YY∕T 1808-2021 医疗器械体外皮肤刺激试验[医药].pdf

ICS 1 1.040+01 C臼C3,0 中华人民共和国医药行业标准YY/T1808二2021医疗器械体外皮肤剌激试验In. vitro skin irritation test for mecUcal devices 202 1-09-06发布2022-09-01实擅圄家药晶监督管理局发布YY /T 1808-20.21 前本文件按照GB/T1.1-2020(标准化工作导则第l部分=标准化文件的结胡和起草规则的规定起草.请注意本文件的某些内事可能在费及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任本文件由国草药晶监i督管理局提出，本文件由全国医拧器峨生物学评价际准化技术委且会(SAC/TC248)归口0，本文件起草单位=山东省医疗器械产品质量检验中心、中国食晶药晶栓置研究院、北京市医疗器械撞撞所、晋南磐升生物技术有限公司0本文件主要起草人t范春光、X1J佳、陈亮、五草、邢志青、陈丽握、戴政宁、张平咀I YY/T 1808-20,21 言|-将从健康志愿者提取的正常角蛋白细胞在南E草草撞班上的气植交界田培挥数日后可形成包括基底层、翩层、颗鞋层和有功能的角质层在内的三维皮肤模型，即重建人表皮模型，此模型起初是为瞌测纯化学物体外应眈剌激性而研2量的e近年来，此类模型也植用于检测医疗蠕捕中的剌激性物质.E YV/11808-2021 医抒器械体外皮肤剌激试验1 范围本文件规定了亲用重建人表皮(RhE)模型进行医疗器植体外皮肤J撒试验的方醋，本文件适用于来用RhE模型进行体外皮肤刺撒试验评价医疗器械潜在的皮肤剌激性，2 规描性引用文件下列文件中的内容通过文中的规程性引用而构成本文件必不可少的条盐，其中，注目期的引用文件，仅该日期1世座的版本适用于本文件p不住日期的引用文件，其最新版本包括所有的修改单)适用于本文件，GB/T 168.86.10 医疗器幢生物学评价第10部分z剌激与应肤政敏试验GB/T 168,86.12 医疗器械生物学评价第12部分z样品制备与参照材料3 术悟和建立GB/T 16886.10和GB/T16886，.12界寇的术语和直义适用于本文件，4 谊瞌原理医疗器械/材料的瞌性和非极性程提液或摆植/材料本身可直接接触RhE模型的上表面，孵宵-定时间后忡洗除去表皮上的试验样晶，再用四甲基惘氨睡盐(MTT)试验瞌拥RhE模型细胞捂住，与阴性时照相比得到扭扭擂匪，根据组织活度预测试验样品的刺酷性.5 材料5.1 RhB模型使用商晶化RhE模型进行试验RhE模型的监明见附录011. 00表皮细胞应取自人类免疫融陷病毒日IV)L2抗体、商型肝炎抗体、乙肝等抗原均阴性的健康志愿者.本文件的使用者宜建立相应的安圭和健康规程以确悔生物安全，5. .2 但器设备仪器设备如下za) 超净工作台.b) 生物安全柜，c) 细胞培养箱。ld) 天平，e) 酶踞仪咽。水平摇床a1 yy JT 1808-2021 g) 祸旋握菌器，的路植器(200、1mL)、活塞排代武警檀器(100L)、连鳝分植器，i) 计时器，5.3 试j辑树试jll握材如下1的皮肤模型培养基(曲直脏模型制造商提供，与应且是模型配套使用)6b) 社民磷酸理冲盐禧擅(DPBS，lX) 0 c) 氧化铺在射撞【质量榷度10.9%)0 d 芝麻油高纯度或药用辑的MTTo f) 十二最基硫酸嗣(S!D5.，质量撞1r:20%) g) 异同晖分析蜡Lh) 6孔培挥植、24孔培弊植、96乱培棒扭(平庸)D 无菌离心营，j) 忡幢幢收集瓶，k) 弯头钝头幢于D 大幅斗，m)封口膜。n) 蝠摘旺，的无菌棉梅，6 试瞌步骤6.11 理提班E对照霞的制备6.1.1 量提麓的哥哥告应按照GB/T16886.12制备医疗器植和/rt.材料握握擅注意无菌操作.宜使用。.9%辄化铀注肘榷作为幢性捏捏介质制备极佳捏提檀F宜使用芝麻油作为非植性捏捏介质制备非极性霞提擅-若使用其他捏捏介质，应证明浸提介质不影响试验系统G宜基于GBjT16886.12论证捏提时间和温度.不适合捏握的医疗器械和/或精料进行试瞌时，宜论证其适用性，6画1.2时回溃的制告6,1.,2.1 阴性耐用无菌DPBS(lX ) 0 6,.11 .2.2 介匮对照应将介质对照置于捏捏容器中并进行与医疗器械和/葫材料相同的捏捏程序6,.1.2.,3 阳性对照l1%的SDS榕攘，取0.5mL 20% SDS水瞎掖与9.5mL相应捏捏介质，用雄泪掘菌器充分由勾.z YY/T 1808-2但1量h使用武瞌当天断酵制备的阳性对照，推茸使用商品化20Yo50s槽植$IJ岳阳性对睛，耐不适合盟握的试瞌捍品进行情噩时，可l用无菌DPBS制备SDS阳性琦圃，注2若试验样品与MTT试剂反应，或将组扭革锢跑到医色且在班后仍有一定量的踌圃，试验结果可能会被干拢，在这种情配下，可置置适宜的时照以晴除干扰哩6.2 RhE模型的准备E面孵盲接收皮肤组织后，植据模型制造商的说明将模型放入大小舍适的培葬植如6孔培养植)中，用配套的墙葬基面孵育。