面，而后顺子宫角方向继续向左上方观察左侧卵巢，直至卵巢影像消失后原路返回至子宫角分叉处，再按同样的方法，向右上方旋转观察右侧子宫及卵巢。10.2.2 声像图显示 在母驴输精排卵后 12 d13 d，利用 B 超直肠扫描子宫，妊娠则反射为圆形清晰的胚泡声像图案。见附录 E。11 繁殖评价 情期受胎率 情期受胎率按式（1）计算。F=F.1/I 100%(1)式中：F情期受胎率，%；F.1同期受胎母驴数，头；I情期数同期输精，头 次。受胎率 受胎率按式（2）计算。C=C1/I1 100%(2)式中：R繁殖率，%；C1同期产驹母驴数，头；I1同期应繁殖母驴数，头。繁殖率 繁殖率按式（3）计算。DB 6505/T 0952020 7 R=C2/I2 100%(3)式中：R繁殖率，%；C2同期产驹母驴数，头；I2同期应繁殖母驴数，头。繁殖成活率 繁殖成活率按式（4）计算。G=C3/I3 100%(4)式中：G繁殖成活率，%；C3同期繁殖成活幼驹数，头；I3同期繁殖幼驹数，头。DB 6505/T 0952020 8 A A 附录A （资料性）驴人工授精工作常用器具配置表 序号 设备材料名称 规格 单位 数量 序号 设备材料名称 规格 单位 数量 1 采、输精器材 2.16 玻璃量杯 100 mL 个 2 1.1 采精器械 套 3 2.17 搪瓷杯 500 mL 个 2 1.2 输精器械 套 4 2.18 搪瓷方盘 40cm*50cm 个 2 1.3 一次性长臂手套 个 500 2.19 pH 试纸 盒 2 1.4 凡士林 Kg 3 3 洗涤消毒器材 1.5 注射器 30 mL 个 10 3.1 高锰酸钾 500 g 瓶 1 2 精液检查及处理器材 3.2 碘酊 500 mL 瓶 20 2.1 显微镜 架 1 3.3 酒精 500 mL 瓶 20 2.2 水浴锅 台 1 3.4 压力消毒锅 台 1 2.3 冰箱 台 1 3.5 洗涤盆 个 3 2.4 器械柜 架 1 3.6 来苏尔 500 mL 瓶 5 2.5 血细胞计数板 台 1 3.7 新吉尔灭 500 mL 瓶 5 2.6 酒精灯 个 2 3.8 蒸汽消毒锅 台 1 2.7 载玻片 盒 2 3.9 肥皂 条 10 2.8 盖玻片 盒 2 3.10 洗洁精 瓶 5 2.9 温度计 100C 支 5 3.11 医用纱布 Kg 1 2.10 室温计 个 2 3.12 医用脱脂棉 Kg 2 2.11 水温计 50C 支 5 3.13 碳酸氢钠 Kg 3 2.12 玻璃杯 个 2 3.14 氯化钠溶液 0.9%瓶 20 2.13 镊子 把 3 4 其他器材 2.14 玻璃量筒 500 mL 个 3 4.1 办公设备 套 3 2.15 三角烧杯 500 mL 个 3 4.2 工作服 套 3 DB 6505/T 0952020 9 A A 附录B （资料性附录）种公驴精液品质检查登记表 配种站名称：种公驴号：年龄：品种：毛色特征：采精日期 采精量（mL）颜色 气味 pH 密度(亿/mL)活率 稀释液 稀释比例 稀释后活力 输精量 输精母驴数 备注 采精员：检测员：DB 6505/T 0952020 10 B B 附录C （资料性附录）驴人工授精记录 畜主 母驴个体号 毛色特征 产驹日期 幼驹特征 卵泡发育情况及输精日期 输精的公驴号 妊娠结果 预产期 1 2 3.30 35.注：准确把握卵泡的发育规律，精确推断排卵时间，减少配种次数和精液。卵泡发育过程及排卵的快慢，与卵泡的 形状及卵巢上着生的部位有一定的关系。因此，在驴的人工授精配种记录工作中，必须严格记载卵泡的直径、弹性、波动、敏感度、皮厚度等指标的填写，便于了解卵泡的发育规律。如：上午检查左侧有3期泡，右侧2期泡，可表述“3丄2”。如果是下午检查，可表述为“3T2”。DB 6505/T 0952020 11 C C 附录D （资料性附录）输精期确定声像图 从B超显示器上观察到卵泡壁开始增厚，卵泡形状逐渐变得不规则时，表明卵泡已发育成熟并即将排卵。图D.1、2、3均可输精，并根据时序控制输精次数；图D.4排卵后形成黄体。图D.1 卵泡壁增厚声像图 图D.2 卵泡壁进一步增厚并卵泡变形声像图 图D.3 卵泡严重变形声像图 图D.4 排卵后生产黄体声像图