YY∕T 1805.3-2022 组织工程医疗器械产品 胶原蛋白 第3部分：基于特征多肽测定的胶原蛋白含量检测 液相色谱-质谱法[医药].pdf

ICS11.040.30CCSC30YYYY/T1805.320223部分：基于特征多肽测定的胶原蛋白含量检测液相色谱-质谱法TissueengineeringmedicaldeviceproductsCollagenproteinPart3:QuantificationofcollagenbasedonmarkerpeptidedetectionLiquidchromatography-massspectrometry2022-01-13发布2022-08-01实施国家药品监督管理局发 布YY/T1805.32022次目刖 目引 言n1范 围2规 范 性 引 用 文 件3术语和定义4鍵5试 剂 及 其 配 制6仪器和设备7检测方法8结 果 计 算附 录A(规 范 性）牛I型胶原蛋白特征多肽含量检测附录B(规 范 性）牛n型胶原蛋白特征多肽含量检测附录C(规 范 性）猪I型胶原蛋白特征多肽含量检测参考文献2335691215学兔兔 w w w .b z f x w .c o m 标准下载YY/T1805.32022言刖本文件按照GB/T1.1一2020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。胶原蛋白的第3部分。YY/T1805已经发布了本文件是YY/T1805组织工程医疗器械产品以下部分：-第2部分：I型胶原蛋白分子量检测十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法；第3部分：基于特征多肽测定的胶原蛋白含量检测液相色谱-质谱法。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由国家药品监督管理局提岀。本文件由全国外科植人物和矫形器械标准化技术委员会组织工程医疗器械产品分技术委员会(SAC/TC110/SC3)归口。本文件起草单位：中国科学院过程工程研究所、中国食品药品检定研究院、岛津企业管理（中国）有限公司、国科卓越（北京）医药科技研究有限公司。本文件主要起草人：张贵锋、高建萍、张天宏、李晓东、冀峰、李敬来、范行良、冯倩倩、张乐、徐丽明。学兔兔 w w w .b z f x w .c o m 标准下载YY/T1805.32022言引用于组织工程医疗器械产品的胶原蛋白类材料包括组织提取的胶原蛋白和基因重组的胶原蛋白。胶原蛋白被广泛应用于各种医疗器械产品的研发和产品制备。胶原蛋白类材料具有不同的特性，如：分子量、纯度、种属、型别差异、三螺旋结构、细胞黏附特性等，这些性能直接关系着胶原蛋白的质量和使用性能。YY/T1805组织工程医疗器械产品胶原蛋白旨在建立胶原蛋ft某些特殊性能的检测和表征方法，拟由4个部分构成。第1部分：术语和定义。目的在于给岀包括组织提取的胶原蛋白和基因重组胶原蛋白的各种术语和定义。第2部分：I型胶原蛋白分子量检测十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法。目的在于提供可用于胶原蛋白分子量检测的方法。第3部分：基于特征多肽测定的胶原蛋白含量检测液相色谱-质谱法。目的在于给岀基于特征多肽定量测定，间接地反映胶原蛋白含量的液相色谱-质谱检测方法。该方法也可用于种属来源和型别的鉴别。第4部分:胶原蛋白螺旋结构表征方法。目的在于建立不同参数和指标的胶原蛋白结构分析和三螺旋结构表征方法，用于评价其三螺旋结构的有无、相对含量及其完整性。胶原蛋白含量的检测目前常用的有羟脯氨酸法，通过羟脯氨酸含量的检测来反映胶原蛋白含量。本文件给出的是基于合成特异性胶原蛋白特征多肽对照品，利用液相色谱-质谱法进行胶原蛋白特征多肽含量的测定，间接地反映胶原蛋白的含量。n学兔兔 w w w .b z f x w .c o m 标准下载YY/T1805.32022组织工程医疗器械广品胶原蛋白第3部分：基于特征多肽测定的胶原蛋白含量检测液相色谱-质谱法1范围本文件规定了用液相色谱-质谱法测定不同类型胶原蛋白特征多肽含量的方法。本文件适用于组织提取纯化的胶原蛋白及其胶原类产品中不同类型胶原蛋白特征多肽含量的测定。注：重组胶原蛋白、脱细胞基质经胶原蛋白提取后的样品可参考本方法进行相应的胶原蛋白特征多肽含量测定。