根据制造商的说明将适量培养基加入培弄握中，无菌条件下，打开盛有RhE模型的培养植盖子.用瞌于小心掌出盛有皮肤组织的小室，在无菌勃布g(;撞戴上轻轻除去粘附在小室外侧挚的残留蘸脯，幢查确认元残留后将院型转移至新鲜培养萃，制解小草避免底部产生气泡.根据制造商说明书贾孵育皮肤模且撞E悻存适量组辑的醺脯墙挥4巨室温下晤时l散日能理事有元宵染噩噩.6.3 拥样和冲茸3.1 总则虽然果用不同模型进行的体外皮脏剌激茸验都遵循相同原则，但不同模型的具体操作可能存在盏异，接触时间等条件宜遵从制造商说明书的规定.3.2 准备重温商热培养基，加样前约5min JA培养箱中拿出面膊育的培养植.加样前准备大小合适的培养植扭据制造商的要求选择用于RhE模型与样品及时照的膊育-用tt码标记培养植盖子，每个世验样晶如样品1的两种霞提擅可记为Tl-1和Tl-2)、阳性对照可记为PCl和PC2)、介质对照(可记为VCl和VC2)和阴性对照(可记为NC)分别使用3块组织更换小室下的培养基或将小室替人啻新鲜培养基的培算握中.检查晴捍握属部山确认转移过程中元气泡产生画.6.3.3 加样分别咂取100L未辑酵的试验样品、VC，NC或PC置于每个表皮表团(平行3孔，在意使用活塞排忧式移植蠕喔取黠稠液体用枪头轻轻将植体铺在皮肤上表面咽抽样完成后，转事培养植至培养箱(37C士1c ,5% COz士UICO:i，相对湿度95，%)孵育至制造商姐定时间.撞1:记住加;挥朋序国附m顺序屡与加样顺序-盐，撞2:国檀型表面晶疏术的，所归要确il:100L禧擅均匀捧布在垂直的整个幸面.在牵面张力作用下，有时幢幢禧荆撤滴只酷分布到表庭的外蝶，这种情况下，可使用桂头铺开样晶豆豆使用噩于矗击小草使样品疆盖盟个应.男外，对于油性量提植或1%SDS主麻抽轧植撞，可使用头蜻球状的瞌璃器具或事罹器眼铺开鞭悻山保证其与整个费应完全接恤，6. .3.4 冲洗孵背后，使用连锺分植器眼取灭菌DPBS捆靡冲撞组织，推荐冲揽15.25lX.去除肆留试验材料，根据组织制造商提供的具体说明进行咽冲洗不能太轻柔，否则试验样品不能完全清除，可使用大幅斗和塑料瓶收集忡世植，注意防止飞融和精m.冲挠后，在无菌吸水纸上反扣小室排干水分.使用棉签轻轻棋干表应章面，并用暖水辑或棉盛拭干小草底部，转事小室歪预先拥有新鲜培养基(0.3，mL/孔的24乱植中|临时存储，准备进行MTT孵育，若发现皮肤表面仍有肆存试撞样晶，使用元菌棉棒去除并记录.s yy lT 11808-20,21 6.4 RbE模型MTI帽胃丑陋先匮副定6.4.1 M1T孵宵6.4.1.1 MIT母班配制将MTT勘末需解于DPBS中，质量由度为5mg/mLo MTT充分需解后，使用0.22m撞膜过撞，用锢帽蜡包襄避光-20c悻事，可保存1年6.4. 1.2 MIT工悻擅配嗣用室温预热的培养基将MTT母植稀释至1mg/mLo 童:MTT工悻植要理配现用，6.4.1.3 费事草帽盲I临时存储缸中移出小室，使用无菌暖水纸或无菌棉签拭干小室属部，黠后将其转移至丽先捆人。.3mLMTT工作植的24孔缸中，使用锢牺辑包矗避光。将培养板放人蜡葬箱(，37c土1C ，5%z士1.% C03，相对在2度95%)孵育180min土5min 6,.4,.104 革取MTT孵育完成后，拭干小室内外所有强自MTT禧掖，根据组辑制造商说明转移组飘至合适的盛有适量异丙酶的组tft培养缸中，使用封口膜啻封容器培养极防止液体挥盎.记录开蜡时间，用培养握握蔷器(120r/min)室温握蔷至少120min士5mino使用枪头91注射针刺破组织得到相应孔中的草取液，用加样器至少棍匀3眈至禧液均匀后转移至96孔植，量:上述密封平板在不握菌条件下可在室温盟甜髓内避先过在草取08h24 h)收集草取革前使用撮苗器握茵平坦至少15mm. 6.4.2 I暖先应副直根据模型制造商说明从每个试验孔中转移200L植体重平届时孔培养板中适当标记)，平行3孔.使用酶际仅提据制造商说明在合适的波长下田是|吸光度(OD)值，通常使用1570nm披佳，异芮禧撒作为童自对照，平行6孔e连串及时测量，避兔96孔缸中异商酶藕发.7 盘盘据计算步醺以下计算步事适用于不与MTT试1fIJ反应、无鱼、不会将组织提色、非特异性。