龙牙百合多糖的超声辅助提取及其抗氧化、降血脂活性分析.pdf

王威振，杨盼盼，遆永瑞，等.龙牙百合多糖的超声辅助提取及其抗氧化、降血脂活性分析 J.食品工业科技，2023，44（18）：251257.doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022100237WANG Weizhen,YANG Panpan,TI Yongrui,et al.Ultrasound-Assisted Extraction and Analysis of Antioxidation and HypolipidemiaActivities of Polysaccharides from Lilium brownii var.viridulumJ.Science and Technology of Food Industry,2023,44(18):251257.(in Chinese with English abstract).doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022100237 工艺技术 龙牙百合多糖的超声辅助提取及其抗氧化、龙牙百合多糖的超声辅助提取及其抗氧化、降血脂活性分析降血脂活性分析王威振1，杨盼盼2,+，遆永瑞2，唐玉超2，徐雷锋2，吴学尉1,*，宋子涵2,*，明军2,*（1.云南大学农学院，云南昆明 650091；2.中国农业科学院蔬菜花卉研究所，蔬菜生物育种全国重点实验室，北京 100081）摘要：龙牙百合（Lilium brownii var.viridulum）是我国主要传统食用药用百合之一，本试验拟探究龙牙百合多糖提取工艺及其理化性质和功能活性，以龙牙百合鳞茎为原料，以多糖得率为指标，料液比、浸提时间和浸提温度为因素，对龙牙百合多糖提取工艺进行优化，再进一步去蛋白纯化多糖，分析其理化性质，测定其体外抗氧化和降血脂能力。结果显示：龙牙百合粗多糖最佳提取工艺为料液比 1:20 g/mL，浸提时间 20 min，浸提温度75，粗多糖得率为 11.98%。粗多糖总糖、糖醛酸和蛋白质含量分别为 58.46%、8.06%和 10.85%，经过去蛋白后多糖的总糖和糖醛酸含量分别提高到 84.78%和 15.41%，蛋白质含量降低至 4.73%。龙牙百合去蛋白多糖在10 mg/mL 时对 DPPH 和 ABTS+自由基清除率为 8.75%和 38.59%，低于对照 VC；对胰脂肪酶的抑制率为85.78%，高于对照奥利司他，有较好的体外抑制胰脂肪酶效果。实验结果将为进一步研究龙牙百合多糖的构效关系和开发具有潜力的功能性食品提供依据，并为百合的应用提供理论参考。关键词：龙牙百合，多糖，正交试验，抗氧化活性，胰脂肪酶本文网刊:中图分类号：TS201.2 文献标识码：B 文章编号：10020306（2023）18025107DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2022100237Ultrasound-AssistedExtractionandAnalysisofAntioxidationandHypolipidemiaActivitiesofPolysaccharidesfromLiliumbrowniivar.viridulumWANGWeizhen1，YANGPanpan2,+，TIYongrui2，TANGYuchao2，XULeifeng2，WUXuewei1,*，SONGZihan2,*，MINGJun2,*（1.School of Agriculture,Yunnan University,Kunming 650091,China；2.State Key Laboratory of Vegetable Biobreeding,Institute of Vegetables and Flowers,Chinese Academy of AgriculturalSciences,Beijing 100081,China）Abstract：Lilium brownii var.viridulum is one of the main traditional edible and medicinal lily in China.This study aimedto explore the extraction technology,physicochemical properties and functional activity of polysaccharide from Liliumbrownii var.viridulum,used Lilium brownii