2规 范 性 引 用 文 件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法YY/T1453组织工程医疗器械产品I型胶原蛋白表征方法中华人民共和国药典（2020年版）3术 语 和 定 义YY/T1453界定的术语和定义适用于本文件。4概 述将胶原蛋白试样溶解，加热变性后进行胰蛋白酶酶解，释放特征多肽；再用液相色谱-质谱法测定。以不同类型胶原蛋白特征多肽的保留时间和二级子离子碎片的质荷比进行定性和确证，用外标法或内标法进行定量。用合成的不同类型胶原蛋白特征多肽作为标准品，实现外标法定量检测；用合成的相同特征多肽序列的同位素标记特征多肽与非同位素标记特征多肽按一定比例混合，实现内标法定量检测。同位素内标法有助于改善基质效应对测定准确性的干扰。本文件以同位素内标法为例，分别给岀牛I型、牛n型和猪I型胶原蛋白特征多肽含量检测的标准操作规程和要求。其中，牛I型胶原蛋白特征多肽含量检测按附录A，牛n型胶原蛋白特征多肽含量检测按附录B，猪I型胶原蛋白特征多肽含量检测按附录c进行测定。针对不同动物来源或不同型别的胶原蛋白，也可自行筛选合适的特征多肽经验证后进行定量检测。学兔兔 w w w .b z f x w .c o m 标准下载YY/T1805.320225试 剂 及 其 配 制5 . 1试 剂 和 对 照 品所用试剂及对照品要求如下：a)乙腈，色谱纯。b)胰蛋白酶，序列纯。c)碳酸氢铵，分析纯。d)甲酸，色谱纯。e)胶原蛋白特征多肽对照品：检测不同种属及不同类型的胶原蛋白特征多肽含量时，需要设计和合成相应的种属和/或型别特异性的胶原蛋白特征多肽，作为定量对照品。其设计原则为：对不同来源及不同类型的胶原蛋白序列进行Blast多序列比对，只在某一特定来源和/或特定类型的胶原蛋白序列中出现的肽段，且化学修饰或交联对其丰度没有影响，为其特异性的特征多肽，并保证在色谱分离过程中有较高的分离度。注：推荐使用国家医药标准物质。f)同位素标记特征多肽:将作为定量用对照品的特征多肽进行同位素标记，与定量用特征多肽对照品以及待检测样品按一定比例混合，通过特征多肽与其同位素内标峰面积的比值对样品中特征多肽进行定量，有助于降低或消除基质干扰。5 . 2溶 液 配 制所用溶液配制方法如下：溶液配制用水应满足GB/T6682中分析实验室用水的要求。a)乙腈水溶液（体积比）：乙腈：水为6:4;b)0.05mol/L碳酸氢铵溶液：精密称定0.3950g碳酸氢铵，加水定容至100mL(现用现配）；c)0.10mol/L碳酸氢铵溶液：精密称定0.7900g碳酸氢铵，加水定容至100mL(现用现配）；d)液相色谱流动相：1)流动相A:取200mL水置1L容量瓶中，加人1mL甲酸，并加水定容至1L，用0.22滤膜过滤后备用；2)流动相B:取200mL乙腈水溶液a)置1L容量瓶中，加人1mL甲酸，并加乙腈水溶液a)定容至1L，用0.22滤膜过滤后备用；e)特征多肽标准工作溶液配制：1)特征多肽储备液配制：精密称定一定量的胶原蛋白特征多肽(最小取样量5mg)，用1mL0.05mol/L碳酸氢铵溶液溶解，用0.05mol/L碳酸氢铵溶液定容，配制成浓度为2mg/mL的标准溶液，2C4C保存，有效期7天；2)同位素标记特征多肽内标储备液配制：精密称定一定量的同位素标记胶原蛋白特征多肽(最小取样量5mg)，用1mL0.05mol/L碳酸氢铵溶液溶解，转移至10mL容量瓶中，用0.05mol/L碳酸氢铵溶液定容，配制成浓度为2mg/mL的标准溶液，2C4C保存，有效期7天；取适量的同位素标记特征多肽内标储备液，用0.05mol/L碳酸氢铵溶液稀释成适当浓度的同位素内标工作溶液（其信号强度应与被测组分相当，现用现配）；2YY/T1805.32022注1:特征多肽和同位素标记的特征多肽对照品可以取1瓶20mg/瓶），直接全部溶解，配制成相应浓度的储备液，分装后一20(：以下冷冻保存。注2:推荐用纯甲醇配制同位素特征多肽内标储备液和特征多肽储备液，一20C以下冷冻保存，使用时再用0.05mol/L碳酸氢铵溶液稀释。3)特征多肽标准工作液配制：用0.05mol/L碳酸氢铵溶液稀释成系列浓度的特征多肽标准工作液，并与同位素内标标准工作溶液按一定比例混合（现用现配），制备系列标准样品，离心3000,10min)，取上清液置进样瓶中，待用；注3:采用外标法时直接用特征多肽标准工作溶液进行测定。