D值小于或等于阴性时用的5.%的试验样品，4 a) 窒白对照z计算，6个空白:t-t照孔的|平均OD值作为窒白时照理OD值Eb) NCNC组每块组织3个复孔的OD值均陆去空白对照OD值后再相加求和，其相除以3碍NC组每块组织的OD值，然后计算NC组3块组织OD值的平均值作为NC组OD值.c) PC:同法计算PC盟每块组织的QD值，用下式计算PC组每块扭扭曲组扭活度z口DVD= -_-=: x 100 ODNC 式中EVD 一一组织活度，U;OD.I 一-PCVC或试验样晶组每块组飘的OD值FODNC一-NC组OD值-YYtT808202 然后计算PC组3块组扭曲组织活度的平均值作为PC组的组棋话度也d) 同法计算试验样品和vc组每块组氧的组飘活匪，然后计算各组3块组舆平均组辑活匪作为各组的组织活庄-U 根据各坦每块组织的组织活度计算各组3块组织的组织活度的标准荤白白，建z若为排除试瞌样品干扰设置7相血对圃，页。在计算结果时扣除非特异性OD值.s试验撞更准则8.1 NC和VC撞噩准则a) NC军IVC的3块组织OD51O平均值大于或等于0.7且小于3.0t9lNC或vc的组棋擂匮通常将合接呈准则，建10.7和，3.0矗噩挤舍作与盎展组扭化学品试验导则439(OECDTG43，9)中几种RbE模型NC和VCI的最小和d大OD直，每种模型扭扭曲施圈可能有所盖异.b) 除了特舍a)外，每种模型NC和vc的OD值范围应特合制造商各自由接受罹则。c) 孵育后NC或VC3块组扭曲组织活匪的SD小于革等于20%d) VC组的组扭活rt应为NC的80Yo-120%0 且2PC撞暨准则孵育后PC组的组棋擂度为NC的40%山下且3换组织的扭扭活度的SD小于盟等于20%?则PC数据符合接受准则，,8.3 试瞌样晶幽据撞暨准则试验样品孵育后3抉组织的组扭话团的SD小于或等于20%则认为数据有强.若不待命要求则应重复试验，9 结果判定根据试验样晶组的组织活度商测试验样品潜在刺撒性。组织活J!f小于或等于阴性对照的50%即表示出现刺酷反应.试验组至少一个捏捏罹组的组织活度小于蓝等于50Yo，则认为此医疗器幢/材剧有皮脏剌激性，见表1量1直肤剌激结果的，自U至少一个捏捏鞭盟的组织活匪小于疆等于阴性对照的50%两个噩噩植组的组飘宿庄均大于回住对阳的50.%10 试验握告试验报告应至少包括以下信息=一一试瞌材料或辑械的描述自一-RhE模型的描述及其质控证书复印件F一一试瞌方醋，包括样品制备过程的详细描边s一一试验结果z一一试验结论，判定剌酷性(1)非剌激性例1)5 YY /T 1.8018-2021 附景A(资料性Rb.E模型的t昆明QECD TG 439中!&录了巴经是过验证的6种RhE模型=EpiSkin TM (SM)、EpiD町mTM SIT (EPI-200)、SkinEthicMRHE、LabCyteEPI-MODEL24 SIT、epiCS和Skin十另l外，文件中还提供了模验证方案与接受准则其他模型若能通过对6种RhE模型比对试瞌相同的剌激及非剌激材料进行曲实验室同(至少3个实验室)3辑。个生产批号的RhE模型盲法验证试验，证明其噩酣睡力、实验室内及实验室间变异性与巴收录某种模型高等同的表现，则可证明其与已收景模型的等教性，150;C 194相关工作组果用以上6种模型中的EpiDerm(EPI-200)和SkinEthicTM RHE两种模型对医疗器植体丹应肤剌撒试验进行了国际实磕室闯比时，验证了这两种模型的有娃性咽其他模型如果通过了以上两种形式的比对试验即追随验证试验(catch-upvalidation)，则认为可用于医疗器植体外皮肤刺撒试验，6 VY/T 1808-2021 事毒立lJ De JongW.H.，HoHmann丘，LeeM.，Kand缸ovH画，PeUevoisinC., Haishima Y. Tox.icoL Round rol)in study to evaluatethe reoonstructed human epidermis (RhE) model at.san in vitro skin ir-ritation test for detection of irritant时tivhyin med.icar device extractsJn Vitro. 20 18t 50pp.439-449. 2 Kandarova H.; Wmoughby J.A., De Jon,g W.