桂圆果核黄酮提取工艺及抗氧化活性研究.pdf

Food and Fermentation Science&Food and Fermentation Science&TechnologyTechnology收稿日期：2023-02-20基金项目：国家科技部重点研发项目（2021YFD1600804）；资阳市科技局重点研发项目（Zykjjsc20-zdyf-2022-02）；泸州市科技局重点研发项目（2022-SYF-29）作者简介：陈心雨（1995-），男，硕士，工程师。研究方向：酿酒工程及天然产物活性成分提取。*通信作者：彭奎（1982-），男，博士研究生，正高级工程师。研究方向：酿酒工程；郭杰（1973-），男，高级工程师。研究方向：酿酒工程。引用格式：陈心雨，李琳，刘宏飞，等.桂圆果核黄酮提取工艺及抗氧化活性研究 J.食品与发酵科技，2023，59（4）：44-50.桂圆果核黄酮提取工艺及抗氧化活性研究陈心雨1，4，5，李琳2，刘宏飞3，刘念1，4，5，6，王超凯1，4，5，6，张磊1，4，5，6，李觅1，4，5，6，常少健1，4，5，蔡海燕1，4，5，彭奎1，4，5*，郭杰1，4，5*（1.四川省食品发酵工业研究设计院有限公司，四川成都 611130；2.四川外交家科技有限公司，四川资阳 641300；3.泸州纳贡庄园酒业有限公司，四川泸州 646000；4.刘念酿酒师技能大师工作室，四川成都 611130；5.中国轻工业酿酒工程及应用重点实验室，四川成都 611130；6.酿酒生物技术及应用四川省重点实验室，四川宜宾 644000）摘要：以桂圆果核为研究对象，采用超声提取桂圆果核黄酮，通过单因素试验及正交试验优化确定最佳提取工艺条件，并研究其抗氧化活性。研究结果表明，桂圆果核黄酮的最佳提取工艺条件：乙醇浓度为70%、提取温度为40、料液比为1 30g/mL、提取时间为60min，平均黄酮提取率为5.17%，该提取工艺简便高效，稳定可行。在一定浓度范围内，桂圆果核黄酮对DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基的清除能力以及还原力均随黄酮提取液质量浓度的升高而增强，表明桂圆果核黄酮具有一定的抗氧化活性。该结果为桂圆果核黄酮工业化提取奠定一定的理论基础。关键词：桂圆果核；黄酮；提取工艺；正交试验；抗氧化活性中图分类号：TS255.1文献标识码：A文章编号：1674-506X（2023）04-0044-0007Study on Extraction Technology and Antioxidant Activityof Flavone from Longan KernelCHEN Xinyu1，4，5，LI Lin2，LIU Hongfei3，LIU Nian1，4，5，6，WANG Chaokai1，4，5，6，ZHANG Lei1，4，5，6，LI Mi1，4，5，6，CHANG Shaojian1，4，5，CAI Haiyan1，4，5，PENG Kui1，4，5*，GUO Jie1，4，5*（1.Sichuan Food and Fermentation Industry Research&Design Institute Co.，Ltd.，Chengdu Sichuan 611130，China；2.Sichuan Diplomat Technology Co.，Ltd.，Ziyang Sichuan 641300，China；3.Luzhou Nagong Manor Wine Co.，Ltd.，Luzhou Sichuan 646000，China；4.Liu Nian s Master Studio of Oenological Skills，Chengdu Sichuan 611130，China；5.Key Laboratory of Brewing Engineering and Application of China National Light Industry Council，Chengdu Sichuan 611130，China；6.Liquor-making Biotechnology&Application Key Laboratory of Sichuan Province，Yibin Sichuan 644000，China）Abstract：The flavonoids from longan kernel were extracted