注4:为防止特征多肽的吸附，可在配制储备液或工作液时添加10%乙腈（体积分数）；同时在样品配制时，同样添加10%乙腈（体积分数），以保持有机溶剂组成与特征多肽标准工作液一致。f)加标样品的配制：以样品量为基准，加入特征多肽对照品的量在正负3倍以内，尽量与样品中待测特征多肽含量相近；加标体积不超过样品原体积的10%(4000线性尺2值：0.99;加标回收率：80%120%;精密度：按照中华人民共和国药典2020年版四部通则9101分析方法验证指导原则。外标法时，对照品溶液的色谱峰面积与供试品中对应的色谱峰面积比值不超过2倍。;或150mm)X(2.1或2.0mm)mmmm;7 . 3测 定7.3.1标 准 工 作 曲 线以一系列特征多肽与同位素标记特征多肽标准工作溶液浓度比值为横坐标，以特征多肽与同位素标记特征多肽的峰面积比值为纵坐标绘制标准曲线，得到回归方程和相关系数。Y=aX+b,R2(1)式中:-特征多肽与同位素标记特征多肽峰面积比值；-常数；特征多肽浓度与同位素标记特征多肽浓度比值；常数；相关系数。注：釆用外标法时，以标准工作液浓度Mg/mU为横坐标，特征多肽的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，用于样品特征多肽含量计算。yxbR27.3.2定 量 检 测将标准工作液和待测液分别注入液相色谱-质谱联用仪中，以保留时间和稳定特异的子离子色谱峰进行定性。按照液相色谱-质谱条件测定标准工作液和样品，样品和标准工作液中待测物的保留时间与对照品一致。定量测定时采用内标法或外标法定量。4YY/T1805.320228结 果 计 算8.1用标准曲线的回归方程计算测试样品的特征多肽浓度。根据测试样品中特征多肽与同位素标记特征多肽峰面积比值(Y)得岀测试样品中特征多肽与同位素内标的浓度比（X)。8.2根据试样的同位素特征多肽浓度和测试样品中特征多肽与同位素内标的浓度比，计算试样中的特征多肽浓度和含量见式2)和式（3)。用系统处理软件或按照式2)计算试样中特征多肽含量：XXCXVMt=(2)式中：试样中特征多肽含量，单位为微克每毫克yg/mg);样品中特征多肽与同位素内标特征多肽的浓度比；同位素内标特征多肽浓度，单位为微克每毫升Mg/mL);样品最终定容体积，单位为毫升mL);最终测试样液的试样质量，单位为毫克mg)注：式2)适用于固体样品，包括：凝胶、海绵、膜、冻干粉等样品的胶原蛋白特征肽含量计算，即以每毫克样品中含有特征多肽的量g)表示。由于凝胶类样品含水量较多，其单位质量中胶原蛋白的特征多肽含量意义不同，建议在结果后面标注样品的性状（凝胶）。液体样品按照式3)计算试样中特征多肽含量：MtXVX X C,X V,M(3)V2式中:试样中特征多肽含量，单位为微克每毫升pg/mL);样品中特征多肽与同位素内标特征多肽的浓度比；同位素内标特征多肽浓度，单位为微克每毫升pg/mL);样品最终定容体积，单位为毫升mL);最终测试样液的试样体积，单位为毫升mL)MXCV,v25YY/T1805.32022附 录A(规范性）牛I型胶原蛋白特征多肽含量检测A.1试 剂 及 配 制A.1 . 1试 剂 及 对 照 品所用试剂及对照品均符合以下要求：a)牛I型胶原蛋白特征多肽对照品：序列为GPAGPQGPR的多肽，纯度大于98%；b)同位素标记牛I型胶原蛋白特征多肽：序列为G(N15)PA(N15)G(N15)PQG(N15)PR的多肽，纯度大于95%;c)其他试剂见5.1。注：GETGPAGPAGPIGPVGAR的特征多肽已被验证也可用于牛I型胶原蛋白特征多肽定量检测对照品，并推荐用于与其他种属I型胶原蛋白的鉴别。该序列已被验证在适宜的色谱质谱条件下可进行定量检测，并进行种属鉴别。A.1 . 2试 剂 配 制所用试剂配制方法如下：a)牛I型胶原蛋白特征多肽标准工作液配制：1)牛I型胶原蛋白特征多肽储备液配制：按照5.2e)l)规定进行配制2)同位素标记牛I型胶原蛋白特征多肽储备液配制：按照5.2e)2)规定进行配制；3)特征多肽标准样品配制：将牛I型胶原蛋白特征多肽储备液用0.05mol/L碳酸氢铵溶液稀释成浓度为0.1yg/mL0.5|ug/mLljitg/mL2jitg/mL5pg/mL10ig/mL的标准工作液，并与同位素标记特征多肽标准工作液按1:1(体积比）混合（现用现配），制备系列标准样品，离心3000,10min)取上清液置进样瓶中，待用；b)其他试剂按照5.2规定进行配制。