旺，Letasiova且，M.iIasovaT. ,Bachelor M.A. Pre-validation of an in vitro skin irritation test for medical d.evices using the reoonstructerl human tis-ue model EpiDerm.ToxioolJn Vitro.2018.,50 pp.407-417. 3J Olse.n D.S., Lee M., Tur1ey A.P. Toxko1.Assessm田ltof test method variables for in vitro skin irritationtesting of mediea.l devie,e extracts.ln Vitro.2018 ,50. ppA26-432咂4J Pellevoisin C. ,. Videau C酶，BriotetD., Gr，阔。ireC., Tornier C., Alonso A. SkinEthic?M RHE for in vitro evaluation .of skin irritation of me.dical devce extracts. ToxicoL In Vitro. .20.18,50 pp. 419.4.25. 5J Organza.tion for Economic Cooperation and Development (OECD).Gu.deUnes for testing of chemicals.N4-39Jn Vitro Skin Initation: Reconstructed Human Epid町misT臼tMethod.OECD Pub lic:ations, 2017. 6 Alpe N Tornier Cd Robert C., Amsellem C., Roux M.-Hd Douoet O. A catch-up validation study on reconstructed human epidcrms (SkinEthicTM RHE) f.orfull replac! ement of the Draize skin irritation test. Toxicol.ln Vitro.2010 .24 pp.257-266. 7 Kandrov H., Hayden P. Ki.ausner M.t Kubilus J. Kearney P. t Sheasgreen J. 2009)! In Vitro Ski Irritation Test: Improving t:he Sensitivity of the EpiDerm Skin Irritation Test ProtocoLAT LA 37,.671-66,9,2009. 8 Coleman K.P.，.Grail巳rT.丑tMcNamara L. R. ,Rollins B. L. Christia.no N.J., Kandrov H. ToxcoLPreparation of irritant polymer sam.pls for an in vitro. round r,obin study.ln Vitro.2018. 50 pp. 4.01-406. 9J PeUevoisin C. 7 Tornier 已?Bremond C., RoUins 且.:riotet D., Turley A. Skin irritation of medical devices: 1n vitro assay with EPISKIN reconstructed. hUffi,an ,epidermis (RHE). TO.xicol. Lett. 2016, 2S8 (S63) p. viiil. 10 KandroY H. , Bendova H., Letasova 丘，ColemanK.P.,De Jong W.因.,Jlrova D. Tox!eol. Evaluation .of the medical d.evices benchmark materials jn th巳controUedhuman patch testing and in the RhE ln vitro skin ir:rita.tion protoco1.In Vitro.2018 ,50 pp.433-438. 11 FaHer 巳，BracherM. t Dami N. ,Roguet R.Predictive ahJity of reconstructed human epider-mis equivalentB (or theassessment 01 sk