by ultrasonography，and the optimal extractionconditions were determined by single factor test and orthogonal test，and the antioxidant activity of longankernelwasstudied.Theresultsshowedthattheoptimalextractionconditionswereasfollows：ethanolconcentration of 70%，extraction temperature of 40，solid-liquid ratio of 130 g/mL，extraction time of60 min，average extraction rate of flavonoids was 5.17%.The extraction process was simple，efficient，stableand feasible.In a certain concentration range，the scavenging ability of longan kernel flavonoids on DPPH free陈心雨等：桂圆果核黄酮提取工艺及抗氧化活性研究第59卷（总第236期）陈心雨等：桂圆果核黄酮提取工艺及抗氧化活性研究radicals，ABTSfree radicals and hydroxyl free radicals and the reducing ability of flavonoids were enhancedwith the increase of the concentration of flavonoids extract，which indicated that longan kernel flavonoids hadcertain antioxidant activities.The results provided a theoretical basis for industrial extraction of flavone fromlongan kernel.Keywords：longan kernel；flavonoids；extraction technology；orthogonal test；antioxidant activitydoi：10.3969/j.issn.1674-506X.2023.04-007黄酮类物质具有抗氧化活性1，以次级代谢产物的形式在植物体内存在2，药用价值高3，常用于治疗心脑血管疾病4，以其为主要成分的相关药物研究已受到普遍关注5-6。桂圆别名龙眼，无患子科龙眼属常绿果树，为药食两用植物，自古以来被视为珍贵补品。市场上售卖的桂圆作为水果和入药部分大多为果肉，但因为桂圆储藏保鲜技术难度大，上市时间较集中，部分桂圆除作为新鲜水果直接销售外，还有大量的桂圆用于加工成桂圆肉、桂圆罐头和桂圆膏等，短时间内产生大量的果核废弃物，不仅影响到产业链的延伸，同时也造成资源的浪费和环境的污染7。桂圆果核自古可作药用，近年来发现其含有黄酮类物质，但关于桂圆果核中黄酮类物质的提取工艺及抗氧化活性的研究未见报道，以及黄酮类物质的抗氧化活性是否能保持等问题有待研究。因此，为了全面掌握桂圆果核黄酮类物质的提取工艺及抗氧化活性，本研究以市售桂圆鲜果果核为原料提取黄酮，在单因素试验的基础上通过正交试验优化提取工艺条件，并对其抗氧化活性进行初步研究，为桂圆果核资源的开发利用和黄酮类物质的工业化提取提供理论依据8-9。1材料与方法1.1材料与试剂桂圆鲜果购于四川省成都市温江区农贸市场；芦丁标准品（纯度98%）、亚硝酸钠、硝酸铝、抗坏血酸、氢氧化钠、无水乙醇、过硫酸钾、磷酸氢二钠、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、2,2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）、过氧化氢、水杨酸、三氯乙酸、氯化铁、硫酸亚铁，均为分析纯，成都市科隆化学品有限公司。1.2仪器与设备PX224ZH/E电子分析天平，奥豪斯公司；FW-100高速万能粉碎机，上海沪粤明科学仪器有限公司；OLB-WB26 恒温水浴锅，欧莱博公司；UV-1600PC紫外可见分光光度计，上海美析仪器有限公司；BK-180J超声波清洗仪，博科公司；R-1010旋转蒸发仪，巩义市京华仪器有限责任公司。