;A.2仪 器所用仪器规格参照以下要求：a)液相色谱柱：十八焼基桂院键合桂胶柱（粒径5jLtm,150mmX2.1mm);b)其他仪器见第6章。A.3测 试 方 法A.3 . 1试 样 制 备A.3 . 1.1样 品 变 性 溶 解按照7.1.1规定进行处理。A.3.1.2样品酶解及配制样品酶解及配制方法如下：a)样品酶解：酶解反应17h其他按照7.1.2规定进行处理；b)待测样品配制：酶解后的样品与同位素内标牛I型胶原蛋白特征多肽标准工作液按1:1混6YY/T1805.32022合，待测；c)加标样品溶液配制：取胰蛋白酶酶解后的牛I型胶原蛋白样品溶液455L200pg/mL标准工作液5L混匀，待测。A.3 . 2色 谱 质 谱 条 件A.3 . 2.1色 谱 条 件流动相A相为含0.1%甲酸的水溶液，B相为含0.1%甲酸的60%乙腈溶液，流速为0.3mL/min,柱温为30C，进样量为5L色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱（粒径5m,150mmX2.1梯度洗脱。洗脱条件见表A.1)，使用mm表A.1梯 度 洗 脱 条 件流动相A流动相B时间%9550.000.509556.0075257.505958.005958.0195510.00955A.3 . 2.2质 谱 条 件根据不同的质谱仪器设定相应的参数，通用参数按照7.2b)规定进行设置，牛I型胶原蛋白特征多肽检测参考条件见表A.2表A.2监 测 离 子 通 道母离子子离子检测方式611.27牛I型胶原蛋白特征多肽418.74682.18613.27同位素标记特征多肽420.71685.43注1:上述液相色谱-质谱操作条件是典型操作参数，可根据不同仪器的特点，对操作参数作适当调整，以获得最佳效果。注2:优先选择内标和受试物相对应的子离子碎片，推荐使用受试物m/z418.74611.27、内标物m/z420.71613.27作为定量离子通道。A.3.3测定按照7.3规定进行测定。7611.37553.22681.85610.57390.04225.61328.91490.73612,57154.84271.8339i,15507.62555.24380.64211.50682.92283.69410.35593.24683.69YY/T1805.32022A.4结 果 计 算按照第8章规定进行计算。A.5牛I型胶原蛋白特征多肽对照品典型色谱质谱图本文件中使用的牛I型胶原蛋白特征多肽对照品的典型色谱图见图A.1质谱图见图A.2RT:0.00-10.005.34NL:1.71E5m/z=610.77-611.77F:+cliSlSRMms2418.739611.267-611.269,682.176-682.178MS10090-80H-l70召60350-40-30-20-10-5.771.662.252.763.544.214.646,257.587.918.859.410.620350246789Time/rain图A.1牛I型胶原蛋白特征多肽对照品典型色谱图dFullms2418.70cid35.00105.00-850.00T:+c554.10100200300400500600700800m/z图A.2牛I型胶原蛋白特征多肽对照品典型二级质谱图8ooooo43218ooudpunqv0AJTCT0HYY/T1805.32022附录B(规范性）牛I型胶原蛋白特征多肽含量检测B.1试 剂 及 配 制B.1 . 1试 剂 及 对 照 品所用试剂及对照品均符合以下要求：a)牛II型胶原蛋白特征多肽对照品：序列为GEAGAQGPMGPAGPAGAR的多肽，纯度大于98%；b)同位素标记牛n型胶原蛋白特征多肽：序列为G(N15)EAG(N15)AQG(N15)PMG(N15)PAG(NI5)PAG(N15)AR的多肽，纯度大于95%；c)其他试剂见5.1B.1 . 2试 剂 配 制所用试剂配制方法如下：a)牛n型胶原蛋白特征多肽标准工作液配制：1)牛n型胶原蛋白特征多肽储备液配制：按照5.2e)l)规定进行配制；2)同位素标记牛n型胶原蛋白特征多肽储备液配制：按照5.2e)2)规定进行配制；3牛n型胶原蛋白特征多肽标准工作液配制：取适量的牛n型胶原蛋白特征多肽储备液，用0.05mol/L碳酸氢铵溶液(含10%乙腈)稀释成浓度为0.2Mg/mL0.5/.g/mL.l吨/mL2yg/mL5yg/mL10yg/mL20pg/mL50/ig/mL的系列标准工作液，备用;b)其他试剂按照5.2规定进行配制。