var.viridulum scales as materials,polysaccharide yield as the index,solid-liquid ratio,extraction time and extraction temperature as factors to optimize the extraction process of lily polysaccharide.Then the polysaccharide was purified through removing protein.The physicochemical properties of the polysaccharides 收稿日期：20221024 +并列第一作者基金项目：国家自然科学基金（31902043，32172612）；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（IVF-BRF2022015）；中国农业科学院创新工程项目。作者简介：王威振（1997），男，硕士，研究方向：百合研究，E-mail：。杨盼盼（1988），女，博士，助理研究员，研究方向：百合研究，E-mail：。*通信作者：吴学尉（1977），男，博士，教授，研究方向：百合研究，E-mail：。宋子涵（1991），女，博士，助理研究员，研究方向：食品科学，E-mail：。明军（1963），男，博士，研究员，研究方向：百合资源与育种，百合功能性成分代谢及应用，E-mail：。第 44 卷 第 18 期食品工业科技Vol.44 No.182023 年 9 月Science and Technology of Food IndustrySep.2023 were analyzed,and the antioxidant and lipid-lowering abilities were measured in vitro.The results showed that the optimalextraction conditions were the material to liquid ratio 1:20 g/mL,extraction time 20 min,extraction temperature 75,andpolysaccharide yield was 11.98%.The contents of total sugar,uronic acid and protein of crude polysaccharide were58.46%,8.06%and 10.85%,respectively.After deproteinization,the contents of total sugar and uronic acid ofpolysaccharide were increased to 84.78%and 15.41%,respectively,and the content of protein was reduced to 4.73%.Thescavenging rates of 10 mg/mL deproteinized polysaccharide for DPPH and ABTS+free radicals were 8.75%and 38.59%,respectively,which were lower than those of control VC.The inhibition rate of deproteinized polysaccharide for pancreaticlipase was 85.78%,which was higher than that of the control orlistat,indicating good inhibit pancreatic lipase effect invitro.These results would provide a basis for further study on the structure-activity relationship and development ofpotential functional food,and provide theoretical reference for the application of lily.Keywords：Lilium brownii var.viridulum；polysaccharide；orhogonal design；antioxidant activity；pancreatic lipase 百合通常指百合科（Liliaceae）百合属（Lilium）植物，百合属中真正中文名称为“百合”的种是指 Liliumbrownii var.viridulum，也被称为龙牙百合1。