1.3试验方法1.3.1桂圆果核黄酮的提取新鲜桂圆手工剥壳去除果肉清水浸泡洗净烘干粉碎过筛桂圆果核粉末，避光保存备用。精确称量桂圆果核粉末1.000 0 g，加入乙醇进行超声提取，超声功率300 W，过滤，减压蒸发，得到桂圆果核黄酮提取物。1.3.2标准曲线的绘制参考文献 10 方法，称取芦丁标准品2.5mg，用70%乙醇溶解，定容在25mL容量瓶，以此制备不同浓度标准溶液。吸取5mL标准溶液加入容量瓶，滴入 0.2 mL 5%亚硝酸钠，静置 10 min，滴入 0.2 mL10%硝酸铝，静置10 min，滴入3 mL 5%氢氧化钠，加入70%乙醇定容至10 mL，静置15 min，在510 nm处测量吸光度，以吸光度为纵坐标，以标准溶液浓度为横坐标绘制标准曲线。如图 1 所示，芦丁标准溶液在试验浓度范围内与吸光度呈良好线性关系，线性回归方程为y8.522 6x0.002 2，R20.999 3，其中自变量x为芦丁浓度；因变量y为吸光度。1.3.3单因素试验固定乙醇浓度为70%、提取温度为50、料液比为1 20 g/mL、提取时间为45 min，分别研究乙醇图1标准曲线Fig.1Standard curve吸光度/Abs芦丁浓度/（mg/mL）0.000.010.020.030.040.050.00.10.20.30.40.5452023年第4期浓度（50%、60%、70%、80%、90%）、提取温度（30、40、50、60、70）、料液比（1 10、1 20、1 30、1 40、1 50g/mL）、提取时间（15、30、45、60、75min）对桂圆果核黄酮提取率的影响。1.3.4正交试验以单因素试验结果为依据，选择乙醇浓度（A）、提取温度（B）、料液比（C）、提取时间（D）为自变量，以桂圆果核黄酮提取率为评价指标，采用L9（34）正交试验优化桂圆果核黄酮提取条件，以确定其最佳提取工艺，正交试验因素水平如表1所示。表1正交试验因素水平表Tab.1Orthogonal test factor level table水平123A乙醇浓度/%607080B提取温度/405060C料液比/（g/mL）1 101 201 30D提取时间/min3045601.3.5桂圆果核黄酮提取率计算称取适量桂圆果核黄酮提取物，用70%乙醇溶解，定容在25mL容量瓶。吸取5mL加入容量瓶，滴入 0.2 mL 5%亚硝酸钠，静置 10 min，滴入 0.2 mL10%硝酸铝，静置10 min，滴入3 mL 5%氢氧化钠，加入70%乙醇定容至10 mL，静置15 min，在510 nm处测量吸光度，并根据公式（1）计算。桂圆果核黄酮提取率/%CVm100（1）式中：C根据标准曲线计算得到桂圆果核黄酮提取液的质量浓度，mg/mL；V提取溶剂体积，mL；m桂圆果核粉末质量，g。1.3.6抗氧化活性试验1.3.6.1清除DPPH自由基试验参考文献 11 方法，制备0.1 mmol/L DPPH乙醇溶液，取2 mL不同质量浓度的桂圆果核黄酮提取液于试管中，加入2 mL DPPH乙醇溶液混合均匀，避光静置 30 min，测定 517 nm 处的吸光度 A1。随后用相同方法，测定用2mL无水乙醇代替DPPH乙醇溶液的吸光度A2。空白组以2 mL无水乙醇代替黄酮提取液测定吸光度A0。以相应浓度的Vc溶液作为阳性对照，DPPH 自由基清除率根据公式（2）计算。DPPH自由基清除率/%1-A1-A2A0100（2）1.3.6.2清除ABTS自由基试验参考文献 12 方法，将250L过硫酸钾溶液置于25 mL容量瓶，加入10 mL ABTS溶液，静置15 h得到ABTS母液。将ABTS母液加入磷酸缓冲溶液中，在734 nm处测量吸光度，在0.680.72内即为ABTS工作液。吸取50L桂圆果核黄酮提取液，加入5 mL ABTS工作液，静置10 min，在734 nm处测量吸光度A1。以相同方法测量5 mL无水乙醇代替ABTS工作液的吸光度A2。以相同方法测量50 L无水乙醇代替黄酮提取液的吸光度A0。以相应浓度的Vc溶液作为阳性对照，ABTS自由基清除率根据公式（3）计算。ABTS自由基清除率/%1-A1-A2A0100（3）1.3.6.3清除羟基自由基试验参考文献 13 方法，取1.5mL桂圆果核黄酮提取液，滴加1 mL FeSO4溶液、2 mL水杨酸-乙醇溶液、1 mL H2O2溶液，35 水浴加热45 min，静置，在510 nm处测量吸光度A1。