B.2仪 器所用仪器规格参照以下要求：a)液相色谱柱：十八垸基桂焼键合娃胶柱（粒径5jLtm,150mmX2.1mm);b)其他仪器见第6章。B.3测试方法B.3 . 1试 样 制 备B.3 . 1.1样 品 变 性 溶 解按照7.1.1规定进行处理。B.3 . 1.2样 品 酶 解取配制好的浓度为1mg/mL的样品溶液200yL0.05mol/L碳酸氢铵溶液700和100fig/mL的同位素标记牛II型胶原蛋白特征多肽工作液100pU加入酶解小瓶中（含胰蛋白酶20Mg酶活力15000u/mg)，置37C恒温水浴锅中，振荡频率150次/分200次/分，反应44h沸水浴加热5min使胰蛋白酶失活，冷却至室温，离心3叱，10min)取上清液置进样小瓶中，待用。牛II型胶原蛋白样品：碳酸氢铵溶液：同位素内标胶原蛋白特征多肽工作液的体积比为2:7:1。9YY/T1805.32022B.3.2色 谱 质 谱 条 件B.3.2.1色 谱 条 件流动相A相为含0.1%甲酸的水溶液，B相为含0.1%甲酸的60%乙腈溶液，流速为0.5mL/min,柱温为25C，自动进样仓温度为15C，进样量为2L色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱（粒径5pm150m m X2.1)，洗脱条件见表B.lmm表B.1梯 度 洗 脱 程 序流动相A流动相B时间%9550.001.009556.0070307.505959.005959.0195510.00955注：以上液相色谱操作条件是典型操作参数，可根据不同仪器的特点，对操作参数作适当调整，以获得最佳效果。B.3.2.2质 谱 条 件根据不同的质谱仪器设定相应的参数，部分通用参数按照7.2b)规定进行设置，牛n型胶原蛋白特征多肽检测参考条件如下：雾化气流速：3L/mm;加热气流速：10L/mm;离子源温度：300C;DL管温度：250C;加热块温度：400C;干燥气流速：10L/mm;滞留时间100ms;检测方式为多反应监测模式MRM)，监测离子通道见表B.2表B.2监测离子通道母离子子离子检测方式1711039.50牛n型胶原蛋白特征多肽696.10776.50980.951043.10同位素标记特征多肽779.35697.95984.50注1:以上质谱操作条件是典型操作参数，可根据不同仪器的特点，对操作参数作适当调整，以获得最佳效果。注2:优先选择内标和受试物相对应的子离子碎片，推荐使用受试物m/z776.501039.50、内标物m/z779.351043.10作为定量离子通道。B.3.3测定B.3.3.1特 征 多 肽 系 列 标 准 样 品 的 配 制取牛n型胶原蛋白特征多肽系列标准工作液各200L，分别加人0.05mol/L碳酸氢铵溶液10YY/T1805.32022700yL和100pg/mL的同位素标记特征多肽标准工作液100L，涡旋混匀后，取450L，加入50pL乙腈，混匀，待测。牛n型胶原蛋白特征多肽：碳酸氢铵溶液：同位素标记特征多肽的体积比为2:7:1。B.3.3.2样品溶液配制样品溶液配制方法如下：a)待测样品溶液配制：取胰蛋白酶酶解后的牛n型胶原蛋白样品（见B.3.1.2)溶液450L，加入50pL乙腈，混匀，待测；b)加标样品溶液配制：取胰蛋白酶酶解后的牛II型胶原蛋白样品（见B.3.1.2)溶液450L，加入45tiL乙腈，5的200yg/mL标准工作液按照B.1.2a)3)规定进行配制，混匀，待测。B.3.3.3样品测定按照7.3规定进行测定。B.4结 果 计 算按照第8章规定进行计算。B.5牛n型胶原蛋白特征多肽对照品典型色谱质谱图本文件中使用的牛n型胶原蛋白特征多肽对照品的典型色谱图见图B.1，质谱图见图B.2。3:rRC)-1776.5(XK)1039.5000(十）CK:II275(X)4225(X)4175602.3000(+)CR:-30.08.0-7.0-6.0-5.04.0-3.0-2.0-1.00.0min2.55.07.510.0图C.1猪I型胶原蛋白特征多肽对照品典型色谱图Tnton.