百合广泛分布于北半球，是非常重要的高档蔬菜、药材，也是世界 4 大切花之一。同时它也是中国卫生部审批通过的首批药食同源植物之一，具有确定医药疗效，而且还具有很高的食用、观赏价值23。百合中含有丰富的多糖、多酚、黄酮和皂苷等活性成分，多糖是主要活性功能成分之一4，具有抗氧化、降血糖、降血脂等多种生理活性功能作用5。近年来，随着人们生活水平的不断提高，肥胖成为一个重要的公共健康问题，而营养过剩成为肥胖的重要诱因6。饮食中的脂肪摄入量经常被认为是肥胖的增加的罪魁祸首，且膳食脂肪摄入量与肥胖呈正相关7。在人体消化系统中膳食脂肪的消化主要依靠胰腺脂肪酶（human pancreatic lipase，HPL），如果可以抑制胰脂肪酶就可以减少脂肪吸收，从而控制和治疗肥胖8。目前市场上应用的胰脂肪酶抑制剂类减肥产品主要是奥利司他910。尽管奥利司他具有良好的减肥作用，但会引起一些较为严重的副作用，如腹泻、腹胀、油性粪便、大便紧急感，以及一些对肝脏的负面影响1113。因此，探寻一种天然的、安全有效的药食同源类降脂产品具有重要的现实意义。李鑫鑫等14检测了 12 种植物粗多糖对胰脂肪酶抑制率，均具有一定的抑制效果，同时多具有良好的抗氧化活性，而龙牙百合多糖在降血脂抗肥胖方面鲜见报道。百合多糖提取方法主要有热水浸提法、超声法、微波辅助法、高压法和酶法等，而不同的提取方法会影响多糖的得率、结构和生物活性1517。王荣琨等18比较了超声辅助提取、压力辅助提取法和不同 pH 水浸提法所得竹荪纯多糖的提取率，其中超声提取法提取率最高，且其抗氧化活性最强。马高兴等19采用热水浸提法和超声提取法提取杏鲍菇多糖测定了其免疫活性，结果表明超声提取杏鲍菇多糖具有更高的免疫活性。目前在百合多糖的报道中，主要对卷丹和兰州百合多糖提取工艺及功能研究较多，而针对龙牙百合多糖提取工艺优化及其多糖的结构功能鲜有报道。超声辅助提取能有效提高百合多糖得率，且所得多糖可能具有较高的生物活性。因此，本实验主要研究了超声辅助提取龙牙百合多糖的最佳工艺参数和初步分离纯化方法，并以纯化的多糖进行抗氧化、降血脂功效初步验证，以期为龙牙百合的深加工和新产品开发提供理论依据。1材料与方法 1.1材料与仪器龙牙百合8 月份采收自湖南隆回，将其鳞片洗净，60 烘干至恒重，破壁机打粉过 100 目筛网，置于干燥器中常温保存备用；NaOH、硫酸、苯酚北京化工厂有限责任公司；无水葡萄糖山东齐鲁生物科技有限公司；牛血清蛋白、考马斯亮蓝、D-半乳糖醛酸、蒽酮、橄榄油、VC源叶生物科技有限公司；DPPH 试剂盒、ABTS 试剂盒苏州科铭生物技术有限公司；酚酞上海凛恩科技发展有限公司；奥利司他鲁南制药集团股份有限公司；胰脂肪酶上海阿拉丁生化科技股份有限公司；聚乙二醇 4000日本青木工贸株式会社；无水乙醇天津市致远化学试剂有限公司；磷酸二氢钾北京化学试剂公司；十二水合磷酸氢二钠西陇化工股份有限公司；正丁醇国药集团化学试剂有限公司。Pilot2-4M 型真空冷冻干燥机博医康（北京）仪器有限公司；WFZ UV-2802PC 型紫外分光光度计尤尼柯（上海）仪器有限公司；BSM-220.4 型电子天平上海卓精电子科技有限公司；JBT/C-YCL600T/3P（D）型超声波药品处理机济宁金百特电子有限责任公司；HH-4 型数显恒温水浴锅常州越新仪器制造有限公司；DHG-9143BS-III 型电热恒温鼓风干燥箱上海新苗医疗器械制造有限公司；H4-20K 型台式高速离心机湖南可成仪器设备有限公司；THD-200D 型台式恒温振荡器北京天林恒泰科技有限公司。1.2实验方法 1.2.1 龙牙百合粗多糖的提取工艺取龙牙百合粉3.00 g，按照单因素实验条件超声辅助提取，提取结束后多糖液用 70%乙醇溶液过夜醇沉，6000 r/min 252 食品工业科技2023 年 9 月离心 10 min 弃去上清液得到沉淀，室温酒精挥发 1 h后放入烘箱中 60 烘干至恒重，称重，重复 3 次。按照公式（1）计算多糖得率。A(%)=m1m2100式（1）式中：A：多糖得率；m1：粗多糖质量，g；m2：原料质量，g。1.2.2 水溶性粗多糖超声提取单因素实验 1.2.2.1 料液比对多糖得率的影响准确称取龙牙百合粉 3.00 g，将蒸馏水按照料液比 1:10、1:15、1:20、1:25 和 1:30 g/mL 的比例加入锥形瓶中，搅拌均匀后在提取温度 55，提取时间 20 min，超声功率 400 W 条件下进行多糖提取，每个料液比梯度3 次平行实验。1.2.2.2 浸提时间对多糖得率影响准确称取龙牙百合粉 3.00 g，选取提取时间 5、10、15、20 和 25 min，在料液比 1:10 g/mL，提取温度 55，超声功率 400 W条件下进行多糖提取，每个时间梯度 3 次平行实验。