以相同方法测量2 mL去离子水代替水杨酸-乙醇溶液的吸光度A2。以相同方法测量1.5mL去离子水代替黄酮提取液的吸光度A0。以相应浓度的Vc溶液作为阳性对照，羟基自由基清除率根据公式（4）计算。羟基自由基清除率/%1-A1-A2A0100（4）1.3.6.4还原力测定试验参考文献 14 方法，分别吸取2mL不同质量浓度的桂圆果核黄酮提取液于试管中，依次加入质量浓度1g/L铁氯化钾溶液和0.2mol/L pH 6.6磷酸盐缓冲溶液各2 mL，振荡均匀，置于50 水浴条件下反应20 min，取出后迅速冷却，加入2 mL 0.6 mol/L三氯乙酸溶液，混匀，4500r/min离心5min，取1mL上清液，依次加入2 mL蒸馏水、0.5 mL 1 g/L FeCl3溶液，混匀，静置5min，于700nm处测定吸光度，以黄酮提取液相应浓度的 Vc 溶液作为阳性对照。通过吸光度比较相同浓度下桂圆果核黄酮提取液和 Vc 溶液的还原力强弱，吸光度越大，表明还原力越强。46第59卷（总第236期）陈心雨等：桂圆果核黄酮提取工艺及抗氧化活性研究1.3.7数据处理所有试验数据平行测定三次取平均值，采用IBM SPSS Statistics 22.0进行统计处理和显著性差异分析，采用Origin 8.5进行图片绘制。2结果与分析2.1单因素试验2.1.1乙醇浓度对桂圆果核黄酮提取率的影响如图2所示，桂圆果核黄酮提取率随乙醇浓度的增加呈先上升后下降的趋势。当乙醇的极性逐渐接近黄酮类物质的极性，根据“相似相溶”原理，有利于黄酮类物质的溶出，因此黄酮提取率逐渐上升。当乙醇浓度为70%时，桂圆果核黄酮提取率达到最高，为4.84%。若继续增加乙醇浓度，桂圆果核黄酮提取率逐渐下降，可能是因为高浓度的乙醇导致非黄酮类的部分脂溶性和醇溶性物质溶出，从而造成体系中黄酮提取率下降。同时，随着乙醇的极性降低，也会使得提取溶剂与黄酮类物质的极性差异增大而不利于其溶出。故选择乙醇浓度为60%、70%、80%进行正交试验。图2乙醇浓度对桂圆果核黄酮提取率的影响Fig.2Effect of ethanol concentration on flavonoidextraction rate of longan kernel黄酮提取率/%3.64.04.44.85.25060708090乙醇浓度/%edabc注：不同字母表示差异显著（P0.05），下同。2.1.2提取温度对桂圆果核黄酮提取率的影响如图3所示，提取温度在3050 时，桂圆果核黄酮提取率呈上升趋势，热效应使分子运动加速，渗透和扩散作用加快，提取率逐渐增加，当提取温度为50时，黄酮提取率达到最高，为4.75%。随着提取温度的继续升高，部分热稳定性较差的黄酮类物质在高温下分解，导致黄酮提取率逐渐降低；同时，温度过高会使得桂圆果核中的杂质溶出更多，因此提取温度高于 50 时，黄酮提取率反而下降。故选择提取温度为 40、50、60 进行正交试验。2.1.3料液比对桂圆果核黄酮提取率的影响如图4所示，料液比1 101 20 g/mL时，桂圆果核黄酮提取率先随溶剂量的增加而升高，在料液比为1 20 g/mL时最大，此时黄酮提取率为4.91%，之后显著降低（P0.05）。这可能是因为当溶剂量较小时，提取液中黄酮类物质已接近饱和，不利于其进一步溶出，导致黄酮提取率偏低；若溶剂量过大，则会导致桂圆果核中非黄酮类杂质的溶出量增加，反而使得黄酮提取率下降。故选择料液比为1 10、1 20、1 30g/mL进行正交试验。图4料液比对桂圆果核黄酮提取率的影响Fig.4Effect of solid-liquid ratio on flavonoidextraction rate of longan kernel料液比/（g/mL）黄酮提取率/%3.94.24.54.85.11 101 201 301 401 50cabde2.1.4提取时间对桂圆果核黄酮提取率的影响如图5所示，在1545min内，桂圆果核黄酮提取率随提取时间的延长而增加，在45min达到最大值，为4.81%；此时继续增加提取时间，黄酮提取率逐渐降低。这可能是因为提取时间过长造成部分黄酮类物质发生变性，进而被分解或氧化；同时，随着提取时间增加，桂圆果核中蛋白质和糖类等非黄图3提取温度对桂圆果核黄酮提取率的影响Fig.3Effect of extraction temperature on flavonoidextraction rate of longan kernel黄酮提取率/%3040506070提取温度/3.64.04.44.8ecabd472023年第4期酮类物质的溶出量增大，造成溶液黏度增加，使得部分黄酮类物质吸附在固体基质上，不易被分离。