(xlOG000)602.21.00-774.30.750.50-556.2681.10.25327.2518.0175.3977.5)LlliLi.liidljlallL1LiJiljllllL.i.lL.r.-MI,.illliii,.1iiiIIii0.0025050075010001250m/z图C.2猪I型胶原蛋白特征多肽对照品典型二级质谱图14YY/T1805.32022参考文献1YY/T0954无源外科植人物I型胶原蛋白植人剂2LeeCH，SinglaA.,LeeYY.Biomedicalapplicationsofcollagen.IntJPhar，2001，221:1-223ShermanVR，YangW，MeyersMA.Thematerialsscienceofcollagen.JMechBehavBi-omed，2015，52:22-504LiuXH,ZhengC，LuoXM,WangXC,JiangH.Recentadvancesofcollagen-basedbioma-terials:Multi-hierarchicalstructure,modificationandbiomedicalapplications.MaterSciEng,R.2019,99:1509-15225ZhangGF，SunAM,LiWJ，LiuT,SuZG.Massspectrometricanalysisofenzymaticdi-gestionofdenaturedcollagenforidentificationofcollagentype.JChromatogrA,2006，1114：274-2776PataridisS,EckhardtA,MikulikovaK.IdentificationofcollagentypesHPLC-MS/MS.jSepSci,2008(31)：3483-34887PataridisS，EckhardtA，MikulikovaK，SedlakovaP，MiksikI.Determinationandquanti-ficationofcollagentypesintissuesusingHPLC-MS/MS.CurrAnalChem，2009，5(4)：316-3238NimptschA，SchiburS，IhlingC，SinzA，RiemerT，HusterD，SchillerJ.Quantitativea-nalysisofdenaturedcollagenbycollagenasedigestionandsubsequentMALDI-TOFspectrometry.CellTissueRes，2011，343(3)：605-6179PeffersMJ,BeynonRJ，CleggPD.Absolutequantificationofselectedproteinsinthehumanosteoarthriticsecretome.InternationalIntJMolSci,2013，14(10):20658-2068110BuckleyM.Speciesidentificationofbovine，ovineandporcinetype1collagen;comparingfingerprintingandLC-basedproteomicsmethods.IntJMolSci,2016，17(4):1-1711VanHuizenNA，IjzermansJNM,BurgersPC，LuiderTM.Collagenanalysiswithspectrometry.MassSpectromRev.2020,39:309-335mtissuesusingmasspeptidemassmass中 华 人 民 共 和 国 医 药行业标准组织工程医疗器械产品胶原蛋白第3部分：基于特征多肽测定的胶原蛋白含量检测液相色谱-质谱法YY/T1805.32022中 国 标 准 出 版 社 出 版 发 行北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029)北京市西城区三里河北街16号（100045)网址：服务热线：400-168-00102022年1月 第 一 版回回书号:1550662-36323回？码上扫一扫正版服务到版 权 专 有 侵 权 必 究YY/T1805.3-2022CNcJ0CNl.908lH/AA