1.2.2.3 浸提温度对多糖得率影响准确称取龙牙百合粉 3.00 g，选取提取温度 35、45、55、65 和 75，在料液比 1:10 g/mL，提取时间 20 min，超声功率400 W 条件下进行多糖提取，每个温度梯度 3 次平行实验。1.2.3 水溶性粗多糖提取的正交试验在单因素实验基础上以料液比、浸提时间和浸提温度为因素，每个因素取 3 个水平进行 L9（34）正交试验对提取条件进一步优化，因素与水平见表 1。表 1 正交试验因素与水平Table 1 Factors and their levels used in orthogonal arraydesign水平A：料液比（g/mL）B：浸提时间（min）C：浸提温度（）11:15105521:20156531:252075 1.2.4 龙牙百合粗多糖除蛋白纯化将制备好的龙牙百合粗多糖 10.00 g 以 1:60 g/mL 的料液比加入蒸馏水于 60 水浴锅汇中搅拌充分溶解，将多糖溶液用 1%的醋酸调节 pH 至 6.4，加入木瓜蛋白酶于60 水浴锅酶解 3 h。冷却至室温后，6000 r/min 条件离心 3 min，收集上清液。在上清液中加入 1/2 体积 Sevag 试剂（氯仿:正丁醇 3:1），剧烈振荡 40 min，6000 r/min 离心 5 min 除蛋白层，吸取上清，重复进行 Sevage 去蛋白操作，直至无法去除蛋白层。除蛋白后样液用 5000 d 透析袋透析，流水透析 1 d，纯水1 d，透析液用 3 倍体积无水乙醇醇沉，4 冰箱静置过夜。6000 r/min 离心 5 min 分离沉淀，分别用丙酮，乙醚洗涤 2 遍，真空冷冻干燥得纯化多糖2022。1.2.5 多糖成分测定分析 1.2.5.1 基本成分测定以葡萄糖为标准品，采用苯酚-硫酸法测定总糖含量23；以半乳糖醛酸为标准品，采用咔唑-硫酸比色法测量糖醛酸含量21；以牛血清蛋白为标准品，采用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量24。1.2.5.2 百合多糖红外光谱分析采用傅里叶红外色谱法，称取 1.00 mg 完全干燥的多糖样品，与 100 mg完全干燥的 KBr 粉末在玛瑙研钵中研磨均匀，后压片，用傅里叶变换红外色谱仪 FT-IR 进行红外扫描，扫描范围 4000400 cm1。1.2.6 体外抗氧化活性测定 1.2.6.1 ABTS+自由基清除率测定配制多糖样品溶液（0.50、1.00、2.00、5.00、10.00 mg/mL）。使用ABTS+自由基试剂盒进行测定，在 734 nm 测吸光值，VC为对照。ABTS+自由基清除率(%)=(A空白A测定)A空白100式（2）式中：A空白：空白对照吸光度；A测定：样品溶液吸光度。1.2.6.2 DPPH 自由基清除率测定配制多糖样品溶液（0.50、1.00、2.00、5.00、10.00 mg/mL）。使用DPPH 自由基试剂盒进行测定，在避光反应 20 min后 6000 r/min 离心 1 min 取上清在 517 nm 处测定吸光度，VC为对照。计算公式如下：DPPH自由基清除率(%)=(A空白A测定)A空白100式（3）式中：A空白：空白对照吸光度；A测定：样品溶液吸光度。1.2.7 胰脂肪酶抑制率测定胰脂肪酶测定参考何执中等25的方法略作改动。取若干锥形瓶，加入5 ml pH 为 7.5 的 0.025 mol/L 的磷酸缓冲液，将其和橄榄油乳化液于 40 预热 5 min，剧烈振荡乳化液，取乳化液 4 mL 加入锥形瓶，加入 1 mL 0.02 g/mL胰脂肪酶，加入酶液开始计时，继续保温 5 min。取出后立即加入 95%乙醇 15 mL，终止酶反应。加入3 滴酚酞指示剂，用 0.0025 mol/L 氢氧化钠滴定至溶液呈粉红色为止，记录氢氧化钠消耗量。空白组脂肪酶替换 1 mL 蒸馏水。奥利司他做阳性对照。胰脂肪酶活力(UI,%)=1000(AB)MTW100式（4）式中：A：平行组消耗氢氧化钠滴定液的平均体积，mL；B：空白试验消耗氢氧化钠的体积，mL；M：氢氧化钠滴定的摩尔浓度，mol/L；W：脂肪酶的取样量，g；T 为反应时间，min。胰脂肪酶抑制活性测定：预热完毕后，向测定组和对照组加入抑制剂 1 mL，再向测定组加 1 mL 脂肪酶，对照组加 1 mL 蒸馏水，反应 5 min，操作同胰第 44 卷 第 18 期王威振，等：龙牙百合多糖的超声辅助提取及其抗氧化、降血脂活性分析 253 脂肪酶抑制率测定。试验重复 3 次。