故选择提取时间为30、45、60min进行正交试验。2.2正交试验如表2所示，各试验条件对桂圆果核黄酮提取率的影响因素顺序：乙醇浓度（A）料液比（C）提取温度（B）提取时间（D）。乙醇浓度是影响桂圆果核黄酮提取率的最主要因素，而提取时间的影响较小。由正交试验结果可知，最佳提取工艺条件为A2B1C3D3，即乙醇浓度为70%、提取温度为40、料液比为1 30g/mL、提取时间为60min。在最佳提取工艺条件下进行三组平行验证性黄酮提取试验，平均黄酮提取率为5.17%，RSD为0.21%，结果表明在该最佳提取工艺条件下提取桂圆果核黄酮具有可行性，试验结果稳定且重复性良好。2.3桂圆果核黄酮的体外抗氧化活性试验2.3.1清除DPPH自由基能力黄酮类物质可与DPPH自由基反应生成稳定的抗磁性物质以减少其含量。如图6所示，随着桂圆果核黄酮提取液质量浓度的增加，在0.11.0mg/mL内，其对DPPH自由基的清除率逐渐升高，两者呈正相关。相比Vc，桂圆果核黄酮提取液的清除效果较弱，但随着质量浓度的升高，两者的差距先增大后减小，最终趋于稳定。当桂圆果核黄酮质量浓度为 1.0 mg/mL 时，其对 DPPH 自由基的清除率可达 74.36%，此时 DPPH 溶液出现明显褪色现象。桂圆果核黄酮与Vc的IC50分别为0.5003mg/mL和0.2976mg/mL，由此可知，桂圆果核黄酮提取液对DPPH自由基表现出较好的清除效果。图6桂圆果核黄酮提取液对DPPH自由基的清除能力Fig.6Scavenging ability of longan kernel flavonoid extracton DPPH free radicalDPPH自由基清除率/%桂圆果核黄酮VC质量浓度/（mg/mL）0.00.20.40.60.81.00204060801002.3.2清除ABTS自由基能力黄酮类物质可与ABTS自由基反应生成稳定化合物以减少其含量。如图7所示，桂圆果核黄酮提取液和对照组Vc对ABTS自由基的清除率均随质量浓度增加呈上升趋势。桂圆果核黄酮对ABTS自由基的清除效果与Vc对照组在同一质量浓度下相对较弱。在质量浓度为0.11.0mg/mL范围内，桂圆果核黄酮和Vc对ABTS自由基清除率均在 1.0 mg/mL 达到最大值，此时清除率分别为63.27%和97.43%。因此，桂圆果核黄酮对ABTS自由基有较好的清除效果。2.3.3清除羟基自由基能力如图8所示，随着桂圆果核黄酮提取液质量浓表2正交试验结果Tab.2Orthogonal test result试验号123456789k1k2k3RA1112223333.994.813.561.25B1231231234.324.103.950.37C1232313123.973.924.480.55D1233122314.024.164.190.17桂圆果核黄酮提取率/%3.933.814.244.875.044.524.153.453.09图5提取时间对桂圆果核黄酮提取率的影响Fig.5Effect of extraction time on flavonoidextraction rate of longan kernel提取时间/min黄酮提取率/%15304560755.04.54.03.53.0ecabd48第59卷（总第236期）陈心雨等：桂圆果核黄酮提取工艺及抗氧化活性研究度的增加，在0.11.5mg/mL内，其对羟基自由基的清除率逐渐升高，最终趋于平缓。当桂圆果核黄酮质量浓度为1.5mg/mL时，其对羟基自由基的清除率可达 58.90%。桂圆果核黄酮与 Vc 的 IC50分别为0.881 4 mg/mL和0.425 5 mg/mL，表明桂圆果核黄酮提取液对羟基自由基表现出一定的清除效果。2.3.4还原力测定还原力是体现黄酮类物质抗氧化活性的重要指标。如图9所示，桂圆果核黄酮和Vc的还原力均随浓度增加而升高，当桂圆果核黄酮提取液质量浓度为 1.5 mg/mL 时，吸光度可达到最大值；在0.31.5mg/mL内，桂圆果核黄酮的还原力低于Vc，但仍表现出较好的抗氧化活性。3结论通过单因素试验及正交试验优化得到桂圆果核黄酮最佳提取工艺条件：乙醇浓度为70%、提取温度为40、料液比为1 30g/mL、提取时间为60min，平均黄酮提取率为5.17%，该提取工艺简便高效，稳定可行。