抑制率(%)=(脂肪酶活力抑制后脂肪酶活力)脂肪酶活力100式（5）1.3数据处理所有测定指标均作 3 次平行处理，结果以平均值标准差表示。实验数据用 IBM SPASS Statistics26 软件进行分析，数据分析采用 Origin 9.2 软件进行分析。方差分析采用（one-way AVONA）进行显著性检验，显著水平 PB（浸提时间）A（料液比），即影响得率的最大因素是浸提温度，其次是浸提时间，料液比影响较小。这与余倩莎等32热水浸提法的研究结果：提取温度料液比提取时间不同，可能是在超声的作用下，多糖在溶剂较少时也能充分析出，使得料液比的影响变小。龙牙百合粗 1:101:151:201:251:308.28.48.68.89.09.29.4粗多糖得率(%)料液比(g/mL)aaabc5101520257.58.08.59.09.5粗多糖得率(%)时间(min)aabbbc35455565757.58.08.59.09.5粗多糖得率(%)温度()abbbb图 1 料液比、浸提时间、浸提温度对多糖得率的影响Fig.1 Effects of material-to-water ratio,time and temperatureon the yield of polysaccharide注：图中不同小写字母表示差异显著（PBA优组合A2B3C3 254 食品工业科技2023 年 9 月多糖提取的最佳工艺组合为 A2B3C3，即料液比1:20，提取时间 20 min，浸提温度 75。以此条件进行试验，粗多糖得率达 11.98%，转化为多糖提取率后为 7.00%。这在结果上比余倩莎等32使用热水浸提法优化后工艺：提取温度 60，料液比 1:5 g/mL，提取时间 30 min，提取次数 5 次，提取龙牙百合多糖提取率 6.27%要高，且超声辅助提取明显比热水浸提法效率也更高。因此选择料液比 1:20 g/mL，浸提时间 20 min，浸提温度 75 为龙牙百合粗多糖最佳提取工艺。2.2龙牙百合多糖结构特性分析 2.2.1 化学组成龙牙百合粗多糖及去蛋白多糖化学组成如表 3 所示。龙牙百合粗多糖的总糖、糖醛酸和蛋白质含量分别为 58.46%、8.06%和 10.85%，去蛋白后总糖、糖醛酸和蛋白质含量分别为 84.78%，15.41%和 4.73%，较陈小蒙等21采用相同方法的蛋白脱除率低，这可能是在具体脱除蛋白过程中 Sevege试剂组成成分比例不同。表 3 龙牙百合多糖化学组成Table 3 Chemical composition of Lilium brownii var.viridulum polysaccharides龙牙百合多糖总糖含量（%）糖醛酸含量（%）蛋白质含量（%）龙牙百合粗多糖58.460.0108.060.00210.85%0.004龙牙百合去蛋白多糖84.780.03315.410.0084.730.004 2.2.2 红外光谱分析龙牙百合多糖的傅里叶红外光谱图见图 2。吸收光谱在 3392.78 和 2927.46 cm1处有强且宽的的吸收峰，是多糖上的 O-H 形成分子间、内氢键和 C-H 伸缩振动的信号33；1649.44 和1421 cm1处的强吸收峰分别是由 C=O弯曲震动和C-H 弯曲震动引起，表明多糖为酸性多糖34，这与化学组成测定中存在糖醛酸相符；在 13771240 cm1处吸收峰由糖的 C-H 变角震动引起，它和 C-H 键的伸缩振动构成了糖类的特征吸收峰21；1249.23 cm1附近的吸收峰应为磺酸基的 S=O 伸缩震动峰，证明了多糖组分中有 S 元素的存在，表明多糖中可能有硫酸根。1154.77、1026.36 cm1两个峰为吡喃糖环特征吸收峰，是其糖苷键 C-O-C 的非对称振动峰，是葡聚糖典型的红外光谱信号35；红外光谱在 890 cm1附近无吸收峰，而在 807.68 cm1附近形成峰表明多糖主要为 型糖苷键，且为吡喃己糖36，这与陈小蒙等21热水提取法提取龙牙百合多糖研究结果一致。2.3龙牙百合去蛋白多糖功能特性分析 2.3.1 抗氧化活性分析由图 3a 可知，龙牙百合去蛋白多糖具有一定的 DPPH 自由基清除作用，清除能力弱于阳性对照 VC。随着多糖溶液质量浓度的增加，对 DPPH 自由基的清除能力逐渐强。当多糖质量浓度达到 10 mg/mL时，其对 DPPH 自由基的清除率达 8.75%。龙牙百合去蛋白多糖在质量浓度在10 mg/mL 时显著低于李化强等对龙牙百合精制多糖和粗多糖对 DPPH 自由基清除率的研究37，这可能是由于材料、超声提取条件和纯化程度差异造成的。