抗氧化活性试验表明，桂圆果核黄酮对DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基的清除能力以及还原力均随黄酮提取液质量浓度的升高而增强，结果表明桂圆果核黄酮具有一定的抗氧化活性。后期研究团队将对桂圆果核中提取的黄酮类物质开展进一步的分离鉴定，探究黄酮类物质与其抗氧化活性之间的量效关系，为桂圆果核资源的开发及利用提供依据。参考文献1TAO Y P，ZHANG H W，WANG Y.Revealing andpredictingtherelationshipbetweenthemolecularstructureandantioxidantactivityofflavonoidsJ.LWT，2023，174.DOI：10.1016/j.lwt.2023.114433.2 SHI S H，LEE S S，ZHU Y M，et al.Comparativemetabolomic profiling reveals key secondary metabolitesassociated with high quality and nutritional value inbroad bean（Vicia faba L.）J.Molecules，2022，27（24）.DOI：10.3390/molecules27248995.3RAYYAN S，FOSSEN T，ANDERSEN M.FlavoneC-glycosides from seeds of fenugreek，Trigonellafoenum-graecum L.J.Journal of Agricultural andFood Chemistry，2010，58（12）：7211-7217.4 严啸东，郭美丽.黄酮类化合物抗心脑血管缺血性疾病作用的研究进展 J.药学实践杂志，2022，40（2）：97-102.5 ZHAO B B，WANG J L，WANG L，et al.Discoveryofflavonederivativescontainingcarboxamidefragments as novel antiviral agentsJ.Molecules，2023，28（5）.DOI：10.3390/molecules28052179.6 马梦鸽，宋忠兴，陈琳，等.红花叶总黄酮提取纯化工艺优化及抗急性肝损伤活性研究 J.天然产物研究与开发，2023，35（1）：108-11721.图7桂圆果核黄酮提取液对ABTS自由基的清除能力Fig.7Scavenging ability of longan kernel flavonoid extracton ABTSfree radicalsABTS+自由基清除率/%桂圆果核黄酮VC质量浓度/（mg/mL）0.00.20.40.60.81.0020406080100图8桂圆果核黄酮提取液对羟基自由基的清除能力Fig.8Scavenging ability of longan kernel flavonoid extracton hydroxyl radical羟基自由基清除率/%桂圆果核黄酮VC质量浓度/（mg/mL）0.00.30.60.91.50204060801001.2图9桂圆果核黄酮提取液的还原力测定Fig.9Determination of reducing power of flavone extractfrom longan kernel吸光度/Abs桂圆果核黄酮VC质量浓度/（mg/mL）0.00.30.60.91.21.50.00.30.60.91.21.5492023年第4期7 丁晶晶.龙眼储藏过程中生理变化研究 J.中国果菜，2015，35（8）：4-9.8 王凤，肖楚翔，刘淑珍，等.榴莲核黄酮的提取及其对秀丽隐杆线虫氧化和衰老的影响 J.食品科学，2021，42（9）：123-129.9 孙海燕.樱桃核中类黄酮的提取工艺条件研究 J.食品研究与开发，2015，36（17）：70-73.10张爽，刘治飞，高洁，等.陕产瞿麦中总黄酮提取工艺响应曲面法的优化 J.世界中医药，2018，13（6）：1541-1545.11 LUO Y H，LI X R，HE J，et al.Isolation，characterisation，and antioxidant activities offlavonoids from chufa（Eleocharis tuberosa）peels J.Food Chemistry，2014，164：30-35.12张静，陶俊葓，刘银，等.