0246810多糖浓度(mg/L)VC龙牙多糖a abcda aaaa0204060801000246810020406080100多糖浓度(mg/L)abcdeabbccVC龙牙多糖DPPH自由基清除率(%)ABTS+自由基清除率(%)图 3 龙牙百合去蛋白多糖 DPPH 和 ABTS+自由基清除率测定Fig.3 Scavenging ability of refined polysaccharides fromLilium brownii var.viridulum against DPPH and ABTS+radical 由图 3b 可知，龙牙百合去蛋白多糖具有良好的ABTS+自由基清除作用，清除能力弱于阳性对照VC。随着多糖溶液质量浓度的增加，对 ABTS+自由基的清除率呈上升趋势。当多糖质量浓度达到10 mg/mL 时，其对 ABTS+自由基清除率达 38.59%。2.3.2 龙牙百合去蛋白多糖对胰脂肪酶抑制作用由图 4 可知，阳性对照奥利司他和龙牙百合去蛋白多糖随着浓度的增加对胰脂肪酶的抑制率显著增加，当浓度大于 2 mg/mL 时，龙牙百合去蛋白多糖对胰脂肪酶的抑制效果好于奥利司他。当龙牙百合去蛋白多糖浓度在 5 mg/mL 时，对胰脂肪酶的抑制率可达到 86.22%，优于莲子红衣多糖和黑木耳等中药多 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500透光率(%)波数(cm1)3392.782927.461649.441377.051249.231154.771026.36807.68759.30611.271421图 2 龙牙去蛋白多糖的傅里叶变换红外光谱图Fig.2 FIIR spectrum of refined polysaccharides from Liliumbrownii var.viridulum 第 44 卷 第 18 期王威振，等：龙牙百合多糖的超声辅助提取及其抗氧化、降血脂活性分析 255 糖3839。这说明，龙牙百合去蛋白多糖对胰脂肪酶的抑制效果较好，具有降血脂药物替代潜力。3结论本文以龙牙百合制成的干粉为原料，在超声辅助条件下选择料液比、浸提时间、浸提温度进行龙牙百合粗多糖制备单因素实验，进一步通过正交试验对多糖制备条件进行了优化，获得超声辅助提取龙牙百合粗多糖的最佳提取工艺，为料液比 1:20 g/mL，浸提时间 20 min，浸提温度 75，该条件下的粗多糖得率为 11.98%。去蛋白的龙牙百合多糖的总糖、糖醛酸、蛋白质含量分别为 84.78%、15.41%和 4.73%，表明龙牙百合多糖中含有中性糖较多，去蛋白效果良好。红外光谱分析表明，龙牙百合多糖是一种酸性多糖。龙牙百合多糖具有一定的抗氧化能力和良好降血脂能力，对胰脂肪酶的抑制率高达 86.22%，具有开发降血脂食品药品的潜力。研究结果为龙牙百合多糖开发抗氧化、降血脂功能食品提供理论依据，而不同提取方法对多糖抗氧化活性影响和体内降血脂活性需进一步研究探讨。参考文献 1 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志:第14 卷M.北京:科学出版社,1980:157166.Editorial Committee of Floraof China,Chinese Academy of Sciences.Flora of China:Volume 14M.Beijing:Science Press,1980:166157.2 国家药典委员会.中华人民共和国药典M.2010 年版.一部.北京:中国医药科技出版社,2010.Chinese PharmacopoeiaCommission.Chinese PharmacopoeiaM.2010.Part I.Beijing:China Medical Science Press,2010 3 李玉帆,明军,刘新艳,等.15 个百合种和品种的食用性比较研究C/中国园艺学会 2013 年学术年会论文摘要集A.成都:园艺学报,2013:124.LI Y F,MING J,LIU X Y,et al.Compara-tive study on edible applicability of 15 lily species and varietiesC/Collection of abstracts from 2013 annual conference papers ofChinese Society for Horticultural ScienceA.Chengdu:Acta Horti-culturae Sinica,2013:124.4 袁泽玥,张典,崔迎春.百合多糖的药理作用研究进展J.科学技术创新，2020（15）：2526.YUAN Z Y,ZHANG D,CUIY C.Research 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