响应曲面法优化超声辅助提取芒果叶中多酚和黄酮工艺及抗氧化活性研究 J.云南民族大学学报（自然科学版），2020，29（6）：527-534.13雷良波，周剑丽，黄叶强，等.蓝莓果渣花色苷提取工艺优化及抗氧化活性比较研究 J.食品工业科技，2018，39（21）：178-184.14肖萍，赵可欣，蔡倩倩，等.以藜麦为基质的红茶菌发酵液抗氧化活性研究 J.食品研究与开发，2023，44（2）：37-44.9 吉庆勋，杨曼利，李志明，等.炭吸附聚谷氨酸对土壤肥力和作物产量的影响 J.黑龙江农业科学，2019（7）：53-58.10 BAJAJ I，SINGHAL R.Poly（glutamic acid）-Anemergingbiopolymerofcommercialinterest J.Bioresource Technology，2011，102（10）：5551-5561.11 CHANGF，LIW，HUH，etal.Chemicalpretreatment and saccharification of corncob for poly-glutamic acid production by Bacillus subtilisSCP010-1 J.Process Safety and EnvironmentalProtection，2022，159：1184-1193.12 ALI A A M，MOMIN B，GHOGARE P.Isolation ofa novel poly-glutamic acid-producing BacilluslicheniformisA14strainandoptimizationoffermentation conditions for high-level productionJ.PreparativeBiochemistry&Biotechnology，2020，50（5）：445-452.13罗丽娟，王刚，万玉军，等.-聚谷氨酸高产菌株选育及发酵条件优化 J.食品与发酵科技，2021，57（6）：35-42.14贺杨扬，曾伟，王青龙，等.响应面法优化枯草芽孢杆菌产-聚谷氨酸发酵工艺 J.食品科学，2014，35（9）：147-151.15林格儿，刘宏，刘海杰，等.暹罗芽孢杆菌高产-聚谷氨酸的发酵条件优化 J.微生物学通报，2022，49（8）：3335-3345.16盛洁，孟凡强，吕凤霞，等.解淀粉芽孢杆菌FMBJ37产-聚谷氨酸发酵培养基的优化 J.食品工业科技，2019，40（20）：160-166.17李宏杰，方军，蒋彩霞，等.-聚谷氨酸发酵工艺研究 J.食品研究与开发，2015，36（14）：79-82.18刘洁，王建磊，刘燕妮，等.聚谷氨酸液态发酵条件优化 J.安徽农业科学，2014，42（32）：11231-11235.19武国慧，张蕾，高德才，等.枯草芽孢杆菌发酵生产聚-谷氨酸的条件优化 J.食品研究与开发，2017，38（11）：165-170.20 疏秀林，施庆珊，冯静，等.-聚谷氨酸发酵培养基的Plackett-Burman法优化 J.生物技术通报，2007（4）：173-177.21张庆庆，金鑫强，陈剑翔，等.发酵液中-聚谷氨酸含量快速测定方法研究 J.食品工业科技，2012，33（19）：294-296300.22郭建敏，郭利飞，赵廷彬，等.地衣芽孢杆菌分批补料发酵-聚谷氨酸 J.食品研究与开发，2022，43（18）：191-198.23桑秀梅，王晶，赵杰，等.利用枯草芽孢杆菌发酵生产-聚谷氨酸 J.安徽农业大学学报，2017，44（4）：567-573.24张雷，张蕾，王玲莉，等.-聚谷氨酸生产菌株的鉴定及发酵培养基优化 J.食品工业科技，2020，41（20）：64-71.25 王振强，贾俊伟，王浩，等.纳豆芽孢杆菌 TK-2 产-聚谷氨酸发酵工艺优化 J.中国酿造，2019，38（11）：95-101.26李海军，王庆波，张英华，等.利用廉价原料生产聚谷氨酸的研究 J.食品与药品，2022，24（1）：36-39.27 朱丹，邹水洋，康建雄.纳豆芽孢杆菌液态发酵生产-聚谷氨酸 J.食品工业科技，2012，33（17）：151-153158.28刘常金，郑焕兰，姜川，等.纳豆芽孢杆菌液体发酵生产-聚谷氨酸 J.现代食品科技，2009，25（8）：935-939.（上接第19页）50